高产莫能菌素肉桂地链霉菌的透明颤菌vgb基因异源表达 被引量：4

1

作者 李欣颖 张善飞 +2 位作者 刘旻炜 黄子瑄 孙付保 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1-9,共9页

肉桂地链霉菌(Streptomyces cinnamonensis)发酵产生的聚醚类抗生素莫能菌素(Monensin)因其环保且高效的特性而被广泛应用在医药、农业等领域,但莫能菌素实际生产中普遍的低氧条件严格限制了肉桂地链霉菌发酵莫能菌素水平。该文在前期... 肉桂地链霉菌(Streptomyces cinnamonensis)发酵产生的聚醚类抗生素莫能菌素(Monensin)因其环保且高效的特性而被广泛应用在医药、农业等领域,但莫能菌素实际生产中普遍的低氧条件严格限制了肉桂地链霉菌发酵莫能菌素水平。该文在前期整合表达莫能菌素生物合成基因簇中途径特异性正向调控基因(monH、monRⅡ)基础上,尝试通过异源整合表达透明颤菌血红蛋白基因vgb,以期通过改善菌株摄取溶氧能力来提高莫能菌素产量。结果显示,在40 mmol/L Ca^(2+)、供受体菌比例100∶1和培养18 h覆盖抗生素条件下,接合转移效率提高3倍;成功将基因vgb与莫能菌素生物合成途径特异性调控基因monH/monRⅡ进行串联整合,得到工程菌2110-monH-vgb和2110-monH-monRⅡ-vgb,其摇瓶生物量在高限氧条件下稍有提高(6%),但发酵效价分别较异源表达前提高18.0%和21.3%;后者在5 L罐水平生物量较异源表达前略有提高,发酵效价高达11.5 kU/mL,较出发菌提高47.3%。通过优化遗传操作系统并用于肉桂地链霉菌发酵产莫能菌素基因工程改造,成功获得有效提高莫能菌素发酵效价的vgb异源串联整合表达菌,为其后续的工业应用奠定基础。 展开更多

关键词 肉桂地链霉菌 莫能菌素 接合转移 异源表达 透明颤菌血红蛋白基因vgb

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透明颤菌vgb基因整合型大肠杆菌的培养特性 被引量：1

2

作者 陈新爱 徐志南 +1 位作者 王芳 岑沛霖 《浙江大学学报（工学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第1期124-128,共5页

透明颤菌血红蛋白(VHb)是一种氧调节、氧结合蛋白,其基因vgb的表达在转录水平上受氧调控.大肠杆菌E.coliBV是采用基因同源重组方法将vgb基因整合到基因工程常用宿主菌E.coliBL21中构建得到的.研究了不同价态的铁离子对同源重组菌的生长... 透明颤菌血红蛋白(VHb)是一种氧调节、氧结合蛋白,其基因vgb的表达在转录水平上受氧调控.大肠杆菌E.coliBV是采用基因同源重组方法将vgb基因整合到基因工程常用宿主菌E.coliBL21中构建得到的.研究了不同价态的铁离子对同源重组菌的生长特性及VHb合成的影响,研究表明,0.2mmol/L的二价铁离子具有促进VHb表达从而刺激菌体细胞生长的作用.在0.1L/h低通气量条件下,E.coliBV分别进行间歇培养和流加培养,低溶氧刺激VHb在短时间内迅速大量合成,改善了细胞内氧的传递性能,使生长期分别延长到25h和45h,生物量(DCW)分别达到9.6g/L和26g/L. 展开更多

关键词 透明颤菌 vgb基因 基因同源重组 血红蛋白 大肠杆菌 基因表达 基因工程 微生物培养

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利用透明颤菌血红蛋白基因vgb改造毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K的研究 被引量：4

3

作者 孟志刚 张锐 +1 位作者 陈毓荃 郭三堆 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期166-170,共5页

为了解决酵母发酵时贫氧限制目的蛋白表达量,利用透明颤菌血红蛋白基因vgb设计毕赤酵母分泌 型表达载体pPIC9K-vgb,并以人乳铁蛋白基因为目的基因转入毕赤酵母GS115。研究结果表明,该表达载体具 有转化操作简单、后期工程菌筛选简便、... 为了解决酵母发酵时贫氧限制目的蛋白表达量,利用透明颤菌血红蛋白基因vgb设计毕赤酵母分泌 型表达载体pPIC9K-vgb,并以人乳铁蛋白基因为目的基因转入毕赤酵母GS115。研究结果表明,该表达载体具 有转化操作简单、后期工程菌筛选简便、菌体耐低氧能力强、目的蛋白摇瓶表达量高等优点。该表达载体也可 以通过直接替换目的基因而用于其他蛋白表达系统的开发研究。 展开更多

关键词 透明颤菌血红蛋白基因vgb 毕赤酵母 表达载体pPIC9K 人乳铁蛋白

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透明颤菌血红蛋白基因(vgb)与monellin基因在毕赤酵母中的联合表达

4

作者 王清路 张玉军 +2 位作者 窦烨 李俏俏 周彩霞 《中国酿造》 CAS 北大核心 2008年第8期37-40,共4页

根据酵母偏爱密码子合成了monellin甜蛋白基因和vgb基因,然后构建了2种不同方式表达的载体,胞内表达的pPIC3.5KV和分泌表达的pPIC9KM。电击转化得到重组子GS115/pPIC9KM和GS115/pPIC9KM/pPIC3.5KV,通过PCR、SDS-PAGE及western blotting... 根据酵母偏爱密码子合成了monellin甜蛋白基因和vgb基因,然后构建了2种不同方式表达的载体,胞内表达的pPIC3.5KV和分泌表达的pPIC9KM。电击转化得到重组子GS115/pPIC9KM和GS115/pPIC9KM/pPIC3.5KV,通过PCR、SDS-PAGE及western blotting检测发现monellin甜蛋白基因和vgb基因成功整合进毕赤酵母基因组并成功表达,通过品尝和CO-差示光谱法证实其表达产物具有活性,用southern blotting对6株高产菌株进行拷贝数分析并未发现拷贝数与分泌蛋白产量之间存在明显的正相关。对比发现,含vgb基因菌株比未含菌株高甜度monellin的产量最高提高了20%,菌体密度平均提高了9%。 展开更多

关键词 透明颤菌血红蛋白基因 甜蛋白基因 毕赤酵母 拷贝数 外源基因

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利用透明颤菌血红蛋白基因在谷氨酸棒杆菌中的表达提高谷氨酸和谷氨酰胺的产量 被引量：8

5

作者 孙智杰 梁楠 +2 位作者 李润东 沈忠耀 陈国强 《北京理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第2期180-184,共5页

为了降低谷氨酰胺 (glutamine,Gln)生产过程中所需要的高溶氧水平对设备的要求 ,在谷氨酸棒杆菌 C.glutamicum ATCC14 0 6 7中表达增强摄氧的透明颤菌血红蛋白基因 (Vitreoscilla hemoglobin gene,vgb) ,以此提高细胞的摄氧能力及能量... 为了降低谷氨酰胺 (glutamine,Gln)生产过程中所需要的高溶氧水平对设备的要求 ,在谷氨酸棒杆菌 C.glutamicum ATCC14 0 6 7中表达增强摄氧的透明颤菌血红蛋白基因 (Vitreoscilla hemoglobin gene,vgb) ,以此提高细胞的摄氧能力及能量的供给水平 .对得到的重组菌和野生菌进行了发酵实验 .在溶氧只有 5 %的条件下 ,重组菌比野生菌细胞干重提高了 1.2倍 ,单位细胞谷氨酸的生产能力提高了 6 .5倍 ,单位细胞谷氨酰胺的生产能力提高了 1.4倍 .对比结果显示 ,含有 vgb基因的重组菌比野生菌在细胞生长。 展开更多

关键词 透明颤菌血红蛋白基因 谷氨酸棒杆菌 谷氨酸 谷氨酰胺 发酵

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透明颤菌血红蛋白研究进展及其在芽孢杆菌属中的应用 被引量：3

6

作者 冯静 施庆珊 +2 位作者 疏秀林 欧阳友生 陈仪本 《化学与生物工程》 CAS 2007年第11期5-8,共4页

透明颤菌血红蛋白(VHb)可在低氧条件下提高细胞对氧气的利用效率,促进细胞的生长和代谢产物的合成,因而被广泛应用于多种异源微生物的研究中。简述了VHb的结构特征、在细胞内的定位、编码基因vgb的表达调控及其生物化学功能;介绍了VHb... 透明颤菌血红蛋白(VHb)可在低氧条件下提高细胞对氧气的利用效率,促进细胞的生长和代谢产物的合成,因而被广泛应用于多种异源微生物的研究中。简述了VHb的结构特征、在细胞内的定位、编码基因vgb的表达调控及其生物化学功能;介绍了VHb在芽孢杆菌属中的应用情况及其在芽孢杆菌属菌株外源表达中的重要意义。 展开更多

关键词 透明颤菌血红蛋白(VHb) 透明颤菌血红蛋白编码基因(vgb) 芽孢杆菌

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重组大肠杆菌VG1(pTU14)产PHB的补料分批培养 被引量：9

7

作者 于慧敏 张延平 +2 位作者 史悦 杨胜利 沈忠耀 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第7期742-746,共5页

利用已构建的同时含有透明颤菌血红蛋白基因 (vgb)、λ噬菌体裂解基因 (S-RRz)和PHB合成基因(phbCAB)的产PHB基因工程大肠杆菌VG1(pTU14 ) ,在 5L发酵罐里进行补料分批培养 .研究发现 :碳氮比(C/N) ,DO(溶氧 )及碳源和氮源的浓度是影响... 利用已构建的同时含有透明颤菌血红蛋白基因 (vgb)、λ噬菌体裂解基因 (S-RRz)和PHB合成基因(phbCAB)的产PHB基因工程大肠杆菌VG1(pTU14 ) ,在 5L发酵罐里进行补料分批培养 .研究发现 :碳氮比(C/N) ,DO(溶氧 )及碳源和氮源的浓度是影响菌体生长和PHB积累的重要因素 ;补料时间可以通过DO和 pH值两个参数的变化在线综合识别 ;流加策略应使发酵前期菌体大量生长 ,发酵后期PHB大量积累 .在优化条件下 ,对VG1(pTU14 )进行 6 0h的补料分批培养 ,菌体细胞浓度、PHB浓度和PHB占细胞干质的分数分别高达2 15 .9g·L-1、 193.7g·L-1和 89.7% . 展开更多

关键词 重组大肠杆菌VG1 PHB 透明颤菌血红蛋白基因 塑料 白色污染 微生物降解 补料 分批培养 λ噬菌体裂解基因 聚Β-羟基丁酸酯

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低氧诱导透明颤菌血红蛋白基因在大肠杆菌中的表达 被引量：2

8

作者 张锋 赵晓瑜 周艳芬 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2006年第B10期20-22,共3页

合成透明颤菌血红蛋白基因(vgb)的天然低氧启动子,与vgb结构基因拼接得到570 bp的vgb基因,将该基因克隆到pUC18质粒中重组为pUC_LV质粒,转化大肠杆菌得到重组子。通过低氧诱导10 h后,重组菌的密度较对照增加了67.4%,经SDS_PAGE和CO差光... 合成透明颤菌血红蛋白基因(vgb)的天然低氧启动子,与vgb结构基因拼接得到570 bp的vgb基因,将该基因克隆到pUC18质粒中重组为pUC_LV质粒,转化大肠杆菌得到重组子。通过低氧诱导10 h后,重组菌的密度较对照增加了67.4%,经SDS_PAGE和CO差光谱分析证明重组菌表达了有活性的透明颤菌血红蛋白(VHb)。 展开更多

关键词 透明颤菌血红蛋白基因 天然启动子 大肠杆菌 低氧诱导

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溶氧控制对氨基酸发酵的影响 被引量：9

9

作者 刘晓波 李宗伟 +2 位作者 闫世梁 丁晓兵 秦广雍 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第19期7977-7979,共3页

对溶氧控制对氨基酸发酵工艺的影响及增加溶氧的一些方法进行了综合分析与探讨。

关键词 溶氧控制 氨基酸 发酵工艺 氧载体 透明颤菌血红蛋白基因

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利用PCR法扩增透明颤菌血红蛋白基因条件的优化 被引量：3

10

作者 吴琼 王洪军 +4 位作者 张志强 王立强 冯立 孙艳 吴益民 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期50-52,共3页

以透明颤菌染色体基因组DNA为模板,利用PCR技术获取透明颤菌(Vitreoscilla)血红蛋白基因(vgb)。在多聚合酶链式反应中采用碱变性模板与热启动等方法进行透明颤菌血红蛋白基因体外扩增,成功地扩增出约0.5 kb的透明颤菌血红蛋白基因,并对... 以透明颤菌染色体基因组DNA为模板,利用PCR技术获取透明颤菌(Vitreoscilla)血红蛋白基因(vgb)。在多聚合酶链式反应中采用碱变性模板与热启动等方法进行透明颤菌血红蛋白基因体外扩增,成功地扩增出约0.5 kb的透明颤菌血红蛋白基因,并对vgb的PCR条件进行了研究。获取理想的目的基因PCR反应的综合参数比十分重要。 展开更多

关键词 PCR 透明颤菌 血红蛋白基因

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透明颤菌血红蛋白基因在提高枯草芽孢杆菌产脂肽功能中的研究 被引量：4

11

作者 王大威 胡鸢雷 +1 位作者 刘永建 林忠平 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第5期116-119,127,共5页

脂肽是一类具有特殊作用的生物表面活性剂。本实验将血红蛋白基因(vhb)置于RDR细菌启动子驱动下的质粒PSET中,构建PSET-RDR-vhb重组质粒,并通过电激作用转入脂肽代谢菌株-枯草芽孢杆菌株(bacillus subtilis)ZW-3中,转化菌株经酶切和PCR... 脂肽是一类具有特殊作用的生物表面活性剂。本实验将血红蛋白基因(vhb)置于RDR细菌启动子驱动下的质粒PSET中,构建PSET-RDR-vhb重组质粒,并通过电激作用转入脂肽代谢菌株-枯草芽孢杆菌株(bacillus subtilis)ZW-3中,转化菌株经酶切和PCR电泳检测鉴定,Southern-blot杂交显示部分转化菌株中外源基因插入基因组DNA,采用一氧化碳差异色谱法测定了血红蛋白的表达量。实验进一步对转化菌株的生长曲线、总蛋白量、过氧化氢酶活性、脂肽的产率进行了测定,结果显示,相比于原始菌株,转化菌株数据均有明显提高。 展开更多

关键词 透明颤菌血红蛋白基因 枯草芽孢杆菌 脂肽 表达

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利用血红蛋白基因提高短小芽孢杆菌在低氧条件下的碱性蛋白酶产量 被引量：3

12

作者 张风豪 王海燕 +4 位作者 何明雄 李羚锐 杨春晖 葛建 张义正 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期755-760,共6页

将透明颤菌血红蛋白基因vgb成熟肽编码区序列分别与枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）P43双启动子和短小芽孢杆菌（B. pumilus）碱性蛋白酶基因启动子wBp连接,利用大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pSUGV4分别构建组成型表达质粒pSUP43Vgb... 将透明颤菌血红蛋白基因vgb成熟肽编码区序列分别与枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）P43双启动子和短小芽孢杆菌（B. pumilus）碱性蛋白酶基因启动子wBp连接,利用大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pSUGV4分别构建组成型表达质粒pSUP43Vgb和pSUwBpVgb,将其分别转化短小芽孢杆菌UN-31-C-11.SDS-PAGE和CO差异光谱检测表明,融合基因在UN-31-C-11中均得到了表达,并且表达质粒使重组菌株在低氧条件下的生长量在对数生长后期超过对照菌株20%以上,同时促进了短小芽孢杆菌碱性蛋白酶基因的表达,其产量高于对照30%以上. 展开更多

关键词 透明颤菌血红蛋白基因(vgb) 基因启动子 穿梭载体 短小芽孢杆菌 基因表达

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透明颤菌血红蛋白基因的研究与应用 被引量：4

13

作者 吴巧雯 崔洪志 郭三堆 《生物技术通报》 CAS CSCD 2004年第2期27-30,共4页

总结了近 15年来透明颤菌血红蛋白的研究结果 ,包括它的分布、结构、功能、合成等分子生物学以及在基因工程中的应用。透明颤菌的血红蛋白是 2 0世纪 70年代被发现的 ,由于它具有结合氧的特性 ,可使透明颤菌这一专性好氧的革兰氏阴性菌... 总结了近 15年来透明颤菌血红蛋白的研究结果 ,包括它的分布、结构、功能、合成等分子生物学以及在基因工程中的应用。透明颤菌的血红蛋白是 2 0世纪 70年代被发现的 ,由于它具有结合氧的特性 ,可使透明颤菌这一专性好氧的革兰氏阴性菌在贫氧环境中生长。透明颤菌血红蛋白是同型二聚体形式的可溶性血红蛋白分子 ,每分子透明颤菌血红蛋白由两个分子量为 15 775的亚基和两个b型血红素组成。透明颤菌血红蛋白的功能是为透明颤菌强大的呼吸膜增加氧的流量。完整的有功能的血红蛋白由血红蛋白亚基和血红素组成 ,血红蛋白亚基由基因vgb编码 ,血红素由生化代谢合成。透明颤菌血红蛋白基因在野生透明颤菌中是以单拷贝的方式随染色体一起复制表达的。透明颤菌血红蛋白基因已经被克隆和测序。同时也讨论了将透明颤菌血红蛋白基因整合到异源宿主菌中增加重组蛋白产量和发酵产量方面的研究。最后 ,概述了当透明颤菌血红蛋白在植物中表达时 ,转基因植物表现出生长增加以及代谢物产量发生变化的情况。 展开更多

关键词 透明颤菌 血红蛋白 基因 转基因植物 基因工程 克隆 序列测定

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透明颤菌血红蛋白基因在多粘芽孢杆菌中的克隆和表达 被引量：1

14

作者 周荣华 饶犇 +2 位作者 廖先清 胡蔻孜 杨自文 《湖北农业科学》 2016年第15期3907-3909,共3页

本研究将启动子P43与透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla hemoglobin)基因(vgb)通过重叠PCR进行融合,克隆到芽孢杆菌表达载体p CM20上,将筛选得到的重组载体p CM20-vgb转化多粘芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)NR1,Western-Blot表明重组菌... 本研究将启动子P43与透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla hemoglobin)基因(vgb)通过重叠PCR进行融合,克隆到芽孢杆菌表达载体p CM20上,将筛选得到的重组载体p CM20-vgb转化多粘芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)NR1,Western-Blot表明重组菌株表达了VHb蛋白,该蛋白的表达对重组菌体的生长和多粘菌素的产生均有促进作用。 展开更多

关键词 多粘芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) 透明颤菌血红蛋白(vitreoscilla hemoglobin)基因 多粘菌素

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W-15菌株产生的纤溶酶蛋白的提取与纯化 被引量：2

15

作者 王峰 李术娜 +2 位作者 朱宝成 武翠红 袁洪水 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期65-67,75,共3页

为从微生物中获取溶栓药物,从土壤、豆豉中获得产纤溶酶活性高的1株菌株,命名为W-15。经检测,发酵上清液中纤溶活性的蛋白酶分子质量约为36 kDa,酶的比活为1 571 UK/mg。

关键词 纤溶酶 菌株 筛选 纯化

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透明颤菌血红蛋白基因在龟裂链霉菌中的表达及其对土霉素合成的影响 被引量：2

16

作者 倪辉 Ali Mohsin +4 位作者 曹君书 张风新 郭美锦 储炬 庄英萍 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 2018年第8期1034-1042,共9页

目的考察透明颤菌血红蛋白基因(vgb)在大肠埃希菌(E.coli)和龟裂链霉菌(S.rimosus)中的表达,研究在不同溶氧条件下表达的透明颤菌血红蛋白(VHb)对龟裂链霉菌生长和土霉素合成的影响。方法将vgb插入表达型质粒pET-28a中,导入E.coli BL21(... 目的考察透明颤菌血红蛋白基因(vgb)在大肠埃希菌(E.coli)和龟裂链霉菌(S.rimosus)中的表达,研究在不同溶氧条件下表达的透明颤菌血红蛋白(VHb)对龟裂链霉菌生长和土霉素合成的影响。方法将vgb插入表达型质粒pET-28a中,导入E.coli BL21(DE3)用以表达VHb并测定其活性。以整合型质粒pSET152为载体,利用erm E*启动子组成型表达vgb基因,将构建的质粒通过接合转移整合到S.rimosus M4018基因组上,利用CO差示光谱法和SDS-PAGE鉴定两个重组菌中的血红蛋白。在5L罐上考察不同溶氧条件下VHb的表达对重组龟裂链霉菌生长和土霉素合成的影响。结果重组大肠埃希菌和重组龟裂链霉菌都能够表达具有生物活性的VHb,发酵结果表明,在117h时与对照菌相比,重组龟裂链霉菌在高氧和低氧条件下的干重分别提高了6%和32%,同时单位干重土霉素的产量分别提高了41%和93%。结论 VHb在重组龟裂链霉菌中成功表达,改善了菌体的生长和土霉素的合成,为解决工业发酵过程中氧限制问题提供了策略。 展开更多

关键词 透明颤菌血红蛋白基因 龟裂链霉菌 土霉素生物合成 CO差示光谱分析

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透明颤菌血红蛋白基因在产TRAIL蛋白大肠杆菌中的克隆表达

17

作者 杨凌超 孙爱友 +3 位作者 沈亚领 魏东芝 龚毅 马昱澍 《华东理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第8期925-929,共5页

为解决大肠杆菌高密度发酵生产TRA IL过程中的供氧矛盾,提高菌体的发酵密度,在大肠杆菌中引入透明颤菌血红蛋白基因(vgb)。聚合酶链反应(PCR)检验和CO差光谱法检验表明:vgb基因能够在C 600(pBV 220-TRA IL)中表达并受溶氧调控,重组菌CT... 为解决大肠杆菌高密度发酵生产TRA IL过程中的供氧矛盾,提高菌体的发酵密度,在大肠杆菌中引入透明颤菌血红蛋白基因(vgb)。聚合酶链反应(PCR)检验和CO差光谱法检验表明:vgb基因能够在C 600(pBV 220-TRA IL)中表达并受溶氧调控,重组菌CTV具有良好的遗传稳定性。3.7 L发酵罐实验表明:在同样的发酵条件下,含vgb基因的重组菌CTV的最高菌体密度为对照菌的1.64倍,达到50.6 g/L,乙酸积累为对照菌的55.6%,TRA IL蛋白产量提高了70%,达到2.8 g/L。 展开更多

关键词 透明颤菌血红蛋白基因(vgb) TRAIL 大肠杆菌 发酵 乙酸

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多功能基因工程菌VG1(pTU14)产PHB的氮源代谢

18

作者 于慧敏 尹进 +2 位作者 李红旗 杨胜利 沈忠耀 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 1999年第5期70-73,共4页

为降低PHB生产过程中的发酵成本和分离成本,以大肠杆菌为宿主成功构建了溶氧利用能力高且可诱导裂解破壁的新型PHB高产多功能基因工程菌VG1(pTU14)。由于该重组菌同时表达透明颤菌血红蛋白基因、λ噬菌体裂解基因及PHB合成基因这3种外... 为降低PHB生产过程中的发酵成本和分离成本,以大肠杆菌为宿主成功构建了溶氧利用能力高且可诱导裂解破壁的新型PHB高产多功能基因工程菌VG1(pTU14)。由于该重组菌同时表达透明颤菌血红蛋白基因、λ噬菌体裂解基因及PHB合成基因这3种外源基因,故其氮源代谢特性不同于一般的基因工程菌。实验证明,无机氮源和有机氮源,尤其是有机氮源的种类及浓度均对重组菌生长和PHB积累有重要影响,且二者之间存在很强的交互作用。进一步实验表明,重组菌VG1(pTU14)的最佳无机氮源为乙酸铵,优化质量浓度为2.0 g/L;最佳有机氮源为酵母浸膏粉,优化质量浓度为6.0 g/L。在0.03 g/L及0.4 g/L两种质量浓度下分析酵母浸膏粉中的17种氨基酸对重组菌生长和PHB积累的影响,表明无论在何种质量浓度水平下,精氨酸均是促进菌体生长和PHB积累的一种最重要的氨基酸;而谷氨酸、赖氨酸、甘氨酸、色氨酸、脯氨酸等也均显著促进重组菌生长和PHB积累;但亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、天冬氨酸、胱氨酸等反而不利于菌体的生长和PHB的积累。 展开更多

关键词 透明颤菌血红蛋白基因 λ噬菌体裂解基因 PHB合成基因 氮源

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sucA缺失型大肠杆菌菌株的构建与发酵条件优化

19

作者 林凡 张震宇 +1 位作者 孙付保 于林 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期830-837,共8页

反式-4-羟脯氨酸在多领域具有重要应用价值。为了进一步提高反式-4-羟脯氨酸的产量,在已构建好的E. coli BL21(DE3)△putA的基础上,敲除基因sucA的同时插入密码子优化后的反式-4-羟化酶基因(hyp),并将构建好的质粒pUC19-ptrp2-hyp-vgb... 反式-4-羟脯氨酸在多领域具有重要应用价值。为了进一步提高反式-4-羟脯氨酸的产量,在已构建好的E. coli BL21(DE3)△putA的基础上,敲除基因sucA的同时插入密码子优化后的反式-4-羟化酶基因(hyp),并将构建好的质粒pUC19-ptrp2-hyp-vgb导入该基因敲除菌株中。之后在摇瓶水平上,单因素优化发酵条件与发酵培养基的组分,并通过正交实验进一步确定敲除菌株的培养条件。结果表明:与含有同样质粒的原菌和两种单敲除菌E. coli BL21(DE3)△sucA、E. coli BL21(DE3)△putA相比,E. coli BL21(DE3)△putA△sucA双敲除菌具有最高的全细胞酶活,大约是原菌的2.6倍;在摇瓶水平上,发酵条件优化后,以100 mmol/L的L-脯氨酸为底物进行发酵,12 h后可得到1.08 g/L的羟脯氨酸,是优化前的3.87倍。 展开更多

关键词 反式-4-羟脯氨酸 sucA 透明颤菌血红蛋白 基因敲除 重组大肠杆菌 全细胞酶活

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敲除ptsG基因及共表达透明颤菌血红蛋白提高大肠杆菌SHMT产量 被引量：1

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作者 韩琴 徐新星 +4 位作者 王儒昕 李鑫 闫达中 吴菁 刘军 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第2期119-125,共7页

利用Red同源重组技术敲除大肠杆菌BL21(DE3)的ptsG基因,得到ptsG基因缺失菌株BL21(DE3)ΔptsG。构建重组质粒,得到表达大肠杆菌丝氨酸羟甲基转移酶(serine hydroxymethyltransferase,SHMT)工程菌株BL21(DE3)/pET-glyA、BL21(DE3)ΔptsG/... 利用Red同源重组技术敲除大肠杆菌BL21(DE3)的ptsG基因,得到ptsG基因缺失菌株BL21(DE3)ΔptsG。构建重组质粒,得到表达大肠杆菌丝氨酸羟甲基转移酶(serine hydroxymethyltransferase,SHMT)工程菌株BL21(DE3)/pET-glyA、BL21(DE3)ΔptsG/pET-glyA,及共表达SHMT和透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla hemoglobin,VHb)工程菌株BL21(DE3)ΔptsG/pET-SV。在LB培养基中,BL21(DE3)ΔptsG/pET-glyA菌株与BL21(DE3)/pET-glyA菌株生长情况没有明显差异,BL21(DE3)ΔptsG/pET-SV菌株稳定期的OD 600 nm值比BL21(DE3)ΔptsG/pET-glyA菌株提高了21.3%,在LBG培养基中,稳定期BL21(DE3)ΔptsG/pET-glyA菌株OD600 nm值比BL21(DE3)/pET-glyA菌株提高了19.4%,BL21(DE3)ΔptsG/pET-SV菌株OD600 nm值比BL21(DE3)ΔptsG/pET-glyA菌株提高了21.5%。在LBG培养基中,经过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导,与对照菌株BL21(DE3)/pET-28a相比较,两种单表达工程菌株产SHMT活力分别是其6.4倍和7.7倍,共表达工程菌株产SHMT活力是其9.6倍。实验结果表明,敲除ptsG基因能够增加大肠杆菌在含葡萄糖培养基中的生长量及SHMT表达量,共表达VHb能进一步提高菌株生长量和SHMT产量。 展开更多

关键词 RED同源重组 丝氨酸羟甲基转移酶 透明颤菌血红蛋白 ptsG基因 共表达

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