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超声造影联合TERT启动子突变构建列线图模型对PTMC并发颈部淋巴结转移的预测效能 被引量：1
1
作者 吴昌慧 黄志平 +3 位作者 戴慧萍 邱慧芳 何春 唐芳 《实用医学杂志》 北大核心 2025年第5期756-765,共10页
目的探讨超声造影联合端粒酶逆转录酶(TERT)启动子突变构建列线图模型对甲状腺微小乳头状癌(PTMC)并发颈部淋巴结转移(CLNM)的预测能效。方法选取2021年1月至2024年3月在我院行甲状腺部分切除或全部切除+淋巴结清扫的PTMC患者202例,根... 目的探讨超声造影联合端粒酶逆转录酶(TERT)启动子突变构建列线图模型对甲状腺微小乳头状癌(PTMC)并发颈部淋巴结转移(CLNM)的预测能效。方法选取2021年1月至2024年3月在我院行甲状腺部分切除或全部切除+淋巴结清扫的PTMC患者202例,根据术后病理检查是否并发CLNM分为CLNM组(97例)和非CLNM组(105例)。收集所有PTMC患者的一般资料和超声(常规超声和超声造影)特征,采用Sanger测序检测TERT启动子突变。通过单因素和多因素非条件logistic回归分析PTMC并发CLNM的影响因素;RStudio4.4.1软件构建超声造影联合TERT启动子突变的PTMC并发CLNM列线图模型,用校准曲线、决策曲线和C指数评价列线图模型的一致性和净收益,Hosmer-Lemeshow检验列线图模型的拟合优度;MedCalc22.023软件绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评价评价超声造影、TERT启动子突变和超声造影联合TERT启动子突变构建列线图模型对PTMC并发CLNM的预测能效。结果经术后病理检查,202例PTMC患者CLNM发生率为48.02%(97/202)。单因素分析显示,甲状腺球蛋白抗体、病灶数目、纵横比、微钙化、增强时间、增强方式、增强强度、被膜连续性、TERT启动子突变与PTMC并发CLNM有关(P<0.05)。多因素非条件Logistic回归显示,多灶性肿瘤(OR=3.487,95%CI:1.641~7.406,P=0.001)、微钙化(OR=4.484,95%CI:2.113~9.516,P<0.001)、等或高增强(OR=3.187,95%CI:1.460~6.957,P=0.004)、被膜连续性中断(OR=2.201,95%CI:1.051~4.608,P=0.036)、TERT启动子突变阳性(OR=4.460,95%CI:2.132~10.103,P<0.001)为PTMC并发CLNM的独立危险因素。根据PTMC并发CLNM的独立危险因素构建超声造影联合TERT启动子突变列线图模型[Logit(P)=-4.486+1.350×病灶数目+1.399×微钙化+2.124×增强强度+1.524×被膜连续性+2.175×TERT启动子突变]。该列线图模型的C-指数为0.899(95%CI:0.893~0.905),校准曲线走形接近理想曲线,决策曲线高于两条极端曲线,Hosmer-Lemeshow检验P>0.05。ROC曲线显示,超声造影联合TERT启动子突变构建的列线图模型预测PTMC并发CLNM曲线下面积为0.899,大于超声造影、TERT启动子突变单独预测的0.857、0.697(P<0.05)。结论超声造影联合TERT启动子突变构建列线图模型对PTMC并发CLNM具有较高的预测能效。 展开更多
关键词 甲状腺微小乳头状癌 超声造影 端粒酶逆转录酶启动子突变 颈部淋巴结转移 列线图 预测能效
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不同环境条件和抗氧化剂处理对CmTERT表达的影响
2
作者 张丹丹 彭静梅 +1 位作者 黄紫妍 付鸣佳 《江西师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2024年第3期253-259,共7页
该文通过实时荧光定量PCR分析了不同条件和抗氧化剂对蛹虫草(Cordyceps militaris)菌株YJ端粒酶逆转录酶(C.militaris telomerase reverse transcriptase,CmTERT)基因转录水平的影响.分析结果表明:适宜的培养温度(22℃和25℃)有利于菌... 该文通过实时荧光定量PCR分析了不同条件和抗氧化剂对蛹虫草(Cordyceps militaris)菌株YJ端粒酶逆转录酶(C.militaris telomerase reverse transcriptase,CmTERT)基因转录水平的影响.分析结果表明:适宜的培养温度(22℃和25℃)有利于菌株YJ菌丝体生长和Cmtert转录,蓝光抑制Cmtert转录;高温(28、30和33℃)不利于菌株YJ菌丝体生长和Cmtert转录,蓝光促进Cmtert转录;但在30℃时,在菌株YJ菌丝中Cmtert转录水平急剧升高,推测与端粒高温损伤的诱导有关.维生素C(VC)、维生素E(VE)、β-烟酰胺单核苷酸(NMN)和白藜芦醇对在菌株YJ中Cmtert转录的影响更为明显,而对在菌株TN中Cmtert转录的影响不明显.因此,若蛹虫草交配型不同,则受抗氧化剂影响的Cmtert转录水平也有差异. 展开更多
关键词 蛹虫草 环境条件 抗氧化剂 端粒酶逆转录酶
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c-myc调节人端粒酶逆转录酶(htert)启动子活性的体外研究 被引量：10
3
作者 林勇 谢渭芬 +4 位作者 陈伟忠 张新 张兴荣 张忠兵 沈建伟 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第1期34-36,共3页
目的 :研究c myc对人端粒酶逆转录酶 (htert)启动子的调节作用。方法 :采用Lipofect脂质体转染法将DNA质粒分别转染至肝癌细胞HepG2 、猴肾COS 7细胞和NIH3T3细胞 ,孵育 48h后 ,分别检测其报告基因萤虫素酶活性。结果 :与对照相比 ,载有... 目的 :研究c myc对人端粒酶逆转录酶 (htert)启动子的调节作用。方法 :采用Lipofect脂质体转染法将DNA质粒分别转染至肝癌细胞HepG2 、猴肾COS 7细胞和NIH3T3细胞 ,孵育 48h后 ,分别检测其报告基因萤虫素酶活性。结果 :与对照相比 ,载有htert 80 0bp启动子的质粒TERTLuc(80 0 )在肿瘤细胞HepG2 中活性显著增强。外源性转录因子c myc可显著上调htert启动子的表达 ,其激活作用与剂量呈正相关。人工突变c myc结合位点明显降低htert启动子的活性。结论 :c myc可直接激活htert启动子的表达 ,是调节端粒酶活性的重要转录因子。 展开更多
关键词 C-MYC 人端粒酶逆转录酶 Htert 启动子 基因调控 脂质体 肝癌细胞
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三氧化二砷对HL-60细胞凋亡及其端粒酶hTERT-mRNA表达影响的实验研究 被引量：43
4
作者 章尧 赵燕 陈昌杰 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期206-208,共3页
目的　探讨不同浓度的三氧化二砷 (As2 O3)对急性早幼粒细胞白血病细胞株HL 60细胞端粒酶亚单位hTERT mRNA表达及其诱导凋亡的作用。方法　不同浓度的As2 O3与HL 60细胞株共培养 48h ,流式细胞术鉴定HL 60细胞凋亡 ;RT PCR法检测HL 60... 目的　探讨不同浓度的三氧化二砷 (As2 O3)对急性早幼粒细胞白血病细胞株HL 60细胞端粒酶亚单位hTERT mRNA表达及其诱导凋亡的作用。方法　不同浓度的As2 O3与HL 60细胞株共培养 48h ,流式细胞术鉴定HL 60细胞凋亡 ;RT PCR法检测HL 60细胞端粒酶亚单位hTERTmRNA的表达。结果　在 0 1、1 0和 5 0 μmol·L-13种浓度的As2 O3作用下 ,HL 60细胞凋亡率分别为 2 2 8%± 0 40 %、2 5 5 %± 0 2 2 %和 47 5 7%± 2 79% ;端粒酶亚单位hTERT mRNA表达的相对值分别为 73 97%、63 70 %和 2 9 0 4%。细胞凋亡率在 5 0 μmol·L-1与 0 1和 1 0μmol·L-1浓度组间差异有显著性 (P <0 0 1) ;端粒酶亚单位表达的差异也有显著性 (P <0 0 5 )。As2 O3诱导HL 60细胞凋亡效应与其抑制端粒酶亚单位hTERTmRNA的表达相关。结论　As2 O3对HL 60细胞具有凋亡诱导效应 ,且对其端粒酶亚单位hTERTmRNA的表达具有抑制作用 ,两者均呈现浓度依赖效应。As2 O3可能通过抑制HL 展开更多
关键词 肿瘤细胞 细胞凋亡 端粒酶催化亚单位 细胞凋亡 HL-60细胞 三氧化二砷
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曲古菌素A抑制HL-60细胞端粒酶活性及亚单位hTERT的表达并诱导凋亡 被引量：5
5
作者 周咏明 薛克营 +2 位作者 陈艳红 刘隽 黄士昂 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期171-174,共4页
目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(tri-chostatin A,TSA)抑制HL-60细胞端粒酶活性及亚单位hTERT的表达并诱导凋亡的机制。方法采用MTT法和倒置相差显微镜观察不同浓度曲古菌素A对HL-60细胞的抑制作用,流式细胞仪检测600 nmol.L-... 目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(tri-chostatin A,TSA)抑制HL-60细胞端粒酶活性及亚单位hTERT的表达并诱导凋亡的机制。方法采用MTT法和倒置相差显微镜观察不同浓度曲古菌素A对HL-60细胞的抑制作用,流式细胞仪检测600 nmol.L-1TSA作用后的细胞凋亡情况,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性变化,RT-PCR分析端粒酶三个亚单位的mRNA表达情况。结果曲古菌素A对HL-60细胞的抑制作用具有时间和剂量依赖性,Annex-inV/PI双染色体法检测凋亡显示,600 nmol.L-1TSA作用48h后,细胞凋亡率为42.6%。600 nmol.L-1曲古菌素A作用12、24和48 h后,端粒酶活性分别下降为1.95±0.25、1.73±0.12和1.52±0.09。RT-PCR显示,端粒酶逆转录酶hTERT表达下降,而端粒酶RNA模板(hTR)和端粒酶相关蛋白(hTP1)表达无明显改变。结论曲古菌素A(trichosta-tin,TSA)抑制HL-60细胞端粒酶活性下降,并诱导凋亡,其机制可能与曲古菌素A下调hTERT转录水平有关。 展开更多
关键词 曲古菌素A 细胞凋亡 端粒酶 端粒酶逆转录酶
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靶向hTERT基因表达载体的构建和其对人乳腺癌细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响 被引量：6
6
作者 刘祥厦 姚陈 +2 位作者 张辉 王三明 王深明 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期2187-2190,共4页
目的构建靶向端粒酶hTERT基因mRNA的shRNA质粒表达载体,转染人乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系,探讨其对细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法设计合成端粒酶hTERT基因特异性shRNA干扰序列,重组pSuper-retro-puro质粒,转染乳腺癌MCF-7和M... 目的构建靶向端粒酶hTERT基因mRNA的shRNA质粒表达载体,转染人乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系,探讨其对细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法设计合成端粒酶hTERT基因特异性shRNA干扰序列,重组pSuper-retro-puro质粒,转染乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系(转染组),设立正常培养乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系(阴性对照组)和pSuper-retro-puro质粒转染的乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系(空白对照组),利用端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附测定法(TRAP-ELISA)检测细胞端粒酶活性,MTT实验及琼脂糖细胞集落形成实验检测细胞增殖能力等。结果成功构建pSuper-retro-puro-TERTRNAi#1、#2质粒并转染乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系,转染后细胞端粒酶活性较转染前明显下调,差异有统计学意义(P<0.005);MTT法检测细胞增殖能力显示,MCF-7及MDA-MB231转染组细胞增殖活性较阴性对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);软琼脂集落形成实验表明MCF-7和MDA-MB231转染组细胞克隆形成能力较阴性对照组显著下降,差异有统计学意义(P<0.001)。结论通过RNAi技术特异性干扰hTERT基因mRNA表达可显著下调细胞端粒酶活性,并可导致细胞增殖能力的减弱,以端粒酶为靶点的基因治疗可能是乳腺癌治疗的一种有效方法。 展开更多
关键词 乳腺癌 端粒酶 Htert RNA干扰 基因治疗
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肝细胞肝癌中端粒酶活性及hTERT mRNA表达 被引量：4
7
作者 戴大英 翟为溶 +3 位作者 朱腾方 万大方 凌玉琴 朱虹光 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2003年第5期484-487,共4页
目的　探讨肝细胞肝癌 (hepatocellularcarcinoma,HCC)中端粒酶、端粒酶催化亚单位hTERT(humantelomerasere versetranscriptase)表达及意义。方法　应用PCR ELISA和TRAP 银染法检测人HCC癌内、癌旁和正常肝组织中端粒酶活性 ,用RNA RN... 目的　探讨肝细胞肝癌 (hepatocellularcarcinoma,HCC)中端粒酶、端粒酶催化亚单位hTERT(humantelomerasere versetranscriptase)表达及意义。方法　应用PCR ELISA和TRAP 银染法检测人HCC癌内、癌旁和正常肝组织中端粒酶活性 ,用RNA RNA原位杂交法检测石蜡包埋组织hTERTmRNA表达 ,观察二者与肿瘤病理特征间的关系。结果　癌组织中端粒酶活性、hTERTmRNA检出率分别为 81 3% (2 6 /32 )、87 5 % (2 8/32 ) ,远高于这些病例的癌旁肝组织 (1 2 5 % ,1 2 5 % ) ;癌内及癌旁端粒酶活性与hTERTmRNA表达相关。小肝癌和肿瘤分化差者端粒酶、hTERT均呈高表达 ;肿瘤近包膜处、与周边正常组织交错或移行处癌细胞hTERT表达强 ;癌内及癌旁浸润的单核性细胞、癌旁不典型增生区肝细胞及癌栓内的肿瘤细胞hTERTmRNA常为阳性。正常肝组织 4例均为阴性。结论　HCC中端粒酶活性、hTERTmRNA高表达 ,二者密切相关 ;端粒酶、hTERTmRNA活化表达与HCC的发生、演进及肿瘤的侵袭状态相关。癌旁端粒酶活性来自浸润的单核性细胞。 展开更多
关键词 肝细胞 肝癌 粒酶活性 Htert MRNA表达 末端转移酶
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维甲酸诱导HL-60细胞分化过程中端粒酶活性与hTERT,c-myc和bcl-2表达的研究 被引量：6
8
作者 吴立德 陈元仲 +1 位作者 李乃农 吴勇 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第5期395-399,共5页
为了探讨全反式维甲酸 (ATRA)诱导HL 60细胞分化过程中端粒酶活性与hTERT ,c myc和bcl 2mRNA表达的变化规律及其意义 ,复制HL 60细胞的诱导分化模型 ,在分化前和分化过程中通过端粒重复序列扩增PCR ELISA方法测定端粒酶活性 ,采用RT PC... 为了探讨全反式维甲酸 (ATRA)诱导HL 60细胞分化过程中端粒酶活性与hTERT ,c myc和bcl 2mRNA表达的变化规律及其意义 ,复制HL 60细胞的诱导分化模型 ,在分化前和分化过程中通过端粒重复序列扩增PCR ELISA方法测定端粒酶活性 ,采用RT PCR方法检测hTERT ,c myc和bcl 2mRNA表达水平。结果显示 ,在ATRA诱导HL 60细胞分化过程中 ,端粒酶活性水平逐渐下降 ,hTERTmRNA表达下调的同时c myc和bcl 2mRNA表达亦下调 ,且hTERTmRNA下调早于端粒酶活性水平下降。结论 :全反式维甲酸诱导的HL 60细胞分化过程与端粒酶活性降低和hTERT ,c myc及bcl 展开更多
关键词 HL—60细胞 维甲酸 端粒酶 人端粒酶逆转录酶 c—myc bcl—2 细胞分化 Htert 酶活性 表达水平 白血病 药物治疗
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反义hTERT对胃癌细胞SGC7901 VEGF及其受体表达的影响 被引量：6
9
作者 司艺玲 韩为东 +3 位作者 赵亚力 宋海静 李琦 郝好杰 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1061-1063,共3页
目的研究反义hTERT对胃癌细胞SGC7901VEGF及其受体表达的影响,探讨其对肿瘤发展和转移的影响。方法以端粒酶逆转录酶组分hTERTcDNA为模板构建反义hTERT逆转录病毒表达载体,包装重组逆转录病毒后感染胃癌SGC7901细胞,用半定量RTPCR检测... 目的研究反义hTERT对胃癌细胞SGC7901VEGF及其受体表达的影响,探讨其对肿瘤发展和转移的影响。方法以端粒酶逆转录酶组分hTERTcDNA为模板构建反义hTERT逆转录病毒表达载体,包装重组逆转录病毒后感染胃癌SGC7901细胞,用半定量RTPCR检测基因转染前后VEGFC及其受体Flt4mRNA表达水平的变化,免疫组化法检测VEGFC、Flt4蛋白表达。结果反义hTERT稳定转染后SGC7901细胞VEGFC及其受体VEGFR3(Flt4)mRNA和蛋白表达均受到明显抑制。结论反义hTERT可有效抑制胃癌细胞VEGFC及其受体Flt4的表达,阻断肿瘤血管和淋巴途径转移。 展开更多
关键词 DNA 反义 人端粒酶逆转录酶 胃肿瘤 血管内皮生长因子类
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hTERT基因转染激活人毛乳头细胞端粒酶的实验研究 被引量：3
10
作者 刘官智 伍津津 +2 位作者 朱堂友 鲁元刚 杨桂红 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期69-71,共3页
目的:明确外源性人端粒酶反转录酶(hTERT)基因转染能否激活体外培养人毛乳头细胞(DPC)的端粒酶。方法:采用脂质体转染法,将空载体质粒pIRES2-EGFP和含有hTERT基因的质粒pIRES2-EGFP-hTERT分别导入体外培养的正常人DPC,经G418筛选得到阳... 目的:明确外源性人端粒酶反转录酶(hTERT)基因转染能否激活体外培养人毛乳头细胞(DPC)的端粒酶。方法:采用脂质体转染法,将空载体质粒pIRES2-EGFP和含有hTERT基因的质粒pIRES2-EGFP-hTERT分别导入体外培养的正常人DPC,经G418筛选得到阳性克隆,连续传代培养。应用反转录(RT)-PCR法检测hTERTmRNA的表达,端粒重复序列扩增(TRAP)-ELISA法检测细胞端粒酶活性。结果:未转染DPC和空载体转染细胞(DPC-EGFP)无hTERTmRNA表达,端粒酶活性为阴性;而外源性hTERT基因转染细胞(DPC-hTERT)稳定表达hTERTmRNA,同时端粒酶活性转为阳性。结论:外源性hTERT基因转染能够激活体外培养人DPC的端粒酶,为建立永生化细胞系奠定基础。 展开更多
关键词 毛乳头细胞 基因 Htert 端粒酶 人端粒酶反转录酶
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hTERT启动子调控下HSV-tk/GCV系统对人卵巢癌细胞系Skov3的杀伤作用 被引量：3
11
作者 宋悦 孔北华 +3 位作者 刘培淑 马道新 曲迅 江森 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期438-442,共5页
目的探讨hTERT启动子驱动下的HSV-tk/GCV系统对人卵巢癌细胞系Skov3的体外杀伤作用。方法应用分子生物学方法构建hTERT启动子调控下的tk基因真核表达载体pBTdel-279-tk,并应用脂质体转染法将之转入Skov3、正常人卵巢上皮细胞(NOEC)和人... 目的探讨hTERT启动子驱动下的HSV-tk/GCV系统对人卵巢癌细胞系Skov3的体外杀伤作用。方法应用分子生物学方法构建hTERT启动子调控下的tk基因真核表达载体pBTdel-279-tk,并应用脂质体转染法将之转入Skov3、正常人卵巢上皮细胞(NOEC)和人胚肺成纤维细胞中,加入GCV,用MTT法和流式细胞术检测pBTdel-279-tk/GCV系统对各种细胞的杀伤作用;应用RT-PCR法检测pcDNA3-tk和pBTdel-279-tk转染前后卵巢癌细胞和正常细胞中tk基因的表达情况。结果pBTdel-279-tk/GCV对端粒酶阳性的卵巢癌细胞有明显的杀伤作用,而对端粒酶阴性的正常细胞则无;hTERT启动子系统诱导卵巢癌细胞凋亡的效能与CMV启动子近似,两者差别无显著性意义。pcDNA3-tk转染后,在Skov3细胞和NOEC中均可探测到tk基因;而pBTdel-279-tk转染后只有Skov3可探测到tk基因,NOEC中则无。结论hTERT启动子调控下的tk基因治疗是一种新的卵巢癌靶向治疗方法,具有更高的特异性和高效性。 展开更多
关键词 卵巢癌 启动子 端粒酶 逆转录酶 胸苷激酶
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正、反义hTERT基因真核表达载体的构建与鉴定 被引量：6
12
作者 孙来保 李成荣 +1 位作者 文剑明 张萌 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第9期899-902,共4页
目的构建正、反义hTERT基因真核表达载体,为进一步研究端粒酶的活性调节与恶性肿瘤基因治疗作准备。方法根据已发表在Genebank的hTERT cDNA序列,设计并合成了1对两端带特定限制性酶切位点引物,提取子宫颈癌HeLa细胞株总RNA,进行RT-PCR,... 目的构建正、反义hTERT基因真核表达载体,为进一步研究端粒酶的活性调节与恶性肿瘤基因治疗作准备。方法根据已发表在Genebank的hTERT cDNA序列,设计并合成了1对两端带特定限制性酶切位点引物,提取子宫颈癌HeLa细胞株总RNA,进行RT-PCR,并将扩增产物TA首先克隆至pGEMR-T载体,然后双酶切pGEM-T载体回收目的片段再克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(±)中,并对重组体进行酶切鉴定和测序分析。结果PCR扩增片段与预期结果相符,双酶切证实构建的正、反义hTERT基因真核表达载体克隆成功,插入片段测序结果与Genebank的hTERT cDNA的部分序列完全一致。结论成功地构建了正、反义hTERT基因真核表达载体,为下一步研究端粒酶的活性调节与恶性肿瘤基因治疗打下了实验基础。 展开更多
关键词 恶性肿瘤 Htert基因 真核表达载体 构建 鉴定 基因治疗
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RNA干扰hTERT基因治疗喉鳞状细胞癌的实验研究 被引量：7
13
作者 刘丹 陶泽璋 +1 位作者 陈始明 肖伯奎 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2005年第20期1182-1186,共5页
目的:探讨RNA干扰hTERT(人端粒酶逆转录酶)基因对人喉鳞状细胞癌的治疗作用。方法:根据hTERTcDNA序列构建表达hTERTmRNA特异的、含荧光素基因的shRNA真核表达质粒pshRNA1、pshRNA2。将shRNA质粒分别转染人喉癌Hep-2细胞株及荷瘤裸鼠瘤... 目的:探讨RNA干扰hTERT(人端粒酶逆转录酶)基因对人喉鳞状细胞癌的治疗作用。方法:根据hTERTcDNA序列构建表达hTERTmRNA特异的、含荧光素基因的shRNA真核表达质粒pshRNA1、pshRNA2。将shRNA质粒分别转染人喉癌Hep-2细胞株及荷瘤裸鼠瘤体内。以激光共聚焦显微镜观察质粒在Hep-2细胞及瘤体内的表达;以MTT法观察质粒对Hep-2细胞增殖的抑制作用;以蛋白印迹法(Westernblot法)检测Hep-2细胞中hTERT蛋白的表达;以免疫组化SP法检测裸鼠瘤体内hTERT蛋白的表达。结果:pshRNA1、pshRNA2转染Hep-2细胞及pshRNA1转染瘤体后,共聚焦显微镜下见大量的癌细胞表达绿色荧光,hTERT蛋白表达明显下降。细胞受pshRNA1、pshRNA2转染后,其生长活性受到明显抑制。体内抑瘤实验表明,与空质粒载体组(pshRNA4)和生理盐水组相比,pshRNA1组移植瘤生长明显受到抑制。结论:表达shRNA的、hTERT基因特异的真核表达质粒能有效转染体内、外喉鳞癌细胞,并可有效抑制人喉鳞癌细胞的生长,为今后应用RNA干扰基因治疗喉癌提供重要的实验参考。 展开更多
关键词 Htert RNAI 头颈部肿瘤 癌 鳞状细胞 基因治疗
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BRAF V600E和TERT启动子突变与甲状腺乳头状癌临床病理特征的关系 被引量：9
14
作者 王旭红 彭琛 +1 位作者 李乐 秦彦超 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期557-562,共6页
目的:探讨端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)启动子突变和BRAF V600E突变与甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)临床病理因素的关系。方法:对2014年12月至2016年12月山西省肿瘤医院728例PTC患者肿瘤... 目的:探讨端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)启动子突变和BRAF V600E突变与甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)临床病理因素的关系。方法:对2014年12月至2016年12月山西省肿瘤医院728例PTC患者肿瘤组织提取DNA,检测其BRAF V600E和TERT启动子突变情况,收集患者临床病理资料,进行统计学分析。结果:728例患者中BRAF V600E突变型308例(42.3%)。TERT C228T突变型78例(10.7%),TERT C250T突变型4例(0.5%)。TERT启动子突变与患者发病年龄(P=0.034)、腺外侵犯(P=0.026)、肿瘤直径(P=0.028)、中央区淋巴结转移(P=0.012)、远处转移(P=0.001)、TNM分期(P<0.001)、病理亚型(P=0.003)以及肿瘤复发(P=0.002)显著相关。BRAF V600E突变与PTC患者的腺外侵犯(P=0.001)、肿瘤直径(P<0.001)、桥本甲状腺炎(P<0.001)、远处转移(P=0.010)、TNM分期(P=0.009)和肿瘤复发(P=0.001)显著相关。同时伴有BRAF V600E和TERT启动子突变与发病年龄(P=0.024)、腺外侵犯(P=0.022)、合并桥本甲状腺炎(P=0.005)、中央区淋巴结转移(P=0.018)及更高临床分期(P=0.002)显著相关。结论:BRAF V600E和TERT启动子突变与高侵袭性的临床病理因素相关,BRAF V600E和TERT存在协同作用,对于指导治疗和评估预后具有积极作用。 展开更多
关键词 甲状腺乳头状癌 BRAF V600E tert
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PCNA、p53和hTERT在口腔黏膜癌前病变和鳞癌中的表达及意义 被引量：8
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作者 吴国英 朱玲 +1 位作者 冯振卿 彭韬 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2005年第3期256-258,共3页
目的:探讨PCNA、p53蛋白和hTERT在口腔黏膜癌前病变和鳞癌组织中的表达及临床意义。方法:采用原位杂交和免疫组化技术检测口腔黏膜单纯增生(HP)9例,轻度异常增生(LD)11例,中度异常增生(MD)10例,重度异常增生(原位癌CIS)9例,鳞癌(SCC)11... 目的:探讨PCNA、p53蛋白和hTERT在口腔黏膜癌前病变和鳞癌组织中的表达及临床意义。方法:采用原位杂交和免疫组化技术检测口腔黏膜单纯增生(HP)9例,轻度异常增生(LD)11例,中度异常增生(MD)10例,重度异常增生(原位癌CIS)9例,鳞癌(SCC)11例中p53蛋白、PCNA和hTERTmRNA的表达。结果:PCNA、p53和hTERT在口腔黏膜癌前病变和鳞癌中均有表达的异常。结论:hTERT、PCNA和p53与口腔黏膜癌前病变癌变的发生发展有关,它们的异常表达有助于口腔黏膜癌前病变和鳞癌的早期诊断,为研究癌前病变癌变的发生提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 癌前病变 鳞癌 端粒酶逆转录酶 增殖细胞核抗原 P53
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胃癌细胞株hTERT基因启动子区甲基化分析 被引量：3
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作者 程永波 房殿春 +1 位作者 杨海捷 罗元辉 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期187-189,共3页
目的检测人端粒酶反转录酶(hTERT)基因启动子区甲基化状态。方法采用TRAP法检测细胞端粒酶活性,免疫荧光法观察hTERT表达;选择hTERT启动子中-692～-403bp共290bp为靶序列,采取亚硫酸氢钠修饰和测序法(BSP)检测2种胃癌细胞株中靶序列甲... 目的检测人端粒酶反转录酶(hTERT)基因启动子区甲基化状态。方法采用TRAP法检测细胞端粒酶活性,免疫荧光法观察hTERT表达;选择hTERT启动子中-692～-403bp共290bp为靶序列,采取亚硫酸氢钠修饰和测序法(BSP)检测2种胃癌细胞株中靶序列甲基化状态并作分析。结果端粒酶和hTERT在SGC-7901和BGC-823胃癌细胞株中都有表达;PCR扩增产物测序测出-634～-403bp共232bp,经比对与亚硫酸氢钠转化前源序列对应良好,此序列段26个CpG胞嘧啶中,BGC-823细胞株有25个发生甲基化,SGC-7901细胞株全部发生甲基化,经检索此序列段含2个MZF-2结合域即2个锌指基序,但仅可结合MZF-2一个转录调节因子。结论高甲基化改变了DNA的空间结构可能是hTERT启动子高甲基化上调hTERT表达的原因之一,从而阻断了MZF-2与锌指基序的结合。 展开更多
关键词 人端粒酶反转录酶 甲基化 MZF-2
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hTERT永生化细胞的研究进展及应用前景 被引量：4
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作者 张敏 陈小云 +3 位作者 王磊 王栋 蒋桃珍 王静文 《中国兽药杂志》 北大核心 2015年第2期58-62,共5页
人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)诱导的永生化细胞兼具原代细胞的生物学特性和传代细胞系连续传代的能力,是一种理想的细胞来源,在基础研究、临床应用和生物工程领域具有无可比拟的优势。本文主要就hTERT永生化细胞的研究进展及应用前景作... 人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)诱导的永生化细胞兼具原代细胞的生物学特性和传代细胞系连续传代的能力,是一种理想的细胞来源,在基础研究、临床应用和生物工程领域具有无可比拟的优势。本文主要就hTERT永生化细胞的研究进展及应用前景作一综述。 展开更多
关键词 永生化 端粒 端粒酶 人端粒酶逆转录酶基因(htert)
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hTERT核心启动子调控的hNIS重组腺病毒的构建与鉴定 被引量：3
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作者 张俊 王爱东 +4 位作者 申咏梅 石怡珍 崔学军 刘增礼 欧阳松应 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期549-553,共5页
目的:构建含人端粒酶逆转录酶(hTERT)核心启动子调控的人钠碘转运体(hNIS)基因重组腺病毒,并初步鉴定。方法:将hTERT核心启动子从hTERT/pcDNA3.1(+)质粒中切出,亚克隆至含全长hNIS cDNA序列的质粒载体FL*-hNIS/pcDNA3,应用限制性内切酶... 目的:构建含人端粒酶逆转录酶(hTERT)核心启动子调控的人钠碘转运体(hNIS)基因重组腺病毒,并初步鉴定。方法:将hTERT核心启动子从hTERT/pcDNA3.1(+)质粒中切出,亚克隆至含全长hNIS cDNA序列的质粒载体FL*-hNIS/pcDNA3,应用限制性内切酶将hTERT-hNIS片段切出后连入穿梭质粒载体pAdTrack,应用AdEasy系统构建出重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS。同时,构建CMV启动子调控的hNIS重组腺病毒Ad-CMV-hNIS作为阳性对照。应用RT-PCR方法验证hTERT在转染肿瘤细胞中的转录活性。结果:成功构建重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS、Ad-CMV-hNIS并经PCR验证正确。RT-PCR证实hNIScDNA能从Ad-hTERT-hNIS转染的细胞中扩增出来。结论:成功构建重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS;hTERT核心启动子在转染的肺癌A549细胞中具有转录活性。为下一步的碘治疗实验提供了实验依据。 展开更多
关键词 钠碘转运体(hNIS) 端粒酶逆转录酶(htert) 重组腺病毒 核心启动子
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清毒片和hTERT反义核酸对HL-60细胞增殖及凋亡的协同作用 被引量：4
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作者 李宏良 曾荣香 +4 位作者 陈鹏 丘和明 余寿益 黄小青 陈学彰 《辽宁中医杂志》 CAS 北大核心 2010年第3期395-398,共4页
目的:探讨清毒片联合端粒酶逆转录酶反义核酸(hTERT ASODN)对HL-60细胞增殖及凋亡的影响。方法:体外培养HL-60细胞,分别加入清毒片、hTERT ASODN、清毒片加hTERT ASODN,取培养24、48、72h的细胞,采用四唑盐比色(MTT)法检测细胞增殖、Ann... 目的:探讨清毒片联合端粒酶逆转录酶反义核酸(hTERT ASODN)对HL-60细胞增殖及凋亡的影响。方法:体外培养HL-60细胞,分别加入清毒片、hTERT ASODN、清毒片加hTERT ASODN,取培养24、48、72h的细胞,采用四唑盐比色(MTT)法检测细胞增殖、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡。以加入阿糖胞苷组为阳性对照,未处理的细胞为空白对照。结果:清毒片、hTERT ASODN(0.5μmol/L)、阿糖胞苷(10μmol/L)均能抑制HL-60细胞增殖、诱导细胞凋亡,其作用随着培养时间的延长增强;HL-60细胞增殖抑制率及诱导凋亡率从高到低依次为:阿糖胞苷组>清毒片加hTERT ASODN组>hTERT ASODN组>清毒片组;清毒片加hTERT ASODN对HL-60细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用明显高于单独使用清毒片或hTERT ASODN(P<0.05)。结论:清毒片与hTERT ASODN联合对于抑制HL-60细胞增殖及诱导凋亡具有协同效应。 展开更多
关键词 清毒片 端粒酶逆转录酶反义核酸 HL-60细胞
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自然衰老大鼠骨组织中TERT变化与骨衰老相关性的研究 被引量：2
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作者 林煜 张怡元 +3 位作者 黄云梅 吴银生 肖莉莉 林燕萍 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1429-1435,共7页
目的探讨在衰老过程中骨组织的端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)及其相关因子随增龄的变化情况。方法 6月龄、10月龄、13月龄、18月龄SD大鼠各20只(雌雄各半),取左侧完整股骨按组别、性别排列整齐,Discovery Wi双... 目的探讨在衰老过程中骨组织的端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)及其相关因子随增龄的变化情况。方法 6月龄、10月龄、13月龄、18月龄SD大鼠各20只(雌雄各半),取左侧完整股骨按组别、性别排列整齐,Discovery Wi双能X线骨密度仪测定股骨BMD,采用东芝800MA平板DR摄片机进行X线摄片。取大鼠右侧股骨近端骨组织行HE染色及图像分析。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中的骨钙素(osteocalcin,BGP)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(tartrateresistant acid phosphatse 5b TRACP5b)、雌二醇(estradiol,E2)、睾酮(testosterone,T)含量。采用实时荧光定量SYBR GREEN法检测第1腰椎中TERT、雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)、mRNA表达。采用Western Blot检测第2腰椎TERT、ERα蛋白的表达。结果 ELISA法检测结果显示大鼠血清中BGP、E2、T水平均随着月龄增大逐渐降低,TRACP5b水平均随着月龄增大逐渐升高(P<0.05);骨组织中ERα、TERT的mRNA与蛋白表达均随月龄的增长而降低,各组间比较有显著性差异(P<0.05)。骨密度检测结果显示:雌性大鼠股骨BMD随着月龄增大呈下降态势,且除6月龄外其他月龄雌性均低于同期雄性组(P<0.05)。雄性BMD均值随着月龄增大呈下降态势,但6月龄与10月龄相比、13月龄与18月龄相比无统计学意义(P>0.05)。HE染色结果显示6月龄组股骨头骨小梁宽厚且量多稠密,分布均匀,排列规则,相互之间连成网状,未见有骨小梁中断;10月龄之后,骨小梁相对细小,小梁间距较宽,但排列整齐,且雌性较雄性更为明显,13月龄及18月龄组随着月龄增大骨小梁更加纤细,分布稀疏散乱,骨小梁中断多见,小梁间距增大,甚至出现典型骨质疏松松质骨的病理形态改变,且雌性较雄性更为明显。结论大鼠在增龄过程中,体内性激素水平下降的同时,骨组织内TERT转录水平降低,端粒酶活性下降,使骨组织中骨形成功能衰退,骨形成低于骨吸收,从而导致骨衰老。 展开更多
关键词 大鼠 骨 端粒酶逆转录酶 衰老
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