中性红染色法检测人参皂苷及其衍生物对CEF增殖的影响 被引量：5

1

作者 苏建青 褚秀玲 +3 位作者 李俊霞 付本懂 申海青 韦旭斌 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第35期17523-17525,17527,共4页

[目的]为体外研制人参皂苷及其衍生物的抗MDV作用机制提供理论依据。[方法]采用中性红染料吸收法,检测了人参皂苷及其衍生物对鸡胚成纤维细胞(CEF)体外培养中增殖活性的影响。[结果]各药物的促增殖作用不完全相同,低毒性的药物促增殖作... [目的]为体外研制人参皂苷及其衍生物的抗MDV作用机制提供理论依据。[方法]采用中性红染料吸收法,检测了人参皂苷及其衍生物对鸡胚成纤维细胞(CEF)体外培养中增殖活性的影响。[结果]各药物的促增殖作用不完全相同,低毒性的药物促增殖作用更明显。从药物对CEF细胞的不同作用时间点来看,以72 h的OD值和正常对照的差异最大,在24 h和正常对照组差异不显著。[结论]人参皂苷及其衍生物在中、低浓度能够促进CEF细胞的增殖,且药物作用具有时间依赖性。 展开更多

关键词 人参皂苷 衍生物 鸡胚成纤维细胞 安全浓度

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芝芪菌质多糖对CEF的增殖和抵抗NDV感染的研究 被引量：3

2

作者 张敦林 张李阳 +1 位作者 唐宁 刘建平 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第20期8604-8605,8614,共3页

[目的]明确芝芪菌质多糖是否是芝芪菌质提高动物免疫力的有效成分。[方法]用不同浓度的乙醇对芝芪菌质水提物进行分级沉淀,得到3种芝芪菌质多糖(GAP30、GAP60和GAP90),采用中性红染料吸收法,研究其对鸡胚成纤维细胞(CEF)增殖的影响及抵... [目的]明确芝芪菌质多糖是否是芝芪菌质提高动物免疫力的有效成分。[方法]用不同浓度的乙醇对芝芪菌质水提物进行分级沉淀,得到3种芝芪菌质多糖(GAP30、GAP60和GAP90),采用中性红染料吸收法,研究其对鸡胚成纤维细胞(CEF)增殖的影响及抵抗NDV感染的效果。[结果]GAP30、GAP60、GAP90的得率分别为0.37%、0.70%、1.04%,表明乙醇分级沉淀已将芝芪菌质中的多糖成分提取完全。GAP30、GAP60在浓度为1×10-1、1×10-2mg/ml时能显著促进CEF增殖,GAP90在浓度为1×10-3mg/ml时即能显著促进CEF增殖。GAP30、GAP60在浓度为1×10-2mg/ml时能显著抵抗NDV感染,GAP90在浓度为1×10-1、1×10-2mg/ml时能显著抵抗NDV感染。[结论]芝芪菌质多糖能不同程度地促进CEF增殖、抵抗NDV感染,以GAP90的效果最好。 展开更多

关键词 芝芪菌质多糖 鸡胚成纤维细胞 NDV 免疫力

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DOT1L敲除的鸡胚成纤维细胞系构建及其对ALV-J复制和细胞信号通路的影响

3

作者 余莫涵 王鑫妍 +4 位作者 蔡清清 王佳兴 高琦 常国斌 陈世豪 《中国家禽》 北大核心 2025年第8期1-10,共10页

研究旨在通过CRISPR-Cas9技术构建DOT1L基因敲除的鸡胚成纤维细胞系(DF-1),并分析DOT1L基因敲除对J亚群禽白血病病毒(ALV-J)复制及其细胞信号通路的影响,也为后续进一步研究DOT1L的生物学功能提供生物材料。研究首先利用CRISPR/Cas9基... 研究旨在通过CRISPR-Cas9技术构建DOT1L基因敲除的鸡胚成纤维细胞系(DF-1),并分析DOT1L基因敲除对J亚群禽白血病病毒(ALV-J)复制及其细胞信号通路的影响,也为后续进一步研究DOT1L的生物学功能提供生物材料。研究首先利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建DOT1L基因敲除的DF-1细胞系,分析野生型和敲除细胞对ALV-J复制的影响,再通过转录组测序技术对敲除细胞与野生型细胞的基因表达谱进行了差异分析。结果显示:设计的sgRNA均具有T7E1酶切割活性且sgRNA-1切割活性最高。DNA测序显示,筛选DOT1L敲除的阳性细胞外显子区域分别缺失2个和4个碱基,导致移码突变产生。Western blot验证DOT1L基因敲除的单克隆细胞的H3K79me2水平显著降低(P<0.05),并且DOT1L敲除显著抑制ALV-J复制。RNA-Seq结果显示,与野生细胞系相比DOT1L敲除细胞系的差异表达基因(DEGs)共有2821个,其中上调基因1384个,下调基因1437个。DEGs的GO功能注释主要与细胞成长代谢和生物过程的调节相关;KEGG通路富集分析主要集中在细胞黏附、ECM受体和Wnt途径等信号通路。综上,研究首次成功构建了DOT1L基因敲除的鸡胚成纤维细胞系,并通过转录组测序分析和筛选DOT1L基因敲除细胞系的差异基因表达谱,这有助于理解DOT1L基因在鸡胚成纤维细胞中的潜在作用,还为进一步探究鸡DOT1L的抗病毒天然免疫调控功能提供重要的生物材料。 展开更多

关键词 DOT1L基因 鸡胚成纤维细胞系 CRISPR-Cas9 ALV-J 转录组测序

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艾叶精油体外抑制鸡马立克病病毒增殖的效应分析

4

作者 张苑 李明扬 +6 位作者 梁越 于向谦 王妍 陈吉一 刘海侠 连雪 钱莺娟 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第11期5901-5911,共11页

本研究旨在探究艾叶精油(Artemisia argyi essential oil, AAEO)对鸡马立克病病毒(Marek’s disease virus, MDV)体外增殖的影响及潜在分子机制。通过CCK-8法测定AAEO对鸡胚成纤维(chicken embryo fibroblast, CEF)细胞的毒性作用,筛选A... 本研究旨在探究艾叶精油(Artemisia argyi essential oil, AAEO)对鸡马立克病病毒(Marek’s disease virus, MDV)体外增殖的影响及潜在分子机制。通过CCK-8法测定AAEO对鸡胚成纤维(chicken embryo fibroblast, CEF)细胞的毒性作用,筛选AAEO的最佳作用浓度范围;根据筛选出的最佳作用浓度处理细胞收集样品。通过蚀斑分析和病毒滴度测定,检测AAEO对MDV体外增殖的影响。通过RT-qPCR和Western blot从分子水平上解析AAEO抑制MDV增殖的机制。结果表明,AAEO作用浓度为60~360μg·mL^(-1)对CEF无细胞毒作用。AAEO处理组的病毒蚀斑明显减小且变少,病毒滴度下降,病毒在基因水平和蛋白水平的表达上均有下降,说明AAEO可抑制MDV的复制,且具有剂量依赖性。通过对AAEO作用的细胞内信号通路筛选发现,AAEO可下调磷酸化ERK和STAT3蛋白表达水平,下调IL-6 mRNA表达水平。使用ERK抑制剂U0126处理细胞,当细胞内ERK通路被抑制时,病毒复制减少。AAEO可抑制鸡MDV体外增殖,其抗病毒作用可能与AAEO抑制IL-6/STAT3和ERK通路激活有关。艾叶精油具有较好的抗MDV活性,研究结果可为抗疱疹病毒药物的研发提供新的依据。 展开更多

关键词 马立克病病毒 艾叶精油 鸡胚成纤维细胞 体外抗病毒

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NDV基因Ⅶ型与基因Ⅱ型感染CEF后microRNA表达谱分析

5

作者 薄一丹 庞洪泽 +5 位作者 赵款 雷白时 蒋文明 袁万哲 张武超 刘聚祥 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期105-112,F0003,共9页

本研究旨在探究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)流行株HB株(基因Ⅶ型)与疫苗株La Sota株(基因Ⅱ型)在感染鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEF)36 h后宿主细胞microRNA(miRNA)表达谱变化情况。通过高通量测序技术... 本研究旨在探究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)流行株HB株(基因Ⅶ型)与疫苗株La Sota株(基因Ⅱ型)在感染鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEF)36 h后宿主细胞microRNA(miRNA)表达谱变化情况。通过高通量测序技术分别对La Sota株与HB株感染CEF后36 h后的样本与参考鸡源基因组进行系统比对,筛选差异表达miRNA并对其靶基因进行GO功能注释以及KEGG通路富集。最后随机筛选5条miRNA通过实时荧光定量PCR(Real-time quantification PCR,RT-qPCR)进行验证。结果表明,La Sota与HB感染组中已知miRNA分别为56.9%和47.8%;La Sota与HB感染组通过差异性比较后共筛选出10条差异表达miRNA;通过对差异表达基因的靶基因进行GO与KEGG富集发现,其主要在细胞代谢、生物合成以及应激信号传导等通路上出现显著富集;RT-qPCR结果与RNA-seq结果趋势一致,证明了测序结果的可靠性。为进一步揭示不同NDV毒株感染CEF以及在感染过程中miRNA发挥的调控作用提供了研究基础。 展开更多

关键词 新城疫病毒 基因Ⅶ型 基因Ⅱ型 miRNA 鸡胚成纤维细胞(cef)

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鸡胚成纤维细胞原代培养及应用 被引量：16

6

作者 朱国坡 周晓丽 +5 位作者 郭延锋 李瑞芳 高均伟 陈仕均 王丽荣 刘兴友 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第3期112-114,共3页

原代培养是指在体外模拟体内生理环境,使从体内取出的组织细胞生存、生长和传代,并维持原有组织细胞的结构和功能特性。鸡胚成纤维细胞具有相对容易获得、增殖能力强、适应性强、良好的耐受性、性状比较稳定等特点,使得其被广泛地应用... 原代培养是指在体外模拟体内生理环境,使从体内取出的组织细胞生存、生长和传代,并维持原有组织细胞的结构和功能特性。鸡胚成纤维细胞具有相对容易获得、增殖能力强、适应性强、良好的耐受性、性状比较稳定等特点,使得其被广泛地应用于分子和细胞生物学研究的许多方面。论文综述了近年来有关鸡胚成纤维细胞的培养技术,如鸡胚的取材、细胞的分离、纯化和培养,同时介绍了应用进展和未来研究方向。 展开更多

关键词 鸡胚成纤维细胞 原代培养 分离 纯化

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鸡胚成纤维细胞cDNA酵母表达文库的构建与鉴定 被引量：7

7

作者 祁小乐 陈玉明 +7 位作者 张礼洲 任宪刚 高立 高宏雷 秦立廷 王永强 高玉龙 王笑梅 《中国家禽》 北大核心 2013年第8期14-16,共3页

试验提取CEF细胞总RNA,运用SMART和LD-PCR技术合成cDNA,通过同源重组克隆入真核表达质粒pGADT7,转化酵母菌Y187,构建cDNA表达文库。文库滴度高达6.94×107cfu/mL,重组率达100%。随机挑选10个克隆进行测序,全部为原鸡序列。本研究为... 试验提取CEF细胞总RNA,运用SMART和LD-PCR技术合成cDNA,通过同源重组克隆入真核表达质粒pGADT7,转化酵母菌Y187,构建cDNA表达文库。文库滴度高达6.94×107cfu/mL,重组率达100%。随机挑选10个克隆进行测序,全部为原鸡序列。本研究为进一步研究重要禽源病毒与宿主细胞的相互作用奠定了基础。 展开更多

关键词 cef CDNA文库 酵母双杂交

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短发夹结构RNA干扰新城疫病毒的增殖 被引量：8

8

作者 岳华 汤承 +2 位作者 李定霏 傅安静 马丽 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期154-159,共6页

以新城疫病毒(NDV)NP基因为标靶,构建3个细胞内表达发夹样结构小干扰RNA(shRNA)的质粒载体,在鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡胚上进行了RNAi试验,筛选出一个有效抑制病毒复制的小分子ndv1.用阳离子脂质体转染试剂Silent-fect将ndv1转染CEF,以... 以新城疫病毒(NDV)NP基因为标靶,构建3个细胞内表达发夹样结构小干扰RNA(shRNA)的质粒载体,在鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡胚上进行了RNAi试验,筛选出一个有效抑制病毒复制的小分子ndv1.用阳离子脂质体转染试剂Silent-fect将ndv1转染CEF,以不相关shRNA质粒载体HK为阴性对照,4h后接种NDV,与对照相比,干涉组在病毒感染后3hNP基因的表达量降低2.3倍,6h降低21.1倍,9h降低9.8倍;ndv1能在48h内完全阻断NDV在CEF中的增殖,延缓病变出现时间,减轻病变程度.将Silent-fect-ndv1混合物与NDV同时注入10日龄SPF鸡胚绒毛尿囊腔,能使105ELD50NDV感染后17h鸡胚尿囊液中病毒增殖量减少94.4%,使106ELD50 NDV感染后17h鸡胚尿囊液中病毒增殖量减少62.5%.实验结果证实,在CEF中存在RNAi机制,抑制ND VNP基因的表达能有效阻断该病毒增殖,说明NP基因在NDV复制过程中起重要作用.实验结果为进一步利用RNAi技术在CEF和鸡胚中研究病毒基因组功能及筛选抗病毒小分子奠定了基础. 展开更多

关键词 RNA干涉 小发夹结构RNA 新城疫病毒 鸡胚成纤维细胞 鸡胚

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传染性法氏囊病病毒在鸡胚细胞上的优化繁殖 被引量：7

9

作者 张立 张元兴 +1 位作者 严春 俞俊棠 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1996年第6期707-711,共5页

研究了传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）在鸡胚细胞上繁殖的优化条件，结果表明，鸡胚细胞体外增殖培养后对ＩＢＤＶ的敏感性并不减弱，而且有提高。维持培养基中血清浓度的变化（体积分数在０．０１～０．１０范围内）对病毒的繁殖影响... 研究了传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）在鸡胚细胞上繁殖的优化条件，结果表明，鸡胚细胞体外增殖培养后对ＩＢＤＶ的敏感性并不减弱，而且有提高。维持培养基中血清浓度的变化（体积分数在０．０１～０．１０范围内）对病毒的繁殖影响不大。该病毒更适宜于稍偏酸性和较高温度下繁殖。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病 病毒 鸡胚细胞 优化 繁殖

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8种硫酸化多糖对新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞能力的影响 被引量：13

10

作者 王君敏 胡元亮 +6 位作者 张帆 王德云 赵晓娜 张靖 刘静 赵彪 郝丽华 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期118-122,共5页

用氯磺酸-吡啶法修饰当归多糖(CAPS)和枸杞多糖(LBPS),得到4种硫酸化当归多糖sCAPS0.6、sCAPS1.1、sCAPS1.9、sCAPS2.2和4种硫酸化枸杞多糖sLBPS0.7、sLBPS1.1、sLBPS1.5和sLBPS1.9。分别以CAPS和LBPS为对照,采用MTT法比较了这8种硫酸... 用氯磺酸-吡啶法修饰当归多糖(CAPS)和枸杞多糖(LBPS),得到4种硫酸化当归多糖sCAPS0.6、sCAPS1.1、sCAPS1.9、sCAPS2.2和4种硫酸化枸杞多糖sLBPS0.7、sLBPS1.1、sLBPS1.5和sLBPS1.9。分别以CAPS和LBPS为对照,采用MTT法比较了这8种硫酸化多糖对新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞能力的影响。结果表明:硫酸化修饰能显著提高当归多糖和枸杞多糖的抗病毒活性,且与硫酸基取代度有一定的相关性。sCAPS2.2、sLBPS1.5、sCAPS1.9和sLBPS1.9的活性较好,可以作为进一步研究的材料。 展开更多

关键词 硫酸化修饰 当归多糖 枸杞多糖 新城疫病毒 感染细胞能力 鸡胚成纤维细胞

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用ELISA检测传染性囊病病毒诱导的细胞凋亡 被引量：5

11

作者 薛春宜 毕英佐 +1 位作者 曹永长 朱基美 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期28-32,共5页

用5株传染性囊病病毒（IBDV）分别感染鸡胚成纤维细胞（CEF），于感染后不同时间收集接毒组与对照组的细胞进行检测．试验结果显示，接毒组与对照组细胞的DNA在琼脂糖凝胶电泳谱上均呈现梯状条带．用酶联免疫吸附试验（EUSA）检测各组... 用5株传染性囊病病毒（IBDV）分别感染鸡胚成纤维细胞（CEF），于感染后不同时间收集接毒组与对照组的细胞进行检测．试验结果显示，接毒组与对照组细胞的DNA在琼脂糖凝胶电泳谱上均呈现梯状条带．用酶联免疫吸附试验（EUSA）检测各组细胞中降解DNA量，发现感染IBDV7h后，接毒组细胞降解DNA量比对照组明显增加，且各接毒组间降解DNA量有一定的差异．试验结果表明：各株IBDV均诱导CEF发生细胞凋亡，但不同IBDV毒株诱导细胞凋亡的能力有差异；ELISA是定量检测细胞凋亡的较好方法． 展开更多

关键词 传染性囊病 病毒 细胞凋亡 鸡成纤维细胞 IBDN

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致病性鹅源新城疫病毒对鸡胚成纤维细胞的致病变特性 被引量：6

12

作者 万洪全 卢军 +3 位作者 刘秀梵 陈平 陈素娟 冀德君 《动物医学进展》 CSCD 2004年第5期89-91,共3页

选择4株鹅源新城疫病毒(NDV)接种鸡胚成纤维细胞(CEF)培养物,研究鹅源NDV对CEF的致病变特性,并与鸡源及鸽源NDV进行比较。结果显示,鹅源NDV接种次代CEF后24h开始有病变产生,表现为少数细胞变圆、皱缩,折光性增强,随后病变缓慢进展,感染... 选择4株鹅源新城疫病毒(NDV)接种鸡胚成纤维细胞(CEF)培养物,研究鹅源NDV对CEF的致病变特性,并与鸡源及鸽源NDV进行比较。结果显示,鹅源NDV接种次代CEF后24h开始有病变产生,表现为少数细胞变圆、皱缩,折光性增强,随后病变缓慢进展,感染细胞形成大量合胞体,到84-144 h时,CEF单层彻底破坏;鸡源和鸽源NDV接种CEF后也在24 h左右开始有病变产生,最初病变与鹅源毒株导致的病变相似,但病变进展迅速,细胞显著裂解并导致单层的严重破坏,60-84 h时细胞单层即彻底破坏。对病毒接种后不同时间段培养物上清血凝(HA)效价的测定结果表明,鹅源NDV接种后84-120h培养物上清HA效价达到高峰,为5-8 log2,鸡源和鸽源NDV接种后60-84 h HA效价即可达到高峰,但其最高效价只有4 log2。 展开更多

关键词 鹅 新城疫病毒 鸡胚成纤维细胞 致病变特性

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新城疫病毒感染细胞的双向凝胶电泳方法建立及其初步分析 被引量：8

13

作者 吴双 开妍 +2 位作者 王晓泉 胡顺林 刘秀梵 《中国家禽》 北大核心 2010年第10期25-29,共5页

为了研究新城疫病毒(NDV)和宿主细胞之间的相互作用关系,本研究以NDV感染鸡胚成纤维细胞(CEF)为材料,对细胞培养方式、样品制备方法、上样量、等电聚焦以及凝胶染色等步骤进行一系列优化,建立了NDV感染CEF的双向凝胶电泳技术。运用PDQue... 为了研究新城疫病毒(NDV)和宿主细胞之间的相互作用关系,本研究以NDV感染鸡胚成纤维细胞(CEF)为材料,对细胞培养方式、样品制备方法、上样量、等电聚焦以及凝胶染色等步骤进行一系列优化,建立了NDV感染CEF的双向凝胶电泳技术。运用PDQuest8.0.1软件对电泳图谱分析后显示:17cmIPG胶条(pH4～7)对应的凝胶上可检测到800个左右蛋白点、蛋白点匹配率达90%,表明NDV感染CEF蛋白质组双向凝胶电泳模型稳定、分辨率高、重复性好。电泳图谱上共发现36个差异表达明显的蛋白点,其中上调表达蛋白点有16个,下调表达蛋白点15个,新出现蛋白点3个,消失蛋白点为2个。NDV感染CEF双向凝胶电泳技术的建立为NDV的致病机理研究提供了有力的工具。 展开更多

关键词 双向凝胶电泳 差异蛋白质组学 新城疫病毒 鸡胚成纤维细胞

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一种肌腱缝合线的细胞毒性研究 被引量：3

14

作者 李文平 何理平 +2 位作者 崔建国 李香鑫 罗国良 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期535-537,共3页

为检测采用海狸鼠尾部肌腱经过脱脂、脱水、两次固定等一系列加工过程而制成的新型可吸收手术缝合线的细胞毒性,将它与鸡胚成纤维细胞共同体外培养,观察其对细胞形态和增殖率的影响.结果表明,这种缝合线对细胞形态无影响,对细胞增殖有... 为检测采用海狸鼠尾部肌腱经过脱脂、脱水、两次固定等一系列加工过程而制成的新型可吸收手术缝合线的细胞毒性,将它与鸡胚成纤维细胞共同体外培养,观察其对细胞形态和增殖率的影响.结果表明,这种缝合线对细胞形态无影响,对细胞增殖有一定的促进作用,细胞相容性好,符合医用缝合线的要求. 展开更多

关键词 肌腱缝合线 细胞毒性 鸡胚成纤维细胞

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鸡胚成纤维细胞感染IBDV后SOD活性的变化 被引量：13

15

作者 薛春宜 毕英佐 曹永长 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 1999年第1期3-5,共3页

鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦｓ）用传染性囊病病毒（ＩＢＤＶ）感染后，采用邻苯三酚自氧化法测定细胞超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的活性。ＣＥＦｓ感染ＩＢＤＶ后８ｈ，细胞ＳＯＤ活性有所上升。之后，随着时间的延长，细胞ＳＯＤ活性逐渐下... 鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦｓ）用传染性囊病病毒（ＩＢＤＶ）感染后，采用邻苯三酚自氧化法测定细胞超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的活性。ＣＥＦｓ感染ＩＢＤＶ后８ｈ，细胞ＳＯＤ活性有所上升。之后，随着时间的延长，细胞ＳＯＤ活性逐渐下降。试验结果表明，ＳＯＤ活性降低是ＣＥＦｓ感染ＩＢＤＶ之后发生的重要生化变化，在ＩＢＤＶ诱导细胞凋亡的过程中可能起关键作用。 展开更多

关键词 传染性囊病病毒 鸡胚成纤维细胞 SOD

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中药复方抗鸡新城疫病毒作用研究 被引量：11

16

作者 刘群 段亮亮 江平康 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第20期10697-10699,10724,共4页

[目的]探讨中药复方抗鸡新城疫病毒(NDV)的作用机理,为临床合理使用抗病毒性药物提供科学的理论依据。[方法]以白花蛇舌草、金银花、黄芪和甘草组成中药复方,制备成中药复方流浸膏并配制成不同浓度梯度的药液;测定中药复方对鸡成纤维细... [目的]探讨中药复方抗鸡新城疫病毒(NDV)的作用机理,为临床合理使用抗病毒性药物提供科学的理论依据。[方法]以白花蛇舌草、金银花、黄芪和甘草组成中药复方,制备成中药复方流浸膏并配制成不同浓度梯度的药液;测定中药复方对鸡成纤维细胞(CEF)最大无毒浓度,并测定NDV在CEF上半数感染力(TCID50);设中药复方不同浓度组,正常细胞和NDV感染细胞对照组,采用3种不同的作用方式作用于各组以检测中药复方抗NDV活性,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法(MTT法)测定OD值,以治疗指数为评价指标。[结果]中药复方对CEF的最大无毒浓度为2-6g/ml,NDV对CEF的TCID50为10-7.3;第①种作用方式中药复方的最小有效浓度是2-10g/ml,第②种作用方式为2-8g/ml,第③种作用方式为2-7g/ml。[结论]第①种作用方式对病毒的灭杀作用最强,第②种作用方式次之,第③种对病毒的灭杀作用最弱。表明中药复方不仅具有细胞外直接杀灭病毒作用,而且还具有抑制病毒吸附、穿入、复制和成熟的某一环节,为研究中药抗病毒的作用机理及临床应用提供了可靠的试验依据。 展开更多

关键词 中药复方 鸡胚成纤维细胞 鸡新城疫病毒

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鸡胚成纤维细胞cDNA真核表达文库的构建及鉴定 被引量：3

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作者 张改平 朱礼倩 +6 位作者 杨艳艳 赵绪永 乔松林 张红 王丽 李清州 王选年 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期216-219,共4页

为构建鸡胚成纤维细胞cDNA真核表达文库并对文库质量进行鉴定,从鸡胚成纤维细胞中直接提取mRNA,用紫外分光光度计测定含量。经电泳确定mRNA的质量,反转录合成第一、二链cDNA,经苯酚氯仿抽提后与EcoRⅠ接头连接,经NotⅠ酶切后用spin col... 为构建鸡胚成纤维细胞cDNA真核表达文库并对文库质量进行鉴定,从鸡胚成纤维细胞中直接提取mRNA,用紫外分光光度计测定含量。经电泳确定mRNA的质量,反转录合成第一、二链cDNA,经苯酚氯仿抽提后与EcoRⅠ接头连接,经NotⅠ酶切后用spin column除去小于500 bp的cDNA片段,与经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切的真核表达质粒连接,连接产物电转化感受态细胞,测定文库的容量大小并通过colony PCR鉴定插入cDNA片段的大小。构建成含8.8×105个重组子的鸡胚成纤维细胞cDNA文库,重组子中平均插入外源片段长度大于1.0 kb的约占85.7%。从结果看构建的文库合格,适合用于筛选目的cDNA克隆。 展开更多

关键词 鸡胚成纤维细胞 CDNA表达文库 传染性法氏囊病毒受体

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传染性法氏囊病病毒在次代鸡胚成纤维细胞上的增殖 被引量：5

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作者 李有根 聂峰光 +2 位作者 戚艺华 顾铭 欧阳藩 《微生物学杂志》 CAS CSCD 1998年第3期10-14,共5页

研究了用次代鸡胚成纤维细胞（SCEF）增殖传染性法氏囊病病毒（IBDV）的可能性。在研究了原代鸡胚成纤维细胞（PCEF）与SCEF的生长特性的基础上，就各种培养方式采用PCEF与SCEF增殖IBDV进行了比较。结果表明，可用SCEF代替PCEF进行IBDV... 研究了用次代鸡胚成纤维细胞（SCEF）增殖传染性法氏囊病病毒（IBDV）的可能性。在研究了原代鸡胚成纤维细胞（PCEF）与SCEF的生长特性的基础上，就各种培养方式采用PCEF与SCEF增殖IBDV进行了比较。结果表明，可用SCEF代替PCEF进行IBDV的增殖培养。 展开更多

关键词 IBDV Scef 病毒增殖 细胞培养 Pcef

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细胞微载体培养技术用于鸡胚原代细胞培养及鸡新城疫病毒的增殖 被引量：3

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作者 陈嘉棣 杨惠萍 +3 位作者 杨颐 黎济申 赵洪兴 余鸣 《上海农业学报》 CSCD 1991年第1期1-7,共7页

以细胞微载体培养技术,用DEAE-Sephadex A 50,Cytodex 3二种微载体,对鸡胚原代细胞进行培养研究,并用在微载体上培养的鸡胚细胞感染鸡新城疫Ⅰ系毒,制备鸡新城疫Ⅰ系细胞苗免疫鸡,与普通细胞培养及鸡胚增殖病毒制备的鸡新城疫Ⅰ系苗比较... 以细胞微载体培养技术,用DEAE-Sephadex A 50,Cytodex 3二种微载体,对鸡胚原代细胞进行培养研究,并用在微载体上培养的鸡胚细胞感染鸡新城疫Ⅰ系毒,制备鸡新城疫Ⅰ系细胞苗免疫鸡,与普通细胞培养及鸡胚增殖病毒制备的鸡新城疫Ⅰ系苗比较,我们得到了在微载体培养系统有较高的细胞产量,较高的病毒滴度,培养物制备疫苗抗原性也好的结果。 展开更多

关键词 鸡 胚原代细胞 微载体 新城疫 病毒

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siRNA干涉禽流感病毒PA基因在鸡胚成纤维细胞中的表达 被引量：2

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作者 马莉 朱金凤 +3 位作者 汤承 李明义 李定霏 岳华 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期438-441,共4页

用阳离子脂体质转染试剂将人工合成的小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)转染鸡胚成纤维细胞(CEF).结果表明,针对禽流感病毒(AIV)H5N1亚型核蛋白(NP)基因的siRNA能在AIV感染后1,2,3 h显著抑制NP基因的表达,表达水平分别降低3,1.4... 用阳离子脂体质转染试剂将人工合成的小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)转染鸡胚成纤维细胞(CEF).结果表明,针对禽流感病毒(AIV)H5N1亚型核蛋白(NP)基因的siRNA能在AIV感染后1,2,3 h显著抑制NP基因的表达,表达水平分别降低3,1.4和2.5倍. 展开更多

关键词 RNA干涉 SIRNA 禽流感病毒 实时荧光定量RT-PCR 鸡胚成纤维细胞

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