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HepG2.9706细胞内HDV核酶对HCV RNA抑制活性的初步研究 被引量:2
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作者 郭焕珍 毛青 +3 位作者 李奇芬 王宇明 顾长海 于乐成 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期960-962,共3页
目的 探讨HDV核酶在细胞内抑制HCVRNA的可能性。方法 将重组载体转染至转基因细胞HepG2 .970 6中 ,通过荧光定量PCR检测细胞和培养上清中的HCVRNA ,初步探讨HDV核酶对HCVRNA的抑制活性。结果 ①RzC1,RzC2 ,RzC3 3组HDV核酶定向插入... 目的 探讨HDV核酶在细胞内抑制HCVRNA的可能性。方法 将重组载体转染至转基因细胞HepG2 .970 6中 ,通过荧光定量PCR检测细胞和培养上清中的HCVRNA ,初步探讨HDV核酶对HCVRNA的抑制活性。结果 ①RzC1,RzC2 ,RzC3 3组HDV核酶定向插入到真核表达载体。②在转基因细胞HepG2 .970 6中 ,pC1 RzC1、pC1 RzC2、pC1 RzC3对HCV 5′NCR CRNA抑制活性分别为 69.2 %,3 8.7%、4.2 %。结论 ①成功构建了 3个HDV核酶重组表达载体。②pC1 RzC1、pC1 RzC2在转基因细胞HepG2 .970 6具有抑制HCV 5′NCR 展开更多
关键词 核酶 HDV核酶 丙型肝炎 荧光定量PCR
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞传代毒株反向遗传系统的优化 被引量:1
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作者 李燕华 韦祖樟 +1 位作者 谭菲菲 袁世山 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第3期13-20,共8页
反向遗传系统已成为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndromevirus,PRRSV)结构与功能非常重要的手段,并且在设计基因工程疫苗中发挥不可替代的作用。因而,有效提高感染性克隆拯救病毒的效率和稳定性... 反向遗传系统已成为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndromevirus,PRRSV)结构与功能非常重要的手段,并且在设计基因工程疫苗中发挥不可替代的作用。因而,有效提高感染性克隆拯救病毒的效率和稳定性以及降低经济成本是一个急需解决的课题。本研究在已构建完成的高致病性PRRSV细胞传代毒株反向遗传系统(pAJXM)的基础上,做了以下三方面的工作:(1)将T7启动子换成hCMV(人类巨细胞病毒,Human cytomegalovirus)启动子,从而全长cDNA克隆不需经过体外转录成mRNA的过程,直接通过DNA转染MARC-145细胞拯救病毒;(2)研究hCMV启动子的TATA框与病毒基因组5末端之间最佳的碱基数目,使体内转染获得的病毒基因组5末端序列为病毒的真实序列;(3)在病毒基因组3末端添加丁型肝炎病毒核酶(delta hepatitis virus ribozyme,HDVr)序列,体内转染获得的病毒基因组3末端的非病毒序列通过核酶自动去除。研究发现,基于DNA转染的反向操作系统是可行的,并且hCMV启动子的TATA框与病毒基因组5末端之间的碱基数目设置为25和在病毒基因组3末端添加HDVr序列后,能够有效地提高全长感染性cDNA克隆的病毒拯救效率和稳定性。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 反向遗传系统 人类巨细胞病毒启动子 丁型肝炎病毒核酶
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反义寡核苷酸体外抗丁型肝炎病毒的初步研究
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作者 邹正升 王升启 +6 位作者 陈菊梅 马立人 施红 韩凤连 程云 雷周云 王玉芝 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第5期326-329,共4页
以质粒(sSVLD3)为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增得到一条139bp的片段,它含有丁型肝炎病毒(HDV)基因组RNA中核酶(ribozyme)区的cDNA,该核酶具有自身裂解功能,将上述片段插入到pGEM-... 以质粒(sSVLD3)为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增得到一条139bp的片段,它含有丁型肝炎病毒(HDV)基因组RNA中核酶(ribozyme)区的cDNA,该核酶具有自身裂解功能,将上述片段插入到pGEM-3Z中,经筛选、鉴定,得到一重组质粒(pHDV108),经测序发现有2个碱基变异,以该质粒为模板,通过T7RNA聚合酶,转录出核酶的前体,并观察到其自身裂解产物,自裂率达71%。针对核酶两个重要的单链区,设计并合成二条反义寡核背酸(ASON),当在转录反应中同时加入ASON后,核酶的自裂率下降均较明显,当ASON浓度为16umo1/L时,核酶自裂抑制率均在70%以上。提示,ASON可与核酶两个重要的单链区结合,从而抑制核酶的自裂活性。 展开更多
关键词 反义寡核苷酸 丁型肝炎病毒 丁型肺炎 基因治疗
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