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Cloning and sequence analysis of US1 gene in duck enteritis virus 被引量:1
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作者 ZHAO Yan WANG Jun-wei +1 位作者 MA Bo ZHAO Xiao-yan 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期105-109,共5页
In this paper,a 1,860 bp sequence in IRs region of duck enteritis virus(DEV) was amplified by single oligonucleotide nested PCR with a single primer designed according to partial sequence of US1 and then a pair of pri... In this paper,a 1,860 bp sequence in IRs region of duck enteritis virus(DEV) was amplified by single oligonucleotide nested PCR with a single primer designed according to partial sequence of US1 and then a pair of primers designed according to the 3' UTR of US8 gene and 5' end of the new getting sequence were used to amplify a 2,426 bp sequence toward the TRs region.Sequence analysis revealed that the both sequences contained an identical 990 bp open reading frame of DEV US1 gene.The two ORFs were in opposite transcription orientation.Sequence comparison of the nucleotide sequence and the deduced amino acid sequence of US1 gene showed relatively high identity to Mardivirus.Phylogenetic tree analysis showed that the eleven herpesviruses viruses were classified into three groups,and the duck enteritis virus was most closely related to Mardivirus. 展开更多
关键词 摘要 编辑部 编辑工作 读者
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牛病毒性腹泻病毒陕西分离株的鉴定及E2基因的克隆与序列分析
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作者 王凯茸 丁雨欣 +4 位作者 于皓同 马永杰 张淑霞 张琪 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2024年第12期14-19,共6页
为分析陕西省牛病毒性腹泻病毒(BVDV)分子变异情况,采集陕西省某牛场腹泻患牛粪便样品,经处理后接种至MDBK细胞后,进行病毒分离鉴定并对分离的BVDV进行E2基因的克隆和遗传进化分析。结果显示,样品经过RT-PCR鉴定后接毒,第4天出现明显的... 为分析陕西省牛病毒性腹泻病毒(BVDV)分子变异情况,采集陕西省某牛场腹泻患牛粪便样品,经处理后接种至MDBK细胞后,进行病毒分离鉴定并对分离的BVDV进行E2基因的克隆和遗传进化分析。结果显示,样品经过RT-PCR鉴定后接毒,第4天出现明显的细胞病变(CPE),通过设计特异性引物对收获的病毒成功扩增出BVDV E2基因,证明分离的病毒为BVDV。对该病毒的E2基因进行序列分析,所得序列与GenBank上已发表的BVDV毒株的核苷酸序列同源性为84.5%~100%,氨基酸序列同源性为82.1%~100%。结果表明,成功分离到牛病毒性腹泻病毒并进行了E2基因的克隆与序列分析,研究结果可为陕西地区BVDV的流行病学、致病性及生物学特性研究提供依据,为BVDV的区域流行及有效防控提供参考,为新疫苗的研发提供地方种毒。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 分离鉴定 e2基因 序列分析
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猪伪狂犬病病毒BJC变异株分离鉴定及gB和gE基因序列分析
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作者 娄昆鹏 李阳 +2 位作者 项伟 徐博 朱国强 《动物医学进展》 北大核心 2024年第9期20-26,共7页
为了确定伪狂犬病疑似发病猪场PRV变异株病原及其病毒分子特征,通过病理剖检、病毒分离鉴定与纯化、ST细胞TCID_(50)和小鼠LD_(50)测定,对分离鉴定的病毒gB、gE基因进行PCR扩增、回收、克隆和测序,用生物信息学分析软件Geneious Prime... 为了确定伪狂犬病疑似发病猪场PRV变异株病原及其病毒分子特征,通过病理剖检、病毒分离鉴定与纯化、ST细胞TCID_(50)和小鼠LD_(50)测定,对分离鉴定的病毒gB、gE基因进行PCR扩增、回收、克隆和测序,用生物信息学分析软件Geneious Prime对gB、gE基因进行遗传进化和同源性分析。结果显示,该分离株为PRV强毒株。该病毒在ST细胞生长良好,纯化后的病毒经测定半数组织培养感染量为10^(8.5)TCID_(50)/mL,对6周龄昆明小鼠的LD_(50)为10^(5.8)TCID_(50)。测序结果与预期的PRV gB、gE基因片段相符。遗传进化分析可知与国内代表PRV变异毒株如JS2012、HN1201、ZJ01等处于同一分支,与欧美分离株如Bartha、Kaplan、Becker等亲缘关系较远,处于不同的大分支。氨基酸序列分析表明,BJC株与国外经典毒株和国内早期分离毒株存在多个特征性位点替换,符合国内流行变异毒株特征,BJC株为PRV变异毒株。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒病 分离鉴定 BJC株 gB、ge基因 序列分析
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1株多毒株重组PRRSV的分离鉴定与遗传进化分析
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作者 元娜 邵明珠 +4 位作者 吕凤霞 窦丽娜 李向清 赵宝凯 董世山 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第3期58-65,共8页
为了分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)遗传变异特性,本试验对来自山西省某猪场疑似感染PRRSV的母猪血清和仔猪肺脏组织样品进行PRRSV实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测,阳性肺脏组织样品研磨液接种于猪肺泡巨噬细胞(PAMs),将出现细... 为了分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)遗传变异特性,本试验对来自山西省某猪场疑似感染PRRSV的母猪血清和仔猪肺脏组织样品进行PRRSV实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测,阳性肺脏组织样品研磨液接种于猪肺泡巨噬细胞(PAMs),将出现细胞病变的PAMs进行有限稀释法纯化后用间接免疫荧光(IFA)鉴定,利用逆转录PCR(RT-PCR)分段扩增分离毒株全基因组序列,并用分子生物学软件进行开放阅读框5(ORF5)基因和全基因组的同源性和遗传进化分析、非结构蛋白2(Nsp2)氨基酸特征及全基因组序列的重组分析。结果显示,qRT-PCR检测样品总阳性率为80%(16/20),从PRRSV阳性仔猪肺脏组织中分离获得1株PRRSV,命名为SXZY202301;分离毒株基因组全长15 021 bp,与NADC30毒株的核苷酸同源性达到90.4%,在遗传进化树中处于同一分支,属于Sublineage 1.8;ORF5基因与IA/2014/NADC34毒株的ORF5基因高度相似,同源性达到了95.1%,在遗传进化树中处于同一分支,属于Sublineage 1.5;分离毒株与类NADC30毒株Nsp2氨基酸序列具有相同的131个氨基酸缺失的典型特征;重组分析结果显示,SXZY202301存在6个重组位点,是以类NADC30毒株为主要亲本,以JXA1毒株和类NADC34毒株为次要亲本的多毒株重组类毒株。本试验为进一步研究PRRSV的重组和演化提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 分离鉴定 测序分析 遗传进化 重组
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2014年福建省南平市登革病毒E基因序列分析 被引量:10
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作者 王金章 陈宏彬 +4 位作者 张拥军 翁育伟 吴春敏 郑奎城 严延生 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期281-285,共5页
目的测定2014年南平市登革暴发相关登革病毒E基因序列,探讨其输入来源及基因型别。方法将患者急性期血清接种C6/36细胞,分离登革病毒,通过RT-PCR进行血清型鉴定,扩增全长E基因,测定序列并绘制系统进化树。结果共分离到4株DENV-1,2株DENV... 目的测定2014年南平市登革暴发相关登革病毒E基因序列,探讨其输入来源及基因型别。方法将患者急性期血清接种C6/36细胞,分离登革病毒,通过RT-PCR进行血清型鉴定,扩增全长E基因,测定序列并绘制系统进化树。结果共分离到4株DENV-1,2株DENV-2,扩增并测序获得E基因全长序列,4株南平地区DENV-1型分离株之间同源性为100%,与D13459(Donguang)分离株同源性也高达99.7%;2株DENV-2型分离株与DENV2/CN/GZ05/2014分离株的同源性均达100%。系统进化分析发现,4株DENV-1病毒株与来自广东及印度的毒株处于同一进化树分支,均为基因Ⅴ型;2株DENV-2病毒株与来自广东及新加坡的毒株处于同一进化树分支,均为基因Ⅳ型。结论福建省南平市本次登革热本地病例暴发可能是由广东或者东南亚地区的登革热输入病例引起的。 展开更多
关键词 登革病毒 e基因 序列分析 系统进化树
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广西猪瘟流行毒与C-株疫苗毒gp55(E_2)主要抗原区DNA序列差异的比较 被引量:8
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作者 张永国 刘湘涛 +2 位作者 韩雪清 张彦明 薛青红 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2002年第1期79-84,共6页
采用反转录 PCR(RT- PCR)和套式 PCR(nest Polym erase Chain Reaction,n PCR)扩增出 3株广西省近期 (1999~ 2 0 0 0年 )猪瘟流行野毒的 E2 基因 ,将其分别克隆于 PMD- 18T载体上并进行了核苷酸序列测定 ,根据 C株及 Brescia和 Alfort... 采用反转录 PCR(RT- PCR)和套式 PCR(nest Polym erase Chain Reaction,n PCR)扩增出 3株广西省近期 (1999~ 2 0 0 0年 )猪瘟流行野毒的 E2 基因 ,将其分别克隆于 PMD- 18T载体上并进行了核苷酸序列测定 ,根据 C株及 Brescia和 Alfort株确定起始氨基酸三联体的正确位置后进行氨基酸序列推导 ,同时进行了同源性比较及 E2 糖蛋白结构的分析。结果表明 ,所测 3株 HCV E2 基因的长度均为 1170 bp,编码的氨基酸序列均包括完整信号肽序列和部分跨膜序列 ,共由 384个氨基酸组成。3株流行毒的 E2 基因核苷酸序列同源性为 90 .10 %~ 98.5 4%,相应的氨基酸序列同源性为 89.5 9%~ 97.92 %。这 3株流行毒与 C-株兔脾组织毒 (疫苗种毒 ) E2 基因的核苷酸序列同源性为 82 .87%~ 83.99%,相应的氨基酸序列同源性为 86 .98%~ 90 .10 %,表明近期猪瘟流行毒与 C-株疫苗毒的 gp5 5蛋白之间存在一定的差异。 展开更多
关键词 猪瘟 e2基因 糖蛋白 流行毒 疫苗毒 抗原 DNA序列分析 比较研究 广西
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禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)全基因克隆及序列分析 被引量:32
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作者 张建林 于康震 +2 位作者 陈化兰 唐秀英 田国斌 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第3期232-235,共4页
本研究用无特定病原体 (SPF)鸡胚增殖禽流感病毒鹅体分离株A/Goose/Guangdong/1/96 (H5N1) (GD1/96 ) ,提取病毒基因组总RNA ,运用反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)技术分别扩增该病毒分离株的 8个基因片段的cDNA ,分别克隆后进行序列测定... 本研究用无特定病原体 (SPF)鸡胚增殖禽流感病毒鹅体分离株A/Goose/Guangdong/1/96 (H5N1) (GD1/96 ) ,提取病毒基因组总RNA ,运用反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)技术分别扩增该病毒分离株的 8个基因片段的cDNA ,分别克隆后进行序列测定。序列分析结果表明 ,所扩增到的 8个片段均包含相应的病毒基因的完整开放阅读框架。GD1/96株与 1997年香港禽流感事件中的 4株香港流感病毒分离株 (分别来自人、鸡、鸭和鹅 )的HA基因的高度同源性说明它们可能起源于同一种系 ,但NS基因的差异说明它们分属于不同的基因群系。GD1/96株与香港流感病毒分离株的核苷酸和推导的氨基酸序列的同源性较低 ( 6 3.9%~ 98.1%) ,而香港流感病毒分离株之间的核苷酸和氨基酸序列的同源性很高 ( 96 .5 %~ 10 0 %) ,且香港各流感病毒分离株的NA均缺失 5 7个核苷酸 ( 19个氨基酸 )残基。因此 ,内地H5N1分离株GD1/96与 展开更多
关键词 禽流感病毒 分离株 全基因克隆 序列分析
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流行性出血病病毒(EHDV)血清7型毒株在中国的首次分离与鉴定 被引量:17
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作者 杨振兴 孟锦昕 +6 位作者 肖雷 朱建波 廖德芳 高林 李占鸿 杨恒 李华春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期602-610,共9页
流行性出血病(EHD)是由流行性出血病病毒(EHDV)感染反刍动物引起的一种虫媒病毒病,为了解中国云南EHDV的感染情况和病毒遗传特征,笔者课题组在云南省师宗县以EHDV血清学和核酸阴性的牛、羊为哨兵动物,拟对流行于云南省的EHDV进行分离与... 流行性出血病(EHD)是由流行性出血病病毒(EHDV)感染反刍动物引起的一种虫媒病毒病,为了解中国云南EHDV的感染情况和病毒遗传特征,笔者课题组在云南省师宗县以EHDV血清学和核酸阴性的牛、羊为哨兵动物,拟对流行于云南省的EHDV进行分离与鉴定。将采集于哨兵动物的EHDV核酸阳性血液接种BHK-21细胞进行病毒分离;通过血清中和试验与病毒Seg-2、Seg-3 ORF区的序列分析,确定病毒的血清型与遗传特征;采用C-ELISA和qRT-PCR方法对EHDV感染动物血液中的抗体水平与病毒核酸进行监测。结果如下:从2013年8月采集自云南师宗县哨兵牛的血样中分离出一株EHDV(毒株号YNSZ/V269/2013),血清中和试验结果表明分离的病毒为血清型7型(EHDV-7);Seg-2、Seg-3序列分析表明分离的病毒属EHDV-7 Eastern型,与日本毒株和澳大利亚EHDV-7型毒株具有最近的亲缘关系。哨兵动物病毒核酸转阳后,血清抗体迅速上升,3周后达最高点并能在该水平持续较长时间,而病毒核酸含量却迅速下降,7周后已经检测不到。本研究首次报道了EHDV-7型毒株在中国的分离、毒株序列特征以及在动物上的感染特性。研究结果可为进一步开展中国EHDV-7型病毒的全基因组测序、流行病学调查、诊断方法的建立和致病性等相关研究提供基础。 展开更多
关键词 流行性出血病病毒 病毒分离鉴定 血清型 序列分析
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伪狂犬病毒GDSH株的分离鉴定及gE基因的序列分析 被引量:17
9
作者 白丽丽 王旭荣 +3 位作者 刘建营 陈德坤 张春红 宋长绪 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第1期23-26,共4页
从广东四会某猪场分离到一株疑为猪伪狂犬病病毒(PRV)的病毒,病毒在猪肾细胞上出现细胞变圆、拉网、融合等典型病变,并具有细胞泛嗜性特点。在MDCK细胞上测得其TCID50值为10-8/0.1mL,能被伪狂犬病病毒标准阳性血清中和。将0.1mL病毒液... 从广东四会某猪场分离到一株疑为猪伪狂犬病病毒(PRV)的病毒,病毒在猪肾细胞上出现细胞变圆、拉网、融合等典型病变,并具有细胞泛嗜性特点。在MDCK细胞上测得其TCID50值为10-8/0.1mL,能被伪狂犬病病毒标准阳性血清中和。将0.1mL病毒液接种小鼠后发生奇痒并麻痹致死,接种猪3天后发病,7天死亡,从攻毒病死猪的脑组织病理切片上观察到典型的病毒性脑膜脑炎及血管套现象。通过PCR扩增到PRVgD基因,由此进一步证明所分离病毒为猪伪狂犬病毒,并命名为GDSH株。根据GenBank中发表的序列,设计一对扩增PRVgE基因的特异性引物,建立可以区分PRV野毒株与疫苗株的PCR诊断方法。以此方法对病毒的细胞培养液进行检测,结果证实所分毒株为PRV野毒株,经克隆测序后与GenBank收录的其它PRVgE基因序列进行比较,发现所测毒株的核苷酸序列与其它PRV毒株的同源性介于98.3%~99.9%之间,其中与PRVEa株的亲缘关系最近为99.9%。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒(PRV) 分离鉴定 Ge基因 序列分析
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急、慢性猪瘟病毒分离株和疫苗株E2基因的序列分析 被引量:10
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作者 刘伯华 刘湘涛 +3 位作者 韩雪清 赵启祖 李明晖 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期568-575,共8页
利用反转录 (RT)及套式PCR(N -PCR)扩增并测定了 6株具有不同表症近期甘肃省猪瘟流行野毒及C -株细胞疫苗毒的主要免疫原E2基因的核苷酸序列。序列分析比较结果表明 ,6株流行野毒与C -株疫苗毒的核苷酸同源性为 82 %~ 84 % ,流行野毒... 利用反转录 (RT)及套式PCR(N -PCR)扩增并测定了 6株具有不同表症近期甘肃省猪瘟流行野毒及C -株细胞疫苗毒的主要免疫原E2基因的核苷酸序列。序列分析比较结果表明 ,6株流行野毒与C -株疫苗毒的核苷酸同源性为 82 %~ 84 % ,流行野毒之间的核苷酸同源性在 89%~99%之间 ,并且明显可分为二个组群 ,病毒株所属组群与其临床症状有一定的相关性。流行野毒与C -株毒在中和抗原决定簇上有部分氨基酸存在性质差异 ,可能影响C -株毒对流行野毒的中和滴度。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2基因 序列分析 分离株 疫苗株
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乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达及其免疫原性的研究 被引量:9
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作者 汤德元 王凤 +5 位作者 马萍 罗险峰 李春燕 曾智勇 徐健 刘建 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1330-1336,共7页
收集某猪场1例发病种公猪的睾丸病料,处理后采用细胞培养与乳鼠脑内接毒相结合的方法盲传并结合RT-PCR方法分离鉴定,命名为乙型脑炎病毒(JEV)贵州分离株(GZ株),然后根据GenBank登录的日本乙型脑炎病毒SA14和SA14-14-2株全基因序列设计... 收集某猪场1例发病种公猪的睾丸病料,处理后采用细胞培养与乳鼠脑内接毒相结合的方法盲传并结合RT-PCR方法分离鉴定,命名为乙型脑炎病毒(JEV)贵州分离株(GZ株),然后根据GenBank登录的日本乙型脑炎病毒SA14和SA14-14-2株全基因序列设计并合成1对扩增E基因的特异性引物,用RT-PCR方法扩增出JEV贵州分离株E基因,并将E基因克隆到pMD19-T载体上,构建重组质粒pMD19-T-E,经双酶切鉴定、测序及序列分析鉴定后,再将E基因亚克隆到pET-32a(+)原核表达载体上,成功构建乙脑病毒E基因原核表达质粒pET-32a-E,将构建好的原核表达质粒pET-32a-E转化至宿主菌BL21(DH3)中,诱导表达目的蛋白,表达产物经SDS-PAGE电泳和Western blot分析,得到了约59ku条带,与预期大小相符,进一步提取、纯化和浓缩目的蛋白,并将其加入弗氏佐剂后免疫小鼠,免疫后采血检测抗体。结果显示:乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达目的蛋白能诱导小鼠产生一定抗体水平,该研究为乙型脑炎亚单位疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 贵州分离株 e基因 原核表达 免疫原性
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伪狂犬病病毒Fa株gE基因的克隆与序列的比较分析 被引量:11
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作者 王勤 郭万柱 +2 位作者 徐志文 汪铭书 王小玉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期389-393,共5页
根据已发表的伪狂犬病病毒(PRV)的基因序列,设计合成一对引物PCL1和PCL2,以PRVFa株的DNA为模板成功地扩增得到预期的长约1 7kb的特异片段,经酶切鉴定,初步确定为gE基因。将扩增产物经KpnⅠ、EcoRⅠ消化形成粘末端克隆到pUC18质粒,得到... 根据已发表的伪狂犬病病毒(PRV)的基因序列,设计合成一对引物PCL1和PCL2,以PRVFa株的DNA为模板成功地扩增得到预期的长约1 7kb的特异片段,经酶切鉴定,初步确定为gE基因。将扩增产物经KpnⅠ、EcoRⅠ消化形成粘末端克隆到pUC18质粒,得到了明显大于载体的重组质粒PpgE。重组质粒PpgE经酶切鉴定为含有PRV的gE基因,测序PpgE得到完整的gE基因片段,并与4株不同来源的毒株进行了比较分析。5毒株的gE同源性比较分析发现毒株间同源性最低也高达97%,这体现了gE基因的保守性。分析还表明Fa与TNL同源。同时99%的高同源性也显示Fa、Ea、SH可能是同一毒株。gE序列在1040-1410碱基的高同源性区域作为PRV的PCR检测或作为核酸探针是非常重要的。 展开更多
关键词 伪狂犬病 病毒 Fa株 Ge基因 克隆 序列分析 PCR扩增
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猪伪狂犬病病毒GXBB株的分离鉴定及gE基因的克隆分析 被引量:10
13
作者 王仰杰 刘芳 +6 位作者 华俊 马玲 陈忠伟 张伟 黄红梅 陈凤莲 吴健敏 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第11期32-35,共4页
从广西玉林博自某猪场采集的发病仔猪大脑和内脏病料中分离到一株病毒。病毒接种家兔后引起典型的奇痒、神经症状,接种PK-15细胞出现典型的细胞病变,病毒效价(TCID50)为10^-7.22/0.1ml。设计扩增PRVgE胞外区基因的引物,能扩增出... 从广西玉林博自某猪场采集的发病仔猪大脑和内脏病料中分离到一株病毒。病毒接种家兔后引起典型的奇痒、神经症状,接种PK-15细胞出现典型的细胞病变,病毒效价(TCID50)为10^-7.22/0.1ml。设计扩增PRVgE胞外区基因的引物,能扩增出约947bp的特异性片段,将扩增出的目的片段进行克隆、测序,并与国内外不同PRV毒株进行分析比较,发现该毒株与国内MinA株、Ea株、SH株、LA株、GXB株、GXW株核苷酸同源性在98.7%~99.4%之间,氨基酸同源性在98.1%~99.1%之间,上述结果证实该分离毒株为伪狂犬病病毒,命名为GXBB株。GXBB株与国内流行毒株同源性很高,说明目前广西PRV流行株变异不大。这为下一步广西伪狂犬病的预防和净化工作提供科学的理论基础。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 PK-15细胞 ge胞外区基因 分离鉴定 序列分析
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我国3株登革2型病毒E基因序列测定及毒力基因位点分析 被引量:17
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作者 赵卫 胡志君 +5 位作者 杨敬 杨佩英 秦鄂德 于曼 段鸿元 欧武 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第1期9-12,共4页
目的 测定我国 3株临床症状、乳鼠神经毒力不同的登革 2型病毒流行株E基因序列并找到可能与毒力相关的基因位点。方法 运用RT -PCR法测定我国 3株登革病毒的E基因序列。结果 DEN2 - 0 4、43、44株的核苷酸及氨基酸同源性均在 95 %以... 目的 测定我国 3株临床症状、乳鼠神经毒力不同的登革 2型病毒流行株E基因序列并找到可能与毒力相关的基因位点。方法 运用RT -PCR法测定我国 3株登革病毒的E基因序列。结果 DEN2 - 0 4、43、44株的核苷酸及氨基酸同源性均在 95 %以上 ,DEN2 - 0 4与DEN2 - 43、44共有 4个氨基酸差异引起极性或电荷的变化。结论 E6 4、E2 0 展开更多
关键词 登革病毒 e基因序列 毒力基因
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建国后首次登革热暴发分离的2株登革4型病毒prM和E基因序列测定及其系统发生分析 被引量:5
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作者 刘志文 俞永新 +2 位作者 贾丽丽 董关木 王志伟 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期678-682,686,共6页
目的对建国后1978年广东佛山首次暴发登革热流行时从患者急性期血液中分离到的两株登革4型病毒(78-42、78-56)进行其分子特征研究并了解其可能来源。方法用Vero细胞培养1978年分离自广东佛山登革热病人的78-42、78-56两病毒株,RNA抽提后... 目的对建国后1978年广东佛山首次暴发登革热流行时从患者急性期血液中分离到的两株登革4型病毒(78-42、78-56)进行其分子特征研究并了解其可能来源。方法用Vero细胞培养1978年分离自广东佛山登革热病人的78-42、78-56两病毒株,RNA抽提后RT-PCR法扩增prM、E区基因,克隆至pGEM-TEasy载体后测序;利用DNASTAR软件预测其氨基酸序列并与其他国内外登革4型病毒株序列比较;运用CLUSTALX1.83和MEGA3.1软件绘制系统发生树。结果78-42、78-56两株高度同源,prM、E基因序列和氨基酸序列与其他登革4型病毒同源性很高并证实为登革4型毒株,与印度尼西亚和马来西亚分离株同属基因IIA亚型,核苷酸同源性与印尼ID1973株最高。结论78-42、78-56两新分离病毒株为建国后首次分离到的登革4型毒株,其来源最可能来自印度尼西亚。 展开更多
关键词 登革4型病毒 prM基因 e基因 序列分析 系统发生树
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猪乙型脑炎病毒E基因的克隆与序列分析 被引量:7
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作者 丛晓燕 吴家强 +4 位作者 王怀忠 徐文 张秀美 王金宝 陈溥言 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第9期71-73,共3页
根据GenBank中猪乙型脑炎病毒SA14-14-2基因序列设计2对引物,从分离的猪源乙型脑炎病毒SD-001株的细胞培养物中扩增出包括E基因全长的两段基因,将扩增的目的片段进行克隆与序列分析。结果表明,所克隆的E基因编码结构域(Domain)区段与SA1... 根据GenBank中猪乙型脑炎病毒SA14-14-2基因序列设计2对引物,从分离的猪源乙型脑炎病毒SD-001株的细胞培养物中扩增出包括E基因全长的两段基因,将扩增的目的片段进行克隆与序列分析。结果表明,所克隆的E基因编码结构域(Domain)区段与SA14-14-2、P3、Beijing-1等毒株的核苷酸与氨基酸序列同源性分别达97.2%与96.8%以上,属于Ⅲ型乙型脑炎病毒,与疫苗株SA14-14-2的Domain区相比,共有8个氨基酸位点变异。 展开更多
关键词 猪乙型脑炎病毒 e基因 序列分析
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伪狂犬病病毒BJ/YT株毒力相关基因gE和TK序列分析 被引量:15
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作者 钟承 刘蕾 +5 位作者 张乐天 王巨实 王安琦 陆宝生 杨万莲 吕艳丽 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第11期73-79,共7页
本试验对2012年从北京地区约克夏犬体内分离得到的伪狂犬病病毒(PRV)BJ/YT株主要毒力基因gE和TK的分子特征和进化关系进行了分析。结果显示,BJ/YT株gE基因与参考序列的核苷酸和氨基酸同源性分别为98.9%~100.0%和98.3%~100.0%;TK基... 本试验对2012年从北京地区约克夏犬体内分离得到的伪狂犬病病毒(PRV)BJ/YT株主要毒力基因gE和TK的分子特征和进化关系进行了分析。结果显示,BJ/YT株gE基因与参考序列的核苷酸和氨基酸同源性分别为98.9%~100.0%和98.3%~100.0%;TK基因核苷酸和氨基酸同源性分别为99.2%~99.9%和99.0%~100.0%。BJ/YT株与同期河北猪源分离株进化关系较近,各毒株之间同源性高,并且存在一致的核苷酸突变位点;与其他参考序列比对分析结果显示,BJ/YT株主要毒力基因存在变异位点,但这些位点均不在已知的主要功能区和抗原表位区内。因此,从分子流行病学角度来看,BJ/YT毒株是近年北京及其周边地区PRV流行毒株,但gE和TK基因的变异对流行毒株的毒力无明显影响。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 BJ/YT株 Ge基因 TK基因 序列分析
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伪狂犬病病毒Ea株gD基因的克隆及序列分析 被引量:8
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作者 洪文洲 陈焕春 +3 位作者 方六荣 周锐 何启盖 吴斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期235-243,共9页
本研究从含有伪狂犬病病毒 (Pseudorabiesvirus,PRV)Ea株 gD基因BamHI 6 6Kb片段的重组质粒 pUCB7中分别亚克隆gD基因的上、下游片段 ,并对上游片段进一步改造 ,去掉 gD基因上游的非编码序列 ,构建了含完整 gD基因编码区的重组质粒 pBR... 本研究从含有伪狂犬病病毒 (Pseudorabiesvirus,PRV)Ea株 gD基因BamHI 6 6Kb片段的重组质粒 pUCB7中分别亚克隆gD基因的上、下游片段 ,并对上游片段进一步改造 ,去掉 gD基因上游的非编码序列 ,构建了含完整 gD基因编码区的重组质粒 pBRgDI,并利用基因内部的限制性内切酶位点 ,用内切酶KpnI和SalI酶切分析 ,证实了 gD基因的可靠性和完整性。同时构建了测序质粒 pSKgDSB和 pSKgDS ,并用双脱氧终止法进行测序。将测序结果与国外的Rice毒株进行比较 ,发现Ea株 gD基因核苷酸序列有多处点突变和一处插入突变 ,在编码氨基酸残基水平上也有差异。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 ea株 GD基因 克隆 序列分析 伪狂犬病
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伪狂犬病病毒Ea株UL54基因的克隆与序列分析 被引量:9
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作者 方六荣 陈焕春 +2 位作者 肖少波 徐引娣 何启盖 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期103-106,共4页
根据伪狂犬病病毒国外Ka株UL5 4基因核苷酸序列 ,设计一对包含UL5 4基因完整编码区的引物 ,以伪狂犬病病毒国内地方分离株Ea株细胞感染物为模板 ,PCR扩增出大小约 1.1kb特异性带。将纯化的扩增产物克隆到pBluescriptⅡsk +中 ,酶切分析... 根据伪狂犬病病毒国外Ka株UL5 4基因核苷酸序列 ,设计一对包含UL5 4基因完整编码区的引物 ,以伪狂犬病病毒国内地方分离株Ea株细胞感染物为模板 ,PCR扩增出大小约 1.1kb特异性带。将纯化的扩增产物克隆到pBluescriptⅡsk +中 ,酶切分析证实后经双脱氧末端终止法进行全序列测定 ,序列分析结果表明Ea株UL5 4基因全长 10 86bp ,可编码 36 1个氨基酸。由二级结构预测数据推断C 末端具有典型的锌指结构域。运用Blast软件与Ka株UL5 4基因进行同源比较 ,发现Ea株UL5 4基因在核苷酸和氨基酸水平上均存在多处点突变 ,但无插入或缺失突变 ;将Ea株UL5 4氨基酸序列同其它 4种α 疱疹病毒 (HSV 1、HSV 2、VZV、EHV 1)进行同源比较 ,同源性分别为 47%、36 %、36 %和 44 %。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 ea株 UL54基因 克隆 序列分析
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犬源伪狂犬病毒BJ/RD株的分离鉴定及gE基因分析 被引量:6
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作者 钟承 张乐天 +5 位作者 王巨实 陆梓杰 刘蕾 杨万莲 孙艳争 吕艳丽 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第5期1-6,共6页
本研究对1例具有剧烈搔痒症状,但无明确传播途径的病犬的组织进行伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)特异性PCR检测,从脑干、三叉神经、交感神经和颈段脊髓中扩增出预期大小的DNA片段。将PCR为阳性的脑干组织病料接种Vero细胞,培养72 ... 本研究对1例具有剧烈搔痒症状,但无明确传播途径的病犬的组织进行伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)特异性PCR检测,从脑干、三叉神经、交感神经和颈段脊髓中扩增出预期大小的DNA片段。将PCR为阳性的脑干组织病料接种Vero细胞,培养72 h后细胞发生圆缩、脱落等病变。对出现稳定病变的细胞培养物进行PRV PCR检测获得预期大小的DNA片段,用PRV mAb进行免疫组化染色,部分细胞中出现大量棕褐色阳性颗粒,从而判定感染细胞中存在PRV,将此分离株命名为BJ/RD株。根据GenBank登录的PRV(JF797219)序列设计引物,扩增gE基因,并对扩增产物进行序列测定与分析,结果显示,BJ/RD株与此前分离的犬源毒株BJ/YT及2012年河北猪群分离株HB/HD的gE基因序列完全相同(核酸同源性为100%),与2012年河北地区分离株HB/HS、HB/BD、HB/LF核苷酸同源性99.9%,而与国内外其他猪源PRV分离株gE基因序列有一定差异。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 分离鉴定 班基因 序列分析
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