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TACE-TGF-α相互作用参与胚泡着床的机制研究 被引量：2
1
作者 杨环 朱兴春 +2 位作者 杨戎 张文文 刘帅 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1466-1469,共4页
目的:探讨胚泡着床过程中转化生长因子α(Transforming growth factor-α,TGF-α)对肿瘤坏死因子-α转化酶(Tumor necrosis factor-converting enzyme,TACE/ADAM17)的反馈调控机制。方法:用逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription po... 目的:探讨胚泡着床过程中转化生长因子α(Transforming growth factor-α,TGF-α)对肿瘤坏死因子-α转化酶(Tumor necrosis factor-converting enzyme,TACE/ADAM17)的反馈调控机制。方法:用逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫组化的方法分别检测实验组(注射TGF-α抗体)和对照组(注射小鼠血清)后子宫内膜TACE mRNA和蛋白的表达。结果:对照组TACE mRNA和蛋白明显高于实验组。结论:在胚胎着床过程中,TGF-α能反馈调控TACE在子宫内膜的表达,TACE-TGF-α-EGFR途径可能是胚胎着床的调控机制之一。 展开更多
关键词 胚胎着床 肿瘤坏死因子-α转化酶 转化生长因子Α 子宫内膜 免疫组化 逆转录聚合酶链反应
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甲钴胺对VZV病毒感染施万细胞中朊蛋白和TNF-α转换酶表达的影响 被引量：1
2
作者 许纲 周朝生 +5 位作者 唐维桢 张雨 徐刚 程超 许洁 王晓梅 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 2022年第2期171-178,共8页
目的:探究感染水痘-带状疱疹病毒(VZV)对人施万细胞(hSC)朊蛋白(PrP^(C))、肿瘤坏死因子-α转换酶(TACE)和肿瘤坏死因子-α受体1(TNFR1)表达的影响,及甲钴胺(MCbl)的调节作用。方法:将传代培养的hSC分为:空白对照组、VZV感染组、VZV感染... 目的:探究感染水痘-带状疱疹病毒(VZV)对人施万细胞(hSC)朊蛋白(PrP^(C))、肿瘤坏死因子-α转换酶(TACE)和肿瘤坏死因子-α受体1(TNFR1)表达的影响,及甲钴胺(MCbl)的调节作用。方法:将传代培养的hSC分为:空白对照组、VZV感染组、VZV感染加MCbl干预组、VZV感染PrP^(C)基因(Prnp)siRNA转染细胞组、VZV感染Prnp-siRNA转染细胞加MCbl干预组。设计合成Prnp的siRNA序列转染hSC,构建PrP^(C)表达下调的hSC模型。以感染复数为1.0的VZV分别感染后4组细胞3 d后,加药组分别加入250μg/ml的MCbl干预。感染7 d后采用CCK-8法评估细胞活力,real time RT-PCR检测Prnp mRNA表达,Western Blot分析PrP^(C)糖基化的变化,免疫荧光双染检测TACE和TNFR1的表达,TACE试剂盒检测其酶活性的变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞上清液中可溶性TNFR1(sTNFR1)的浓度。结果:与对照组比较,感染组细胞活力明显下降(P<0.05)。感染组细胞Prnp的mRNA表达与对照组相比上调了2.7倍,PrP^(C)的单糖基化条带密度明显增加。TACE染色颗粒明显变小,TACE活性为对照组的36%,TNFR1表达与对照组比较明显增多,sTNFR1含量为(16.77±4.57)pg/ml。感染加药组Prnp mRNA表达上调3.7倍,显著高于感染组,PrP^(C)向单糖基化迁移的比例较感染组明显减少。TACE染色颗粒变大,且TACE的活性为对照组的76%,TNFR1表达较感染组减少,sTNFR1水平达到(231.23±41.04)pg/ml,较感染组明显增加。Prnp-siRNA转染细胞感染VZV后,TACE和TNFR1等表达及活性与VZV感染组比较无明显差异,sTNFR1含量与感染组比较无明显差异。Prnp-siRNA转染细胞感染VZV加药组对TACE和TNFR1的表达及活性调节作用不明显,sTNFR1含量与感染组比较无明显差异。结论:VZV可诱导hSC中PrP^(C)稳定性下降,TACE活性降低。而MCbl可稳定PrP^(C),调节TACE活性,促进TNFR1的脱落,从而增强hSC的抗TNF-α神经毒性能力。 展开更多
关键词 水痘-带状疱疹病毒 细胞型朊蛋白 肿瘤坏死因子-α转换酶 肿瘤坏死因子-α受体1 甲钴胺 施万细胞
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肿瘤坏死因子前体转换酶前肽结构域对TACE活性调节作用 被引量：1
3
作者 李小鸥 阎媛 +2 位作者 黄巍 杨渝珍 王宏伟 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期783-787,共5页
目的:探讨肿瘤坏死因子前体转换酶(TACE)的前肽结构域在TACE成熟过程中所起的作用,为人工干预炎症过程提供依据和手段。方法:以pIRES2-EGFP质粒为载体,利用DNA重组技术分别构造含信号肽结构域+前肽结构域、全长结构域及缺失前肽结构域... 目的:探讨肿瘤坏死因子前体转换酶(TACE)的前肽结构域在TACE成熟过程中所起的作用,为人工干预炎症过程提供依据和手段。方法:以pIRES2-EGFP质粒为载体,利用DNA重组技术分别构造含信号肽结构域+前肽结构域、全长结构域及缺失前肽结构域的真核表达重组体,根据其碱基数目分别命名为pIRES2-EGFP/T648、pIRES2-EGFP/T2472、pIRES2-EGFP/T57-T1824;真核转染U937细胞;LPS刺激转染细胞后,用ELISA法及流式细胞技术检测TNF-α。结果:pIRES2-EGFP/T648的真核表达能显著抑制TACE的活性,减少sTNF-α分泌,抑制率达61.09%;pIRES2-EGFP/T57-T1824的真核表达对sTNF-α的分泌无影响;pIRES2-EGFP/T2472的真核表达能显著增加sTNF-α分泌。结论:前肽结构域在TACE的成熟过程中起了双重作用,TACE抑制剂的研制和开发为抗炎药物的设计和改造提供了新的依据和方法。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子转换酶 Pro区域
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慢性心力衰竭患者单核细胞分泌TNF-α变化及开博通对其影响的研究 被引量：1
4
作者 李玉宏 富维强 +1 位作者 张东旭 任卫东 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期547-548,共2页
目的 :通过测定慢性充血性心力衰竭 (CHF)患者单核细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF α)的改变 ,及血管紧张素转换酶抑制剂开博通对其的影响 ,探讨TNF α在CHF发病中的作用 ,可能来源及与肾素 血管紧张素系统的关系。方法 :测定 30例CHF患者... 目的 :通过测定慢性充血性心力衰竭 (CHF)患者单核细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF α)的改变 ,及血管紧张素转换酶抑制剂开博通对其的影响 ,探讨TNF α在CHF发病中的作用 ,可能来源及与肾素 血管紧张素系统的关系。方法 :测定 30例CHF患者及 2 0例健康人的血清TNF α含量。收集 30例CHF患者及 2 0例健康人外周血单个核细胞 (PBMC) ,应用RPMI 16 4 0培养基进行培养 ,并加入血管紧张素转换酶抑制剂开博通 ,使开博通终浓度为0 ,10 -10 ,10 -9,10 -8mmol/L ,2 4h后取培养上清液 ,用ELISA法测定培养液TNF α含量。结果 :CHF患者血清TNF α含量明显高于对照组。血管紧张素转换酶抑制剂开博通对CHF组PBMC分泌TNF α有抑制作用 ,并呈剂量依赖性。结论 :CHF患者TNF α表达增加 ,提示TNF α可能参与了心力衰竭的发生发展过程。PBMC可能是心衰时TNF α表达增加的一个来源。TNF α表达增加可能与心力衰竭时肾素 血管紧张素系统被激活有关。 展开更多
关键词 心力衰竭 肿瘤坏死因子 血管紧张素转换酶抑制剂 肾素-血管紧张素系统
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细胞间黏附分子-1和肿瘤坏死因子α在心肌肥厚实验中的意义 被引量：1
5
作者 谭晓 王迪斌 +1 位作者 杨春 郭锡熔 《医学研究生学报》 CAS 2005年第12期1094-1097,共4页
目的:①从转录和翻译两个水平研究细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)在大鼠肥厚心肌中和在正常大鼠心肌中的表达,并作比较,探讨其表达规律和与心肌肥厚的关系,初步阐述心肌肥厚发生的可能机制。②应用血管紧张素转换酶... 目的:①从转录和翻译两个水平研究细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)在大鼠肥厚心肌中和在正常大鼠心肌中的表达,并作比较,探讨其表达规律和与心肌肥厚的关系,初步阐述心肌肥厚发生的可能机制。②应用血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)后,重复观察上述指标,探讨ACEI逆转心肌肥厚的可能机制。方法:取SD大鼠30只,雌雄不限,随机分为心肌肥厚组、心肌肥厚+药物组和假手术组3组,每组10只。手术后按要求饲养8周后处死,取心肌标本,行ICAM-1、TNF-α的免疫组化染色;应用RT-PCR法行ICAM-1 mRNA、TNF-αmRNA检测,并进行统计学方法比较。结果:ICAM-1、TNF-α免疫组化结果:心肌肥厚组心肌中2种蛋白表达明显增多,其次是心肌肥厚+药物组;假手术组表达量最少。3组标本ICAM-1mRNA、TNF-αmRNA的RT-PCR检测结果:心肌肥厚组表达量最高,其次是心肌肥厚+药物组,而假手术组表达量最少。结论:ICAM-1、TNF-α参与心肌肥厚的发生和发展。ACEI抑制心肌肥厚的机制与减少ICAM-1、TNF-α的表达有关。 展开更多
关键词 细胞间黏附分子-1 肿瘤坏死因子Α 心肌肥厚 血管紧张素转换酶抑制剂
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LPS刺激对TACE基因表达和对TNF-α前体加工的影响 被引量：1
6
作者 李凌波 朱孔黎 +1 位作者 杨渝珍 龚非力 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期690-693,共4页
目的 :研究LPS刺激对肿瘤坏死因子转换酶 (TACE)基因转录和表达的影响及其与TNF α前体加工的关系。方法 :采用Dot blotting、Dot ELISA、间接免疫荧光和FACS等方法分别检测HL 6 0细胞在LPS刺激的不同时间段TACE、TNF α基因转录表达和... 目的 :研究LPS刺激对肿瘤坏死因子转换酶 (TACE)基因转录和表达的影响及其与TNF α前体加工的关系。方法 :采用Dot blotting、Dot ELISA、间接免疫荧光和FACS等方法分别检测HL 6 0细胞在LPS刺激的不同时间段TACE、TNF α基因转录表达和膜分子分布情况。结果 :①HL 6 0细胞构成性高表达有活性TACE ,主要分布于细胞膜和核周边。②LPS刺激TNF α基因转录表达 ,但由于TACE的作用 ,膜TNF α(TM TNF α)下降 ,而分泌型TNF(sTNF α)增加 ;TACE的反义寡核苷酸 (ODN)显著抑制TNF α这种前体转换作用。③LPS同样刺激TACE基因表达增加 ,而且TACE酶解作用增强 ,但其蛋白表达和膜分子分布反而下降 ,推测TACE在发挥其催化膜蛋白作用后 ,其分子结构形式发生改变。结论 :炎症时分泌型TNF α增加不仅是该细胞因子基因表达增高所致 ,更受到TACE基因表达水平和活性状态的约束。 展开更多
关键词 基因表达 前体加工 LPS 肿瘤坏死因子 TNF-Α 肿瘤坏死因子转换酶 TACE
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TACE基因shRNA真核表达载体的构建及其对HeLa细胞生物学活性的影响
7
作者 章杰 闫媛 +1 位作者 杨渝珍 杨业金 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期426-430,共5页
目的构建靶向肿瘤坏死因子转换酶（TACE）的小发夹结构RNA（shRNA）的真核表达载体,观察干扰TA-CE表达对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法设计针对TACE基因的4个shRNA序列,构建真核表达载体shR-NA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4。通过酶切和... 目的构建靶向肿瘤坏死因子转换酶（TACE）的小发夹结构RNA（shRNA）的真核表达载体,观察干扰TA-CE表达对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法设计针对TACE基因的4个shRNA序列,构建真核表达载体shR-NA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4。通过酶切和测序等方法进行鉴定。转染HeLa细胞后,用Realtime PCR的方法检测其对HeLa细胞TACE基因表达的影响;用ELISA检测细胞分泌的sTNF-α,间接反映干扰TACE的效果;用MTT法检测细胞增殖活性;用DNA ladder和流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功构建和筛选出了针对TACE基因的3个有效的特异性真核表达载体,且均在不同程度上抑制了HeLa细胞TACE基因的表达。ELISA检测结果与Realtime PCR实验结果相符。同时发现干扰TACE基因后,HeLa细胞的生长受到抑制,凋亡率升高,与对照组相比差异有显著性意义（P〈0.05）。实验组转染shRNA1~3后72h可见特征性的基因组DNA ladder条带。结论所构建的TACEshR-NA真核表达载体能显著抑制TACE的表达。干扰TACE基因的表达可有效抑制HeLa细胞的增殖并诱导其凋亡。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子转换酶 小发夹结构RNA HELA细胞 细胞凋亡
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重叠延伸PCR法构建人肿瘤坏死因子前体水解酶系列突变重组体及稳定转染HeLa细胞株的建立
8
作者 闫媛 章杰 +2 位作者 杨渝珍 过健俐 李禹琼 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期1-4,共4页
目的构建人肿瘤坏死因子前体水解酶(TACE)系列真核表达载体,转染HeLa细胞,建立稳定转染的HeLa细胞系。方法以THP1细胞cDNA为模板,PCR扩增人TACE基因的全长cDNA编码区序列,将其插入pMD18T载体中,构建出pMD18T-FL-TACE载体。在此基础上,... 目的构建人肿瘤坏死因子前体水解酶(TACE)系列真核表达载体,转染HeLa细胞,建立稳定转染的HeLa细胞系。方法以THP1细胞cDNA为模板,PCR扩增人TACE基因的全长cDNA编码区序列,将其插入pMD18T载体中,构建出pMD18T-FL-TACE载体。在此基础上,应用重叠延伸PCR扩增出缺失解整合素区的TACE重组cDNA和缺失酶区的TACE重组cDNA,利用DNA重组技术将其分别定向插入真核表达载体pIRES2.0-EGFP中,同时TACE全长也构建入pIRES20.-EGFP。这3种真核表达载体经酶切和测序鉴定后,用脂质体法转染HeLa细胞,经过G418筛选,获得稳定转染的HeLa细胞株,采用RT-PCR、Westernblot及荧光法检测表达。结果成功构建了pIRES2.0-EG-FP/FL-TACE、pIRES20.-EGFP/disΔ-TACE、pIRES20.-EGFP/metΔ-TACE真核表达载体,并建立了稳定转染的HeLa细胞株,成功地表达了目的基因。结论真核表达载体的构建和稳定转染HeLa细胞株的建立为进一步研究TACE功能奠定了必要的实验基础。 展开更多
关键词 人肿瘤坏死因子前体水解酶 解整合素 真核表达载体 重叠延伸PCR 转染
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TACE在自体髓核移植背根节致根性神经痛中的作用机制研究
9
作者 曹兴 曹国永 +2 位作者 周跃 龙毅 邓淼 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期186-189,共4页
目的:探讨TACE在椎间盘突出致坐骨神经痛发病机制中的作用。方法:采用自体髓核移植至L4、5神经节,建立根性神经痛的动物模型,应用Von Frey针丝及RTY-Ⅰ型热痛测仪对神经行为的改变进行检测,采用免疫组化法检测TACE在神经节及神经根中的... 目的:探讨TACE在椎间盘突出致坐骨神经痛发病机制中的作用。方法:采用自体髓核移植至L4、5神经节,建立根性神经痛的动物模型,应用Von Frey针丝及RTY-Ⅰ型热痛测仪对神经行为的改变进行检测,采用免疫组化法检测TACE在神经节及神经根中的表达,采用RT-PCR的方法检测TACE和TNF-αmRNA表达,并分析其与神经行为改变之间的相关性。结果:自体髓核移植可以导致明显的机械刺激痛觉过敏现象,而无明显的热刺激痛觉过敏,TACE在自体髓核移植术后4d表达开始增强(P<0.05),术后1周表达最强(P<0.01),术后3周逐渐恢复正常,与TNF-α的表达及TACE的表达之间存在显著相关性。结论:TACE作为释放活性TNF-α的特异性蛋白酶,自体髓核移植至DRG后,其蛋白表达升高,TNF-αmRNA、TACEmRNA表达之间存在线性相关,说明TACE可能是抗TNF-α治疗的新靶点,在治疗椎间盘突出引起的根性神经痛中具有重要作用。 展开更多
关键词 髓核 坐骨神经痛 TNF—α 肿瘤坏死因子α转换酶 神经节
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淡水接近淹溺肺损伤的病理生理研究
10
作者 周志强 徐建国 《医学研究生学报》 CAS 1993年第S1期9-17,共9页
用 Carlen 管隔开左右肺,仅向右肺灌入淡水(25 ml/kg),观察淹溺后导致直接(右肺)和间接(左肺)肺损伤的病理变化,探讨 TNF,TXB_2,ACE 等介质在淹溺后肺损伤的作用。结果表明,淡水淹溺的直接和间接作用都可以引起肺损害。淹溺后,肺细胞表... 用 Carlen 管隔开左右肺,仅向右肺灌入淡水(25 ml/kg),观察淹溺后导致直接(右肺)和间接(左肺)肺损伤的病理变化,探讨 TNF,TXB_2,ACE 等介质在淹溺后肺损伤的作用。结果表明,淡水淹溺的直接和间接作用都可以引起肺损害。淹溺后,肺细胞表现为进行性损伤;1型肺上皮细胞出现损伤变化较Ⅱ型肺上皮细胞早;血气屏障破坏是喷射性肺水肿的病理学基础;TXB_2和 ACE 都参与于淹溺后肺损伤作用,但它们不是淹溺后肺损伤的标志;TNF 不是淹溺后肺损伤的重要介质,但可能参与淹溺后期的肿损伤作用。 展开更多
关键词 接近淹溺 肺损伤 肿瘤坏死因子 血栓烷 B2 血管紧张素1转化酶 肺表面活性物质
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