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八聚精氨酸修饰的载ASODN脂质体的构建及体外评价 被引量:8
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作者 王文喜 代凯 唐岚 《浙江工业大学学报》 CAS 2014年第3期334-337,共4页
用硬脂酰八聚精氨酸(R8)对普通脂质体进行修饰,以期获得高效低毒的反义寡核苷酸(Antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)载体.修饰后的脂质体(R8-Lip)与反义寡核苷酸孵育,用琼脂糖凝胶电泳法考察复合物的形成情况;在肝癌细胞(HepG2)、... 用硬脂酰八聚精氨酸(R8)对普通脂质体进行修饰,以期获得高效低毒的反义寡核苷酸(Antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)载体.修饰后的脂质体(R8-Lip)与反义寡核苷酸孵育,用琼脂糖凝胶电泳法考察复合物的形成情况;在肝癌细胞(HepG2)、肺癌细胞(A549)和口腔上皮癌细胞(KB)中,用MTT法评估R8-Lip的细胞毒性;同时考察在这三种细胞株中,R8的浓度与摄取效率的关系.当R8-Lip/ASODN复合物中正负电荷比(+/-)超过4∶1时,ASODN已与R8-Lip完全结合成带正电的复合物;当R8-Lip中R8的质量浓度小于10μg/mL时,细胞存活率大于75%;R8-Lip对ASODN细胞摄取的促进作用与R8的浓度有关,当R8的质量浓度由0.3μg/mL增加到9.6μg/mL(+/-由1∶2增加到16∶1),细胞内荧光强度逐渐增加;当R8-Lip/ASODN复合物中+/-=16∶1时,R8对ASODN摄取的促进作用强于市售的转染试剂Lipfectamine2000.因此,R8-Lip作为ASODN的载体,具备了高效低毒的优势,值得进一步深入研究. 展开更多
关键词 八聚精氨酸 反义寡核苷酸 细胞摄取 非病毒载体 脂质体
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PEI-RGD/^(125)I-(α_V) ASODN的制备及其对肝癌HepG2细胞侵袭力的抑制
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作者 蔡海东 谯娱 +4 位作者 袁雪宇 杨越华 袁世栋 孙明 吕中伟 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期609-613,共5页
目的:探讨以PEI-RGD(polyethyleneimine-Arg-Gly-Asp)为转染载体的125I-(αV)ASODN投递在体外对HepG2肝癌细胞侵袭力的影响。方法:125I标记整合素αV亚基的ASODN,以聚乙烯亚胺衍生物PEI-RGD为载体制备PEI-RGD/125I-(αV)ASODN复合物,通... 目的:探讨以PEI-RGD(polyethyleneimine-Arg-Gly-Asp)为转染载体的125I-(αV)ASODN投递在体外对HepG2肝癌细胞侵袭力的影响。方法:125I标记整合素αV亚基的ASODN,以聚乙烯亚胺衍生物PEI-RGD为载体制备PEI-RGD/125I-(αV)ASODN复合物,通过受体介导方式转染进入HepG2细胞,利用Boyden小室侵袭模型检测复合物对HepG2细胞侵袭力的影响。结果:(1)125I-(αV)ASODN的标记率为(73.78±4.09)%,放化纯度为(96.68±1.38)%,37℃放置48 h后的放化纯度仍>90%,表明其稳定性良好;(2)HepG2细胞对PEI-RGD/125I-(αV)ASODN的摄取于4μl/2μg时达到峰值[(12.77±0.85)%],之后明显降低,故选择2μl/1μg作为PEI-RGD/125I-(αV)ASODN对HepG2细胞的作用剂量;(3)相对于其他实验组和对照组,PEI-RGD/125I-(αV)ASODN组显著降低了HepG2细胞的侵袭能力(P<0.01)。结论:以PEI-RGD为载体投递125I-(α)ASODN能有效抑制HepG2细胞的侵袭力。 展开更多
关键词 聚乙烯亚胺-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(PEI-RGD) 整合素αV亚基 asodn 肝肿瘤 侵袭
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聚乙烯亚胺介导生存素反义核酸体外投递肝癌SMMC-7721细胞的条件优化 被引量:9
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作者 王芳 蒋建伟 +1 位作者 陈涛 曹明溶 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期551-556,共6页
目的:探讨聚乙烯亚胺(polyethylene im ine,PEI)作为生存素(survivin)反义核酸(anti-sense oligodeoxynuc leotides,ASODN)的载体投递肝癌SMMC-7721细胞的条件。方法:凝胶阻滞实验筛选PEI与survivin ASODN形成静电复合物的最佳质量比;W ... 目的:探讨聚乙烯亚胺(polyethylene im ine,PEI)作为生存素(survivin)反义核酸(anti-sense oligodeoxynuc leotides,ASODN)的载体投递肝癌SMMC-7721细胞的条件。方法:凝胶阻滞实验筛选PEI与survivin ASODN形成静电复合物的最佳质量比;W ST-8法检测PEI对肝癌细胞的毒性;流式细胞仪及W ST-8法筛选荧光标记的PEI与ASODN在不同质量比时的瞬时转染效率及48 h转染效率;流式细胞仪及荧光显微镜分别检测荧光标记的ASODN以及PEI-ASODN复合物进入细胞的情况;W ST-8法检测血清对PEI转染效率的影响。结果:m(PEI)∶m(ASODN)为0.625∶1~2.5∶1时可以形成电中性状态的静电复合物;PEI终质量浓度≤4μg/mL对肝癌细胞的毒性较小;m(PEI)∶m(ASODN)为0.75∶1时转染效率最高;血清存在对PEI转染效率无明显影响。结论:PEI是一种低毒的ASODN投递载体,其终质量浓度≤4μg/mL可作为肝癌细胞的转染载体,血清条件下m(PEI)∶m(ASODN)为0.75∶1时,PEI携带sur... 展开更多
关键词 聚乙烯亚胺 生存素 反义核酸 肝癌
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c-myc反义寡核苷酸对肾癌细胞的生长抑制作用及对细胞周期的影响 被引量:9
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作者 王子明 种铁 张鹏 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期611-612,623,共3页
目的 观察修饰的c myc反义寡核苷酸 (ASODN)对肾癌细胞的生长和细胞周期的影响。 方法 用人工合成的c mycASODN转染于培养的人肾癌细胞 ,观察其对瘤细胞的作用。结果 ①MTT法测定发现 ,与正义和错配链相比较 ,c mycASODN有明显抑制... 目的 观察修饰的c myc反义寡核苷酸 (ASODN)对肾癌细胞的生长和细胞周期的影响。 方法 用人工合成的c mycASODN转染于培养的人肾癌细胞 ,观察其对瘤细胞的作用。结果 ①MTT法测定发现 ,与正义和错配链相比较 ,c mycASODN有明显抑制肾癌细胞生长的作用 ,12 μmol·L-1c mycASODN组作用 4 8h ,对瘤细胞的生长抑制率为 4 7% ;该生长抑制作用随反义药物剂量的增加而增强 ,同时随作用时间的变化而变化。②流式细胞仪检测证明 ,c mycASODN对肾癌细胞周期的抑制作用在G1期到S期。结论 c 展开更多
关键词 C-MYC 反义寡核苷酸 肾癌 生长抑制 细胞周期 asodn 细胞培养
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hTERT反义寡核苷酸对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用 被引量:8
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作者 孙玲 王峰 +4 位作者 孙慧 乐晓萍 葛秀峰 姜中兴 张钦宪 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期649-653,共5页
为了研究hTERT基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用,并探讨HL-60细胞端粒酶活性与hTERT基因表达的关系,应用反义寡核苷酸封闭HL-60细胞hTERT基因的表达,RT-PCR方法检测该基因表达抑制情况,倒置显微镜观察细... 为了研究hTERT基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用,并探讨HL-60细胞端粒酶活性与hTERT基因表达的关系,应用反义寡核苷酸封闭HL-60细胞hTERT基因的表达,RT-PCR方法检测该基因表达抑制情况,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖状态,应用TRAP-ELISA、TRAP-PAGE方法检测HL-60细胞端粒酶活性。结果发现反义硫代寡核苷酸作用于HL-60细胞72小时后,hTERT基因表达明显受抑,细胞生长受抑,增殖能力减弱,其抑制作用具有序列特异性及浓度、时间依赖性。端粒酶活性检测显示反义寡核苷酸10、20和30μmol/L作用组OD450-690值分别为1.504±0.47、1.223±0.39,0.944±0.16,与未作用组(2.648±0.42)比较,差异有显著性(P<0.05);正义寡核苷酸20μmol/L作用组(OD450-690值为2.376±0·65)与未作用组比较,差异无显著性(P>0.05)。TRAP-PAGE检测表明hTERTASODN作用组较SODN作用组端粒酶条带明显减少,以30μmol/L作用组条带最少。结论hTERT基因反义寡核苷酸能够通过封闭hTERT基因的表达而抑制HL-60细胞增殖,下调端粒酶活性。 展开更多
关键词 HL-60细胞 HTERT 反义寡核苷酸 端粒酶活性
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反义寡核苷酸抑制survivin基因表达及肝癌细胞生长的研究 被引量:4
6
作者 陈涛 贾玉容 +1 位作者 赵铁军 尹致良 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2004年第3期187-190,共4页
目的:采用反义寡核苷酸抑制肝癌细胞中survivin基因的表达,研究其对肝癌细胞生长的作用。方法:采用脂质 体介导survivin反义寡核苷酸转染人肝癌细胞株SMMC-7721细胞,Western blot及原位杂交方法检测survivin蛋白及mRNA表 达,流式细胞仪... 目的:采用反义寡核苷酸抑制肝癌细胞中survivin基因的表达,研究其对肝癌细胞生长的作用。方法:采用脂质 体介导survivin反义寡核苷酸转染人肝癌细胞株SMMC-7721细胞,Western blot及原位杂交方法检测survivin蛋白及mRNA表 达,流式细胞仪检测凋亡细胞比率,检测转染前后细胞贴壁率变化,并绘制细胞生长曲线。结果:survivin反义寡核苷酸转染 后,肝癌细胞survivin蛋白及mRNA表达均显著降低,细胞贴壁率显著降低,细胞增殖活性明显受抑,细胞凋亡率显著增加。 结论:survivin反义寡核苷酸转染可以有效降低细胞内survivin基因的表达,诱导细胞发生凋亡,抑制肝癌细胞生长。 展开更多
关键词 肝癌 SURVIVIN基因 反义寡核苷酸 细胞增殖 细胞凋亡
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神经元型一氧化氮合酶反义寡脱氧核苷酸抑制大鼠吗啡戒断症状 被引量:7
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作者 周文华 刘惠芬 +3 位作者 顾钧 谢小虎 唐甩恩 杨国栋 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期688-692,共5页
目的 观察鞘内或侧脑室注射神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)反义寡脱氧核苷酸对大鼠吗啡戒断症状的影响。方法 根据基因结构设计nNOS或eNOS反义寡脱氧核苷酸片段 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)测定nNOSmR NA表达。结果 吗啡依赖大鼠... 目的 观察鞘内或侧脑室注射神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)反义寡脱氧核苷酸对大鼠吗啡戒断症状的影响。方法 根据基因结构设计nNOS或eNOS反义寡脱氧核苷酸片段 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)测定nNOSmR NA表达。结果 吗啡依赖大鼠在纳洛酮激发前 2 4h鞘内注射nNOS反义寡脱氧核苷酸抑制所有大鼠吗啡戒断症状如湿狗摇动、扭体及激惹、腹泻、体重减少、咬牙和流涎。eNOS反义寡脱氧核苷酸对吗啡戒断症状总评分值没有影响 ,但减少腹泻、体重减轻值和咬牙等评分值。侧脑室注射nNOS反义寡脱氧核苷酸减少吗啡戒断症状 ,eNOS反义寡脱氧核苷酸对吗啡戒断症状没有影响。鞘内注射nNOS反义寡脱氧核苷酸后脊髓nNOSmRNA的相对表达几乎消失 ,iNOS的表达增加 ;而eNOS反义寡脱氧核苷酸处理后对nNOS和iNOS的表达没有影响。结论 nNOS基因表达介导了吗啡戒断反应过程 ,抑制nNOS基因表达可增加脊髓i NOS基因的表达。 展开更多
关键词 阿片依赖 一氧化氮合酶 吗啡戒断症状 MRNA
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靶向Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1反义核酸抑制消化系肿瘤细胞增殖效果的差异 被引量:9
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作者 蒋建伟 吴风云 +3 位作者 何金花 廖晓莉 王威 吴志慧 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1093-1098,共6页
目的比较靶向Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1反义核酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASO)对消化系统肿瘤细胞(肝癌HepG2细胞、胃癌MGC-803细胞、结肠癌Lovo细胞)的增殖抑制作用和致凋亡作用的差异。方法分别合成靶向Bcl-2、Bcl-xl... 目的比较靶向Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1反义核酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASO)对消化系统肿瘤细胞(肝癌HepG2细胞、胃癌MGC-803细胞、结肠癌Lovo细胞)的增殖抑制作用和致凋亡作用的差异。方法分别合成靶向Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1的反义核酸和随机序列反义核酸(randomolig odeoxynucleotide,RODN),采用脂质体Li-pofectamineTM 2000转染细胞,WST法检测相同浓度的5种ASOs对肝癌HepG2细胞、胃癌MGC-803细胞、结肠癌Lovo细胞的增殖抑制作用和致凋亡作用。结果 Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1等5种ASOs中,不论是对细胞增殖抑制还是致凋亡作用,均以Bcl-xlASO、Mcl-1ASO的作用效果较好。结论在Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1等5种ASOs中,Bcl-xlASO、Mcl-1ASO可明显抑制消化系肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 反义核酸 BCL-2 BCL-XL MCL-1 增殖 凋亡 肿瘤细胞
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c-myc反义寡核苷酸对HL-60细胞端粒酶活性影响及诱导凋亡作用 被引量:9
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作者 孙玲 王峰 +7 位作者 孙慧 乐晓萍 刘林湘 刘延方 王芳 王一浩 马鸿雁 张钦宪 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期605-609,共5页
为了研究c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞端粒酶活性的影响及其诱导凋亡作用,探讨HL-60细胞端粒酶活性与c-myc基因表达的关系,应用反义寡核苷酸封闭HL-60细胞c-myc基因的表达,RT-PCR方法检测该基因表达抑制情况,采用流式细胞... 为了研究c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞端粒酶活性的影响及其诱导凋亡作用,探讨HL-60细胞端粒酶活性与c-myc基因表达的关系,应用反义寡核苷酸封闭HL-60细胞c-myc基因的表达,RT-PCR方法检测该基因表达抑制情况,采用流式细胞术进行细胞凋亡检测及细胞周期分析,琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA断裂情况,应用TRAP-ELISA法测定HL-60细胞端粒酶的活性。结果表明:反义硫代寡核苷酸作用于HL-60细胞72小时后,c-myc基因表达明显受抑;S期细胞百分数由55.6%降至30%,并出现早期凋亡峰(凋亡细胞比例占25.2%);琼脂糖凝胶电泳显示DNA凋亡梯形带;端粒酶活性检测发现反义寡核苷酸3,4,5μmol/L作用组OD450-690分别为1.952±0.14,1.805±0.40,1.616±0.41,与未作用组(OD450-690为2.648±0.42)比较,差异有显著性(P<0.05);反义寡核苷酸1和2μmol/L作用组及正义寡核苷酸5μmol/L作用组OD450-690分别为2.324±0.36,2.162±0.38,2.466±0.29,与未作用组比较,差异无显著性(P>0.05)。结论:c-myc基因反义寡核苷酸能够通过封闭c-myc基因的表达而诱导HL-60细胞凋亡,阻止细胞由G1期进入S期,并具有下调端粒酶活性作用。 展开更多
关键词 HL-60细胞 c—myc基因 反义核酸 细胞凋亡 端粒酶活性
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乙酰肝素酶反义寡核苷酸对A375细胞增殖及乙酰肝素酶蛋白表达的影响 被引量:5
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作者 于建斌 张岚 +4 位作者 李琳 陈燕辉 张江安 陈奎生 张云汉 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2006年第6期1067-1070,共4页
目的观察乙酰肝素酶反义寡核苷酸(ASODN)对人恶性黑素瘤A375细胞增殖及乙酰肝素酶蛋白表达的影响。方法以空白组和无关序列(N-ODN)组为对照,设计、合成4条ASODN链(ASODN-t1,t2,t3和t4),脂质体包埋后分别以10μmol/L、20μmol/L、30μmol... 目的观察乙酰肝素酶反义寡核苷酸(ASODN)对人恶性黑素瘤A375细胞增殖及乙酰肝素酶蛋白表达的影响。方法以空白组和无关序列(N-ODN)组为对照,设计、合成4条ASODN链(ASODN-t1,t2,t3和t4),脂质体包埋后分别以10μmol/L、20μmol/L、30μmol/LN-ODN和ASODN转染A375细胞,台盼蓝排斥试验检测细胞增殖情况,免疫组织化学法检测乙酰肝素酶蛋白表达的变化。结果转染72h后,各ASODN组A375细胞计数较对照组、N-ODN组均减少(P均=0.000);每条链的10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L3个浓度组相比,差异均有统计学意义(P均=0.000);30μmol/LASODN-t2组与其他各组相比,差异均有统计学意义(P均<0.05)。转染48h后,30μmol/LASODN-t2组乙酰肝素酶蛋白的表达较对照组、N-ODN组下调(P均=0.000)。结论乙酰肝素酶ASODN可抑制A375细胞增殖,下调乙酰肝素酶蛋白的表达。 展开更多
关键词 恶性黑素瘤 乙酰肝素酶 寡核苷酸 反义 A375细胞
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β1-整合素反义寡核苷酸抑制胃癌细胞系SGC7901粘附侵袭的实验研究 被引量:5
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作者 董武 崔越宏 +1 位作者 孙宏 徐惠绵 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期601-603,共3页
目的:观察β1-整合素反义寡核苷酸对高侵袭性人胃癌细胞SGC7901粘附侵袭的抑制作用。方法:以脂质体为载体将硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸转染SGC7901细胞,免疫化学方法观察转染后以Biotin标记的Inte鄄grinβ1asODN在细胞内的分布;RT-PCR... 目的:观察β1-整合素反义寡核苷酸对高侵袭性人胃癌细胞SGC7901粘附侵袭的抑制作用。方法:以脂质体为载体将硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸转染SGC7901细胞,免疫化学方法观察转染后以Biotin标记的Inte鄄grinβ1asODN在细胞内的分布;RT-PCR及流式细胞术分别测定Integrinβ1mRNA和蛋白表达变化;MTT法和Boy鄄den小室模型分别测定其粘附力和侵袭力。结果:Integrinβ1asODN转染SGC7901后1h,胞浆及胞核内可见均匀分布的浅棕色颗粒,随着时间的延长,颗粒颜色不断加深;RT-PCR结果显示489bp处条带不同程度变浅;Integrinβ1蛋白表达曲线明显左移;粘附和侵袭实验证明,Integrinβ1asODN转染的SGC7901细胞的粘附力及侵袭力明显下降(P<0.001),抑制率分别为54%和76%,明显优于随机序列(P<0.001)。结论:Integrinβ1asODN转染SGC7901可降低其mRNA和蛋白表达水平,从而抑制其对细胞外基质(ECM)的粘附和侵袭。 展开更多
关键词 胃癌 INTEGRINΒ1 反义寡核苷酸(as ODN)
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一个新的靶点的反义bcl-2寡核苷酸诱导HL-60细胞凋亡的研究 被引量:6
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作者 雷小勇 张洹 林剑 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 2001年第1期125-128,共4页
目的 :探讨针对bcl- 2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸对HL - 60细胞bcl - 2蛋白表达和凋亡的作用 方法 :应用台盼蓝拒染法和流式细胞仪检测HL - 60细胞的活性和bcl- 2蛋白表达和细胞凋亡的情况 结果 :10 μmol/L和 2 0 μmol/L的反义... 目的 :探讨针对bcl- 2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸对HL - 60细胞bcl - 2蛋白表达和凋亡的作用 方法 :应用台盼蓝拒染法和流式细胞仪检测HL - 60细胞的活性和bcl- 2蛋白表达和细胞凋亡的情况 结果 :10 μmol/L和 2 0 μmol/L的反义寡核苷酸能抑制HL - 60细胞bcl- 2蛋白表达和诱导细胞凋亡 ,并且针对bcl - 2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸比针对bcl - 2mRNA翻译起始区的反义寡核苷酸作用更强 结论 :针对bcl- 2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸能抑制HL - 60细胞bcl- 展开更多
关键词 反义寡核苷酸 bcl-2 HL-60细胞 细胞凋亡 原癌基因 肿瘤细胞 生长抑制
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Livin mRNA的反义核酸诱导MCF-7乳癌细胞凋亡作用(英文) 被引量:14
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作者 张华东 袁守军 +2 位作者 陈惠鹏 田增月 韩昌明 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2004年第12期1353-1356,共4页
目的 :以livinmRNA为靶点设计反义硫代脱氧寡核苷酸 (PS ODNs) ,探讨其体外抗肿瘤效应及其机制。方法 :设计以livinmRNA为靶点的反义核酸并作用于MCF 7乳癌细胞 ,用MTT、RT PCR和流式细胞仪检测等方法对其进行评价研究。结果 :在设计的... 目的 :以livinmRNA为靶点设计反义硫代脱氧寡核苷酸 (PS ODNs) ,探讨其体外抗肿瘤效应及其机制。方法 :设计以livinmRNA为靶点的反义核酸并作用于MCF 7乳癌细胞 ,用MTT、RT PCR和流式细胞仪检测等方法对其进行评价研究。结果 :在设计的一些反义核酸中 ,YMZ0 5能够有效地抑制livin基因的表达 ,增加caspase 3的活性 ,诱导MCF 7细胞凋亡 ,明显抑制其生长 ,结论 :通过抑制livin基因的表达能够抑制MCF 7乳癌细胞生长、诱导其凋亡 ,livin可能会成为抗肿瘤的新靶点。 展开更多
关键词 反义 磷酰硫代脱氧寡核苷酸 LIVIN MRNA MCF-7细胞 细胞凋亡
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界面聚合法制备反义核酸氰基丙烯酸正丁酯纳米粒的研究及稳定性考察 被引量:4
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作者 徐越 柯以铨 +3 位作者 杨西晓 阎玺庆 王建奇 黄乐松 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第14期1334-1337,共4页
目的优化制备包裹反义寡核苷酸a-氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(ASODN in NP)并考察稳定性。方法以氰基丙烯酸正丁酯(butyleyanoacrylate,BCA)为载药材料,采用界面聚合法制备ASODN in NP;在单因素考察的基础上,采用正交设计优化处方和制备工艺... 目的优化制备包裹反义寡核苷酸a-氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(ASODN in NP)并考察稳定性。方法以氰基丙烯酸正丁酯(butyleyanoacrylate,BCA)为载药材料,采用界面聚合法制备ASODN in NP;在单因素考察的基础上,采用正交设计优化处方和制备工艺;用透射电镜观察其形态;马尔文激光粒度分析仪测定粒径;高效液相色谱法测定载药量和包封率;用含7mol/L尿素的20%聚丙烯酰胺凝胶电泳考察载药纳米粒在体外血清中的稳定性。结果按优化工艺条件,制得的载药纳米粒,其形态规整、无黏连、大小均匀,平均粒径为94.9nm,包封率和载药量分别为96.7%、10.1%,在体外血清中稳定性好并优于传统的吸附法制备的纳米粒。结论本实验制备的ASODN in NP具有较好的稳定性,较高包封率和载药量。 展开更多
关键词 反义寡核苷酸 氰基丙烯酸正丁酯 纳米粒 稳定性 界面聚合法
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CCR2介导MCP-1诱导的人内皮细胞凋亡 被引量:7
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作者 徐艳 刘喜平 +2 位作者 李琴山 尚惠锋 钱民章 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期356-361,共6页
本室前期工作发现,单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)可诱导人内皮细胞(hVECs)凋亡.为进一步揭示MCP-1诱导凋亡分子机理,首先观察MCP-1对hVECs CC类趋化因子受体2(C-C motifchemokine receptor-2,CCR2)蛋白表达的影响.Western印迹结果显示,MCP-... 本室前期工作发现,单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)可诱导人内皮细胞(hVECs)凋亡.为进一步揭示MCP-1诱导凋亡分子机理,首先观察MCP-1对hVECs CC类趋化因子受体2(C-C motifchemokine receptor-2,CCR2)蛋白表达的影响.Western印迹结果显示,MCP-1以剂量依赖方式诱导CCR2在hVECs的表达.以脂质体为载体的CCR2反义寡核苷酸序列转染hVECs后,激光共聚焦显微镜及膜联蛋白(annexin)V-FITC/PI双染流式细胞术显示,CCR2反义寡核苷酸转染hVECs48h后可明显降低CCR2蛋白质的表达(P<0.05),抑制MCP-1诱导的hVECs凋亡(P<0.01).反义CCR2抑制凋亡结果与加入CCR2阻断剂RS102895后细胞凋亡测定结果一致.上述结果表明,MCP-1的主要受体CCR2介导了MCP-1诱导的hVECs凋亡. 展开更多
关键词 单核细胞趋化因子1 CC类趋化因子受体2 人脐静脉内皮细胞 反义寡核苷酸 细胞凋亡
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Cyclin D_1反义寡核苷酸对人黑色素瘤细胞周期的影响及对细胞增殖抑制作用的研究 被引量:3
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作者 王晓丽 田美丽 +4 位作者 王梅 朱红梅 杨晓娟 王亚利 宋天保 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期342-343,376,共3页
目的 探讨cyclinD1反义寡核苷酸对人黑色素瘤的潜在治疗作用。方法 合成针对cyclinD1翻译起始部位序列的 2 0bp硫代反义寡核苷酸 (AS ODN)。采用流式细胞仪检测细胞周期的分布 ,用台盼蓝计数、集落形成抑制试验体外观察AS ODN对人黑... 目的 探讨cyclinD1反义寡核苷酸对人黑色素瘤的潜在治疗作用。方法 合成针对cyclinD1翻译起始部位序列的 2 0bp硫代反义寡核苷酸 (AS ODN)。采用流式细胞仪检测细胞周期的分布 ,用台盼蓝计数、集落形成抑制试验体外观察AS ODN对人黑色素瘤细胞增殖的影响。结果 cyclinD1反义寡核苷酸能增加G1期细胞百分比 ,降低S期细胞百分比 ,且明显抑制人黑色素瘤细胞生长和集落形成。结论 CyclinD1反义寡核苷酸能有效抑制人黑色素瘤细胞的增殖。 展开更多
关键词 CYCLIN D1 反义寡核苷酸 人黑色素瘤 细胞周期 细胞增殖 抑制作用
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VEGF-C反义寡核苷酸抑制人胃癌裸鼠移植瘤淋巴管生成的实验研究 被引量:4
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作者 李勇 杨进强 +3 位作者 赵增仁 范立侨 赵群 王益民 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期437-440,共4页
目的:探讨VEGF-C反义寡核苷酸(VEGF-C-ASODN)对人胃癌裸鼠移植瘤淋巴管生成的影响。方法:构建人胃癌裸鼠移植瘤模型,反义组在接种部位皮下注射VEGF-C-ASODN,正义组和对照组分别注射VEGF-C正义寡核苷酸和生理盐水,观察移植瘤生长变化。... 目的:探讨VEGF-C反义寡核苷酸(VEGF-C-ASODN)对人胃癌裸鼠移植瘤淋巴管生成的影响。方法:构建人胃癌裸鼠移植瘤模型,反义组在接种部位皮下注射VEGF-C-ASODN,正义组和对照组分别注射VEGF-C正义寡核苷酸和生理盐水,观察移植瘤生长变化。半定量RT-PCR检测移植瘤VEGF-CmRNA表达,酶组织化学方法(5’-Nase-ALPase)染色行淋巴管计数。结果:反义组移植瘤生长缓慢,体积和重量分别为(387.57±166.29)mm3、(1.4±0.7)g,较正义组和对照组显著下降(P<0.01)。反义组VEGF-CmRNA表达的相对系数为(0.35±0.12),淋巴管计数为(14.37±4.21),较正义组和对照组均显著降低(P<0.01)。结论:VEGF-C-ASODN可抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长及淋巴管的生成。 展开更多
关键词 胃肿瘤 血管内皮生长因子-C 反义寡核苷酸 淋巴管生成
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Survivin反义寡核苷酸治疗耐顺铂人肺腺癌细胞裸鼠移植瘤的实验研究 被引量:7
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作者 张梅春 胡成平 +1 位作者 陈琼 夏莹 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期717-722,共6页
目的:探讨以存活素基因(survivin)为靶点反义基因治疗耐顺铂(CDDP)人肺腺癌移植瘤的可行性。方法:常规体外培养A549/CDDP细胞,采用皮下注射法建立移植瘤裸鼠动物模型。以脂质体包裹的survivin反义寡核苷酸(ASODN)直接移植瘤内注射,观察... 目的:探讨以存活素基因(survivin)为靶点反义基因治疗耐顺铂(CDDP)人肺腺癌移植瘤的可行性。方法:常规体外培养A549/CDDP细胞,采用皮下注射法建立移植瘤裸鼠动物模型。以脂质体包裹的survivin反义寡核苷酸(ASODN)直接移植瘤内注射,观察肿瘤生长情况,计算抑瘤率和肿瘤生长指数。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学分别检测survivinmRNA和蛋白的表达。结果:单用ASODN组的抑瘤率和肿瘤生长指数分别为35.4%和4.230±0.886,和空白对照组比较,抑瘤率较高,肿瘤生长减缓(P<0.05)。而ASODN联合CDDP组的抑瘤率和肿瘤生长指数则分别为63.7%和1.700±0.436,与CDDP组、Lip与CDDP联用组及单用ASODN组比较均有统计学差异(P<0.05)。RT-PCR半定量和免疫组织化学显示,ASODN组和ASODN联合CDDP组肿瘤组织中survivinmRNA及其蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论:Survivin反义寡核苷酸可以抑制耐顺铂人肺腺癌移植瘤的生长,可能主要与其特异性下调survivin基因表达有关。特异性靶向survivin反义寡核苷酸可用于肺癌顺铂耐药的辅助治疗,其临床实际应用有待进一步研究。 展开更多
关键词 肺癌 存活素基因 基因治疗 反义寡核苷酸 多药耐药性
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树形分子递送survivin反义寡核苷酸对HepG2细胞的抑制效应 被引量:5
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作者 徐萍 崔大祥 +7 位作者 潘碧峰 李清 黄拓 刘凤涛 陈浩 鲍晨晨 贺蓉 高峰 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第5期411-416,共6页
目的:研究利用聚酰胺(polyamidoamine,PAMAM)树形分子递送survivin基因反义寡核苷酸(antisense oligodeoxy- nucleotide,asODN)抑制人肝癌细胞株HepG2细胞增殖的效应。方法:采用第1至第5代的聚酰胺树形分子室温下与反义survivin寡核苷... 目的:研究利用聚酰胺(polyamidoamine,PAMAM)树形分子递送survivin基因反义寡核苷酸(antisense oligodeoxy- nucleotide,asODN)抑制人肝癌细胞株HepG2细胞增殖的效应。方法:采用第1至第5代的聚酰胺树形分子室温下与反义survivin寡核苷酸混合制备树形分子与反义寡核苷酸的复合物(PAMAM-asODN),应用琼脂糖凝胶电泳及原子力学显微镜观察复合物的形态结构。PAMAM-asODN复合物转染HepG2细胞,同时设survivin反义寡核苷酸转染细胞作对照。共聚焦荧光显微镜检测复合物细胞转染效果;RT-PCR分析转染后细胞survivin mRNA的表达水平;MTT法检测复合物对HepG2细胞增殖的抑制效应。结果:琼脂糖凝胶电泳分析表明,树形分子与survivin反义寡核苷酸具有高效络合作用,形成了大小为25 nm左右的复合物;共聚焦荧光显微镜检测显示,与对照相比,PAMAM-asODN复合物转染细胞的效率显著提高;RT-PCR的结果表明,转染PAMAM-asODN复合物的肿瘤细胞中survivin mRNA表达显著降低;MTT结果表明,树形分子递送survivin反义寡核苷酸进入细胞后,HepG2细胞增殖明显受抑制,增殖抑制率随培养时间、复合物浓度、树形分子代数的增加而增加,6.0μmol/L G4.0 PAMAM-asODN与细胞培养96h可使抑制率达55%以上。结论:PAMAM树形分子能高效递送survivin asODN进入细胞,并抑制HepG2肿瘤细胞的增殖。树形分子可能是一种高效基因药物递送载体,在肿瘤治疗中具有潜在应用价值。 展开更多
关键词 纳米材料 树形分子 SURVIVIN基因 反义寡核苷酸 肝癌细胞 基因治疗
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反义硫代寡核苷酸与榄香烯乳剂合用抗乳腺癌活性的体外研究 被引量:4
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作者 孙君重 蒋双 +4 位作者 肖文华 朱建华 江泽飞 宋海峰 宋三泰 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期661-664,共4页
目的:研究以HER2mRNA为靶点的反义硫代脱氧寡核苷酸(S-ODNs)HA6722单用及与榄香烯乳剂合用时对HER-2过表达乳腺癌细胞株MDA-MB-453体外增殖的抑制作用。方法:选择HER2过表达的MDA-MB-453细胞与HER2低表达的MDA-MB-231细胞,MTT法观察HA6... 目的:研究以HER2mRNA为靶点的反义硫代脱氧寡核苷酸(S-ODNs)HA6722单用及与榄香烯乳剂合用时对HER-2过表达乳腺癌细胞株MDA-MB-453体外增殖的抑制作用。方法:选择HER2过表达的MDA-MB-453细胞与HER2低表达的MDA-MB-231细胞,MTT法观察HA6722单用及与榄香烯乳剂合用时对两种肿瘤细胞增殖的影响。结果:HA6722及榄香烯单用均可以剂量依赖方式抑制MDA-MB-453细胞的体外增殖,IC50值分别为41.8±8.1nmol·L-1和79.4±12.1nmol·L-1(n=3,mean±s)。加用低剂量的HA6722可增强榄香烯乳剂对MDA-MB-453细胞的抑制作用,IC50值由合用前的79.4±12.1nmol·L-1降至51.6±8.2nmol·L-1(n=3,P<0.05)。相反,在HER2低表达的MDA-MB-231细胞则没有这种增强作用;在IC50浓度下二者之间的联合指数(CI)为0.72±0.38(n=3)。结论:反义寡核苷酸HA6722与榄香烯乳剂合用对HER-2过表达乳腺癌细胞的体外增殖抑制具有协同作用。 展开更多
关键词 反义 寡核苷酸 乳腺癌 HER2 mRNA榄香烯
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