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GRA15_(Ⅱ)在小鼠肿瘤微环境中促进巨噬细胞极化抗肝癌
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作者 余焱霞 张远 +1 位作者 王艳玲 蔡亦红 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期36-47,共12页
肿瘤相关巨噬细胞(TAM)与肿瘤的转归密切相关,探索刚地弓形虫致密颗粒蛋白分子(GRA15_(Ⅱ))在肿瘤微环境中通过诱导巨噬细胞(Mφ)极化抑制肿瘤生长的作用机制。通过构建肝细胞癌小鼠,注射LV-gra15_(Ⅱ)重组慢病毒后,采用实时荧光定量PC... 肿瘤相关巨噬细胞(TAM)与肿瘤的转归密切相关,探索刚地弓形虫致密颗粒蛋白分子(GRA15_(Ⅱ))在肿瘤微环境中通过诱导巨噬细胞(Mφ)极化抑制肿瘤生长的作用机制。通过构建肝细胞癌小鼠,注射LV-gra15_(Ⅱ)重组慢病毒后,采用实时荧光定量PCR、酶联免疫法、免疫组化、流式细胞术和共聚焦显微镜分析肿瘤微环境中的免疫应答情况。结果显示,GRA15_(Ⅱ)可在体外诱导M2样Mφ向M1表型偏移。而且,在荷瘤小鼠注射LV-gra15_(Ⅱ)后,肿瘤体积明显减小,进一步分析发现,在肿瘤微环境中GRA15_(Ⅱ)主要通过TRAF6途径激活NF-κB,诱导TAM从M2向M1偏移,且NO、IL-12、TNF-α的表达上调,发挥Th1免疫应答。GRA15_(Ⅱ)能够抑制肿瘤生长,此研究为肿瘤免疫治疗提供新的思路和策略,为开发新的药物提供实验室基础。 展开更多
关键词 弓形虫 致密颗粒蛋白 肝细胞癌 巨噬细胞 极化
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弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒的构建与表达 被引量:3
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作者 林绮萍 吴少庭 +8 位作者 翁亚彪 秦莉 张仁利 高世同 黄达娜 袁仕善 雷明军 潘晖榕 温见翔 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期788-792,747,共6页
目的构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA4的真核表达质粒,并研究其在体外与体内细胞中的表达情况。方法采用PCR方法及克隆技术,构建pVACGRA4重组质粒;利用脂质体介导转染法,将该重组质粒导入HEK293细胞,用RTPCR法及Westernblot法检测其表达情况... 目的构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA4的真核表达质粒,并研究其在体外与体内细胞中的表达情况。方法采用PCR方法及克隆技术,构建pVACGRA4重组质粒;利用脂质体介导转染法,将该重组质粒导入HEK293细胞,用RTPCR法及Westernblot法检测其表达情况;利用基因枪导入法将该重组质粒导入BALB/c小鼠体内细胞,测定免疫鼠T淋巴细胞亚群及IFNγ、IL4含量,并观察攻毒试验后小鼠存活情况,以评价其免疫保护力。结果从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出GRA4基因片段,成功构建重组表达质粒pVACGRA4;转染GRA4的HEK293细胞,RTPCR检测可见一条约987bp的目的条带,表达产物经Westernblot鉴定,其分子量约为41kD,能被特异性免疫血清所识别;经pVACGRA4免疫后的小鼠,其CD+4T细胞百分率无明显变化(P>0.05),CD+8T细胞百分率明显增加(与pVAC对照组比较P<0.05,与空白对照组比较P<0.01),CD+4/CD+8比值也较空白对照组明显降低(P<0.01);pVACGRA4免疫鼠IFNγ的A值比对照组略高,但差异无显著性(P>0.05),IL4A值各组间无明显变化(P>0.05);pVACGRA4免疫鼠存活率显著高于两对照组,死亡小鼠的平均存活时间延长(与空白对照组比较P<0.05)。结论构建的真核表达质粒pVACGRA4能在HEK293细胞中和小鼠体内细胞中表达,为弓形虫疫苗的进一步研究打下基础。 展开更多
关键词 弓形虫 致密颗粒蛋白4 真核系统 克隆 表达
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重组弓形虫GRA8的表达及其诱导的免疫应答 被引量:2
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作者 袁仕善 吴少庭 +3 位作者 张仁利 高世同 黄达娜 余新炳 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第11期991-994,共4页
目的表达和纯化弓形虫RH株GRA8的截短型片段,分析其诱导的免疫应答。方法从重组克隆pMD18-GRA8中切取GRA8的插入片段,亚克隆至原核表达质粒pET-23a(+)中,转化大肠杆菌BL21,PCR和酶切鉴定转化菌落的插入序列;将构建的原核表达菌株经IPTG... 目的表达和纯化弓形虫RH株GRA8的截短型片段,分析其诱导的免疫应答。方法从重组克隆pMD18-GRA8中切取GRA8的插入片段,亚克隆至原核表达质粒pET-23a(+)中,转化大肠杆菌BL21,PCR和酶切鉴定转化菌落的插入序列;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达;大量诱导表达GRA8,金属螯合层析予以纯化,将纯化蛋白免疫小鼠,观察其诱导的免疫应答。结果GRA8基因的特异片段被亚克隆到原核表达质粒pET-23a(+),在大肠杆菌中未见GRA8的明显表达;表达的蛋白经金属螯合层析获得纯化;纯化蛋白能被弓形虫感染兔血清识别。结论成功构建了GRA8的原核重组表达质粒,纯化的蛋白具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 弓形虫 致密颗粒蛋白 gra8 纯化 免疫应答
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弓形虫GRA8真核表达质粒的构建与体外表达
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作者 袁仕善 吴少庭 +3 位作者 黄达娜 张仁利 高世同 余新炳 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第7期566-569,共4页
目的构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA8的真核重组表达质粒。方法设计GRA8的特异引物,采用多聚酶链反应(PCR)技术从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码GRA8的基因片段,经克隆至pMD18-T载体后,亚克隆至真核表达载体pVAC而构建真核重组表达质粒pVAC-... 目的构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA8的真核重组表达质粒。方法设计GRA8的特异引物,采用多聚酶链反应(PCR)技术从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码GRA8的基因片段,经克隆至pMD18-T载体后,亚克隆至真核表达载体pVAC而构建真核重组表达质粒pVAC-GRA8,转化大肠杆菌DH5α;将构建的真核重组表达质粒pVAC-GRA8转染vero细胞,分析转染vero细胞中GRA8的表达状况。结果PCR扩增出GRA8基因的特异片段,所获克隆的序列正确,并被亚克隆到真核表达载体pVAC,构建了真核重组表达质粒pVAC-GRA8;在vero细胞中获得表达。结论成功构建了GRA8的真核重组表达质粒pVAC-GRA8。 展开更多
关键词 弓形虫 致密颗粒蛋白 gra8 表达 RT-PCR
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弓形虫致密颗粒蛋白6(GRA6)的研究进展 被引量:3
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作者 王学俭 《中国动物检疫》 CAS 2014年第2期45-48,共4页
致密颗粒是由弓形虫致密颗粒细胞器分泌的一类具有免疫活性的蛋白质,它们在弓形虫的入侵,虫体在宿主细胞内的存活和繁殖方面起着重要作用。本文就致密颗粒蛋白6的分子结构、在虫体入侵中的作用、虫体基因分型以及在弓形虫病诊断和疫苗... 致密颗粒是由弓形虫致密颗粒细胞器分泌的一类具有免疫活性的蛋白质,它们在弓形虫的入侵,虫体在宿主细胞内的存活和繁殖方面起着重要作用。本文就致密颗粒蛋白6的分子结构、在虫体入侵中的作用、虫体基因分型以及在弓形虫病诊断和疫苗研制等方面的研究进展作一简要综述。 展开更多
关键词 弓形虫 致密颗粒蛋白6 入侵 诊断 疫苗研制 dense granulE protein 6
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鸡柔嫩艾美耳球虫2种假定致密颗粒蛋白基因的克隆与表达
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作者 李天恩 周思含 +3 位作者 孙洪超 付媛 石团员 闫文朝 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第3期503-514,共12页
柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)是一种严重危害养鸡业健康发展的高致病性原虫,致密颗粒蛋白(dense granule proteins,GRAs)是顶复合器门原虫胞内寄生重要功能蛋白,具有较高的免疫学应用价值,然而目前尚未有关于球虫致密颗粒蛋白的确... 柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)是一种严重危害养鸡业健康发展的高致病性原虫,致密颗粒蛋白(dense granule proteins,GRAs)是顶复合器门原虫胞内寄生重要功能蛋白,具有较高的免疫学应用价值,然而目前尚未有关于球虫致密颗粒蛋白的确切报道。为发掘柔嫩艾美耳球虫GRAs并研究其功能,采用生物信息学、分子生物学、免疫学等技术从E.tenella北京株中鉴定到2种假定致密颗粒蛋白(hypothetical dense granule protein,hEtGRA)hEtGRA12、hEtGRA9,并用纯化后的蛋白分别免疫小鼠制备多克隆抗体,用ELISA、Western blot方法检测2种蛋白的抗原性。分子克隆结果表明,hEtGRA 12、hEtGRA 9基因编码区长度分别为1188、1110 bp,分别编码395、369个氨基酸,与其他顶复合器门原虫致密颗粒蛋白GRA12、GRA9物种间相似性分别为28.8%~39.6%、27.5%~29.5%;SDS-PAGE结果显示,重组蛋白rhEtGRA12、rhEtGRA9条带大小分别为63.6、67.0 ku;ELISA与Western blot结果表明,重组蛋白rhEtGRA12、rhEtGRA9均能诱导小鼠产生较高的抗体水平,且均可被鸡抗E.tenella阳性血清识别,表明具有较好的抗原性。该研究鉴定到2种球虫假定致密颗粒蛋白基因hEtGRA 12、hEtGRA 9,获得了重组蛋白rhEtGRA12、rhEtGRA9,为球虫致密颗粒蛋白基因功能和免疫应用研究奠定了基础。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 假定致密颗粒蛋白 原核表达 多克隆抗体 抗原性
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弓形虫致密颗粒蛋白的生物学功能及免疫原性研究的新进展 被引量:12
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作者 胡玲英 张念章 +4 位作者 王金磊 林旋 周东辉 朱兴全 王寿昆 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期663-668,共6页
刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)可引起严重的人兽共患弓形虫病,给全世界经济造成巨大的损失,给公共卫生安全带来巨大的隐患。致密颗粒(dense granule)分泌的致密颗粒蛋白(dense granule proteins,GRAs)参与调节纳虫泡(parasitophorous v... 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)可引起严重的人兽共患弓形虫病,给全世界经济造成巨大的损失,给公共卫生安全带来巨大的隐患。致密颗粒(dense granule)分泌的致密颗粒蛋白(dense granule proteins,GRAs)参与调节纳虫泡(parasitophorous vacuole,PV)及纳虫泡膜(parasitophorous vacuole membrane,PVM)的形成并能维持其结构稳定性,部分GRAs可参与宿主细胞的转录。近几年来,不断发现了多种新的GRA蛋白家族新成员,并随着对该家族成员研究的逐步深入,发现GRAs是研制抗弓形虫疫苗的候选分子之一。本文综述了弓形虫致密颗粒蛋白的生物学功能和免疫原性研究的新进展,旨在为研究弓形虫致病机理和研发新的抗弓形虫疫苗提供思路。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 弓形虫病 致密颗粒蛋白(gras) 纳虫泡 纳虫泡膜 分子疫苗
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弓形虫致密颗粒蛋白的生物学功能研究进展 被引量:3
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作者 郑晓楠 李婷婷 +2 位作者 王金磊 郑文斌 朱兴全 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期3345-3357,共13页
刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)是一种重要的人兽共患寄生原虫,具有中间宿主广泛、生活史复杂、传播方式多样、呈全球性分布等特点,可感染几乎所有的恒温动物,导致人兽共患的弓形虫病。弓形虫慢性感染约1/3的世界人口,对免疫缺陷患者、... 刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)是一种重要的人兽共患寄生原虫,具有中间宿主广泛、生活史复杂、传播方式多样、呈全球性分布等特点,可感染几乎所有的恒温动物,导致人兽共患的弓形虫病。弓形虫慢性感染约1/3的世界人口,对免疫缺陷患者、孕妇、孕畜的健康更是造成严重威胁。致密颗粒蛋白是由致密颗粒(弓形虫的一种亚细胞分泌器官)分泌的蛋白质,它们可通过操控宿主(细胞)基因表达、信号通路进而调控宿主细胞的免疫反应和细胞周期,并在蛋白质的转运和定位、营养物质的摄取、纳米管网络(IVN)的形成与稳定性的维持、逸出、慢性感染等生理过程中发挥重要作用。本文综述弓形虫致密颗粒蛋白基本生物学功能的最新研究进展,旨在为深入研究弓形虫的致病机制、鉴定新的抗弓形虫潜在药物靶点和疫苗候选分子提供借鉴。 展开更多
关键词 弓形虫 弓形虫病 致密颗粒蛋白 生物学功能
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弓形虫致密颗粒蛋白研究进展 被引量:3
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作者 王英贺 曹利利 +6 位作者 姚新华 苑淑贤 郭衍冰 宫鹏涛 丁鹤 董航 魏峰 《动物医学进展》 北大核心 2016年第8期75-78,共4页
弓形虫是一种胞内寄生性原虫,由其引发的人兽共患病给公共卫生安全带来了威胁。弓形虫致密颗粒蛋白是弓形虫致密颗粒细胞器分泌的一类免疫活性蛋白,与虫体在细胞内寄生、发育密切相关,是重要的弓形虫疫苗候选抗原分子。论文将近年来在... 弓形虫是一种胞内寄生性原虫,由其引发的人兽共患病给公共卫生安全带来了威胁。弓形虫致密颗粒蛋白是弓形虫致密颗粒细胞器分泌的一类免疫活性蛋白,与虫体在细胞内寄生、发育密切相关,是重要的弓形虫疫苗候选抗原分子。论文将近年来在致密颗粒蛋白方面的研究发现和进展进行阐述,为今后的深入研究提供参考。 展开更多
关键词 弓形虫 致密颗粒蛋白 免疫活性蛋白
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