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腾冲嗜热厌氧杆菌ahpC编码基因的克隆表达及生物信息学分析 被引量:3
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作者 郑航辉 高昇 +4 位作者 杨宇泽 吴润 万学瑞 王川 刘磊 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期36-40,共5页
为了研究腾冲嗜热厌氧杆菌( Thermoanaerobacter tengcongensis )AhpC在嗜热中的作用,应用PCR技术扩增腾冲嗜热厌氧菌 tte0270 基因(即 ahpC 编码基因),构建了原核表达载体pET-28a:: ahpC 并在大肠杆菌BL21(DE3)表达 AhpC ,并通过荧光定... 为了研究腾冲嗜热厌氧杆菌( Thermoanaerobacter tengcongensis )AhpC在嗜热中的作用,应用PCR技术扩增腾冲嗜热厌氧菌 tte0270 基因(即 ahpC 编码基因),构建了原核表达载体pET-28a:: ahpC 并在大肠杆菌BL21(DE3)表达 AhpC ,并通过荧光定量PCR分析 ahpC 在50 ℃、60 ℃、75 ℃和80 ℃的mRNA表达量;同时利用生物信息学软件分析AhpC在腾冲嗜热厌氧杆菌、单核细胞增生李斯特菌和大肠杆菌中编码氨基酸的基本理化性质和蛋白质三级结构。在BL21(DE3)中腾冲嗜热厌氧杆菌AhpC蛋白能高效的表达,以可溶性形式存在,分子质量为26 ku;荧光定量PCR结果表明腾冲嗜热厌氧杆菌 ahpC mRNA表达量随温度升高而提高;生物信息学分析得出AhpC含有220个氨基酸,为酸性亲水性蛋白,等电点为6.126,蛋白质有29.1%的氨基酸参与α-螺旋结构的形成。嗜热菌AhpC中Glu(E)和Lys(K)的含量高于常温细菌。腾冲嗜热厌氧杆菌AhpC的三级结构明显比大肠杆菌和单核细胞增生李斯特菌的更紧凑。结果对腾冲嗜热菌嗜热机制研究具有一定的启发。 展开更多
关键词 腾冲嗜热厌氧菌 ahpc 热适应
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水稻白叶枯病菌ahpC基因转录单元分析和原核表达 被引量:2
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作者 王艳丽 吴茂森 +2 位作者 田芳 陈华民 何晨阳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期114-119,共6页
从水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.Oryzae,Xoo)菌株PX099“中克隆了H202降解基因ahpC,发现其编码的烷基过氧化氢酶AhpC在所测定的不同种病原细菌中的蛋白序列高度保守;采用RT—PCR方法分析了基因的转录结构特征,发现aheC... 从水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.Oryzae,Xoo)菌株PX099“中克隆了H202降解基因ahpC,发现其编码的烷基过氧化氢酶AhpC在所测定的不同种病原细菌中的蛋白序列高度保守;采用RT—PCR方法分析了基因的转录结构特征,发现aheC基因与酶电子供体基因ahpF组成了同一个转录单元;通过对ahpCp—lacZ活性检测,发现该启动子活性显著地受转录调控因子OxyR的正调控。此外,利用表达载体pET-28a(+)对ahpC基因进行了原核表达,经诱导后获得了可溶性的靶蛋白,可用于后续的生物学功能的分析。 展开更多
关键词 水稻白叶枯病菌 ahpc基因 转录调控 原核表达
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幽门螺杆菌ahpC基因的克隆与原核表达 被引量:1
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作者 李艳青 段广才 +4 位作者 宋春花 张建光 王淑玲 张卫东 郗园林 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期47-50,共4页
目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)ahpC基因的原核表达系统,表达并纯化Ahp蛋白。方法用PCR方法从中国分离株MEL-Hp27的染色体DNA中扩增出ahpC基因片段,将目的基因插入表达载体pET-30a中,构建重组质粒pET30a-ahpC。重组质粒经... 目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)ahpC基因的原核表达系统,表达并纯化Ahp蛋白。方法用PCR方法从中国分离株MEL-Hp27的染色体DNA中扩增出ahpC基因片段,将目的基因插入表达载体pET-30a中,构建重组质粒pET30a-ahpC。重组质粒经DNA测序鉴定后转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。采用镍离子亲和层析纯化蛋白,并用SDS-PAGE鉴定。结果PCR扩增的ahpC基因长度为594 bp,经酶切和测序分析,插入到载体的基因与GenBank公布的序列相似性达99%;SDS-PAGE显示,经IPTG诱导出分子质量为23 ku的目的蛋白,且产量较高。结论成功构建了ahpC表达载体pET30a-ahpC,并在大肠杆菌中高效表达。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 ahpc基因 克隆 基因表达
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空肠弯曲菌AhpC蛋白的克隆表达及抗原性分析 被引量:1
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作者 曹芳芳 孟凡亮 +2 位作者 乔博 张茂俊 张建中 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期909-913,共5页
目的构建空肠弯曲菌烷基过氧化氢还原酶(ahpC)基因的原核表达系统,克隆表达AhpC蛋白,用Western blot以及ELISA方法检测表达蛋白的抗原性,为筛选空肠弯曲菌感染后特异性抗体检测试剂的制备奠定基础。方法用PCR方法从中国分离菌株ICDCCJ07... 目的构建空肠弯曲菌烷基过氧化氢还原酶(ahpC)基因的原核表达系统,克隆表达AhpC蛋白,用Western blot以及ELISA方法检测表达蛋白的抗原性,为筛选空肠弯曲菌感染后特异性抗体检测试剂的制备奠定基础。方法用PCR方法从中国分离菌株ICDCCJ07001的染色体DNA中扩增出ahpC基因,将目的基因插入表达载体pGEX-4T-1后转化入大肠杆菌E.coliBL21(DE3),IPTG诱导重组质粒pGEX-ahpC的表达。SDS-PAGE分析表达产物,采用GST标签亲和层析柱纯化表达蛋白。应用兔免疫血清、临床感染者血清以及健康无感染者血清,利用Western blot以及ELISA的方法分析AhpC蛋白的抗原性并初步评价其在ELISA检测方法中的应用。结果 PCR扩增及双酶切鉴定证实重组质粒构建成功。重组表达蛋白经飞行质谱鉴定为空肠弯曲菌AhpC蛋白,Western blot及ELISA检测结果显示AhpC具有特异抗原性。结论成功构建了ahpC重组表达载体pGEX-4T-1/ahpC,并在大肠杆菌中高效表达。空肠弯曲菌AhpC蛋白具有抗原性,可以作为空肠弯曲菌感染后血清抗体检测的特异抗原。 展开更多
关键词 空肠弯曲菌 克隆表达 ahpc 抗原性
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超支化聚碳硅烷的掺硼改性与陶瓷化研究 被引量:3
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作者 张佩 杨乐 +2 位作者 徐敏珊 闵浩 余兆菊 《功能材料》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第4期35-38,共4页
通过二甲基胺硼烷(DMAB)与烯丙基超支化聚碳硅烷(AHPCS)反应合成含硼聚碳硅烷先驱体,后经170℃热交联及高温裂解制备出碳化硅陶瓷。采用傅立叶红外光谱、热重分析、X射线衍射分析及扫描电子显微镜对上述过程进行研究。结果表明,DMAB中的... 通过二甲基胺硼烷(DMAB)与烯丙基超支化聚碳硅烷(AHPCS)反应合成含硼聚碳硅烷先驱体,后经170℃热交联及高温裂解制备出碳化硅陶瓷。采用傅立叶红外光谱、热重分析、X射线衍射分析及扫描电子显微镜对上述过程进行研究。结果表明,DMAB中的B—H键可分别与AHPCS中的CC键及Si—H键发生硼氢化反应和脱氢偶合反应,从而促进AHPCS的热交联,并显著提高陶瓷产率。此外,硼的引入还可有效抑制β-SiC在高温下的结晶。 展开更多
关键词 二甲基胺硼烷 烯丙基超支化聚碳硅烷 先驱体 陶瓷化
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