传染性法氏囊病超强毒Gx株VP5基因在病毒致弱过程中的变异研究 被引量：8

1

作者 张厚双 王笑梅 +3 位作者 高宏雷 付朝阳 曾祥伟 鞠玉琳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期25-28,共4页

利用SPF鸡胚对鸡传染性法氏囊病超强毒 (vvIBDV)Gx株进行培育 ,通过鸡胚成纤维细胞对病毒进行传代致弱 ,对其非结构蛋白VP5基因核苷酸及推导的氨基酸序列进行分析 ,从而揭示vvIBDVGx从超强毒力向弱毒力转化过程中基因的序列变化规律。... 利用SPF鸡胚对鸡传染性法氏囊病超强毒 (vvIBDV)Gx株进行培育 ,通过鸡胚成纤维细胞对病毒进行传代致弱 ,对其非结构蛋白VP5基因核苷酸及推导的氨基酸序列进行分析 ,从而揭示vvIBDVGx从超强毒力向弱毒力转化过程中基因的序列变化规律。对不同代次细胞毒序列分析的结果表明 ,细胞毒在第 8代以前 ,VP5基因序列没有改变 ,与欧洲标准超强毒氨基酸同源性达 98%以上 ;细胞毒第 9代核苷酸和氨基酸序列发生了改变 ;10代毒VP5基因与欧洲标准弱毒Cu_1氨基酸序列同源性达 99% ;细胞适应毒传至 2 0代 ,其VP5基因序列不再改变。从而说明 。 展开更多

关键词 鸡传染性法氏囊病超强毒vp5基因 致弱 变异

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IBDV流行强毒HQ-b株与其细胞适应毒生物学特性比较及VP2、VP5基因序列分析 被引量：2

2

作者 杨霞 周欣 +3 位作者 赵军 姚惠霞 王川庆 王泽霖 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期928-936,共9页

为了解IBDV流行强毒HQ-b株囊毒与其细胞适应毒间生物学特性差异及2毒株毒力变化与VP2、VP5基因变异的关系,对2毒株的细胞适应性、致病性等进行比较,同时对其VP2、VP5基因序列进行分析。结果表明,HQ-b株囊毒对CEF、CEK、CELi、DF-1和Ver... 为了解IBDV流行强毒HQ-b株囊毒与其细胞适应毒间生物学特性差异及2毒株毒力变化与VP2、VP5基因变异的关系,对2毒株的细胞适应性、致病性等进行比较,同时对其VP2、VP5基因序列进行分析。结果表明,HQ-b株囊毒对CEF、CEK、CELi、DF-1和Vero均不适应,而细胞适应毒HQ株仅不能适应Vero细胞、且批内及批间毒价稳定。致病性结果显示HQ-b株对4周龄SPF鸡致死率高达80%,是真正的超强毒,而细胞适应毒致死率已降为0%。对VP2基因高变区研究表明,HQ-b株具备IBDV超强毒株的分子特征,即222A、256I、294I和299S;其细胞适应毒HQ株除222A→P、256I→V、294I→L和299S→N外,在VP2公认的毒力位点253(Q→H)、279(D→N)、284(A→T)位氨基酸也发生改变,导致细胞适应毒具备经典弱毒株的分子特征,即222P、256V、279N、284T、294L和299N。对VP5基因研究表明:流行强毒HQ-b株也具有IBDV超强毒株的分子特征;其细胞适应毒VP5基因有12个位点碱基突变并导致9处氨基酸变异,尤其是ORF区第2个碱基由"T"突变为"C"后,导致细胞适应毒VP5的N端丢失了4个氨基酸,这种突变与现有的疫苗毒完全一致。本研究提供了超强毒HQ-b培育、驯化后致病性和细胞适应性转变的分子机理,也丰富了IBDV分子流行病学的理论。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒(IBDV) 培养特性 致病性 vp2基因高变区 vp5

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蓝舌病病毒3型VP5蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定 被引量：4

3

作者 孙晶 孙恩成 +4 位作者 刘二战 孙亮 徐青元 杨涛 吴东来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期387-390,共4页

为制备血清3型蓝舌病病毒(BTV)VP5蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用pMAL-C4x原核表达系统表达、纯化的重组VP5蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,并以Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达、纯化... 为制备血清3型蓝舌病病毒(BTV)VP5蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用pMAL-C4x原核表达系统表达、纯化的重组VP5蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,并以Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达、纯化的重组VP5蛋白为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗BTV3 VP5蛋白的MAb杂交瘤细胞株(3F2)。间接免疫荧光结果表明:MAb 3F2与BTV3、BTV5、BTV9、BTV16呈阳性反应;与BTV6、BTV7、BTV13、BTV21呈弱阳性反应;与其它BTV血清型均呈阴性反应。利用原核表达的麦芽糖结合蛋白(MBP)融合短肽对MAb 3F2识别的抗原表位进行鉴定,结果表明:该MAb识别的抗原表位为89PGERGIQMKIKEIEEE104。氨基酸序列比对结果显示该表位在不同地域来源的BTV3株间比较保守。该MAb的制备和鉴定为进一步研究VP5蛋白的结构和功能奠定了基础。 展开更多

关键词 蓝舌病病毒3型 vp5蛋白 单克隆抗体 抗原表位

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IBDV血清Ⅱ型VP5蛋白原核表达及型特异性单克隆抗体的制备 被引量：3

4

作者 秦立廷 祁小乐 +2 位作者 高宏雷 高玉龙 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期292-296,共5页

本实验构建表达了传染性法氏囊病病毒(IBDV)血清Ⅱ型23/82株VP5蛋白,并制备出能够区分不同血清型IBDV的单克隆抗体(mAb)。利用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切pUC57-23/82VP5质粒,获得23/82株IBDVVP5基因片段,连接到同样处理的原核表达质粒pET-28a... 本实验构建表达了传染性法氏囊病病毒(IBDV)血清Ⅱ型23/82株VP5蛋白,并制备出能够区分不同血清型IBDV的单克隆抗体(mAb)。利用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切pUC57-23/82VP5质粒,获得23/82株IBDVVP5基因片段,连接到同样处理的原核表达质粒pET-28a,经酶切鉴定获得重组质粒pET-23/82VP5,转化到宿主菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达融合蛋白,SDS-PAGE分析表明该融合蛋白分子量大小约为23ku。Ni-NTA柱纯化重组蛋白,复性后免疫8周龄BALB/c小鼠,3次免疫后,常规方法进行细胞融合,获得1株阳性杂交瘤细胞株(5D3),IFA和westernblot分析表明该细胞株分泌的mAb仅与血清Ⅱ型IBDV23/82株VP5反应,不与血清Ⅰ型IBDVGt株VP5反应。腹水抗体间接ELISA效价为1×104。该mAb的制备为研究血清Ⅱ型IBDV的VP5的功能和标记疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒 vp5 原核表达 单克隆抗体

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传染性法氏囊病病毒VP5基因的克隆及表达 被引量：4

5

作者 马静云 曹永长 毕英佐 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期405-407,共3页

利用PCR技术扩增编码IBDVVP5基因的DNA片段 ,进而构建了T7启动子控制下的N端His_Tag融合表达质粒pRSESTA_VP5 ,通过测序证明序列正确后 ,转化进大肠杆菌BL2 1(DE3) ,用IPTG进行诱导表达 ,SDS_PAGE分析结果表明 ,融合蛋白 (约 2 8kDa)在B... 利用PCR技术扩增编码IBDVVP5基因的DNA片段 ,进而构建了T7启动子控制下的N端His_Tag融合表达质粒pRSESTA_VP5 ,通过测序证明序列正确后 ,转化进大肠杆菌BL2 1(DE3) ,用IPTG进行诱导表达 ,SDS_PAGE分析结果表明 ,融合蛋白 (约 2 8kDa)在BL2 1中得到高效表达 ,表达产物约占菌体蛋白的 35 %。主要以包涵体形式存在 ,通过金属离子 (Ni2 +)螯合亲和层析纯化 ,得到纯度在 90 %以上的电泳纯表达产物VP5。这些结果为进一步研究IBDVVP5的结构与功能、其在IBD中的作用机理奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒 vp5基因 基因克隆 基因表达 传染性法兰氏囊病 PCR

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鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株HLJ-0504 VP5基因缺失株感染性克隆的构建及鉴定 被引量：4

6

作者 高立 祁小乐 +5 位作者 秦立廷 高宏雷 高玉龙 李凯 王永强 王笑梅 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第2期1-7,共7页

利用体外定点突变技术,缺失vvIBDV HLJ-0504株VP5基因,通过多重PCR在基因组两端分别引入锤头状核酶序列(HamRz)和丁肝病毒核酶序列(HdvRz)。将带有核酶序列的IBDV基因组插入载体pCAGGs的β肌动蛋白启动子下游,构建了IBDV感染性克隆pCAGG... 利用体外定点突变技术,缺失vvIBDV HLJ-0504株VP5基因,通过多重PCR在基因组两端分别引入锤头状核酶序列(HamRz)和丁肝病毒核酶序列(HdvRz)。将带有核酶序列的IBDV基因组插入载体pCAGGs的β肌动蛋白启动子下游,构建了IBDV感染性克隆pCAGGHLJ0504A△ VP5HRT,将该感染性克隆与pCAGGHLJ0504BHRT共转染DF-I细胞。IFA,RT-PCR,电镜观察均显示获得重组病毒,将其命名为rHLJ0504HT△VP5。vvIBDV VP5基因缺失感染性克隆的成功构建为我们利用反向遗传操作技术快速致弱vvIBDV,构建IBD的候选疫苗株奠定了基础。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒超强毒株 vp5 感染性克隆 重组病毒

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鸡传染性法氏囊病病毒VP5缺失标记疫苗的生物学特性研究 被引量：2

7

作者 高立 李凯 +5 位作者 祁小乐 高玉龙 高宏雷 王永强 孔宪刚 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期659-662,共4页

为评价鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP5缺失病毒株rHLJ0504HT△VP5的生物学特性,本研究首先对该缺失病毒与其亲本病毒rHLJ0504HT(vvIBDV HLJ0504 253/284双位点突变细胞适应病毒)进行了体外复制动力学比较研究。结果表明,VP5缺失病毒复... 为评价鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP5缺失病毒株rHLJ0504HT△VP5的生物学特性,本研究首先对该缺失病毒与其亲本病毒rHLJ0504HT(vvIBDV HLJ0504 253/284双位点突变细胞适应病毒)进行了体外复制动力学比较研究。结果表明,VP5缺失病毒复制滴度明显低于亲本病毒(p<0.05)。动物实验结果表明,该缺失病毒可以诱导机体产生良好的免疫应答反应,免疫后10 d,其抗体水平与亲本病毒相当;并能够抵抗同源或异源超强毒的攻击,为免疫鸡提供100%保护。此外,该缺失病毒对免疫鸡无明显的致病性;VP5缺失病毒免疫组与未免疫组禽流感血凝抑制效价相当,不存在明显差异(p>0.05),表明该病毒对免疫鸡无免疫抑制作用,不影响其它疫苗的免疫效果。而且,VP5的缺失可以作为鉴定该缺失病毒的生物学标记。以上结果表明,rHLJ0504HT△VP5是一株安全有效的IBDV标记候选疫苗株。 展开更多

关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 vp5缺失 标记疫苗

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鸭肠炎病毒VP5蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：2

8

作者 李慧昕 刘胜旺 +5 位作者 韩宗玺 邵昱昊 刘晓丽 华育平 刘娣 孔宪刚 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第1期9-12,共4页

应用截短表达的鸭肠炎病毒(DEV)VP5-C蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合及筛选,获得4株稳定分泌抗VP5蛋白的杂交瘤细胞株,命名为1B5、3A1、4F9、6F6。抗体亚类鉴定表明,4株单克隆抗体均为IgG、k链。间接免疫荧光检测结果表明,4株单克隆... 应用截短表达的鸭肠炎病毒(DEV)VP5-C蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合及筛选,获得4株稳定分泌抗VP5蛋白的杂交瘤细胞株,命名为1B5、3A1、4F9、6F6。抗体亚类鉴定表明,4株单克隆抗体均为IgG、k链。间接免疫荧光检测结果表明,4株单克隆抗体均能够与DEV感染CEF发生特异性反应,而不与CEF对照发生反应。Western blot检测,4株单克隆抗体均能够识别大小约为150kDa的蛋白,说明4株单抗隆抗体是特异性识别VP5蛋白的抗体。DEV VP5蛋白单克隆抗体的制备为进一步鉴定VP5蛋白B细胞抗原表位及VP5蛋白功能研究提供了有效工具。 展开更多

关键词 鸭肠炎病毒 vp5蛋白 单克隆抗体

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传染性法氏囊病病毒VP5基因的克隆与原核表达 被引量：2

9

作者 吴琼 马明 +1 位作者 何桂梅 陈明勇 《动物医学进展》 CSCD 2008年第6期50-53,共4页

根据GenBank已登录的传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP5基因序列,设计合成了一对VP5基因特异性引物,应用RT-PCR技术从IBDV标准毒株中扩增得到VP5基因,并将其克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建了重组原核表达质粒pGEX-6P-1-VP5,对重组表达... 根据GenBank已登录的传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP5基因序列,设计合成了一对VP5基因特异性引物,应用RT-PCR技术从IBDV标准毒株中扩增得到VP5基因,并将其克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建了重组原核表达质粒pGEX-6P-1-VP5,对重组表达质粒鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21进行诱导表达,SDS-PAGE和Western blot检测结果表明,IBDV VP5基因在大肠埃希菌BL21中得到了正确表达,所表达的融合蛋白与IBDV阳性血清具有特异性抗原抗体反应。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒 vp5基因 基因克隆 表达

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传染性法氏囊病病毒VP5蛋白跨膜区的敲除及可溶性原核表达研究 被引量：1

10

作者 严孝金 李锋 +5 位作者 秦立廷 李倩倩 韩翠晓 冯舵 王笑梅 高伟 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第17期10461-10463,共3页

[目的]构建敲除传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP5蛋白跨膜区序列的原核表达载体,并进行目的蛋白的表达、分离和纯化。[方法]利用PCR技术分别扩增IBDVVP5基因的胞外片段和胞内片段,然后将2个片段及pET-28b(+)同时相接,即载体-胞内片段-胞外片... [目的]构建敲除传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP5蛋白跨膜区序列的原核表达载体,并进行目的蛋白的表达、分离和纯化。[方法]利用PCR技术分别扩增IBDVVP5基因的胞外片段和胞内片段,然后将2个片段及pET-28b(+)同时相接,即载体-胞内片段-胞外片段-载体,构建了敲除跨膜区基因片段的VP5重组表达质粒pET-VP5-FC及改进后的pET-VP5-SC。将表达质粒转化BL21(DE3),IPTG诱导后经Ni亲和层析及凝胶过滤层析纯化重组蛋白。[结果]得到可溶性表达的IBDVVP5。[结论]为进一步研究VP5蛋白的结构与功能奠定了基础。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒 vp5 跨膜区敲除 原核表达

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新疆地区蓝舌病病毒的分离鉴定及编码VP5外壳蛋白的基因序列分析 被引量：1

11

作者 马晓菁 薛晓波 +4 位作者 叶锋 刘丽娅 古丽扎提·塔力甫汗 谷文喜 易新萍 《草食家畜》 2022年第4期22-26,共5页

对分离的新疆蓝舌病病毒(BTV)株编码VP5蛋白的S6基因序列进行比对分析,旨在了解分离毒株的基因遗传变异及进化关系,以期为新疆地区蓝舌病疫苗研究提供科学依据。本研究对绵羊全血中分离的疑似BTV分离毒株,提取RNA进行NS1-PCR扩增,克隆... 对分离的新疆蓝舌病病毒(BTV)株编码VP5蛋白的S6基因序列进行比对分析,旨在了解分离毒株的基因遗传变异及进化关系,以期为新疆地区蓝舌病疫苗研究提供科学依据。本研究对绵羊全血中分离的疑似BTV分离毒株,提取RNA进行NS1-PCR扩增,克隆测序。应用全长cDNA扩增(full-length ampli-fication of cDNAs,FLAC)技术获得S6基因序列,NCBI Blast比对S6基因同源性,MEGA5.0软件绘制进化树,分析BTV新疆分离株与蓝舌病病毒28个血清型S6基因的序列遗传进化关系。结果表明,新疆地区疑似蓝舌病病毒分离株NS1片段与蓝舌病病毒NS1片段序列相似性为98.04%,获得1株蓝舌病病毒。BTV分离株S6基因序列仅与GenBank中BTV strain XJ1407株、BTV strainMNG2/2016株及BTV-18 strain USA2014/FL株的S6基因具有同源性,且同源性均低于90%,分别为88.11%,87.35%以及70.92%。BTV分离株S6基因序列进化关系分析结果表明,分离株与BTV-18血清型在同一进化分支,与BTV-27血清型亲缘关系最近。研究结果为新疆地区蓝舌病疫苗研制提供科学依据。 展开更多

关键词 蓝舌病 vp5蛋白 新疆分离株

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海洋双RNA病毒(MABV)VP5基因的克隆与表达

12

作者 林建国 胡瑛 +1 位作者 王常高 蔡俊 《湖北农业科学》 北大核心 2009年第5期1025-1027,共3页

从海洋双RNA病毒(MABV)基因组中克隆到VP5基因,将其连接到6×His融合表达载体pET-28a(+)上,在大肠杆菌中表达,并对其表达条件进行了优化。研究结果表明,在温度为28℃、IPTG浓度为0.1 mmol.L-1时,表达的融合蛋白相对最高,占细菌总蛋... 从海洋双RNA病毒(MABV)基因组中克隆到VP5基因,将其连接到6×His融合表达载体pET-28a(+)上,在大肠杆菌中表达,并对其表达条件进行了优化。研究结果表明,在温度为28℃、IPTG浓度为0.1 mmol.L-1时,表达的融合蛋白相对最高,占细菌总蛋白的7.3%。 展开更多

关键词 海洋双RNA病毒(MABV) vp5基因 克隆 表达

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蓝舌病病毒VP5蛋白的原核表达及其抗原性分析 被引量：2

13

作者 赵大维 朱彦青 +4 位作者 陈伟业 胡倩倩 殷倩倩 黄克和 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期607-610,共4页

为表达蓝舌病病毒(BTV)VP5蛋白并检测其生物学活性,本实验采用RT-PCR方法扩增血清12型BTV的VP5基因,构建重组质粒pMAL-VP5。将重组质粒转化TB1感受态细胞,以0.4 mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果显示,融合了大肠杆菌麦芽糖结... 为表达蓝舌病病毒(BTV)VP5蛋白并检测其生物学活性,本实验采用RT-PCR方法扩增血清12型BTV的VP5基因,构建重组质粒pMAL-VP5。将重组质粒转化TB1感受态细胞,以0.4 mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果显示,融合了大肠杆菌麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的VP5重组蛋白以可溶形式表达,分子质量约为112.2 ku。利用MBP标签对重组蛋白进行纯化,并以其作为包被抗原,间接ELISA检测山羊血清样品,结果 5份羊血清P/N值均大于1,其中有1只羊检测结果 P/N值为2.396,鉴定为阳性血清,表明重组蛋白可以与VP5抗体反应,可以作为检测BTV VP5抗体的抗原,为今后进一步开展BT诊断研究奠定了基础。 展开更多

关键词 蓝舌病病毒 vp5基因 原核表达 间接ELISA

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传染性法氏囊病病毒VPP5酵母双杂交诱饵载体的构建及互作宿主细胞蛋白的筛选

14

作者 王念 张礼洲 +10 位作者 陈玉明 卢珍 高立 高玉龙 王永强 高宏雷 刘长军 崔红玉 李凯 王笑梅 祁小乐 《中国家禽》 北大核心 2015年第3期22-26,共5页

VP5蛋白是传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)编码的一种非结构蛋白,在病毒感染、释放、致病性方面起着重要作用。为了研究VP5蛋白与宿主细胞的相互作用,本试验首先将IBDV VP5基因克隆入p GBKT7,构建诱饵载体p G... VP5蛋白是传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)编码的一种非结构蛋白,在病毒感染、释放、致病性方面起着重要作用。为了研究VP5蛋白与宿主细胞的相互作用,本试验首先将IBDV VP5基因克隆入p GBKT7,构建诱饵载体p GBGt VP5,通过自激活试验证明其没有自激活活性,对酵母细胞没有毒性。然后,运用酵母双杂交技术,从鸡胚成纤维细胞(CEF)c DNA文库中筛选与VP5互作蛋白,经初筛、测序和回转验证,获得5个互作宿主细胞蛋白,为进一步深入研究IBDV VP5与宿主互作的效应和机制奠定基础。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒 vp5蛋白 酵母双杂交 诱饵载体 互作蛋白

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传染性囊病病毒VP5蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

15

作者 孙晓霞 蔺文成 +3 位作者 李晓齐 曹红 王永强 郑世军 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第12期10-13,共4页

传染性囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)的非结构蛋白VP5在病毒感染细胞的不同阶段发挥着抑制或诱导细胞凋亡的重要作用。为制备抗血清I型IBDV VP5蛋白的单克隆抗体,取经His-VP5蛋白免疫4次的BALB/c小鼠的脾细胞与骨髓... 传染性囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)的非结构蛋白VP5在病毒感染细胞的不同阶段发挥着抑制或诱导细胞凋亡的重要作用。为制备抗血清I型IBDV VP5蛋白的单克隆抗体,取经His-VP5蛋白免疫4次的BALB/c小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,3次亚克隆后获得2株能稳定分泌VP5蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5EC7和2BE5。经间接ELISA测定,以上2株单抗的亲和力解离常数分别为1.14×10^(-10)和4.87×10^(-10),亚类分别为Ig G2a和Ig G1。通过Western Blot和间接免疫荧光试验检测,2株单抗均能识别IBDV感染DF-1细胞后产生的VP5蛋白。Western Blot试验表明,2株单抗识别的抗原表位区域为VP5 N-端的1~10 aa。该单抗为研究血清I型IBDV VP5蛋白的生物学功能及病毒致病机理奠定基础。 展开更多

关键词 传染性囊病病毒 vp5蛋白 原核表达 单克隆抗体

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鸡传染性法氏囊病病毒VP5的原核表达、多抗制备及初步应用

16

作者 韩金泽 牛鑫鑫 +12 位作者 王国栋 葛成菲 张玉龙 黄萌萌 许萌萌 于航博 刘润杭 韩京哲 吴子文 于晓雪 高玉龙 李留安 祁小乐 《中国动物检疫》 CAS 2024年第2期92-98,共7页

传染性法氏囊病(infectious bursal disease virus,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)引起的一种主要危害雏鸡的急性传染病。在IBDV编码的5个蛋白中,VP5是IBDV唯一可以缺失基因的蛋白。本研究克隆了IBD... 传染性法氏囊病(infectious bursal disease virus,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)引起的一种主要危害雏鸡的急性传染病。在IBDV编码的5个蛋白中,VP5是IBDV唯一可以缺失基因的蛋白。本研究克隆了IBDV优势流行毒株的VP5蛋白编码基因,利用原核表达系统表达了VP5蛋白,通过免疫BALB/c小鼠制备VP5多抗,并对多抗进行了鉴定和检测不同IBDV毒株的应用。结果显示,IBDV优势流行毒株的VP5蛋白实现了可溶性表达,分子质量约为17 kDa;制备的VP5多抗特异性良好,ELISA效价可达1:64000;VP5多抗可通过IFA和Western Blot检测识别IBDV rHLJ0504-HT株,不识别VP5基因缺失株。结果表明:试验成功表达了IBDV优势流行毒株的VP5蛋白,并制备了VP5多抗;VP5多抗可对IBDV及其VP5编码基因缺失毒株进行鉴别检测。本研究对于IBDV检测方法的建立以及VP5编码基因功能的进一步研究提供了物质基础。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒 vp5 表达 多抗 应用

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大菱鲆呼肠孤病毒(SMReV)VP5蛋白的原核表达及分析

17

作者 高小蝉 郭明瑜 霍志鹏 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期43-49,共7页

大菱鲆呼肠孤病毒(Scophthalmus maximus reovirus,SMRe V)属于呼肠孤病毒科水生呼肠孤病毒属水生呼肠孤病毒A型(AQRV-A),其病毒粒子具有双层衣壳,外衣壳由VP5和VP7蛋白构成。从SMRe V基因组中克隆出表达外衣壳蛋白VP5的全长基因vp5(2 0... 大菱鲆呼肠孤病毒(Scophthalmus maximus reovirus,SMRe V)属于呼肠孤病毒科水生呼肠孤病毒属水生呼肠孤病毒A型(AQRV-A),其病毒粒子具有双层衣壳,外衣壳由VP5和VP7蛋白构成。从SMRe V基因组中克隆出表达外衣壳蛋白VP5的全长基因vp5(2 057 bp),构建包含该基因全长的原核表达质粒p ET32a-vp5,转化E.coli表达菌BL21(DE3)。经诱导获得的融合蛋白以包涵体的形式表达,大小约为88 k D。将纯化的融合蛋白免疫小鼠,制备出抗SMRe V VP5的多抗血清。经Western blot杂交分析显示,该抗体制备成功,且能识别SMRe V的VP5蛋白,大小约为69 k D。进一步经间接免疫荧光分析显示,VP5呈颗粒状分布在宿主CIK细胞质中。 展开更多

关键词 大菱鲆呼肠孤病毒 vp5蛋白 原核表达 WESTERN BLOT分析 外衣壳蛋白

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蓝舌病Ⅰ型病毒VP5蛋白的表达纯化及免疫原性分析

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作者 陈玉梅 党伟华 +5 位作者 刘燕凯 周景明 刘红亮 郭亚楠 张改平 王爱萍 《中国动物检疫》 CAS 2019年第3期69-74,83,共7页

为分析蓝舌病Ⅰ型病毒(BTV-1)VP5蛋白的免疫原性,本研究构建了载体PET-28a-VP5并转化BL21(DE3),然后进行IPTG诱导表达,以及SDS-PAGE和Western-blot分析。结果显示,重组VP5蛋白相对分子质量约为62 kDa,与预期结果一致。进一步优化条件,发... 为分析蓝舌病Ⅰ型病毒(BTV-1)VP5蛋白的免疫原性,本研究构建了载体PET-28a-VP5并转化BL21(DE3),然后进行IPTG诱导表达,以及SDS-PAGE和Western-blot分析。结果显示,重组VP5蛋白相对分子质量约为62 kDa,与预期结果一致。进一步优化条件,发现IPTG为0.2 mmol/L、温度为25℃、诱导6 h时,重组蛋白在上清中表达量最高,通过Ni柱纯化获得的重组蛋白纯度约为75%。将纯化后的重组蛋白VP5分别以40μg/只和20μg/只免疫Balb/c小鼠,同时设置PBS为阴性对照,对三免后血清进行间接ELISA检测,发现高、低剂量免疫小鼠均能产生针对VP5蛋白的特异性抗体。用灭活BTV-1进行DOT-ELISA检测,发现其能与VP5蛋白免疫的小鼠血清发生特异性反应,说明利用大肠杆菌表达的重组蛋白VP5具有良好的免疫特性,这为进一步开展BTV相关研究奠定了基础。 展开更多

关键词 蓝舌病1型病毒 vp5蛋白 蛋白表达 蛋白纯化 条件优化 免疫分析

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伪狂犬病毒截短VP5蛋白原核表达与鉴定

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作者 门鹏 《山东畜牧兽医》 2015年第1期1-3,共3页

以全长PRV基因组DNA为模板,PCR法扩增截短的伪狂犬病毒VP5基因,将其克隆至p ET-28a载体中,构建重组原核表达质粒p ET-28a-VP5,转化至大肠杆菌BL21中,并诱导表达;表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,进行纯化。结果表明,重组表达蛋... 以全长PRV基因组DNA为模板,PCR法扩增截短的伪狂犬病毒VP5基因,将其克隆至p ET-28a载体中,构建重组原核表达质粒p ET-28a-VP5,转化至大肠杆菌BL21中,并诱导表达;表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,进行纯化。结果表明,重组表达蛋白可以与PRV阳性血清及标签HIS单克隆抗体发生特异性反应。通过成功构建了PRV截短VP5基因重组原核表达质粒p ET-28a-VP5,原核表达并纯化了重组蛋白,为伪狂犬病毒特异性诊断抗原的开发、疫苗的研制及细胞生物学研究奠定了基础。 展开更多

关键词 伪狂犬病毒 vp5 原核基因表达 抗体鉴定

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传染性囊病病毒VP2蛋白诱导细胞凋亡的研究 被引量：5

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作者 吕英姿 曹永长 +1 位作者 陈峰 毕英佐 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期70-73,共4页

在体外分别构建了 3种重组表达质粒 :含传染性囊病病毒GZ911株VP2基因的pGVP2、含HK4 6株VP2基因的pHVP2以及含HK4 6株 5’ -端序列 (包括非编码区、VP5和VP2基因 )的pHVP2 +5 .用不同的重组质粒转染原代鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,在转染... 在体外分别构建了 3种重组表达质粒 :含传染性囊病病毒GZ911株VP2基因的pGVP2、含HK4 6株VP2基因的pHVP2以及含HK4 6株 5’ -端序列 (包括非编码区、VP5和VP2基因 )的pHVP2 +5 .用不同的重组质粒转染原代鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,在转染后 0、14、38h ,收集对照组和转染组细胞 ,用酶联免疫吸附试验检测CEF中降解DNA量 .结果 ,在 14和 38h ,各组细胞中测得的Dλ 值均为转染pHVP2 +5组最大 ,其次为转染pHVP2、pGVP2的组 ,并都大于其他对照组 ,表明 2个IBDV毒株的VP2蛋白在CEF中表达后都能诱导CEF发生凋亡 ,但不同毒株的VP2蛋白诱导CEF凋亡的能力不同 ; 展开更多

关键词 传染性囊病病毒 vp2蛋白 vp5蛋白 细胞凋亡 鸡胚成纤维细胞 致病机理

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