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大西洋鲑传染性胰腺坏死病病毒VP2蛋白和VP3蛋白重组腺病毒载体的构建及其表达 被引量：1
1
作者 李守湖 秦闯 +1 位作者 李新苍 石建高 《水产科技情报》 2025年第1期26-32,共7页
传染性胰腺坏死病(infectious pancreatic necrosis,IPN)是由传染性胰腺坏死病病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)引起的一种主要危害鲑科鱼类的传染病。为克隆传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)VP2基因和VP3基因,并构建其重组... 传染性胰腺坏死病(infectious pancreatic necrosis,IPN)是由传染性胰腺坏死病病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)引起的一种主要危害鲑科鱼类的传染病。为克隆传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)VP2基因和VP3基因,并构建其重组腺病毒载体,利用PCR方法分别扩增出IPNV VP2基因和VP3基因,通过多基因片段同源重组技术将IPNV VP2基因和VP3基因克隆到pAd-Track-CMV载体,经过线性化后与pAd-easy-1载体在BJ5183菌体内进行同源重组,构建出重组腺病毒质粒;通过PCR及NotⅠ和HindⅢ双酶切鉴定,再经PacⅠ线性化后用于转染293T细胞,获得重组腺病毒;通过绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达监控重组腺病毒的复制情况,用Western-blotting法分别检测IPNV VP2蛋白和VP3蛋白的表达,并测定重组病毒滴度。结果显示,分别克隆出IPNV VP2和VP3基因,基因总长度为2211 bp,构建出目的基因重组腺病毒载体,该病毒在293T细胞中分别表达出蛋白分子质量约为54 kD和26 kD的产物,滴度为1.0×10^(9)个/mL TCID_(50)。结果表明,已成功获得IPNV VP2基因和VP3基因重组腺病毒,该病毒在293T细胞中滴度较高,能够稳定表达。传染性胰腺坏死病病毒VP2蛋白和VP3蛋白重组腺病毒载体的成功构建可为大西洋鲑传染性胰腺坏死病活载体疫苗的研制提供参考。 展开更多
关键词 大西洋鲑 传染性胰腺坏死病 vp2基因 VP3基因 腺病毒载体
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2022—2023年锦州市猫瘟病毒流行规律调查及VP2基因的变异分析 被引量：1
2
作者 陈宇山 程安琪 +2 位作者 许大伟 朱琪 李冰 《现代畜牧兽医》 2025年第4期69-73,共5页
试验旨在深入探究锦州地区猫瘟病毒(FPV)的生物学特征,掌握其遗传变异情况,并提升FPV疫苗的免疫效果。试验收集了2022—2023年间锦州地区40份疑似感染FPV的家养猫粪便样本,通过PCR检测选取7份FPV阳性样品进行VP2蛋白的全长测序,并将其与... 试验旨在深入探究锦州地区猫瘟病毒(FPV)的生物学特征,掌握其遗传变异情况,并提升FPV疫苗的免疫效果。试验收集了2022—2023年间锦州地区40份疑似感染FPV的家养猫粪便样本,通过PCR检测选取7份FPV阳性样品进行VP2蛋白的全长测序,并将其与GeneBank公布的国内外FPV VP2蛋白序列进行比对分析。结果显示,40份锦州地区样品中FPV的检出率为65.00%(26/40),其中免疫猫的检出率为33.33%(1/3),而未免疫猫的检出率则高达67.57%(25/37)。VP2基因序列的比对结果显示,锦州地区分离的7株FPV均属于G1群,其中第87、91、133位点发生突变,这些差异可能是导致免疫失败的原因。研究表明,目前锦州地区FPV检出率偏高,亟需对目前市场主流的商品化疫苗的保护效果进行评估。 展开更多
关键词 猫瘟病毒 vp2基因 流行病学调查
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猫泛白细胞减少症病毒VP2蛋白基因重组杆状病毒的构建及应用
3
作者 郭伟伟 向银辉 +4 位作者 刘大卫 刘岳 孙鹏 崔晓霞 杜元钊 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期91-96,共6页
本研究将猫泛白细胞减少症病毒FPV-SD株VP2基因克隆后,构建重组Bacmid-VP2,转染昆虫细胞Sf9,获得了重组杆状病毒re-BacVP2,并对其进行一系列鉴定。结果显示:其病毒含量可达到107.1 TCID50/mL。SDS-PAGE、Western blot结果证明猫泛白细... 本研究将猫泛白细胞减少症病毒FPV-SD株VP2基因克隆后,构建重组Bacmid-VP2,转染昆虫细胞Sf9,获得了重组杆状病毒re-BacVP2,并对其进行一系列鉴定。结果显示:其病毒含量可达到107.1 TCID50/mL。SDS-PAGE、Western blot结果证明猫泛白细胞减少症病毒VP2基因在杆状病毒表达系统中成功表达,并与抗FPV的多克隆抗体发生特异性反应。该蛋白能凝集1%猪红细胞,凝集价达1∶16384。电镜观察可见表达的VP2蛋白能形成病毒样颗粒(VLPs),为20~22 nm。VP2蛋白制备的疫苗能产生较高的抗体滴度。VP2基因的成功表达为FPV疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 猫泛白细胞减少症病毒 vp2基因 重组杆状病毒 鉴定
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辽宁省沈阳市猫细小病毒VP2基因克隆与遗传进化分析
4
作者 李晔 《中国动物检疫》 2025年第1期116-120,共5页
为了解沈阳市猫细小病毒(FPV)的遗传进化情况,探究FPV免疫失败的原因,收集2022年该地区FPV感染猫肛拭子,采用PCR扩增FPV VP2基因,对VP2基因测序并进行同源性比对、主要编码氨基酸位点分析与遗传进化树绘制。结果显示;获得了7个FPV VP2... 为了解沈阳市猫细小病毒(FPV)的遗传进化情况,探究FPV免疫失败的原因,收集2022年该地区FPV感染猫肛拭子,采用PCR扩增FPV VP2基因,对VP2基因测序并进行同源性比对、主要编码氨基酸位点分析与遗传进化树绘制。结果显示;获得了7个FPV VP2基因片段,全长均为1755 bp,与50株参考毒株VP2基因同源性为98.8%~99.9%;与标准株和疫苗株相比,6个获得基因编码的VP2蛋白第91位点发生了改变,其中2个获得基因编码的VP2蛋白第295位点发生了改变;遗传进化树显示,FPV VP2基因分为3个基因群,7个获得基因中有6个位于G1群、1个位于G3群,与国内近年来流行毒株亲缘关系近,但与疫苗株和标准株均不在同一个基因群(G2群)。结果说明;沈阳市流行的FPV逐渐进化形成了不同于疫苗株和标准株的基因群,因此有必要加强FPV感染的流行病学监测,研发针对性更强的疫苗。 展开更多
关键词 猫细小病毒(FPV) vp2基因 同源性 氨基酸位点 遗传进化
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犬细小病毒临床病例中VP2基因序列分析
5
作者 王艳红 赵勇 +1 位作者 付朋飞 洪军 《特产研究》 2025年第2期84-88,共5页
为了解犬细小病毒临床分离株VP2基因的遗传进化规律。本研究采集1例疑患细小病毒病的犬粪便样品,通过提取样品中的病毒基因组,采用PCR扩增及测序,将序列与不同种的细小病毒VP2基因序列进行核苷酸和氨基酸比对,并进行遗传进化分析。结果... 为了解犬细小病毒临床分离株VP2基因的遗传进化规律。本研究采集1例疑患细小病毒病的犬粪便样品,通过提取样品中的病毒基因组,采用PCR扩增及测序,将序列与不同种的细小病毒VP2基因序列进行核苷酸和氨基酸比对,并进行遗传进化分析。结果显示,该粪便样品CPV/LS-01中扩增出的VP2核苷酸序列为CPV-2c型,与参考毒株MF467242(CPV-2c)的核苷酸同源性最高为99.9%,与M38245(CPV-2)同源性较低(98.8%),与其它参考毒株的同源性为99.0%~99.7%。对VP2蛋白中氨基酸变异情况分析显示,CPV/LS-01样品中的VP2蛋白的I447M位氨基酸位点出现了CPV-2c型细小病毒的独特突变。本研究中所鉴定的犬腹泻粪便中的细小病毒属于CPV-2c型,与目前河南分离毒株(ON322797)VP2中具有相同的突变位点(A5G和I447M),该研究为犬细小病毒流行趋势的研究提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 犬细小病毒 鉴定 vp2基因 序列分析
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犬细小病毒VP2基因的比较及分型研究 被引量：25
6
作者 邱薇 范泉水 +6 位作者 李作生 杨美峰 郑颖 尹惠琼 王双印 李江 夏咸柱 《动物医学进展》 CSCD 2005年第5期69-72,共4页
为查明我国CPV的流行变异情况及为进一步的免疫研究奠定基础,对我国不同地区分离到的9株细小病毒毒株进行了VP2基因的扩增和序列分析,并与CPV的参考毒株进行了比较分型, 9 株CPV 中有6 株属CPV 2a,3株属CPV 2b,但未分离到CPV 2c变异株,... 为查明我国CPV的流行变异情况及为进一步的免疫研究奠定基础,对我国不同地区分离到的9株细小病毒毒株进行了VP2基因的扩增和序列分析,并与CPV的参考毒株进行了比较分型, 9 株CPV 中有6 株属CPV 2a,3株属CPV 2b,但未分离到CPV 2c变异株,结果表明我国目前仍以CPV 2a流行为主。 展开更多
关键词 vp2基因 犬细小病毒 分型 CPV 免疫研究 序列分析 病毒毒株 参考毒株 变异株 流行 分离
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不同时期8株IBDV地方株VP2基因变异分析 被引量：5
7
作者 张春杰 赵德明 +3 位作者 程相朝 李银聚 吴庭才 白东英 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期428-433,共6页
对分离于洛阳地区1991和2001年前后间隔达10年之久的两个时期的8株IBDV进行了VP2基因的克隆与序列分析。结果发现,8个地方株虽均属于IBDV超强毒株,但各个毒株间也有一定的差异。根据它们的核苷酸和氨基酸同源性高低可明显分为3群,分别... 对分离于洛阳地区1991和2001年前后间隔达10年之久的两个时期的8株IBDV进行了VP2基因的克隆与序列分析。结果发现,8个地方株虽均属于IBDV超强毒株,但各个毒株间也有一定的差异。根据它们的核苷酸和氨基酸同源性高低可明显分为3群,分别位于系统进化树上超强毒区的3个小分支上。第1群包括1991年分离的L912、L914和L916三株;第2群包括L913、L017和L018三株;第3群包括2001年分离的L015和L016二株。群内各毒株间同源性较高,在98.3%～100%之间;群间各毒株的同源性则相对较低,在95%～97.9%之间,其中最低的为L015和L017、L016和L018二对,同源性均只有95%。进一步的序列分析表明,8个地方分离株均具有vvIBDV所具有的特征。其中,1991年的4株在各亲水区和七肽区的氨基酸和经典株及传统的超强毒株相比均无明显的变化;而2001年的4个分离株虽仍符合超强毒株的特点,但在相应亲水区均有1～2个氨基酸发生替换,特别是L015和L016株还出现了4个其它各毒株均没有的氨基酸位点变化。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 地方株 vp2基因 基因变异 传染性法氏囊病 禽类
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贵阳地区犬细小病毒VP2基因的克隆及遗传进化分析 被引量：12
8
作者 陈强 嵇辛勤 +5 位作者 段志强 阮涌 雷云 龙丹丹 胡焱 万彪 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第4期1061-1068,共8页
为研究贵阳地区犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)的流行基因型及其遗传进化情况,本试验对从贵阳市分离的10株CPV的VP2基因进行PCR扩增和克隆并进行序列分析。结果显示,分离的病毒能使F81猫肾细胞产生明显的细胞病变(CPE),分离的10株... 为研究贵阳地区犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)的流行基因型及其遗传进化情况,本试验对从贵阳市分离的10株CPV的VP2基因进行PCR扩增和克隆并进行序列分析。结果显示,分离的病毒能使F81猫肾细胞产生明显的细胞病变(CPE),分离的10株病毒中,7株为CPV-2a亚型,3株为CPV-2c亚型,命名为GY-1~GY-10。10株CPV分离株与疫苗株VP2基因的同源性98.4%~99.4%,与其他国内外参考株的同源性为97.7%~99.9%。本试验首次报道贵阳市CPV的流行基因型为CPV-2a亚型并伴随CPV-2c亚型存在,对监测CPV遗传变异趋势及疫苗的研制具有重要意义。 展开更多
关键词 犬细小病毒 基因型 vp2基因 遗传进化
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猪博卡病毒VP2基因的克隆与原核表达 被引量：8
9
作者 李彬 杜露平 +11 位作者 何孔旺 温立斌 茅爱华 张雪寒 倪艳秀 郭容利 王小敏 周俊明 吕立新 俞正玉 胡屹屹 于洋 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第4期796-799,共4页
为研究猪博卡病毒VP2蛋白的功能及其在疫病诊断中的作用,对其基因进行了克隆和原核表达。根据猪博卡病毒基因组序列(GenBank登录号GU902967-GU902971)设计了1对引物,采用PCR方法扩增猪博卡病毒的VP2基因,并将其克隆到表达载体pET32a(+)... 为研究猪博卡病毒VP2蛋白的功能及其在疫病诊断中的作用,对其基因进行了克隆和原核表达。根据猪博卡病毒基因组序列(GenBank登录号GU902967-GU902971)设计了1对引物,采用PCR方法扩增猪博卡病毒的VP2基因,并将其克隆到表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒pET32a-VP2,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子量为49 000的融合蛋白,蛋白质表达量较高,且以可溶性形式存在于菌体中。表达产物经纯化后,目的蛋白纯度较好。Western blot结果显示,表达的VP2蛋白能与His抗体发生特异性免疫反应。说明该试验成功克隆了猪博卡病毒的VP2基因并进行了原核表达,为研究该蛋白的功能及建立血清学诊断方法奠定了基础。 展开更多
关键词 猪博卡病毒 vp2 基因 克隆 原核表达
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鸡传染性法氏囊病病毒vp2基因在杆状病毒表达系统中的表达及免疫原性研究 被引量：8
10
作者 高玉龙 高宏雷 +4 位作者 王晓艳 李俊山 邓小芸 刘伟 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期427-431,共5页
将鸡传染性法氏囊病病毒超强毒Gx株vp2基因克隆到载体pFastBac HTA中,构建重组转座载体pFVP2,然后将其转化DH10Bac感受态大肠杆菌,将vp2基因整合到Bacmid穿梭载体中,获得重组穿梭载体BacmidVP2;通过脂质体转染将其转染Sf9昆虫细胞,获得... 将鸡传染性法氏囊病病毒超强毒Gx株vp2基因克隆到载体pFastBac HTA中,构建重组转座载体pFVP2,然后将其转化DH10Bac感受态大肠杆菌,将vp2基因整合到Bacmid穿梭载体中,获得重组穿梭载体BacmidVP2;通过脂质体转染将其转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBacVP2。用Western blot和间接免疫荧光试验分析表明IBDV VP2蛋白在Sf9昆虫细胞获得正确表达,所表达的重组VP2蛋白分子量约50 Ku。以rBacVP2感染Sf9细胞裂解物免疫3周龄SPF鸡,在免疫后7 d可检测到ELISA抗体;免疫后14 d可检测到琼脂免疫扩散抗体。攻毒试验表明,初次免疫后14 d对IBDV超强毒株的攻击保护率为75%,2次免疫后14 d对其的攻击保护率为100%。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 vp2基因 杆状病毒 免疫原性
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虎源细小病毒的分离鉴定及其VP2基因分析 被引量：7
11
作者 刘永相 李秀云 +6 位作者 刘鑫 蒋艳妹 郭冬春 田进 仇铮 邹希明 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期721-724,共4页
为研究虎源细小病毒的分子遗传特征,本研究从东北虎腹泻粪便样品中分离到一株虎源细小病毒(HRB-T2014)。对该分离株的VP2基因进行克隆测序分析,结果表明,HRB-T2014与虎源细小病毒FJ405225和HT-374的相似性最高,达到99.9%,而与犬源细小... 为研究虎源细小病毒的分子遗传特征,本研究从东北虎腹泻粪便样品中分离到一株虎源细小病毒(HRB-T2014)。对该分离株的VP2基因进行克隆测序分析,结果表明,HRB-T2014与虎源细小病毒FJ405225和HT-374的相似性最高,达到99.9%,而与犬源细小病毒相似性最低,仅为98.1%。VP2基因核苷酸序列系统发育树分析结果显示,HRB-T2014与虎源中国分离株位于同一进化分支,并与猫和貂细小病毒共处于猫细小病毒分支,而与犬细小病毒处于不同的进化分支。以上结果表明,HRB-T2014与猫源细小病毒具有共同的遗传起源。 展开更多
关键词 虎 细小病毒 分离鉴定 vp2基因 序列分析
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口蹄疫病毒VP2基因的原核表达及抗原性检测 被引量：6
12
作者 曲哲会 王君伟 +2 位作者 郭晓秋 李刚 李洪涛 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期91-95,共5页
将口蹄疫病毒VP2基因连接到原核表达载体pPROEXTM HTb上,获得重组质粒pPR-VP2。将此质粒转化感受态菌DH5α中,经终浓度为1.0mmol/L的IPTG诱导,1h～6h依次收集菌液,SDS-PAGE电泳分析,在4h后表达量可达到高峰。经过软件分析,表达产物占总... 将口蹄疫病毒VP2基因连接到原核表达载体pPROEXTM HTb上,获得重组质粒pPR-VP2。将此质粒转化感受态菌DH5α中,经终浓度为1.0mmol/L的IPTG诱导,1h～6h依次收集菌液,SDS-PAGE电泳分析,在4h后表达量可达到高峰。经过软件分析,表达产物占总菌体蛋白的23.1%,大小为33Ku左右。根据Ni-NTA纯化系统说明操作,获得较纯的VP2融合蛋白。以牛抗O型口蹄疫病毒血清为第一抗体,通过Western blot和Dot ELISA鉴定,纯化后的VP2融合蛋白可以与牛抗O型口蹄疫病毒血清发生特异性反应。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 vp2基因 原核表达 纯化 抗原性
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猪细小病毒SC-1株VP2基因的克隆及生物信息学分析 被引量：12
13
作者 罗燕 郭万柱 +1 位作者 刘艳丽 殷华平 《动物医学进展》 CSCD 2005年第8期87-91,共5页
根据PPV NADL-2株基因组序列设计了一对引物,以复制型DNA为模板,通过PCR 扩增出长约2.0 kb的DNA片段,将其插入克隆载体质粒pUC19,构建重组质粒pPVP2,测序显示PPV-SC-1 VP2基因全长1 740 bp,共编码579个氨基酸.多序列比对结果显示,猪细... 根据PPV NADL-2株基因组序列设计了一对引物,以复制型DNA为模板,通过PCR 扩增出长约2.0 kb的DNA片段,将其插入克隆载体质粒pUC19,构建重组质粒pPVP2,测序显示PPV-SC-1 VP2基因全长1 740 bp,共编码579个氨基酸.多序列比对结果显示,猪细小病毒VP2基因保守性强,仅存在个别的差异;密码子偏向性分析结果表明,PPV-SC-1 VP2基因在同一氨基酸的不同密码子的选择上存在一定的偏向性,并且与PPV-SC-1 NS1在密码子的偏向性上具有相同的属性,主要偏向于使用以A结尾的密码子;氨基酸疏水性分析表明,PPV-SC-1 VP2蛋白在77～82、291～304、362～373、400～411、465～477等位点存在较明显的亲水区段;跨膜区结构分析显示该蛋白不存在显著意义的跨膜区;分析该蛋白的抗原位点可能位于60～68、81～88、266～275、351～357、398～404位点处. 展开更多
关键词 猪细小病毒 猪细小病毒SC1 vp2基因 克隆 生物信息学
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猪细小病毒SY-99株VP2基因的序列分析 被引量：10
14
作者 李昌文 仇华吉 +5 位作者 吴丹 刘红全 薛强 智海东 钱平 童光志 《动物医学进展》 CSCD 2001年第1期44-46,71,共4页
克隆并测定猪细小病毒 SY- 99株VP2基因 ,与 NADL- 2 ( 4 973)株、NADL- 2( 5 0 75 )株、Kresse株和 US- 1株 VP2基因核苷酸序列及其编码的氨基酸序列进行比较与分析 ,发现 PPV SY- 99株与 Kresse株 VP2基因核苷酸和氨基酸同一性最高 ,... 克隆并测定猪细小病毒 SY- 99株VP2基因 ,与 NADL- 2 ( 4 973)株、NADL- 2( 5 0 75 )株、Kresse株和 US- 1株 VP2基因核苷酸序列及其编码的氨基酸序列进行比较与分析 ,发现 PPV SY- 99株与 Kresse株 VP2基因核苷酸和氨基酸同一性最高 ,推测 SY-99株可能为一强毒株。 展开更多
关键词 猪细小病毒 vp2基因 序列分析
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鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因突变对病毒体外复制的影响 被引量：5
15
作者 祁小乐 高立 +10 位作者 吴关 邓小芸 余飞 张礼洲 秦立廷 高玉龙 王永强 高宏雷 刘娣 华育平 王笑梅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1577-1583,共7页
为了进一步了解影响鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制效率和致病力的分子基础,作者在序列分析的基础上,利用反向遗传操作技术,针对VP2上2个重要的氨基酸位点(222和279),修饰和拯救了相应的2株突变病毒,并研究了突变病毒在体内外的生物学... 为了进一步了解影响鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制效率和致病力的分子基础,作者在序列分析的基础上,利用反向遗传操作技术,针对VP2上2个重要的氨基酸位点(222和279),修饰和拯救了相应的2株突变病毒,并研究了突变病毒在体内外的生物学特性。复制动力学数据显示,VP2的222位由酪氨酸突变为脯氨酸可将IBDV在鸡胚成纤维细胞(CEF)上的复制滴度提高6倍以上,而279位氨基酸对病毒复制效率无显著影响。SPF鸡的感染试验显示,222位和279位氨基酸与IBDV的致病力没有关系。本研究首次报道了VP2 222位和279位氨基酸与IBDV复制效率和致病力的关系,有助于更加全面地了解IBDV的基因功能,也将为新型IBDV疫苗的设计提供依据和思路。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 vp2基因 复制 致病力 反向遗传
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犬细小病毒VP2基因测序分析 被引量：6
16
作者 李世静 嵇辛勤 +3 位作者 主性 阮涌 傅心亮 王修江 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第6期96-100,共5页
为了解贵阳市犬细小病毒(CPV)VP2基因的遗传变异情况,从贵阳市黔灵动物医院采集经试剂盒检测为阳性的患犬粪便13份,对粪样进行病毒DNA的提取,并以此DNA为模板,进行PCR扩增,随机选取3株PCR阳性产物对其VP2基因进行序列测定与遗传变异分... 为了解贵阳市犬细小病毒(CPV)VP2基因的遗传变异情况,从贵阳市黔灵动物医院采集经试剂盒检测为阳性的患犬粪便13份,对粪样进行病毒DNA的提取,并以此DNA为模板,进行PCR扩增,随机选取3株PCR阳性产物对其VP2基因进行序列测定与遗传变异分析。结果显示,抗原快速检测试剂盒与PCR检测结果符合率达76.9%;3个试验毒株之间VP2基因同源性达96.5%～97.3%,与参考毒株同源性为95.2%～96.8%;由遗传进化树可见,与国内分离毒株的亲缘性略高于国外分离株。结果表明,CPV抗原快速检测试剂盒与PCR法符合率较高,3个试验毒株与国内外流行毒株之间差异性不大。 展开更多
关键词 犬细小病毒病 vp2基因 聚合酶链反应 序列分析
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家蚕表达传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的免疫原性初步研究(英文) 被引量：11
17
作者 于涟 宋坤华 +2 位作者 张耀洲 黄耀伟 李建荣 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CSCD 北大核心 2000年第1期9-16,共8页
在家蚕培养细胞及幼蚕中表达传染性法氏囊病病毒 ( IBDV)主要宿主保护性抗原 VP2蛋白的基础上 ,初步研究了该表达产物的免疫原性 .Western免疫印迹和 ELISA均检测到春蚕和秋蚕中的 VP2蛋白活性 .含 VP2的春蚕蚕血制成的注射疫苗皮下注射... 在家蚕培养细胞及幼蚕中表达传染性法氏囊病病毒 ( IBDV)主要宿主保护性抗原 VP2蛋白的基础上 ,初步研究了该表达产物的免疫原性 .Western免疫印迹和 ELISA均检测到春蚕和秋蚕中的 VP2蛋白活性 .含 VP2的春蚕蚕血制成的注射疫苗皮下注射 18日龄非免疫鸡 ,两周后二免 ;含 VP2的秋蚕蚕血冻干制成口服疫苗 ,隔天喂服 18日龄非免疫鸡 .于首免后第 10 ,13,2 1,2 8,37日分别采血 ,第 37日攻毒 .病毒血清中和试验显示注射组及口服组的中和抗体滴度最高可达 1∶ 42 11.3和 1∶ 3118.9,攻毒结果显示它们对 IBDV中国标准强毒株 BC6/85的攻击保护率为 10 0 %和 80 %.以上研究表明家蚕表达的 VP2蛋白具有良好的免疫原性 ,从而为开发实用化低成本的疫苗打下了扎实基础 . 展开更多
关键词 家蚕 IBDV vp2基因 重组疫苗 免疫原性 表达系统
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水貂阿留申病毒VP2基因主要抗原表位区的原核表达 被引量：8
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作者 梁冬莹 华育平 曾祥伟 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期39-41,共3页
根据GenBank中已发表的水貂阿留申病毒(ADV)VP2基因核苷酸序列分别设计合成两对引物,用PCR方法扩增ADV国内分离株VP2基因中主要抗原表位区的两个片段,分别将其克隆到原核表达载体pMAL-c2的多克隆位点中。经酶切、PCR扩增和测序分析证实... 根据GenBank中已发表的水貂阿留申病毒(ADV)VP2基因核苷酸序列分别设计合成两对引物,用PCR方法扩增ADV国内分离株VP2基因中主要抗原表位区的两个片段,分别将其克隆到原核表达载体pMAL-c2的多克隆位点中。经酶切、PCR扩增和测序分析证实其已正确插入到表达载体中,且阅读框是正确的,构建原核表达载体pMAL-VPa和pMAL-VPb。阳性重组质粒转化宿主菌TB1,用IPTG进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE检测和免疫印迹分析。结果表明两段蛋白均获得了表达,表达产物的分子质量分别约为63、65kD,与理论推测的分子质量一致;并在终浓度为1mmol/L的IPTG诱导下,4h时其表达量达到高峰;Western blot分析表明表达蛋白能被兔抗MBP抗体所识别,具有一定的抗原性。 展开更多
关键词 水貂阿留申病毒 vp2基因 抗原表位 原核表达
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犬细小病毒NY株VP2蛋白多克隆抗体的制备与鉴定 被引量：5
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作者 毛倩倩 周灵 +7 位作者 唐青海 卜宾 唐存多 焦铸锦 姚伦广 阚云超 杨建伟 崔尚金 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第7期1659-1666,共8页
试验旨在制备犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)VP2蛋白多克隆抗体。构建pET28a-CPV-VP2重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达,纯化目的蛋白与佐剂混合、乳化制备后作为免疫原,免疫家... 试验旨在制备犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)VP2蛋白多克隆抗体。构建pET28a-CPV-VP2重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达,纯化目的蛋白与佐剂混合、乳化制备后作为免疫原,免疫家兔制备VP2蛋白多克隆抗体;采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)检测抗体的免疫活性、抗体滴度、病毒滴度及中和活性。结果表明,重组VP2蛋白(rVP2)以包涵体形式存在,分子质量约为72ku;所制备的多克隆抗体滴度为1 600倍,病毒滴度为107 TCID50/mL,中和效价为1∶2 884,该抗体与体外培养的CPV呈特异性反应,CPV VP2蛋白的多克隆抗体免疫活性和特异性良好,且中和活性高,为CPV基因工程疫苗的研究和临床治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 犬细小病毒 vp2基因 多克隆抗体 免疫活性
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成都地区犬细小病毒VP2基因克隆分析及基因型鉴定 被引量：5
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作者 杨晓农 张焕容 +9 位作者 杨发龙 于学辉 龙虎 刘群 陈世界 严玉宝 余华 王成东 项振义 王斌 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第9期105-110,共6页
根据GenBank中犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)VP2基因序列设计合成两对特异性引物1F/1R和2F/2R,从疑似CPV感染病犬的粪便病料中提取DNA作为模板,分段扩增涵盖VP2基因的两个片段,大小分别为1325和758bp,并进行克隆、测序,通过拼接得... 根据GenBank中犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)VP2基因序列设计合成两对特异性引物1F/1R和2F/2R,从疑似CPV感染病犬的粪便病料中提取DNA作为模板,分段扩增涵盖VP2基因的两个片段,大小分别为1325和758bp,并进行克隆、测序,通过拼接得到11条长度为1755bp的VP2基因完整序列。核苷酸同源性分析表明,扩增得到的11个完整VP2基因序列与GenBank中发布的21株国内外参考毒株比较,核苷酸同源性为96.2%～99.8%。采用DNAStar软件分析,预测VP2蛋白可能成为B细胞表位的区段位于Met1-Val38、Met73-Val82、Met96-Ala103、Lys151-Thr170、Gly235-Phe243、Leu294-Phe303、Ala359-Thr399、Ile469-His483、Ala503-Arg520、Lys570-Tyr584。将扩增获得的VP2基因编码的氨基酸序列与CPV参考毒株进行比较,第426位和第555位氨基酸残基分别为Asp和Val,鉴定出本试验得到的CPV基因型均为2a型,初步证实成都地区仍以CPV-2a为主要流行毒株。 展开更多
关键词 犬细小病毒(CPV) vp2基因 克隆 基因型
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