基于病毒诱导的基因沉默(VIGS)方法的LsRGL1基因在生菜中的功能分析

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作者 陈丽 范双喜 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期21-26,60,共7页

为了确定LsRGL1基因对生菜抽薹的影响,以S39生菜品种为试验材料,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从S39生菜品种中克隆得到LsRGL1基因;采用病毒诱导基因沉默(VIGS)方法,利用烟草脆裂病毒(TRV)载体对目的基因进行沉默;采用表型观察、石蜡... 为了确定LsRGL1基因对生菜抽薹的影响,以S39生菜品种为试验材料,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从S39生菜品种中克隆得到LsRGL1基因;采用病毒诱导基因沉默(VIGS)方法,利用烟草脆裂病毒(TRV)载体对目的基因进行沉默;采用表型观察、石蜡切片、实时荧光定量PCR(qPCR)方法、酶联免疫吸附法(ELISA)分别研究空白对照组(无TRV载体)、阴性对照组(按质量比1∶1同时注射TRV1空载体和TRV2空载体)和试验组(按质量比1∶1同时注射TRV1空载体和TRV2-LsRGL1重组载体)中植株表型、花芽分化、LsRGL1基因的相对表达量和内源激素质量分数的变化。结果表明:病毒侵染后,试验组植株的茎长相对于空白对照组和阴性对照组的茎长明显增大,且试验组各项表型数据均大于2个对照组的表型数据,而空白对照组与阴性对照组各项表型数据之间并未出现明显差异;石蜡切片结果表明试验组植株已经开始花芽分化,相较于对照组提前进入生殖生长时期;qPCR分析结果显示,试验组中LsRGL1基因的相对表达量相较于空白组和阴性对照组的显著下调,且下调幅度均超过50%。试验组中内源激素赤霉素(GA3)、脱落酸(ABA)、生长素(IAA)的含量显著高于对照组的含量,而茉莉酸(JA)含量显著下降。综上可知,沉默LsRGL1基因加快了生菜的抽薹。 展开更多

关键词 生菜 表达分析 内源激素 病毒诱导的基因沉默(vigs)

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番茄SlERF-H6基因VIGS沉默载体构建

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作者 李立霞 胡康棣 +1 位作者 姚改芳 张华 《合肥工业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2024年第9期1232-1235,1242,共5页

番茄(Solanum lycopersicum)具有较高的营养价值,深受消费者的喜爱,目前番茄已经成为广泛种植的经济作物之一。乙烯响应因子(ethylene response factor,ERF)是一类植物特有的转录因子。ERF在植物形态发生、逆境响应、成熟衰老、激素信... 番茄(Solanum lycopersicum)具有较高的营养价值,深受消费者的喜爱,目前番茄已经成为广泛种植的经济作物之一。乙烯响应因子(ethylene response factor,ERF)是一类植物特有的转录因子。ERF在植物形态发生、逆境响应、成熟衰老、激素信号转导和代谢物调节等多种生理过程中起重要的调节作用。文章以番茄的SlERF-H6(LOC101259323)基因为研究对象,通过对SlERF-H6的基因序列进行分析,获得该基因的特异性区域沉默序列。利用同源重组技术成功构建了番茄SlERF-H6病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)载体。为进一步探究番茄SlERF-H6基因在果实成熟中的作用提供参考。 展开更多

关键词 番茄 病毒诱导的基因沉默(vigs) SlERF-H6基因 同源重组 载体构建

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病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术及其在大豆基因功能研究和育种中的应用潜力 被引量：4

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作者 王爽 郭兵福 +4 位作者 郭勇 张丽娟 金龙国 杨慧 邱丽娟 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期536-540,共5页

病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是植物体抵抗病毒侵染的一种自然防御机制,近年来已发展成为一种基因功能研究的有效手段。与突变体筛选、转基因、基因敲除等技术相比,VIGS技术因具有周期短、成本低、可迅速观... 病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是植物体抵抗病毒侵染的一种自然防御机制,近年来已发展成为一种基因功能研究的有效手段。与突变体筛选、转基因、基因敲除等技术相比,VIGS技术因具有周期短、成本低、可迅速观察表型等优点而被广泛应用于基因的功能鉴定。文章对VIGS技术的分子机理、病毒载体系统、稳定遗传VIGS植株的获得策略及其在大豆中的应用等内容进行了综述并对今后的发展趋势进行了讨论。 展开更多

关键词 病毒诱导的基因沉默 vigs 病毒载体 功能基因 育种

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TRV介导欧洲甜樱桃果实VIGS体系的建立 被引量：7

4

作者 齐希梁 李明 +1 位作者 刘聪利 宋露露 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1309-1315,共7页

【目的】建立欧洲甜樱桃果实VIGS体系。【方法】利用In-Fusion cloning技术,构建欧洲甜樱桃的烟草脆裂病毒(TRV)介导基因沉默表达载体pTRV2-ANS,转入农杆菌GV3101中,采用注射压迫法侵染欧洲甜樱桃果实,通过分子检测、qRT-PCR和表型观察... 【目的】建立欧洲甜樱桃果实VIGS体系。【方法】利用In-Fusion cloning技术,构建欧洲甜樱桃的烟草脆裂病毒(TRV)介导基因沉默表达载体pTRV2-ANS,转入农杆菌GV3101中,采用注射压迫法侵染欧洲甜樱桃果实,通过分子检测、qRT-PCR和表型观察技术评价TRV介导VIGS沉默体系的效果。【结果】TRV::ANS侵染的欧洲甜樱桃果实ans基因的表达显著低于TRV::00侵染的果实。与TRV::00比较,TRV::ANS侵染的欧洲甜樱桃果实的果皮和果肉颜色都没有发生着色,果皮和果肉颜色呈绿色,而TRV::00侵染的欧洲甜樱桃果实的果皮和果肉正常着色。【结论】研究建立的TRV介导欧洲甜樱桃VIGS体系可有效沉默欧洲甜樱桃果实内源基因表达。该体系为欧洲甜樱桃果实品质基因的功能验证及分子机制研究奠定了技术基础。 展开更多

关键词 欧洲甜樱桃 TRV vigs 基因沉默 果实

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桑树PDS基因VIGS转化体系的构建与鉴定 被引量：7

5

作者 李瑞雪 王钰婷 +3 位作者 胡飞 夏家凤 汪泰初 赵卫国 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1432-1438,共7页

【目的】建立桑树的病毒诱导基因沉默(VIGS)转化体系,为桑树功能基因的分析研究提供技术支持。【方法】以丰驰桑为试验材料,克隆含Bam H I和Xba I酶切位点的八氢番茄红素脱氢酶(PDS)基因片段,经Xba I和Bam H I双酶切后与烟草脆裂病毒(T... 【目的】建立桑树的病毒诱导基因沉默(VIGS)转化体系,为桑树功能基因的分析研究提供技术支持。【方法】以丰驰桑为试验材料,克隆含Bam H I和Xba I酶切位点的八氢番茄红素脱氢酶(PDS)基因片段,经Xba I和Bam H I双酶切后与烟草脆裂病毒(TRV)连接构建重组病毒载体p TRV2-PDS,转化农杆菌GV3101后通过压迫注射方式侵染桑树幼苗叶片。【结果】克隆获得的桑树PDS基因干扰片段346 bp,与改造后的TRV质粒连接可成功构建携带桑树PDS基因的重组病毒载体p TRV2-PDS。桑树叶片被侵染15 d后,接种重组病毒载体p TRV2-PDS桑树的第二轮真叶开始出现叶片白化现象,侵染20 d后,白化现象沿叶脉向四周逐渐扩散,叶片呈现明显的白化表型。实时荧光定量PCR检测结果显示,重组病毒载体p TRV2-PDS侵染的桑叶PDS基因相对表达量仅为阴性对照(p TRV2)的58%,二者差异极显著(P<0.01),表明桑树PDS基因表达被有效抑制。【结论】利用TRV构建的桑树VIGS体系能有效沉默PDS基因,使桑树叶片呈现明显的白化症状,即可用于后续的桑树功能基因鉴定。 展开更多

关键词 桑树 八氢番茄红素脱氢酶(PDS) 病毒诱导的基因沉默(vigs) 烟草脆裂病毒(TRV) 白化表型

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VIGS诱导MdHB-1沉默对苹果果实成熟的影响 被引量：9

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作者 温小红 姜永华 +1 位作者 周轲 任小林 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期113-119,共7页

为研究MdHB-1是否可调控苹果果实MdACO1表达及果实成熟进程,以‘澳洲青苹’果实为试材,通过病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)技术抑制果实MdHB-1表达,分析其对MdACO1表达情况和果实成熟相关指标的影响。结果显示,V... 为研究MdHB-1是否可调控苹果果实MdACO1表达及果实成熟进程,以‘澳洲青苹’果实为试材,通过病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)技术抑制果实MdHB-1表达,分析其对MdACO1表达情况和果实成熟相关指标的影响。结果显示,VIGS技术成功抑制果肉MdHB-1表达,使MdACO1表达量下调,果实的呼吸强度和乙烯释放速率受到显著抑制,果实硬度、可溶性固形物和可滴定酸质量分数的下降延缓。说明:MdHB-1不仅可以正向调控苹果果实MdACO1表达,还参与果实的成熟衰老过程。 展开更多

关键词 '澳洲青苹’苹果 vigs 转录因子MdHB-1 果实成熟

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VIGS介导的转复制酶基因番木瓜对PRSV的抗性 被引量：5

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作者 阮小蕾 王加峰 李华平 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期418-422,共5页

将PCR检测呈阳性的T4代转复制酶(replicase,Rep)基因番木瓜植株在苗期接种番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)Ys株系,定期采取不同部位的叶片进行Northern blot分析。结果表明:接种PRSV之前,在植株的各部位均能检测到转基因完... 将PCR检测呈阳性的T4代转复制酶(replicase,Rep)基因番木瓜植株在苗期接种番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)Ys株系,定期采取不同部位的叶片进行Northern blot分析。结果表明:接种PRSV之前,在植株的各部位均能检测到转基因完整的Rep mRNA,但接种后不同时间在接种叶以上部位陆续出现了Rep mRNA的降解;接种后30 d内,接种叶下部第1片叶上始终未出现Rep mRNA的降解;另外,在发生mRNA降解的叶片上都能相继检测到小分子干涉RNA(short interferring RNA,si RNA)的产生。这说明转基因番木瓜的抗病性与mRNA的降解及siRNA的积累有着密切的关系。这种抗性发生在转录后水平上,是由病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)介导产生的。 展开更多

关键词 番木瓜环斑病毒 病毒诱导的基因沉默 抗病机制

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基于叶绿素合成关键基因构建马蹄莲佛焰苞离体VIGS技术体系

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作者 刘红艳 杨拓 +5 位作者 王壹 孙轩 王贤 刘振林 张国君 卫尊征 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1289-1298,共10页

返青是天南星科观赏植物在发育过程中发生的一种典型的功能叶绿体重新分化形成的生理现象,其中马蹄莲佛焰苞常出现这一现象,但其潜在的调控机制并不明确。为了探究马蹄莲返青的调控机制,提高彩色马蹄莲的观赏品质,本研究以黄色品种Flore... 返青是天南星科观赏植物在发育过程中发生的一种典型的功能叶绿体重新分化形成的生理现象,其中马蹄莲佛焰苞常出现这一现象,但其潜在的调控机制并不明确。为了探究马蹄莲返青的调控机制,提高彩色马蹄莲的观赏品质,本研究以黄色品种Florex Gold为材料,以返青过程中两个叶绿素合成关键基因ZhGluTR和ZhChlH为研究对象,建立病毒诱导的基因沉默(VIGS)体系,对马蹄莲进行基因功能验证。通过离体佛焰苞孔片试验并对取样部位和侵染时长进行综合分析,结果显示,中部真空抽吸5 min的试验组返青现象出现最迟,VIGS沉默效果最好。在上述沉默背景下,与对照组相比,ZhGluTR和ZhChlH沉默孔片的返青现象均出现得更迟,色调角值上升更缓慢,并且叶绿素含量更低,类胡萝卜素含量更高。综合上述结果表明,本研究建立的VIGS体系可分别有效沉默佛焰苞中的叶绿素合成关键基因ZhGluTR和ZhChlH。研究结果有助于进一步探究马蹄莲佛焰苞返青现象的分子调控机制。 展开更多

关键词 马蹄莲 佛焰苞孔片 病毒诱导的基因沉默(vigs) 基因功能

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番茄环纹斑点病毒N和NSm基因的VIGS载体构建

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作者 崔玥 赵立华 +4 位作者 陈思 文俊元 邱润霜 张仲凯 赵明富 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第1期98-104,共7页

【目的】番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot orthotospovirus,TZSV)由传毒介体蓟马以持久增殖型方式传播,且能与其他病毒复合侵染作物,对中国西南地区重要蔬菜的产量和观赏作物的品质造成严重影响,给当地农业生产带来了严重危害。TZS... 【目的】番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot orthotospovirus,TZSV)由传毒介体蓟马以持久增殖型方式传播,且能与其他病毒复合侵染作物,对中国西南地区重要蔬菜的产量和观赏作物的品质造成严重影响,给当地农业生产带来了严重危害。TZSV的N和NSm基因与病毒分类、运动和系统侵染密切相关。本研究通过构建N和NSm基因沉默载体,以期为进一步研究TZSV N和NSm基因在病毒侵染方面的功能提供材料,为抗病育种以及田间绿色防控提供一些依据。【方法】根据TZSV N和NSm基因序列设计特异性引物,利用RT-RCR技术扩增得到TZSV N和NSm基因片段,将扩增得到的目的基因连接到pEASY-Blunt-Zero载体上,含有N和NSm基因序列的pEASY-Blunt-Zero载体和pTRV-pTV00载体用Bam HI和Hind III限制性内切酶进行双酶切,并将酶切产物进行纯化回收,纯化后产物与pTRV-pTV00载体使用T4 DNA连接酶连接,获得pTRV-PTV00-N和pTRV-PTV00-NSm重组载体,将其转入根癌农杆菌GV3101中,并注射到本氏烟和栽培烟K326中,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测病毒N和NSm基因的沉默效率,间接酶联免疫吸附试验(ID-ELISA)检测N和NSm蛋白的含量。【结果】RT-qPCR分析表明,本生烟和栽培烟K326中N和NSm基因在接种TZSV后5 d沉默效率均大于90%。ID-ELISA结果显示,2个蛋白含量在不同时间内均显著下降,其中NSm蛋白含量连续9 d显著下降。【结论】TZSV N和NSm基因沉默载体构建成功,并成功试验于本氏烟和栽培烟K326。通过构建TZSV N和NSm基因沉默载体,为研究TZSV致病机理提供了材料,为田间抗TZSV育种和防控提供了理论依据。 展开更多

关键词 番茄环纹斑点病毒 病毒诱导的基因沉默 实时荧光定量PCR 烟草脆裂病毒

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VIGS诱导SL-ZH22基因沉默下番茄耐盐性研究 被引量：1

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作者 李景富 张晓春 +3 位作者 姜景彬 杨欢欢 赵婷婷 许向阳 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期9-15,共7页

植物转录因子通常与其他相关蛋白相互作用或通过互作激活或抑制特定基因表达,对植物逆境条件适应性发挥重要调控作用。Zinc-finger homeodomain(ZF-HD)转录因子家族成员基因在调控植物生长发育过程中具有重要作用,参与植株逆境胁迫。试... 植物转录因子通常与其他相关蛋白相互作用或通过互作激活或抑制特定基因表达,对植物逆境条件适应性发挥重要调控作用。Zinc-finger homeodomain(ZF-HD)转录因子家族成员基因在调控植物生长发育过程中具有重要作用,参与植株逆境胁迫。试验将ZF-HD转录因子家族成员中SL-ZH22基因作基因沉默(VIGS)处理,高盐胁迫处理沉默植株,结合对照植株观察沉默植株耐盐性变化。结果显示SL-ZH22沉默植株抗性水平低于未处理植株,表明VIGS诱导SL-ZH22基因沉默可能降低番茄耐盐性。研究可为番茄抗逆品种选育奠定基础。 展开更多

关键词 vigs SL-ZH22基因 基因表达 耐盐性

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牡丹授粉受精基因PoMYBs的VIGS体系的建立 被引量：2

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作者 王鹏摇 刘鹏 +2 位作者 耿丹丹 王奎玲 郝青 《青岛农业大学学报（自然科学版）》 2021年第3期199-204,217,共7页

授粉受精成败是影响牡丹结实和远缘杂交的关键生殖过程,但缺乏稳定的遗传转化体系严重影响了其基因功能验证。针对牡丹授粉受精基因功能鉴定,采用注射法分析了不同注射部位(雌蕊和花柄)和菌液浓度(1.0、1.5和2.0)对目的基因沉默效率的... 授粉受精成败是影响牡丹结实和远缘杂交的关键生殖过程,但缺乏稳定的遗传转化体系严重影响了其基因功能验证。针对牡丹授粉受精基因功能鉴定,采用注射法分析了不同注射部位(雌蕊和花柄)和菌液浓度(1.0、1.5和2.0)对目的基因沉默效率的影响。结果表明,注射雌蕊、花柄PoMYB2基因沉默效率分别为62.5%、66.7%,注射法尤其是注射花柄的方法适用于牡丹植株病毒诱导的基因沉默(Virus induced gene silencing,VIGS)体系的构建;当菌液浓度OD600分别为1.0、1.5、2.0时,PoMYB2基因的沉默效率分别为100%、77.8%和0%,菌液OD600为1.0时沉默效率最高;注射花柄上部,菌液OD600为1.0时,PoMYB1和PoMYB2基因的表达量显著降低。由此获得了沉默PsMYBs的适宜体系:以PoMYBs基因的非保守区域为靶片段,以带花柄的紧实花蕾为材料,注射花柄上部,菌液OD600为1.0,置于去离子水中,暗培养1 d,转移至正常光照培养环境后可进行检测。本研究建立的VIGS沉默体系可有效沉默雌蕊中的内源基因,为进行牡丹雌雄蕊发育、授粉受精和结实方面的基因功能验证奠定了基础。 展开更多

关键词 牡丹 受精 vigs体系 PoMYB

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利用VIGS技术在本氏烟中沉默枸杞PDS同源基因的研究 被引量：3

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作者 曲玲 李彦龙 +6 位作者 焦恩宁 赵建华 秦垦 尹跃 周旋 安巍 曹有龙 《宁夏农林科技》 2021年第2期25-30,F0002,共7页

【目的】本项研究旨在通过建立一个异源VIGS体系,为枸杞重要性状相关基因的功能鉴定提供前期信息。【方法】从枸杞叶片中克隆获得409 bp长的八氢番茄红素脱饱和酶基因(phytoene desaturase,PDS)的编码区片段,构建入基于烟草脆裂病毒的V... 【目的】本项研究旨在通过建立一个异源VIGS体系,为枸杞重要性状相关基因的功能鉴定提供前期信息。【方法】从枸杞叶片中克隆获得409 bp长的八氢番茄红素脱饱和酶基因(phytoene desaturase,PDS)的编码区片段,构建入基于烟草脆裂病毒的VIGS空载体中,通过农杆菌介导的侵润接种,将重组的病毒沉默载体pTRV2-PDS转入本氏烟中。【结果】本氏烟幼苗被侵染接种后,沉默处理植株的叶片呈现整叶白化的表型,而阴性对照植株叶片一直未出现变白的症状,qRT-PCR检测表明,接种17 d后,与阴性对照植株相比,沉默处理植株PDS基因的表达显著地被抑制(P<0.05),说明枸杞PDS基因的同源基因在本氏烟中得到了有效沉默。【结论】该VIGS体系的构建,可用于对枸杞部分基因功能的快速初步鉴定和筛选,旨在提高枸杞基因功能研究的效率。 展开更多

关键词 枸杞 八氢番茄红素脱饱和酶基因(PDS) 病毒诱导基因沉默(vigs) 本氏烟

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石蒜同源基因沉默体系构建及鳞茎发生基因功能验证 被引量：1

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作者 肖潇 夏宜平 +3 位作者 崔柳 张佳平 洪震 任梓铭 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 北大核心 2025年第1期89-101,共13页

本研究以浙江省野生资源丰富的海滨石蒜(Lycoris insularis)为材料,构建了以鳞茎为外植体的石蒜同源基因沉默体系,并通过该体系验证了海滨石蒜鳞茎发生基因的生物功能。通过设计特异性引物,从鳞茎中克隆获得LiCWIN基因片段,全长1 706 bp... 本研究以浙江省野生资源丰富的海滨石蒜(Lycoris insularis)为材料,构建了以鳞茎为外植体的石蒜同源基因沉默体系,并通过该体系验证了海滨石蒜鳞茎发生基因的生物功能。通过设计特异性引物,从鳞茎中克隆获得LiCWIN基因片段,全长1 706 bp;经双酶切后与烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus, TRV)载体TRV2-GFP连接,从而构建病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing, VIGS)重组载体;转化根癌农杆菌后,用菌液侵染损伤刺激后的鳞茎块。侵染2 d后,观察到鳞茎维管组织中存在绿色荧光;实时荧光定量聚合酶链反应(real time fluorogenic quantitative polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测发现,沉默组LiCWIN基因表达量显著降低。侵染40 d后,相较于空载体对照组,LiCWIN基因沉默组小鳞茎发生数量下降且发育迟缓。上述结果表明,VIGS体系在海滨石蒜鳞茎组织中成功沉默了功能基因,且对小鳞茎后期发育的表型产生了持续影响。特别是LiCWIN基因沉默后,小鳞茎发生受阻。本研究为石蒜鳞茎发生发育关键基因的功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 石蒜属 基因功能 瞬时验证 病毒诱导的基因沉默 体系构建 CWIN基因 小鳞茎发生

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芦笋病毒诱导基因沉默体系的初步构建

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作者 吴贺 李云宾 +3 位作者 董陈文华 林春 刘正杰 毛自朝 《云南农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第1期31-41,共11页

【目的】在多年生雌雄异株植物芦笋(Asparagus officinalis L.)中建立病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)体系,以快速探究芦笋中关键基因的功能。【方法】以绿芦笋品种‘Guelph Millennium’为试验材料,选用八氢番茄... 【目的】在多年生雌雄异株植物芦笋(Asparagus officinalis L.)中建立病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)体系,以快速探究芦笋中关键基因的功能。【方法】以绿芦笋品种‘Guelph Millennium’为试验材料,选用八氢番茄红素脱氢酶编码基因(AoPDS)和镁螯合酶Ⅰ亚基编码基因(AoCH42)为报告基因,基于苹果潜伏球形病毒(apple latent spherical virus,ALSV)沉默载体,采用真空渗透法通过农杆菌对芦笋露白种子进行侵染,经表型和qRT-PCR检测,构建芦笋的VIGS体系,并进一步验证编码芦笋NADH-脱氢酶铁硫蛋白亚基S8基因(AoNDUFS8)的功能。【结果】侵染21 d后,AoPDS和AoCH42沉默植株分别出现白化和黄化表型;AoNDUFS8沉默植株长势瘦弱,发育迟缓。qRT-PCR结果显示:与对照组相比,植株侵染后,目的基因表达均下降,预示成功构建芦笋VIGS体系。【结论】基于ALSV的VIGS体系能有效沉默芦笋中的目的基因,为后续芦笋功能基因组分析提供了实践基础。 展开更多

关键词 芦笋 病毒诱导基因沉默(vigs)体系 PDS CH42 基因功能

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火龙果HuGAI1基因在胰蛋白酶诱抗中的功能及其分子机制

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作者 陈欣欣 王贺敏 +3 位作者 陈恩艳 贾静宇 李富新 李欣 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第13期1-7,共7页

胰蛋白酶被发现具有超氧阴离子清除活性,可以显著诱导果实采后抗病性和抗逆性。先前研究发现DELLA蛋白的编码基因HuGAI1应是胰蛋白酶诱导火龙果果实抗性的关键基因,但其调控机制尚需阐明。为了研究胰蛋白酶诱导火龙果抗性的分子机制,该... 胰蛋白酶被发现具有超氧阴离子清除活性,可以显著诱导果实采后抗病性和抗逆性。先前研究发现DELLA蛋白的编码基因HuGAI1应是胰蛋白酶诱导火龙果果实抗性的关键基因,但其调控机制尚需阐明。为了研究胰蛋白酶诱导火龙果抗性的分子机制,该研究通过病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术构建HuGAI1基因的RNA沉默株,验证其在火龙果的保鲜作用,又通过转录组学分析HuGAI1调控的下游代谢途径。结果显示,胰蛋白酶处理的火龙果果实保存时间延长,HuGAI1沉默后胰蛋白酶的诱抗效果丧失,火龙果果实腐败加剧。HuGAI1沉默后的转录组学分析结果显示,HuMYB12应是与HuGAI1结合的关键转录因子,它参与了类黄酮物质的合成,且受HuGAI1-HuMYB12调控的基因主要富集在类黄酮生物合成途径中,HuCYP98A3、HuPAL1和Hu4CL3等下游多个关键酶的表达显著上调。胰蛋白酶通过上调HuGAI1-HuMYB12的表达,促进黄酮类化合物的生物合成,增强细胞抗氧化能力,延长果实保鲜时间。 展开更多

关键词 基因沉默 胰蛋白酶 HuGAI1 黄酮类化合物生物合成 转录组学

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NbJAZ3在苜蓿花叶病毒侵染本氏烟过程中的作用

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作者 赖诗雨 梁巧兰 +5 位作者 魏列新 牛二波 陈应娥 周鑫 杨思正 王博 《生物技术通报》 北大核心 2025年第8期186-196,共11页

【目的】探究本氏烟(Nicotiana benthamiana)中编码茉莉酸ZIM结构域蛋白3(jasmonate ZIM-domain protein 3,JAZ3)基因NbJAZ3对苜蓿花叶病毒(alfalfa mosaic virus, AMV)侵染本氏烟的影响,为进一步解析AMV侵染机制提供理论依据。【方法... 【目的】探究本氏烟(Nicotiana benthamiana)中编码茉莉酸ZIM结构域蛋白3(jasmonate ZIM-domain protein 3,JAZ3)基因NbJAZ3对苜蓿花叶病毒(alfalfa mosaic virus, AMV)侵染本氏烟的影响,为进一步解析AMV侵染机制提供理论依据。【方法】以本氏烟和AMV为材料,采用摩擦接种法将AMV接种于本氏烟,取接种后1、7、15、21 d的本氏烟叶片进行转录组测序分析,对茉莉酸(jasmonic acid, JA)信号转导途径中差异基因进行筛选,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测NbJAZ3在AMV侵染中的表达变化;克隆NbJAZ3,进行生物学信息分析,构建系统进化树并进行多序列比对;构建pCAMBIA1300-NbJAZ3瞬时过表达载体,利用激光共聚焦显微镜观察NbJAZ3蛋白亚细胞定位,利用Western blot检测蛋白表达量;当NbJAZ3在本氏烟叶片中瞬时过表达后,接种AMV,采用RT-q PCR法检测接种后第5天的AMV CP相对表达量;利用烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus, TRV)诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing, VIGS)技术构建pTRV2-NbJAZ3沉默载体,沉默NbJAZ3后摩擦接种AMV,利用RTqPCR检测AMV CP相对表达量。【结果】转录组测序和RT-q PCR进一步验证表明,AMV接种后的不同天数NbJAZ3均下调表达,且第15天NbJAZ3相对表达量最低,与对照相比下降了84.43%;NbJAZ3 CDS序列长度为1 143 bp,编码380个氨基酸,包含ZIM和Jas-motif 2个保守结构域;NbJAZ3与林烟草(Nicotiana sylvestris)的NsJAZ3同源性最高,相似度为96.58%;显微镜观察到NbJAZ3蛋白定位于本氏烟叶片的细胞核、细胞质与细胞膜中;与对照组相比,NbJAZ3瞬时过表达和瞬时沉默的本氏烟接种AMV第5天时,AMV CP相对表达量分别降低了83.82%和增加了78.58%。【结论】AMV侵染会引起本氏烟中NbJAZ3下调,瞬时过表达NbJAZ3可抑制AMV对本氏烟的侵染,而沉默该基因可促进AMV的侵染,进一步表明NbJAZ3可作为本氏烟抗AMV侵染的正调控因子,在抵御病毒侵染中具有重要作用。 展开更多

关键词 苜蓿花叶病毒 侵染 本氏烟 NbJAZ3 亚细胞定位 瞬时过表达 基因沉默 生物信息学分析

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换锦花LsMYB7基因克隆与功能研究 被引量：2

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作者 郑正权 赵梦婧 高燕会 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期586-596,共11页

【目的】研究转录因子LsMYB7基因对换锦花Lycoris sprengeri花色苷积累的调控作用。【方法】采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法从换锦花花瓣中克隆获得花色苷形成相关R2R3-MYB转录因子LsMYB7基因,并进行生物信息学分析,再通过病毒介导... 【目的】研究转录因子LsMYB7基因对换锦花Lycoris sprengeri花色苷积累的调控作用。【方法】采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法从换锦花花瓣中克隆获得花色苷形成相关R2R3-MYB转录因子LsMYB7基因,并进行生物信息学分析,再通过病毒介导的基因沉默(VIGS)技术研究LsMYB7基因对花色苷积累的调控作用。【结果】克隆到1条长951 bp的LsMYB7基因cDNA序列,开放阅读框(ORF)为825 bp,编码274个氨基酸,LsMYB7蛋白含有2个R2和R3结构域,属R2R3-MYB转录因子家族;系统进化分析表明LsMYB7与拟南芥Arabidopsis thaliana S22亚族基因聚为一类;LsMYB7亚细胞定位于细胞核,在不同花发育阶段和不同花色无性系中,LsMYB7基因表达与花色苷合成相关基因的表达趋势一致,主要在败花期和花色苷含量较高的H1无性系中表达;LsMYB7基因沉默后,换锦花花瓣明显变短,颜色变深,且LsCHS、LsF3'H、LsANS、LsUFGT1和LsUFGT2等花色苷形成相关基因的表达显著下调。【结论】LsMYB7属R2R3-MYB转录因子家族S22亚族,通过正向调控LsCHS、LsF3'H、LsANS、LsUFGT1和LsUFGT2花色苷生物合成相关基因的表达促进花色苷积累。 展开更多

关键词 换锦花 R2R3-MYB转录因子 花色苷积累 病毒介导的基因沉默 调控作用

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辣椒CaDXS和CaPDS基因沉默的表型比较 被引量：1

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作者 张鑫 桂敏 +2 位作者 刘弟 张金峰 刘雅婷 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期125-131,共7页

【目的】沉默辣椒CaDXS和CaPDS基因,比较分析两者白化表型的差异,寻找新的辣椒沉默标记基因。【方法】利用双酶切克隆技术构建CaDXS和CaPDS基因的沉默载体;通过农杆菌介导转化侵染辣椒,观察辣椒的沉默表型;采用实时荧光定量PCR技术检测C... 【目的】沉默辣椒CaDXS和CaPDS基因,比较分析两者白化表型的差异,寻找新的辣椒沉默标记基因。【方法】利用双酶切克隆技术构建CaDXS和CaPDS基因的沉默载体;通过农杆菌介导转化侵染辣椒,观察辣椒的沉默表型;采用实时荧光定量PCR技术检测CaDXS和CaPDS基因的沉默效率。【结果】农杆菌浸润21 d后,沉默CaDXS基因的辣椒叶片出现褪绿症状,沉默CaPDS基因的辣椒叶片出现白化。农杆菌浸润30 d后,沉默CaDXS基因的辣椒叶片出现较为明显的白化;沉默CaPDS基因的辣椒叶片白化程度加剧,新叶近乎白化。与CaDXS基因相比,沉默CaPDS基因导致的辣椒白化表型更明显和高效。沉默组辣椒叶片中CaDXS和CaPDS基因的表达量均显著降低(P<0.05),沉默效率分别为86.80%和93.08%,表明辣椒CaDXS和CaPDS基因被成功沉默。【结论】CaDXS基因可以作为辣椒的沉默标记基因,但沉默CaPDS基因的辣椒白化表型出现更早且明显,因此,CaPDS基因比CaDXS基因更适合作为辣椒沉默标记基因。 展开更多

关键词 病毒诱导的基因沉默 八氢番茄红素脱氢酶 1-脱氧木酮糖-5-磷酸合酶 辣椒 标记基因 烟草脆裂病毒

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藜麦CqAMSlike基因的克隆与功能分析

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作者 张玉敏 林春 +3 位作者 刘正杰 林彤 董玉梅 毛自朝 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期683-694,共12页

为探究藜麦(Chenopodium quinoa,Willd.)花粉发育的分子机制,基于基因组和转录组数据,经同源比对及RT-qPCR表达分析等,预测藜麦中AMS候选基因并克隆其编码序列,随后经病毒介导的基因沉默(VIGS)及双分子荧光互补(BiFC)法进行候选基因的... 为探究藜麦(Chenopodium quinoa,Willd.)花粉发育的分子机制,基于基因组和转录组数据,经同源比对及RT-qPCR表达分析等,预测藜麦中AMS候选基因并克隆其编码序列,随后经病毒介导的基因沉默(VIGS)及双分子荧光互补(BiFC)法进行候选基因的功能验证。结果显示,藜麦中有CqAMSlike1和CqAMSlike2两个基因,其中CqAMSlike1的CDS长1929 bp,而CqAMSlike2的CDS长1920 bp,两基因均在不同发育时期的圆锥花序中表达。与CqAMSlike2相比,CqAMSlike1的表达更与AMS的表达模式相一致,而被进一步用于基因的功能验证。与对照相比,基于烟草脆裂病毒(TRV)沉默CqAMSlike1的藜麦两性花出现部分花丝缩短、花药不裂,花粉败育,单株种子少,种子空瘪率增加的表型。BIFC结果显示CqAMSlike1自身,与CqTDF1和CqMYB80均有互作,预示CqAMSlike1可形成同源或异源聚体调控藜麦绒毡层发育基因的表达。 展开更多

关键词 藜麦 AMS 病毒介导的基因沉默 花粉发育 蛋白互作

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旱柳SmERF B3-45的克隆及耐盐功能研究

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作者 华炫 田博雯 +5 位作者 周欣彤 江梓涵 王诗琦 黄倩慧 张健 陈艳红 《生物技术通报》 CSCD 北大核心 2024年第12期124-135,共12页

【目的】验证SmERF B3-45是否在植物响应盐胁迫中起着正向调控的作用,为揭示AP2/ERF转录因子在调控旱柳耐盐性中的作用奠定基础。【方法】分析旱柳AP2/ERF超家族中SmERF B3-45的启动子区顺式作用元件,利用特异性引物克隆得到SmERF B3-45... 【目的】验证SmERF B3-45是否在植物响应盐胁迫中起着正向调控的作用,为揭示AP2/ERF转录因子在调控旱柳耐盐性中的作用奠定基础。【方法】分析旱柳AP2/ERF超家族中SmERF B3-45的启动子区顺式作用元件,利用特异性引物克隆得到SmERF B3-45的CDS全长序列,对其进行生物信息学和亚细胞定位分析,并通过过表达载体的构建转化拟南芥突变体ERFOE1、ERF-OE2和进行病毒诱导的基因沉默(VIGS)阐明其功能。【结果】顺式作用元件分析表明,SmERF B3-45可能参与逆境胁迫响应表达调控途径。RT-qPCR结果显示,NaCl处理可诱导SmERF B3-45的表达,且该基因在旱柳的不同组织中广泛表达。亚细胞定位显示,SmERF B3-45蛋白定位于细胞核。转基因拟南芥中,SmERF B3-45的表达量大幅提高,在盐胁迫条件下,与野生型相比,过表达SmERF B3-45拟南芥的根长显著增加,总蛋白含量、Na+含量、MDA含量和Na+/K^(+)显著降低,CAT含量和K^(+)含量显著升高。基因沉默植株显著下调了SmERF B3-45的表达水平,与对照相比,基因沉默植株的总蛋白含量显著降低,而MDA和脯氨酸含量却显著高于阴性对照植株,并且沉默植株出现了叶片萎蔫,表明SmERF B3-45的沉默降低了旱柳的耐盐性。【结论】SmERF B3-45是植物响应盐胁迫的正向调控转录因子。 展开更多

关键词 旱柳 基因克隆 盐胁迫 ERF转录因子 转基因 病毒诱导的基因沉默(vigs)

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