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东乡野生稻双元细菌人工染色体(BIBAC)文库的构建 被引量:4
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作者 成志伟 曹筑荣 +1 位作者 陈良碧 曹孟良 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第C00期272-275,282,共5页
双元细菌人工染色体(binarybacterialartificialchromosome,BIBAC)是能直接将大片段DNA转入植物的载体,是植物基因图位克隆和构建植物基因嵌入突变体库的重要工具。该研究以东乡野生稻为材料,构建其BIBAC文库。该文库由14592个克隆组成... 双元细菌人工染色体(binarybacterialartificialchromosome,BIBAC)是能直接将大片段DNA转入植物的载体,是植物基因图位克隆和构建植物基因嵌入突变体库的重要工具。该研究以东乡野生稻为材料,构建其BIBAC文库。该文库由14592个克隆组成,平均插入片段大小为65kb,覆盖率为2倍基因组。稳定性检测结果表明,东乡野生稻基因组DNA能够在BIBAC载体中稳定存在。 展开更多
关键词 东乡野生稻 双元细菌人工染色体文库 基因组 DNA
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高效制备双元细菌人工染色体(BIBAC)载体DNA的研究 被引量:1
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作者 成志伟 曹筑荣 +5 位作者 李磊 邢俊杰 罗赫荣 王正华 陈良碧 曹孟良 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2007年第1期98-100,共3页
高质量的BIBAC载体DNA的制备受到酶切、脱磷等许多因素的影响,是构建BIBAC文库的关键步骤之一.以BIBAC2载体为材料,对其进行了BamHI限制性酶切和CIAP脱磷,制备了可用于进一步构建文库的线性载体.在此基础上确定了适宜的酶量、酶切时间... 高质量的BIBAC载体DNA的制备受到酶切、脱磷等许多因素的影响,是构建BIBAC文库的关键步骤之一.以BIBAC2载体为材料,对其进行了BamHI限制性酶切和CIAP脱磷,制备了可用于进一步构建文库的线性载体.在此基础上确定了适宜的酶量、酶切时间、脱磷酶的用量及失活等步骤的反应条件. 展开更多
关键词 基因组 双元细菌人工染色体 载体 脱磷
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BIBAC2载体转化水稻的研究 被引量:2
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作者 丁文静 叶兴国 《农业科学研究》 2006年第1期6-9,12,共5页
双元细菌人工染色体(BIBAC)栽体具有克隆大片段DNA构建文库和农杆菌介导转化植物的双重功能.利用BIBAC载体,在双子叶植物烟草和番茄中已实现了大片段DNA的转移,但在单子叶植物中的应用还未见报道.本研究利用不同水稻基因型、不同... 双元细菌人工染色体(BIBAC)栽体具有克隆大片段DNA构建文库和农杆菌介导转化植物的双重功能.利用BIBAC载体,在双子叶植物烟草和番茄中已实现了大片段DNA的转移,但在单子叶植物中的应用还未见报道.本研究利用不同水稻基因型、不同农杆菌菌株,对水稻进行了BIBAC2栽体的转化研究.水稻成熟胚诱导愈伤组织经过1~2次继代培养,在含乙酰丁香酮的N6培养基上预培养3d,在含BIBAC2栽体的农杆菌中侵染10min,26℃下共培养3d.感染后的愈伤组织在含25~50mg/L潮霉素培养基上经过4~8周的筛选,共得到了66株抗性再生植株.通过对抗性植株中GUs基因的组织化学染色检测,NPTⅡ基因的PCR检测和ELISA检测,HYG基因的PCR检测,确认2株阳性植株来自EHA105菌系侵染的中花15号愈伤组织,1株阳性植株来自EHA105菌系侵染的中花8号愈伤组织,转化率分别为2.9%和0.9%.结果表明,B1BAC2栽体已被成功导入了水稻基因组中,转化效果EHA105菌株优于C58C1菌株,中花15号、中花8号优于中花10号和中花11号.结果还表明,利用三亲交配法可以将大于23.5kb的载体转化到农杆菌中.初步建立了BIBAC2栽体转化水稻的技术体系,为利用BIBAC系统向水稻转入大片段DNA和多个外源功能基因奠定了基础. 展开更多
关键词 水稻 双元细菌人工染色体 农杆菌 遗传转化
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毛竹大片段双元细菌人工染色体基因组文库的构建 被引量:2
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作者 管雨 杨洋 +2 位作者 张智俊 罗淑萍 汤定钦 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期527-532,共6页
从毛竹Phyllostachys pubescens幼嫩叶片中提取纯化得到高质量的基因组DNA,经限制性内切酶BamH I对它们进行梯度酶切,脉冲场电泳选择合适酶切DNA片段,与脱磷酸化处理过的质粒载体pCLD04541按质量比3∶1相互连接,转化大肠杆菌Escherichia... 从毛竹Phyllostachys pubescens幼嫩叶片中提取纯化得到高质量的基因组DNA,经限制性内切酶BamH I对它们进行梯度酶切,脉冲场电泳选择合适酶切DNA片段,与脱磷酸化处理过的质粒载体pCLD04541按质量比3∶1相互连接,转化大肠杆菌Escherichia coli DH10B感受态细胞进行蓝白斑筛选,挑取白色克隆,获得重组率较高的阳性克隆,构建了含有104个克隆的双元细菌人工染色体(BIBAC)基因组文库,并通过脉冲场电泳检测分析后确定,所构建的毛竹BIBAC文库平均插入片段为105 kb,约覆盖5倍毛竹基因组。该文库的构建为毛竹基因组研究做好了前期的基础工作。 展开更多
关键词 分子生物学 毛竹 双元细菌人工染色体 基因组文库
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双元细菌人工染色体基因组文库研究进展
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作者 朱丹 张杰伟 +2 位作者 陈亚娟 张少斌 魏建华 《现代农业科技》 2013年第2期29-30,36,共3页
酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)是伴随着人类基因组计划的实施而产生的,这些大片段基因克隆载体的应用推动了分子生物学、遗传学等学科的快速发展。以农杆菌介导的直接转化植物为代表的双元细菌人工染色体(BIBAC)载体的发展... 酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)是伴随着人类基因组计划的实施而产生的,这些大片段基因克隆载体的应用推动了分子生物学、遗传学等学科的快速发展。以农杆菌介导的直接转化植物为代表的双元细菌人工染色体(BIBAC)载体的发展,加速植物基因组的研究,成为植物基因组分析、基因功能鉴定、染色体结构与功能关系研究的重要工具。介绍了人工染色体文库的发展史,根据建库经验,着重阐述了BIBAC文库的构建、鉴定与应用。 展开更多
关键词 人工染色体 双元细菌人工染色体文库 基因组文库
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