成人骨髓源性神经干细胞诱导分化实验研究 被引量：21

1

作者 姜晓丹 徐如祥 +3 位作者 张世忠 邹雨汐 徐强 柳晓秋 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期947-949,W001,W002,共5页

为探讨成人骨髓分离培养神经干细胞的可行性和有效性 ,无菌条件下行骨穿 ,梯度密度离心分离获取成人骨髓源细胞 ,以“CYTOKINE·神经干细胞培养液”培养 ,确定神经干细胞的最佳体外生存环境。以细胞克隆方法判断神经干细胞增殖情况 ... 为探讨成人骨髓分离培养神经干细胞的可行性和有效性 ,无菌条件下行骨穿 ,梯度密度离心分离获取成人骨髓源细胞 ,以“CYTOKINE·神经干细胞培养液”培养 ,确定神经干细胞的最佳体外生存环境。以细胞克隆方法判断神经干细胞增殖情况 ;以NESTIN、NSE及GFAP免疫细胞化学方法分别鉴定神经干细胞、神经元和神经胶质细胞。细胞培养所涉及的细胞因子主要有GDNF(2 0ng/ml)、LIF(10ng/ml)和RA(0 5 μg/ml)等。结果发现 ,成人骨髓源细胞在相应培养条件下快速分裂增殖为大而圆并含粗大胞质颗粒的神经干细胞 ,后者形成细胞球 (或称“神经球”) ,该细胞球表达特殊的神经干细胞NESTIN抗原 ;若进一步将这些细胞球分离成单细胞并重新以克隆密度培养 ,单个的细胞又很快形成新的神经球。神经干细胞球进一步分化 ,可见到有的细胞胞体增大并出芽 ,逐渐发育成为较成熟的长突起细胞 ,长突起相互连接、交织成网并建立有神经纤维样联系 ,表达NSE或GFAP抗原。说明成年人骨髓在一定条件诱导下可以生成神经干细胞 ; 展开更多

关键词 成人 骨髓源性神经干细胞 诱导分化 实验研究 骨髓细胞 神经干细胞 细胞分化 细胞培养

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骨髓基质细胞条件培养液对中脑神经干细胞分化的影响 被引量：14

2

作者 顾平 娄淑杰 +4 位作者 王铭维 王彦永 鲍璇 何成 路长林 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期295-297,共3页

目的 :探讨骨髓基质细胞条件培养液诱导中脑神经干细胞分化为高比例神经元的机制。 方法 :采用骨髓基质细胞条件培养液培养中脑神经干细胞 7d ,通过免疫细胞化学染色方法鉴别和计数神经元的数量 ,并与自然分化组、骨髓基质细胞膜片段组... 目的 :探讨骨髓基质细胞条件培养液诱导中脑神经干细胞分化为高比例神经元的机制。 方法 :采用骨髓基质细胞条件培养液培养中脑神经干细胞 7d ,通过免疫细胞化学染色方法鉴别和计数神经元的数量 ,并与自然分化组、骨髓基质细胞膜片段组、骨髓基质细胞固定组以及骨髓基质细胞共培养组相比较。 结果 :用成年大鼠骨髓基质细胞的条件培养液体外培养新生大鼠中脑神经干细胞 ,神经干细胞分化为神经元比例 [(40 .5± 14 .5 ) % ]明显高于自然分化组 [(16 .6± 10 .5 ) % ]、骨髓基质细胞膜片段组 [(2 0 .8± 12 .5 ) % ]以及骨髓基质细胞固定组 ,但与骨髓基质细胞共培养组 [(36 .1± 9.7) % ]相比无统计学差异 (P >0 .0 5 )。 结论 展开更多

关键词 骨髓基质细胞 条件液 中脑神经干细胞 分化

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大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经干细胞 被引量：9

3

作者 张海燕 王健 +2 位作者 卢玉仙 胡勇 夏春林 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期625-630,共6页

为了观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经干细胞(NSCs)的能力,本研究通过贴壁法培养大鼠BMSCs,体外培养扩增纯化后,在细胞传代时用含有表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、N2、B27的DMEM/F12的培养液制成细胞悬液,并... 为了观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经干细胞(NSCs)的能力,本研究通过贴壁法培养大鼠BMSCs,体外培养扩增纯化后,在细胞传代时用含有表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、N2、B27的DMEM/F12的培养液制成细胞悬液,并进行诱导,观察诱导后细胞的形态及生长情况,用免疫荧光检测形成的细胞球的巢蛋白(nestin)的表达情况;形成的细胞球在含10%血清的培养液中进一步分化。结果显示:BMSCs在含EGF、bFGF、N2、B27的培养液中,逐渐形成nestin表达阳性的细胞球,在含血清的培养液中能分化为神经元样细胞、星形胶质样细胞及少突胶质样细胞。本研究结果提示经纯化的BMSCs能分化为NSCs,并具有进一步分化的能力。 展开更多

关键词 分化 骨髓间充质干细胞 神经干细胞 大鼠

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超顺磁性氧化铁对大鼠神经干细胞生物学活性的影响 被引量：11

4

作者 代广辉 修俊刚 +4 位作者 周振军 陈中灿 徐如祥 姜晓丹 杜谋选 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期49-51,55,共4页

目的初步研究利用超顺磁性氧化铁标记大鼠骨髓基质细胞来源的神经干细胞及其对细胞活力、增殖等生物学活性的影响,并确定最佳标记浓度。方法无菌条件下取大鼠股骨骨髓,梯度密度离心法分离得到骨髓基质细胞。体外培养、诱导成神经干细胞... 目的初步研究利用超顺磁性氧化铁标记大鼠骨髓基质细胞来源的神经干细胞及其对细胞活力、增殖等生物学活性的影响,并确定最佳标记浓度。方法无菌条件下取大鼠股骨骨髓,梯度密度离心法分离得到骨髓基质细胞。体外培养、诱导成神经干细胞,使用不同终浓度的(6.25、12.5、25、37.5、50μg/ml)Ferumoxides(超顺磁性氧化铁)标记神经干细胞,采用普鲁士蓝染色、MTT法、流式细胞仪、透射电镜等方法鉴定Ferumoxides标记神经干细胞的效率及对细胞活力、增殖等生物学特性的影响。结果Ferumoxides可以高效率标记神经干细胞,标记效率在90%以上。普鲁士蓝染色显示标记的神经干细胞胞质内存在细小蓝色铁颗粒,细胞呈淡蓝至深蓝色,颜色的深浅与所加Ferumoxides的剂量成正相关。电镜结果显示标记的神经干细胞胞质内含有许多包裹铁颗粒的囊泡,主要集中在胞体上。当Ferumoxides终浓度高于25μg/ml时,Ferumoxides颗粒在细胞内聚集成团块状,量较多,在一定程度上影响了细胞超微结构的观察;低于25μg/ml时,Ferumoxides颗粒散布于细胞胞质内,并随着浓度的降低,Ferumoxides颗粒在胞质内分布越分散,量越少。MTT及流式细胞仪结果显示Ferumoxides终浓度大于25μg/ml时则对细胞活力、增殖、凋亡有一定影响,小于等于25μg/ml时对细胞活力、增殖无明显影响。结论利用Ferumoxides在体外标记神经干细胞是一种可行的实验方案,其最佳终浓度为25μg/ml。 展开更多

关键词 骨髓基质细胞 神经干细胞 超顺磁性氧化铁

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大鼠骨髓间充质干细胞的培养鉴定以及向神经干细胞分化的实验研究 被引量：10

5

作者 蒲晓姝 果磊 +3 位作者 张敏珠 陈文海 王灿 汪燕 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期235-239,共5页

目的:体外培养并鉴定大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),研究其生物学特性,初步探索酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)诱导其向神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化的... 目的:体外培养并鉴定大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),研究其生物学特性,初步探索酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)诱导其向神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化的可行性。方法:全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠BMSCs,倒置相差显微镜观察其形态特征,MTT法绘制生长曲线,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)测定细胞周期并鉴定细胞表面标志物。用80 ng/ml aFGF的无血清DMEM/F12培养液诱导大鼠BMSCs向NSCs分化,镜下观察细胞形态特征,免疫荧光染色方法检测神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)的表达。结果:大鼠BMSCs贴壁生长,呈梭形,多角形。第1、3、5代BMSCs的生长曲线均呈S形,活性无明显差异。细胞周期显示94.34%BMSCs处于G0/G1期,有较强的分裂增殖能力。FCM检测CD29、CD54、CD90表达阳性,CD45表达阴性。诱导6 h后细胞的胞体收缩成椭圆形或球形并伸出细长突起,免疫荧光染色显示Nestin表达阳性,继续诱导发现双极和多极细胞增多,诱导6 d后相互连接成网状,成典型的神经元样细胞,NSE表达阳性。结论:全骨髓贴壁培养法能培养出高纯度的BMSCs,细胞生长稳定、增殖快、可多次传代,具有干细胞特性。经aFGF诱导后具有向NSCs分化的潜能,NSCs能进一步分化为神经元样细胞。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 全骨髓贴壁培养法 诱导分化 神经干细胞 酸性成纤维细胞生长因子

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冻存复苏后骨髓间充质干细胞体外扩增和多向分化潜能研究 被引量：5

6

作者 项盈 贾冰冰 +5 位作者 沈丹 黄国平 解纯刚 郑强 金洁 王金福 《浙江大学学报（工学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第11期2016-2020,共5页

冻存复苏的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)被传至15代并分别诱导成软骨细胞、脂肪细胞和神经细胞,以此研究冻存干细胞的扩增和分化潜能.结果表明,复苏细胞在软骨细胞诱导液的作用下分化为软骨细胞,对甲苯胺蓝异染并通过RT-PCR检测出Ⅱ型前胶... 冻存复苏的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)被传至15代并分别诱导成软骨细胞、脂肪细胞和神经细胞,以此研究冻存干细胞的扩增和分化潜能.结果表明,复苏细胞在软骨细胞诱导液的作用下分化为软骨细胞,对甲苯胺蓝异染并通过RT-PCR检测出Ⅱ型前胶原mRNA的表达;在脂肪细胞诱导液的作用下,可检测到被诱导细胞中脂滴的产生,通过油红O染色显示出细胞核周围聚集的脂滴;在神经细胞诱导液的作用下,通过免疫组化和RT-PCR均检测出被诱导细胞具有巢蛋白和神经元特异性烯醇化酶的表达,分化细胞延伸分支,末端为典型曲张体.推断复苏的hMSCs仍是具有向软骨、脂肪和神经元多系分化的潜能性干细胞群,可以作为细胞组织工程和治疗相关疾病的一种干细胞来源. 展开更多

关键词 冻存 骨髓间充质干细胞 分化 软骨细胞 脂肪细胞 神经细胞

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鼠骨髓间充质干细胞在缺氧缺血性脑病新生鼠脑内的分布及分化 被引量：10

7

作者 李禄全 余加林 +1 位作者 官晓清 刘官信 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期327-330,共4页

目的　探讨鼠骨髓间充质干细胞 (MSCs)在缺氧缺血性脑病新生鼠脑内的分布及分化。方法　采用全骨髓贴壁筛选法分离培养鼠骨髓间充质干细胞 ,移植前加入 5 溴 2 脱氧尿嘧啶核苷 (BrdU)连续标记 72h。采用Rice法制备新生鼠缺氧缺血性... 目的　探讨鼠骨髓间充质干细胞 (MSCs)在缺氧缺血性脑病新生鼠脑内的分布及分化。方法　采用全骨髓贴壁筛选法分离培养鼠骨髓间充质干细胞 ,移植前加入 5 溴 2 脱氧尿嘧啶核苷 (BrdU)连续标记 72h。采用Rice法制备新生鼠缺氧缺血性脑病模型 ,2 4h后经前囟旁缓慢注射 4× 10 6 个MSCs入缺氧缺血性脑性脑病新生鼠右侧脑内 ,4周后进行免疫组化检测MSCs的分布并鉴定神经元巢蛋白 (Nestin)、神经元特异性烯醇化酶 (NSE)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果　Rice法可制备新生鼠单侧脑损伤为主的缺氧缺血性脑病模型 ,MSCs移植入脑后主要分布在患侧大脑 ,呈弥散性分布于皮层、海马等部位 ,细胞计数左侧为 (2 781± 2 5 4) ,右侧为 (4 70 8± 2 81) ,双侧比较t=18 70 ,P <0 0 0 1,并神经性分化 ,左、右侧Nestin分化率为 (1 5 6± 0 47) % ,(71± 0 42 ) 1% (t =1 741,P >0 0 5 ) ;NSE为 (3 79± 0 95 ) % ,(5 69±1 48) % (t =3 40 4,P <0 0 5 ) ;GFAP为 (2 0 6± 0 89) % ,(2 47± 1 75 ) % (t=0 85 5 ,P >0 0 5 )。结论　MSCs颅内直接移植后主要分布在患侧大脑 ,MSCs移植后 2 8d可分化为神经干细胞、成熟神经元和星型胶质细胞。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 神经性分化 颅内移植

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人胚神经干细胞定向诱导分化为多巴胺能神经元的实验研究 被引量：18

8

作者 张力 江澄川 +3 位作者 徐斌 陈商群 冯林音 江澄川 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期410-413,共4页

目的　建立神经干细胞与骨髓基质细胞的共培养系统,根据该系统的条件性培养液诱导多巴胺能神经元的分化。方法　来源于胎脑海马、纹状体、额叶、中脑的神经干细胞与骨髓基质细胞建立起各自的共培养系统,并根据数种条件性培养液诱导神经... 目的　建立神经干细胞与骨髓基质细胞的共培养系统,根据该系统的条件性培养液诱导多巴胺能神经元的分化。方法　来源于胎脑海马、纹状体、额叶、中脑的神经干细胞与骨髓基质细胞建立起各自的共培养系统,并根据数种条件性培养液诱导神经干细胞的分化,以免疫细胞化学检测神经元的总体分化率及多巴胺能神经元的诱导率。结果　骨髓基质细胞及CO-BMSC能显著提高不同来源的神经干细胞的神经元分化率,同时只有中脑神经干细胞能被有效地进行多巴胺能神经元的诱导。结论 共培养系统诱发了神经干细胞与骨髓基质细胞的自/旁分泌作用,该作用可根据神经干细胞的区域特异性有效的定向诱导中脑神经干细胞的分化。 展开更多

关键词 人胚神经干细胞 定向诱导分化 实验研究 骨髓基质细胞 多巴胺能神经元

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骨髓基质细胞促进神经干细胞增殖分化 被引量：6

9

作者 钟乐 杨于嘉 +1 位作者 余小河 王霞 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期1417-1420,共4页

目的:探讨骨髓基质细胞(BMSCs)对神经干细胞(NSCs)增殖分化的影响。方法:在体外比较NSCs在单独培养和在BMSCs条件培养液中培养下的分化和增殖情况。结果:应用BMSCs条件培养液培养NSCs,分化的神经元比例较显著高于NSCs单独培养(41.1%... 目的:探讨骨髓基质细胞(BMSCs)对神经干细胞(NSCs)增殖分化的影响。方法:在体外比较NSCs在单独培养和在BMSCs条件培养液中培养下的分化和增殖情况。结果:应用BMSCs条件培养液培养NSCs,分化的神经元比例较显著高于NSCs单独培养(41.1%±3.2%vs23.3%±16.5%,P<0.05),而分化的星形胶质细胞所占比例显著降低(33.8%±4.9%vs65.0%±10.4%,P<0.01),同时增殖细胞所占比例也显著增高(74.7%±4.7%vs51.4%±12.3%,P<0.01)。结论:BMSCs对NSCs有促进其增殖和向神经元分化的作用。NSCs与BMSCs联合移植可能会增强NSCs移植的抗脑损伤作用。 展开更多

关键词 骨髓基质细胞 神经干细胞 细胞增殖 细胞分化

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兔骨髓基质细胞诱导分化成神经元样细胞的研究 被引量：7

10

作者 陈剑荣 徐如祥 +4 位作者 姜晓丹 徐强 蔡颖谦 邹雨汐 丁涟沭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第4期367-370,共4页

目的检测由骨髓基质细胞诱导分化而成的神经元样细胞能否分泌氨基酸类神经生物活性物质成分,从而推断是否具有神经元的生化特征。方法无菌条件下抽取新西兰大白兔骨髓,梯度密度离心分离获取兔骨髓基质细胞(BMSCs),在神经干细胞培养基及... 目的检测由骨髓基质细胞诱导分化而成的神经元样细胞能否分泌氨基酸类神经生物活性物质成分,从而推断是否具有神经元的生化特征。方法无菌条件下抽取新西兰大白兔骨髓,梯度密度离心分离获取兔骨髓基质细胞(BMSCs),在神经干细胞培养基及细胞因子0.5 μg/ml维甲酸(RA)、20 ng/ml胶质源性神经营养因子(GDNF)于体外诱导分化为神经干细胞及神经元样细胞,采用免疫细胞化学方法进行鉴定,并应用高效液相色谱法(HPLC)检测其氨基酸类生物活性物质的含量。结果BMSCs培养10 d可见细胞大而圆,免疫细胞化学检测Nestin抗原阳性;培养20 d可见具有长突起的神经元样细胞形成,神经元特异烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学检查阳性,高效液相检测骨髓源性神经元样细胞含有高浓度的天冬氨基酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)。方差分析显示:随着BMSC培养天数的增加,其所含的Asp、Glu浓度也渐增加,RA+GDNF组所含Asp生物活性物质与其余各组比较有显著性差异(P<0.01)。结论兔BMSCs在体外条件下可以增殖分化,增殖细胞表达Nestin,分化的细胞则可表达NSE特异性抗原,并含有高浓度的兴奋性和抑制性氨基酸类神经递质成分;RA和GDNF作为BMSCs的诱导剂,在BMSCs向神经干细胞分化中起有重要的促进作用。 展开更多

关键词 骨髓基质细胞 诱导 分化 神经元样细胞 高效液相色谱法 神经干细胞

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骨髓基质细胞诱导的神经干细胞移植对颞叶癫痫大鼠学习记忆障碍的改善作用 被引量：4

11

作者 沈维高 刘艳波 +1 位作者 李淑波 何欣 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期523-531,共9页

探讨骨髓基质细胞诱导的神经干细胞移植至海人酸(kanic acid,KA)致痫大鼠海马后对学习记忆障碍的改善作用,从而为干细胞移植治疗癫痫提供理论依据.体外分离大鼠骨髓基质细胞,并在特定条件下培养、诱导分化为神经干细胞.在海马内注射KA... 探讨骨髓基质细胞诱导的神经干细胞移植至海人酸(kanic acid,KA)致痫大鼠海马后对学习记忆障碍的改善作用,从而为干细胞移植治疗癫痫提供理论依据.体外分离大鼠骨髓基质细胞,并在特定条件下培养、诱导分化为神经干细胞.在海马内注射KA建立大鼠癫痫模型,之后把诱导的神经干细胞移植至KA致痫鼠的海马内,用Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力,用PCR方法检测海马内NSE、c-fos和SEZ-6基因表达,采用Western blot技术检测海马内NSE、C-FOS和SEZ-6蛋白表达.结果显示:骨髓基质细胞成功诱导分化为神经干细胞,诱导分化的神经干细胞移植到脑内可明显改善大鼠的学习记忆障碍;移植组大鼠海马内NSE、c-fos和SEZ-6基因表达下调,NSE、C-FOS和SEZ-6蛋白表达亦下调,与阳性对照组及假移植组比较,差异显著(P<0.05).说明骨髓基质细胞诱导的神经干细胞移植至KA致痫大鼠海马后对学习记忆障碍有明显的改善作用,其机制可能与NSE、c-fos、SEZ-6基因和蛋白的表达下调相关. 展开更多

关键词 骨髓基质细胞 神经干细胞 颞叶癫痫 学习记忆

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骨髓间充质干细胞表达神经营养因子及对神经干细胞的保护作用 被引量：11

12

作者 吴永超 郑启新 +3 位作者 胡东 郝杰 王运涛 刘晓帆 《中国康复理论与实践》 CSCD 2006年第9期780-782,F0003,共4页

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)表达脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)以及BMSC条件培养液对神经干细胞的保护作用。方法取大鼠骨髓培养BMSC,用CD44、CD45和CD71免疫细胞化学染色进行鉴定。提取BMSCmRNA,RTPCR检测BDNF... 目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)表达脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)以及BMSC条件培养液对神经干细胞的保护作用。方法取大鼠骨髓培养BMSC,用CD44、CD45和CD71免疫细胞化学染色进行鉴定。提取BMSCmRNA,RTPCR检测BDNF和NGF表达,ELISA检测BMSC培养液中BDNF和NGF的含量。原代取材培养新生大鼠皮质神经干细胞,nestin染色鉴定。用不同比例的BMSC条件培养液培养神经干细胞24h后,热休克诱导凋亡,流式细胞仪检测凋亡细胞比率。结果BMSC贴壁生长,免疫细胞化学染色CD44和CD71阳性表达,CD45阴性表达。BMSC表达BDNF和NGFmRNA,BMSC培养液中含有BDNF和NGF;随培养时间的延长,培养液中BDNF和NGF的浓度增加。BMSC条件培养液可以减少热休克诱导的神经干细胞凋亡比率,并且BMSC条件培养液浓度高者有更好的保护作用。结论BMSC表达神经营养因子BDNF和NGF,对神经干细胞凋亡有保护作用。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞(BMSC) 脑源性神经营养因子(BDNF) 神经生长因子(NGF) 神经干细胞 凋亡 大鼠

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成鼠骨髓间充质干细胞体外分化为神经前体细胞的研究 被引量：5

13

作者 刘宏志 袁维 路磊 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期212-213,共2页

目的:探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)体外分化为神经前体细胞的可能性。方法:MSC原代培养、传代后在细胞因子和氧化剂作用下进行诱导。形态学观察,免疫细胞化学、流式细胞分析和细胞电生理检查。结果:MSC体外可诱导为神经前体细胞,... 目的:探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)体外分化为神经前体细胞的可能性。方法:MSC原代培养、传代后在细胞因子和氧化剂作用下进行诱导。形态学观察,免疫细胞化学、流式细胞分析和细胞电生理检查。结果:MSC体外可诱导为神经前体细胞,诱导后有表面抗原nestin表达,5h分化率49.8%,同时具有早期神经干细胞电流特性。结论:骨髓来源的神经前体细胞治疗中枢神经系统疾病成为可能。 展开更多

关键词 骨髓 间充质干细胞 诱导分化 神经前体细胞

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大鼠骨髓间充质干细胞神经分化潜能的体内外研究 被引量：3

14

作者 邓全军 张建宁 +2 位作者 王志涛 康春生 浦佩玉 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期17-22,共6页

目的体内外研究大鼠骨髓间充质于细胞向神经细胞分化的潜能。方法从大鼠骨髓中分离培养得到的BMSCs传至5代后分为:A组,无诱导剂组;B组,神经细胞诱导组;C组,成骨诱导组;D组,脂肪细胞诱导组。流式细胞仪检测细胞的免疫表型。A,B两组行神... 目的体内外研究大鼠骨髓间充质于细胞向神经细胞分化的潜能。方法从大鼠骨髓中分离培养得到的BMSCs传至5代后分为:A组,无诱导剂组;B组,神经细胞诱导组;C组,成骨诱导组;D组,脂肪细胞诱导组。流式细胞仪检测细胞的免疫表型。A,B两组行神经细胞相关蛋白检测;C组行茜素红染色,D组行油红O染色。将Hoechst33258标记的第5代BMSCs立体定向植入(n=10只)大鼠顶叶皮质,4周后观测。结果BMSCs表面CD29、CD44、CD90阳性,CD31、CD34、CD45阴性。在体外,A组细胞仅Nestin阳性,B组细胞Nestin、MAP2、NSE、GFAP均呈阳性,且形态类似神经细胞。C组经诱导后可见矿化结节。D组细胞浆内出现脂肪滴。大鼠脑内移植部位可见Hoechst33258染色阳性的BMSCs。并呈Nestin,MAP2、NSE、GFAP阳性。结论体外BMSCs易于分离、培养及扩增。BMSCs具有多向分化潜能,可通过诱导向脂肪、成骨及神经细胞分化。在体外能自发表达神经干细胞相关蛋白,在大鼠脑内可自发向神经细胞分化。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 成骨细胞 脂肪细胞 神经细胞 细胞分化

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ERK1/2信号转导通路对骨髓基质细胞条件培养液诱导大鼠中脑神经干细胞分化作用的影响 被引量：3

15

作者 顾平 王彦永 +5 位作者 马芹颖 温雅 崔冬生 刘力 王铭维 张振清 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期589-592,共4页

目的:探讨ERK1/2信号转导通路在骨髓基质细胞条件培养液(BMSCs-CM)诱导大鼠中脑神经干细胞(NSCs)分化中的作用。方法:将神经干细胞球种植干预先包被多聚赖氨酸的35 mm的培养皿中.神经干细胞球约30 min后贴壁.自然分化组将培养液换为含2%... 目的:探讨ERK1/2信号转导通路在骨髓基质细胞条件培养液(BMSCs-CM)诱导大鼠中脑神经干细胞(NSCs)分化中的作用。方法:将神经干细胞球种植干预先包被多聚赖氨酸的35 mm的培养皿中.神经干细胞球约30 min后贴壁.自然分化组将培养液换为含2%B27的neurobasal培养液,对照组换为BMSCs-CM.抑制剂组将培养液换为含有信号转导通路抑制剂PD98059(5μmol/L)的BMSCs-CM.7 d后采用免疫荧光染色方法观察NSCs后代细胞中神经元和星形胶质细胞的数量比例与形态差别。结果:用成年大鼠BMSCs-CM体外培养新生大鼠中脑NSCs.自然分化组NSCs分化的神经元为(15.7±10.3)%[低干对照组的(51.17±10.30)%.P<0.05],星形胶质细胞为(66.9±14.8)%[明显高于对照组的(23.26±5.60)%.P<0.05]。而抑制剂组神经元所占比例为(39.48±7.29)%[明显低于对照组.P<0.01].星形胶质细胞的比例为(31.01±8.96)%[明显高干对照组,P<0.01]。结论:BMSCs-CM可以提高神经干细胞分化为神经元的比例.并且同时降低了其分化为星形胶质细胞的比例,这两种作用很可能是通过ERK1/2信号转导通路实现的。 展开更多

关键词 ERKl/2信号转导通路 骨髓基质细胞 条件培养液 神经干细胞

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相互间非接触性共培养对神经干细胞和骨髓基质细胞的影响 被引量：2

16

作者 杨军 杨琴 +4 位作者 贾延劼 李傲 曾志磊 谢鹏 任俊伟 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期823-826,共4页

目的观察在神经干细胞培养液下非接触性共培养对骨髓基质细胞和神经干细胞的影响。方法采用Transwell构建共培养体系非接触性共培养方式培养细胞,进行形态学和免疫化学染色方法观察。结果共培养组:神经干细胞贴壁、伸出长突起,随培养时... 目的观察在神经干细胞培养液下非接触性共培养对骨髓基质细胞和神经干细胞的影响。方法采用Transwell构建共培养体系非接触性共培养方式培养细胞,进行形态学和免疫化学染色方法观察。结果共培养组:神经干细胞贴壁、伸出长突起,随培养时间延长,彼此交织成网;免疫组化显示细胞分化为神经元、胶质细胞、少突胶质细胞。骨髓基质细胞则大部分悬浮生长形成大的球状,此球状细胞分化的细胞表达神经元、胶质细胞、少突胶质细胞标志性蛋白。对照组:神经干细胞组细胞仍呈悬浮球状生长;骨髓基质细胞组细胞则部分悬浮生长形成小的球状,部分贴壁生长。结论在神经干细胞培养液下非接触性共培养,骨髓基质细胞和神经干细胞能相互促进向神经细胞的分化,表明骨髓基质细胞和神经干细胞均可能分泌一些营养因子,为彼此提供一种生存分化的微环境。 展开更多

关键词 骨髓基质细胞 神经干细胞 共培养 细胞分化

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条件培养基对神经干细胞增殖与分化作用的影响 被引量：2

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作者 杨昆 申才良 +3 位作者 宋旆文 刘晓颖 徐鹏 张峰 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第6期735-739,共5页

目的观察大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)条件培养基对体外培养神经干细胞(NSCs)增殖与分化作用的影响。方法用BMSCs条件培养基分别在增殖与分化条件下培养NSCs,观察NSCs形态变化。用MTT法及NSCs球数目和直径的统计分析了解NSCs增殖情况,... 目的观察大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)条件培养基对体外培养神经干细胞(NSCs)增殖与分化作用的影响。方法用BMSCs条件培养基分别在增殖与分化条件下培养NSCs,观察NSCs形态变化。用MTT法及NSCs球数目和直径的统计分析了解NSCs增殖情况,同时行免疫荧光及Western blot法鉴定其分化情况。结果原代培养获得大量未分化且悬浮生长的NSCs球,并能分化为神经元细胞、星形胶质细胞及少突胶质细胞。BMSCs条件培养基组能够促进NSCs球的吸附贴壁,但与对照组相比光密度(OD)值差异无统计学意义,NSCs球数目和直径差异亦无统计学意义。另外,BMSCs条件培养基组少突胶质细胞特异性蛋白MBP表达量高于对照组(P<0.05),星形胶质细胞特异性蛋白GFAP表达量低于对照组(P<0.05),而神经元特异性蛋白MAP-2表达量未见明显异常。结论大鼠BMSCs条件培养基促进NSCs向少突胶质细胞方向分化,但不抑制其增殖作用。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 条件培养基 神经干细胞 增殖 分化

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大鼠骨髓细胞诱导分化神经细胞的形态学观察 被引量：2

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作者 李战辉 刘振华 +1 位作者 姜晓丹 徐如祥 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期613-617,共5页

本实验探讨了从骨髓诱导培养分化神经细胞的方法,并从形态学上观察了其演变规律.抽取SD大鼠骨髓做全骨髓细胞培养,用光镜、扫描电镜观察不同阶段的形态变化,用免疫细胞化学方法进行鉴定.观察到骨髓细胞由单细胞、细胞分裂、形成克隆团(... 本实验探讨了从骨髓诱导培养分化神经细胞的方法,并从形态学上观察了其演变规律.抽取SD大鼠骨髓做全骨髓细胞培养,用光镜、扫描电镜观察不同阶段的形态变化,用免疫细胞化学方法进行鉴定.观察到骨髓细胞由单细胞、细胞分裂、形成克隆团(球)、出芽,直至形成突起成为神经元样细胞的演变过程.可确定神经元样细胞的前体在骨髓阶段是一类'大圆细胞'.24h左右开始贴壁,前体细胞长出'足'样结构与细胞外基质相连接.培养25～35 d细胞分化为神经元样,神经元样细胞的形态多样,有球形、锥形、星形或梭形等,直径在15.3～36.5μm之间.应用免疫细胞化学鉴定出神经干细胞、神经元和胶质细胞.结果表明,骨髓细胞可分化为神经细胞,扫描电镜从超微结构上给予佐证.为骨髓细胞向神经细胞分化的发育过程提供了形态学资料. 展开更多

关键词 大鼠 骨髓 基质细胞 造血干细胞 神经细胞 扫描电镜 诱导分化

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BMP-2对室管膜前下区神经干细胞向多巴胺能神经元分化及对DLX5表达的影响 被引量：3

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作者 刘胜华 周政 +3 位作者 杨辉 刘俊 阴金波 辛志成 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期480-483,共4页

目的探讨骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对室管膜前下区(anterior subventricular zone,SVZa)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向多巴胺能神经元分化及对DLX5表达的影响。方法体外培养SVZa NSCs,分为对照组、BMP-... 目的探讨骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对室管膜前下区(anterior subventricular zone,SVZa)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向多巴胺能神经元分化及对DLX5表达的影响。方法体外培养SVZa NSCs,分为对照组、BMP-2组、BMP-2+Noggin组和Noggin组,通过免疫荧光染色和流式细胞术,观察其分化为酪氨酸羟化酶阳性(TH+)神经元的情况;用RT-PCR检测DLX5 mRNA表达水平。结果BMP-2组SVZaNSCs向TH+神经元分化的比例和DLX5 mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.05),且这种效应能被其拮抗剂Noggin特异性抑制。结论BMP-2可能通过上调DLX5表达水平从而促进SVZa NSCs向多巴胺能神经元分化。 展开更多

关键词 神经干细胞 室管膜前下区 多巴胺能神经元 DLX5 BMP-2

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Fasudil促进体外培养骨髓源神经干细胞的增殖与存活 被引量：2

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作者 宋国斌 席国萍 +5 位作者 尉杰忠 丰玲 黄建军 肖保国 李艳花 马存根 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1488-1491,1496,共5页

目的探讨法舒地尔（Fasudil）对体外培养骨髓源神经干细胞（BMNSC）增殖和存活的影响。方法取3～4周龄的C57BL／6小鼠，分离骨髓基质细胞并诱导产生细胞球，用免疫荧光染色鉴定细胞类型。羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记细... 目的探讨法舒地尔（Fasudil）对体外培养骨髓源神经干细胞（BMNSC）增殖和存活的影响。方法取3～4周龄的C57BL／6小鼠，分离骨髓基质细胞并诱导产生细胞球，用免疫荧光染色鉴定细胞类型。羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记细胞，检测Fasudil促进BMNSC增殖能力。利用脂多糖（LPS）和γ干扰素（IFN-γ）联合处理BV-2小胶质细胞制备炎性条件培养液处理BMNSC，Fasudil干预，通过流式细胞术检测线粒体膜电位、碘化丙啶（PI）荧光值，探讨Fasudil对BMNSC的保护效果。结果免疫荧光染色证明骨髓源细胞球为神经上皮干细胞蛋白（nestin）阳性的神经干细胞。Fasudil处理明显降低CFSE平均荧光值。在LPS和IFN-γ联合作用下，BV-2小胶质细胞释放更多的白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）等炎性细胞因子，显著高于PBS处理组。该炎性条件培养液导致BMNSC线粒体膜电位明显降低并诱导更多的细胞死亡，而Fasudil处理则显著恢复线粒体膜电位接近正常值，减少细胞死亡，并且具有明显的剂量依赖性。结论Fasudil对体外培养BMNSC的增殖和存活具有显著的促进作用。 展开更多

关键词 法舒地尔(Fasudil) 骨髓源神经干细胞 线粒体膜电位

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