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泥蚶TLR3基因的生物学特性及表达分析
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作者 杨正宽 张秀梅 +5 位作者 姜璞源 夏飞宇 徐颖 盘钰峰 杨扬 王一航 《浙江海洋大学学报(自然科学版)》 CAS 2024年第3期183-192,共10页
为探究泥蚶Toll样受体3(TLR3)基因的生物学特性及其对缺氧和硫化物胁迫的响应,克隆了泥蚶TgTLR3核心片段序列,并运用实时荧光定量PCR技术检测了TgTLR3基因在血淋巴、鳃、肝胰腺、外套膜、闭壳肌、斧足等组织的分布情况以及在缺氧和硫化... 为探究泥蚶Toll样受体3(TLR3)基因的生物学特性及其对缺氧和硫化物胁迫的响应,克隆了泥蚶TgTLR3核心片段序列,并运用实时荧光定量PCR技术检测了TgTLR3基因在血淋巴、鳃、肝胰腺、外套膜、闭壳肌、斧足等组织的分布情况以及在缺氧和硫化物胁迫下血淋巴中的表达模式。结果显示,泥蚶TgTLR3开放阅读框2634 bp,编码877个氨基酸。其中,49~593位为胞外富含亮氨酸重复序列,跨膜域为658~680位,720~865位为白细胞介素受体1结构域,蛋白质分子量为99.4 kD,等电点为7.76。氨基酸同源性比对发现,泥蚶TgTLR3氨基酸序列与毛蚶相似度高达80.05%。系统进化树显示,TgTLR3与毛蚶首先聚为一支,表明与毛蚶亲缘关系最近。TgTLR3在泥蚶各组织中均有表达,其中血淋巴表达量最高。缺氧胁迫48~96 h后,血淋巴中TgTLR3显著升高;添加硫化物后,TgTLR3在48 h显著低于缺氧组但在96 h仍显著高于对照。上述研究结果表明,TgTLR3基因在泥蚶应对缺氧和硫化物胁迫的免疫调控中可能发挥着重要作用。研究结果为探究软体动物TLR3的功能及其响应缺氧及硫化物胁迫的免疫机制提供了基础数据。 展开更多
关键词 泥蚶 Toll样受体3(tlr3) 克隆 缺氧 硫化物
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日本鳗鲡TLR3基因的克隆及其免疫功能分析 被引量:1
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作者 余丽丽 林鹏 +4 位作者 郭松林 王艺磊 张子平 王婷婷 冯建军 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期160-171,共12页
Toll样受体3(TLR3)是用于识别双链RNA的一种重要模式识别受体。利用RT-PCR和RACE技术克隆了日本鳗鲡TLR3(Aj TLR3)基因c DNA全长序列,并采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测分析该基因在日本鳗鲡各组织器官以及体外肝脏细胞的表达水平变... Toll样受体3(TLR3)是用于识别双链RNA的一种重要模式识别受体。利用RT-PCR和RACE技术克隆了日本鳗鲡TLR3(Aj TLR3)基因c DNA全长序列,并采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测分析该基因在日本鳗鲡各组织器官以及体外肝脏细胞的表达水平变化,以期对日本鳗鲡TLR3基因的序列特征及其功能进行研究。结果表明:Aj TLR3基因全长3 383 bp,开放阅读框为2 766 bp,编码921个氨基酸。该蛋白具有16个LRR的胞外结构域、跨膜结构域以及TIR结构域,其中在TIR结构域含有一个高度保守的氨基酸残基Tyr^(778)。Aj TLR3基因在日本鳗鲡各组织器官中均有表达,其中肝脏表达量最高;经poly I∶C刺激后在血、肠、肝脏、脾脏、皮肤、心脏及肌肉组织中均显著提高;而LPS刺激后,仅在肝脏和肠中有显著提高。日本鳗鲡肝脏细胞体外实验结果显示:poly I∶C处理后12 h和24 h表达水平显著增高,Cp G-DNA和肽聚糖处理后24 h表达量均有显著增加;而细菌浓度达到107 CFU/m L和108 CFU/m L后,Aj TLR3基因表达水平分别在24 h、12 h显著增高并达到峰值。以上研究表明,Aj TLR3在日本鳗鲡抵御病毒及细菌的免疫应答过程中具有重要作用。 展开更多
关键词 日本鳗鲡 tlr3 基因克隆 荧光定量 肝脏细胞
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微小RNA-186-5p(miR-186-5p)下调TLR3表达抑制高糖诱导的心肌细胞凋亡 被引量:4
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作者 刘叶 宋冰 +1 位作者 郑魏 胡晶 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期877-883,共7页
目的研究高糖处理AC16心肌细胞微小RNA-186-5p(miR-186-5p)、Toll样受体3(TLR3)表达水平的变化及其与心肌细胞凋亡的关系。方法靶基因预测数据库Target Scan7.1预测miR-186-5p可直接作用于TLR3,采用高糖诱导培养的人AC16心肌细胞,建立... 目的研究高糖处理AC16心肌细胞微小RNA-186-5p(miR-186-5p)、Toll样受体3(TLR3)表达水平的变化及其与心肌细胞凋亡的关系。方法靶基因预测数据库Target Scan7.1预测miR-186-5p可直接作用于TLR3,采用高糖诱导培养的人AC16心肌细胞,建立糖尿病心肌病模型。采用实时定量PCR检测心肌细胞miR-186-5p水平,Western blot法检测心肌细胞TLR3表达水平。采用细胞转染过表达或降低miR-186-5p或TLR3水平,通过流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况,Western blot法检测心肌细胞裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)的蛋白表达,荧光素酶报告基因检测miR-186-5p与TLR3的相互作用。结果生物信息学分析和荧光素酶活性测定证实TLR3为miR-186-5p直接作用的靶基因,高糖处理的心肌细胞miR-186-5p表达下调,过表达miR-186-5p可逆转高糖诱导的细胞凋亡,并降低c-caspase-3蛋白水平。下调TLR3水平抑制高糖诱导的细胞凋亡并降低c-caspase-3蛋白水平。过表达TLR3可以上调miR-186-5p抑制高糖诱导的心肌细胞凋亡水平。TLR3表达水平升高可逆转miR-186-5p抑制HG诱导心肌细胞凋亡的作用。结论miR-186-5p通过下调TLR3表达抑制高糖诱导的心肌细胞凋亡。 展开更多
关键词 微小RNA-186-5p(miR-186-5p) Toll样受体3(tlr3) 心肌细胞 细胞凋亡 高糖
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团头鲂Toll样受体3基因的克隆及特征研究 被引量:3
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作者 苏建国 朱作言 汪亚平 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期986-993,共8页
关键词 团头鲂 TOLL样受体3 基因克隆 特征分析
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NLRP3炎症小体与相关炎症信号通路在肾缺血-再灌注损伤中的作用 被引量:4
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作者 袁强 申开文 +1 位作者 张瑞波 沈俊 《器官移植》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期177-183,共7页
肾缺血-再灌注损伤(IRI)常见于肾移植术中,是引起急性肾衰竭的重要病理生理过程,严重影响受者预后。炎症反应在IRI的发病机制及病理过程中占据着重要地位。活化的NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体可通过介导多种促炎因子的成熟与释放,调... 肾缺血-再灌注损伤(IRI)常见于肾移植术中,是引起急性肾衰竭的重要病理生理过程,严重影响受者预后。炎症反应在IRI的发病机制及病理过程中占据着重要地位。活化的NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体可通过介导多种促炎因子的成熟与释放,调节机体炎症反应及相关细胞功能。本文对肾IRI中的NLRP3炎症小体及其相关炎症信号通路的作用机制进行了总结,旨在为临床肾IRI的防治提供新思路。 展开更多
关键词 缺血-再灌注损伤(IRI) 肾移植 NOD样受体蛋白3(NLRP3) Toll样受体(tlr) 模式识别受体(PRR) 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1 线粒体DNA(mtDNA)
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