花粉介导法将TaPHR1∷GFP融合蛋白基因导入玉米 被引量：6

1

作者 王秀红 白建荣 +3 位作者 孙毅 刘惠民 史向远 任志强 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1732-1737,共6页

利用超声波辅助花粉介导基因转化法,将小麦耐低磷调控基因TaPHR1和GFP构建成的融合蛋白基因(TaPHR1∷GFP)导入3个玉米自交系郑58、昌7-2和PH6WC中.结果表明:3个自交系的转化效果存在基因型差异,郑58是很好的转化受体材料,平均结籽穗率... 利用超声波辅助花粉介导基因转化法,将小麦耐低磷调控基因TaPHR1和GFP构建成的融合蛋白基因(TaPHR1∷GFP)导入3个玉米自交系郑58、昌7-2和PH6WC中.结果表明:3个自交系的转化效果存在基因型差异,郑58是很好的转化受体材料,平均结籽穗率、每穗平均结籽数、BASTA除草剂抗性和转基因植株PCR阳性率均优于昌7-2和PH6W;对T1代植株进行Southern杂交表明,TaPHR1∷GFP融合蛋白基因已整合到玉米基因组中;RT-PCR结果显示,TaPHR1∷GFP融合蛋白基因得到有效转录;通过对发芽籽粒进行GFP荧光观察表明,TaPHR1∷GFP融合蛋白基因得到了表达. 展开更多

关键词 玉米自交系 花粉介导转基因法 taphr1∷gfp融合蛋白基因 gfp(绿色荧光蛋白)

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RPE细胞光损伤相关新基因s-lap编码区克隆及s-lap/GFP融合蛋白在B16黑色素瘤细胞中的表达与定位 被引量：1

2

作者 宋忆淑 李玉新 +2 位作者 费向东 鲍永利 谭大鹏 《眼科新进展》 CAS 2005年第1期11-13,共3页

目的　克隆新基因s lap编码区序列 ,研究其编码的蛋白质在B16黑色素瘤细胞内的表达与定位。方法　分析s lapcDNA序列 ,建立视网膜色素上皮 (retinalpigmentep ithelium ,RPE)细胞光损伤模型 ,RT PCR克隆其编码区序列 ,构建了带有绿色荧... 目的　克隆新基因s lap编码区序列 ,研究其编码的蛋白质在B16黑色素瘤细胞内的表达与定位。方法　分析s lapcDNA序列 ,建立视网膜色素上皮 (retinalpigmentep ithelium ,RPE)细胞光损伤模型 ,RT PCR克隆其编码区序列 ,构建了带有绿色荧光蛋白的目的基因真核表达重组质粒 pcDNA3 .1 GFP/s lap ,转染B16黑色素瘤细胞 ,观察s lap/GFP融合蛋白在B16黑色素瘤细胞内的表达与定位。结果　s lapcDNA序列含有编码10 1个氨基酸的开放读码框架 ,有 2个可能的N 糖基化位点 ,1个可能的caseinkinaseII磷酸化位点和 2个可能的PKC磷酸化位点 ;成功地克隆了s lap蛋白编码区序列 ,构建了其真核表达载体 ,荧光显微镜观察 ,在转染 pcDNA3 .1 GFP质粒的B16黑色素瘤细胞中 ,荧光呈网状分布于细胞浆内 ,而细胞核内低表达 ;在转染s lap/GFP融合基因的B16黑色素瘤细胞中 ,荧光均匀分布于整个细胞 ,尤其以细胞核内高表达。结论　新基因s lap编码的蛋白质可在B16黑色素瘤细胞中获得表达 ,并以细胞核内高表达。 展开更多

关键词 s-lap基因 克隆 s-lap/gfp 融合蛋白 基因表达 基因定位

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静脉注射41BBLGFP融合表达质粒体内表达及其生物学活性

3

作者 邱惠 张桂梅 +3 位作者 张慧 袁野 李东 冯作化 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期482-487,共6页

通过RTPCR方法扩增小鼠41BBLcDNA,以pEGFPN1为载体,构建融合蛋白41BBLGFP重组表达质粒p41BBLGFP.采用基于流体力学原理建立的裸DNA体内转染技术,从小鼠尾静脉快速(15s)注射质粒p41BBLGFP进行体内转染.荧光显微镜观察组织切片,见小鼠肝... 通过RTPCR方法扩增小鼠41BBLcDNA,以pEGFPN1为载体,构建融合蛋白41BBLGFP重组表达质粒p41BBLGFP.采用基于流体力学原理建立的裸DNA体内转染技术,从小鼠尾静脉快速(15s)注射质粒p41BBLGFP进行体内转染.荧光显微镜观察组织切片,见小鼠肝、脾、肾及肺中均有报告基因GFP表达,尤以肝细胞中荧光最强.进一步用Western印迹和免疫组织化学染色法确定肝细胞表面表达41BBL,用Hsp70H22细胞抗原肽皮下免疫小鼠,同时尾静脉注射质粒p41BBLGFP,检测血清中IL2和IFNγ的分泌.结果显示,质粒注射联合免疫组小鼠血清IL2和IFNγ的浓度分别较生理盐水对照组增加了3倍和4倍;脾细胞对H22细胞的杀伤率则由单独免疫组的45.74%±3.27%增至86.74%±9.36%.结果表明,体内(主要在肝脏)转染质粒p41BBLGFP可以成功表达,表达产物具有41BBL的生物学活性,为进一步研究体内转染41BBL用于基因治疗奠定了基础. 展开更多

关键词 4-1 BBL gfp 融合蛋白 静脉注射 体内表达

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蛋白激酶全抑制分析揭示KG-1细胞增殖的分子机制

4

作者 段毓 徐凝馨 +6 位作者 曹琼 杨恺 王金娟 刘思瑾 贾峰峰 刘建兵 李莉 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期621-628,共8页

目的:通过分析KG-1细胞对各种蛋白激酶抑制剂的反应,探讨其增殖的分子机制。方法:采用CCK-8法、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western-blot检测各种蛋白激酶抑制剂对KG-1细胞增殖、相关基因mRNA表达水平以及FGFR1下游信号通路蛋白磷酸化... 目的:通过分析KG-1细胞对各种蛋白激酶抑制剂的反应,探讨其增殖的分子机制。方法:采用CCK-8法、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western-blot检测各种蛋白激酶抑制剂对KG-1细胞增殖、相关基因mRNA表达水平以及FGFR1下游信号通路蛋白磷酸化水平的影响。结果:NVP-BGJ398和PD173074有效抑制KG-1细胞的增殖,表明FGFR及其下游信号通路在KG-1细胞增殖过程中具有关键作用。使用FGFR抑制剂处理后,p-FGFR1和p-STAT5水平显著下降(P<0.001),p-Akt水平稍有下降(P<0.05),并未影响p-ERK水平(P>0.05)。结论:FGFR1OP2-FGFR1主要作用于下游STAT5信号通路,以促进细胞增殖。蛋白激酶全抑制分析是一种可靠而直接的方法,可用于确定癌细胞增殖的分子机制。 展开更多

关键词 KG-1细胞 蛋白激酶抑制剂 FGFR1OP2-FGFR1融合基因 STAT5

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胸腺素α_1 基因的克隆表达及其生物活性 被引量：16

5

作者 石继红 张英起 +4 位作者 赵永同 赵宁 朱宝娥 颜真 韩苇 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期344-349,共6页

胸腺素α1(thymosinalpha 1 ,Tα1)作为一种免疫增强剂 ,临床用途广泛 .为大量制备Tα1,按大肠杆菌惯用密码子合成Tα1基因 ,克隆于质粒pUC1 9的EcoRⅠ和PstⅠ位点 .经测序证明序列正确后 ,串联为 4串体 (Tα1④ ) ,经再次测序确认后克... 胸腺素α1(thymosinalpha 1 ,Tα1)作为一种免疫增强剂 ,临床用途广泛 .为大量制备Tα1,按大肠杆菌惯用密码子合成Tα1基因 ,克隆于质粒pUC1 9的EcoRⅠ和PstⅠ位点 .经测序证明序列正确后 ,串联为 4串体 (Tα1④ ) ,经再次测序确认后克隆入pThioHisA的EcoRⅠ和PstⅠ位点 .转化大肠杆菌T0P1 0 ,酶切鉴定正确后 ,经 1mmol LIPTG诱导 4h ,获得硫氧还蛋白与Tα1④的融合表达 ,用离子交换层析纯化融合蛋白 .溴化氰裂解融合蛋白 ,释放出Tα1单体 ,经离子交换色谱纯化出Tα1.采用3 H TdR参入法进行生物活性测定 ,证实融合蛋白和Tα1均具有刺激小鼠脾淋巴细胞分裂增殖的能力 . 展开更多

关键词 胸腺素Α1 基因克隆 融合表达 蛋白质纯化 生物活性

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高密度培养大肠杆菌表达重组人胰高血糖素样肽-1 被引量：4

6

作者 张志珍 毛积芳 +1 位作者 杨生生 窦鸿 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期254-256,共3页

目的 :高密度发酵培养表达重组人胰高血糖素样肽 - 1( h GL P- 1)。方法 :将构建的重组质粒 p GEX- h GL P- 1转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3 ) ,得到表达 h GL P- 1的工程菌株 E.coli BL 2 1( DE3 ) / p GEX- h GL P- 1。在 5 0 0 m l三角... 目的 :高密度发酵培养表达重组人胰高血糖素样肽 - 1( h GL P- 1)。方法 :将构建的重组质粒 p GEX- h GL P- 1转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3 ) ,得到表达 h GL P- 1的工程菌株 E.coli BL 2 1( DE3 ) / p GEX- h GL P- 1。在 5 0 0 m l三角摇瓶中进行了诱导条件的摸索实验 ,之后用 5 L自控发酵罐对工程菌进行高密度培养 ,以获取 h GL P- 1和谷胱甘肽 S-转移酶融合蛋白 ( GST- h GL P- 1)。结果 :采用分批培养和补料分批培养相结合的技术 ,控制碳源和氮源的补加 ,控制溶解氧的量 ,可使重组工程菌发酵光密度D6 0 0 值达 5 2 ,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白量的 2 8% ,其含量达到 2 .1g/ L。用 ESI质谱鉴定 h GL P- 1相对分子质量与理论值一致。 结论 :本研究为大规模生产重组 h GL P- 展开更多

关键词 高密度培养 人胰高血糖素样肽-1 基因表达 融合蛋白质类 大肠杆菌 强降血糖肽

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人单核细胞趋化蛋白1基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：2

7

作者 王汉涛 郭葆玉 +3 位作者 屠岳 王元和 张淑英 孟荣贵 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期318-321,共4页

目的：克隆表达具有重要生物功能的人单核细胞趋化蛋白１（ｈｕＭＣＰ－１）。方法：从人外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）中提取 ｐｏｌｙ（Ａ）~＋ ＲＮＡ，用 ＲＴ－ＰＣＲ法扩增出 ｈｕＭＣＰ－１ｃＤＮＡ。将 ｈｕＭＣＰ－１ｃＤＮＡ插... 目的：克隆表达具有重要生物功能的人单核细胞趋化蛋白１（ｈｕＭＣＰ－１）。方法：从人外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）中提取 ｐｏｌｙ（Ａ）~＋ ＲＮＡ，用 ＲＴ－ＰＣＲ法扩增出 ｈｕＭＣＰ－１ｃＤＮＡ。将 ｈｕＭＣＰ－１ｃＤＮＡ插入融合表达载体 ｐＧＥＸＩＮ， １ｍｍｏｌ／Ｌ异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导后获得高效表达。结果： Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证明与 ｈｕＭＣＰ－１单克隆抗体有明显交叉反应。结论：ｈｕＭＣＰ－１基因的克隆并表达成功为今后的实验室和临床研究提供了有用的材料。 展开更多

关键词 基因克隆 融合表达 单核细胞趋化蛋白 huMCP-1

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s-lap/GFP融合蛋白在Hela细胞中的表达与定位 被引量：1

8

作者 宋忆淑 宋志宇 +2 位作者 费向东 贺冰 李玉新 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期39-41,共3页

目的 :观察 s- lap/ GFP融合蛋白在 Hela细胞中的表达及定位。方法 :根据 s- lap基因的编码区序列 ,应用 PCR技术突变其 3′末端终止密码子 ,并通过基因重组技术将其与 GFP基因融合 ,构建 s- lap/ GFP重组质粒 ;采用脂质体转染法 ,将 s-... 目的 :观察 s- lap/ GFP融合蛋白在 Hela细胞中的表达及定位。方法 :根据 s- lap基因的编码区序列 ,应用 PCR技术突变其 3′末端终止密码子 ,并通过基因重组技术将其与 GFP基因融合 ,构建 s- lap/ GFP重组质粒 ;采用脂质体转染法 ,将 s- lap/ GFP融合基因转入 Hela细胞中 ,用荧光显微镜观察其表达。结果 :s- lap/ GFP重组质粒序列测定的结果与预期设计完全一致。荧光显微镜显示 ,在转染 GFP基因的 Hela细胞中 ,荧光呈网状均匀分布于细胞浆内 ,而细胞核内低表达 ;在转染 s- lap/ GFP融合基因的 Hela细胞中 ,荧光均匀分布于整个细胞 ,尤其以细胞核内高表达。结论 :s- lap/ GFP融合蛋白可在人 Hela细胞中表达 ,并主要定位于细胞核。 展开更多

关键词 s-lap/gfp融合蛋白 重组融合蛋白质类/遗传学 基因融合/方法 HELA细胞

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趋化因子MIP-1α和MCP-1及其受体CCR-1和CCR-2在慢性髓系白血病细胞中的表达 被引量：2

9

作者 王伟良 沈悌 +2 位作者 惠玉荣 顾惜春 李蓉生 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期433-436,共4页

本文旨在研究MIP-1α和MCP-1及其受体CCR-1和CCR-2在慢性髓系白血病细胞中的表达,同时观察P210bcr/abl融合蛋白中酪氨酸激酶对MIP-1α和MCP-1及其受体CCR-1和CCR-2mRNA表达的影响。在bcr/abl融合基因阴性和阳性慢性髓系白血病细胞中,采... 本文旨在研究MIP-1α和MCP-1及其受体CCR-1和CCR-2在慢性髓系白血病细胞中的表达,同时观察P210bcr/abl融合蛋白中酪氨酸激酶对MIP-1α和MCP-1及其受体CCR-1和CCR-2mRNA表达的影响。在bcr/abl融合基因阴性和阳性慢性髓系白血病细胞中,采用半定量RT-PCR方法检测MIP-1α、MCP-1、CCR-1、CCR-2mRNA的表达水平。结果表明MIP-1αmRNA和CCR-1mRNA在bcr/abl融合基因阳性细胞中不表达,但在bcr/abl融合基因阴性细胞中表达,而MCP-1mRNA和CCR-2mRNA在bcr/abl融合基因阳性和阴性细胞中均不表达。当P210bcr/abl融合蛋白中酪氨酸激酶被抑制后,MIP-1α和CCR-1的mRNA表达水平恢复至正常水平。结论:P210bcr/abl融合蛋白抑制慢性髓系白血病细胞中MIP-1α和CCR-1mRNA的表达,但对MCP-1和CCR-2mRNA的表达无影响。 展开更多

关键词 慢性髓系白血病 BCR/ABL融合基因 P210bcr/abl融合蛋白 MIP-1Α CCR-1 MCP-1 CCR-2

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用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达GFP与HCV抗原融合蛋白 被引量：2

10

作者 王业富 齐义鹏 +2 位作者 岳莉莉 杜全胜 邓小昭 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第2期134-139,共6页

用细菌／杆状病毒（Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ）系统在昆虫细胞中高效表达了绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）与ＨＣＶ抗原的双功能融合蛋白，经ＥＬＩＳＡ测定和荧光显微镜观查证实，表达产物既能发射易于检测的绿色荧光，又具有ＨＣＶ的抗原活性，... 用细菌／杆状病毒（Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ）系统在昆虫细胞中高效表达了绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）与ＨＣＶ抗原的双功能融合蛋白，经ＥＬＩＳＡ测定和荧光显微镜观查证实，表达产物既能发射易于检测的绿色荧光，又具有ＨＣＶ的抗原活性，实现了用绿色荧光蛋白等分子标记抗原，为免疫诊断新方法的建立打下了理论基础． 展开更多

关键词 HCV 核心蛋白 基因 绿色荧光蛋白 抗原融合蛋白

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以融合蛋白形式在大肠杆菌中表达人MCP－1 被引量：2

11

作者 叶棋浓 苏国富 +1 位作者 徐永强 黄翠芬 《生物化学杂志》 CSCD 1995年第2期146-149,共4页

将编码人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体ｐＥＸ３１Ａ中，在大肠杆菌中表达出ＭＳ２／ＭＣＰ－１融合蛋０白，该表达产物约占菌体总蛋白的１５％左右，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表明，表达产物可... 将编码人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体ｐＥＸ３１Ａ中，在大肠杆菌中表达出ＭＳ２／ＭＣＰ－１融合蛋０白，该表达产物约占菌体总蛋白的１５％左右，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表明，表达产物可与ＭＣＰ－１抗体特异反应。采用琼脂糖平板法进行活性测定表明，表达产物具有明显的单核细胞趋化活性，说明Ｎ端融合一段细菌蛋白对ＭＣＰ－１有无趋化活性可能没有影响。 展开更多

关键词 人 单核细胞 趋化蛋白-1 融合蛋白 基因表达

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ST_1肠毒素基因的合成、克隆及其融合蛋白的高效表达 被引量：1

12

作者 刘兴汉 王莉林 +1 位作者 张绍杰 初晓白 《中国畜禽传染病》 CSCD 1998年第4期221-222,共2页

用ＤＮＡ合成仪合成了编码ＳＴ１肠毒素第５８到７２位氨基酸残基的ＤＮＡ片段，并将其与表达融合蛋白的载体ＰＧＥＭＥＸ－１重组，转化受体菌ＪＭ１０９（ＤＥ－３）。筛选出的重组克隆经过１ＰＴＧ４小时诱导，ＳＴ１融合蛋白的产量... 用ＤＮＡ合成仪合成了编码ＳＴ１肠毒素第５８到７２位氨基酸残基的ＤＮＡ片段，并将其与表达融合蛋白的载体ＰＧＥＭＥＸ－１重组，转化受体菌ＪＭ１０９（ＤＥ－３）。筛选出的重组克隆经过１ＰＴＧ４小时诱导，ＳＴ１融合蛋白的产量超过超过细菌蛋白总量的４０％，最高达５９．９％。 展开更多

关键词 ST1肠毒素 基因重组 融合蛋白 高效表达

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GLP-1-Fc融合蛋白在DG44细胞中的表达及其质量分析 被引量：2

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作者 骆海燕 谭婉珑 +1 位作者 张亚楠 洪厚胜 《南京工业大学学报（自然科学版）》 北大核心 2017年第6期74-81,共8页

构建GLP-1-Fc蛋白真核表达载体,并在DG44细胞株中实现表达。利用基因工程等方法构建表达GLP-1-Fc融合蛋白的重组DG44细胞株,通过甲氨喋呤的加压筛选及有限稀释法挑选出表达量较高的单克隆细胞株,经无血清驯化培养获得悬浮生长的细胞株... 构建GLP-1-Fc蛋白真核表达载体,并在DG44细胞株中实现表达。利用基因工程等方法构建表达GLP-1-Fc融合蛋白的重组DG44细胞株,通过甲氨喋呤的加压筛选及有限稀释法挑选出表达量较高的单克隆细胞株,经无血清驯化培养获得悬浮生长的细胞株。收集发酵培养上清,通过离心、过滤及亲和层析等方法对目的蛋白GLP-1-Fc进行分离纯化,并利用Dot blot、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、高效液相色谱法、Edman降解等方法进行目的蛋白的质量分析,以建立GLP-1-Fc融合蛋白发酵、纯化工艺,探索该融合蛋白的质量检测方法。本实验成功构建了表达GLP-1-Fc融合蛋白的重组DG44悬浮型细胞株,通过该工艺流程,GLP-1-Fc融合蛋白表达量达到400 mg/L,纯度达95%,分子量约为3.0×10~4。该生产工艺能够获得与理论目标蛋白相一致的、且结构稳定GLP-1-Fc融合蛋白,其质量检测方法稳定可靠。 展开更多

关键词 胰高血糖素样肽-1 FC融合蛋白 DG44细胞株 基因表达

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hHT/GFP融合基因表达载体的构建及在小鼠成纤维细胞中的表达

14

作者 郭战军 马毅 +5 位作者 张钥 李三华 王广友 杨慧祥 孙光 乔宝民 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期25-28,共4页

为探讨超急排斥反应(hyperacute rejection,HAR)及延迟性异种排斥反应(delayed xenograft rejec-tion,DXR)分子调控机制,进行-α1,2岩藻糖苷转移酶基因(hHT)与绿色荧光蛋白基因(green fluorescent protein,GFP)融合表达载体pEGFP-C1-hH... 为探讨超急排斥反应(hyperacute rejection,HAR)及延迟性异种排斥反应(delayed xenograft rejec-tion,DXR)分子调控机制,进行-α1,2岩藻糖苷转移酶基因(hHT)与绿色荧光蛋白基因(green fluorescent protein,GFP)融合表达载体pEGFP-C1-hHT的构建及在小鼠成纤维细胞表达的研究。采用脂质体法转染小鼠成纤维细胞48 h后观察到GFP阳性细胞。同时对GFP阳性小鼠成纤维细胞进行PCR及Western blot,检测hHT基因的整合及表达情况。PCR结果表明hHT基因整合入小鼠基因组,Western blot检测到hHT基因的表达。研究结果表明,成功克隆hHT基因并构建了融合表达载体pEGFP-C1-hHT,可应用于进一步转基因研究。 展开更多

关键词 hHT基因 gfp基因 融合表达 小鼠 成纤维细胞

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小鼠PDL1-Red2融合蛋白真核表达载体的构建、表达及其效应

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作者 廖雯君 孙晶 +2 位作者 朱慧芬 张金元 沈关心 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1068-1071,共4页

目的:小鼠跨膜型PD-L1与红色荧光蛋白(RFP)融合基因真核表达载体的构建、表达与鉴定,及其效应初步研究。方法:应用基因工程技术构建重组载体,脂质体转染NIT细胞株,以流式细胞术(FCM)和倒置相差荧光显微镜检测融合蛋白的表达;采用混合淋... 目的:小鼠跨膜型PD-L1与红色荧光蛋白(RFP)融合基因真核表达载体的构建、表达与鉴定,及其效应初步研究。方法:应用基因工程技术构建重组载体,脂质体转染NIT细胞株,以流式细胞术(FCM)和倒置相差荧光显微镜检测融合蛋白的表达;采用混合淋巴细胞培养,以FCM测定脾细胞的增殖反应。结果:融合基因在转染的真核细胞中获得表达,并呈膜分布,转染PD-L1/pDsRed2-N1的细胞对淋巴细胞增殖反应有一定的抑制作用,表明PD-L1/pDsRed2-N1融合蛋白中分子标签未影响PD-L1的结构及其生物学活性。结论:PD-L1与DsRed2融合基因载体构建成功,表达的融合蛋白具有生物学活性。 展开更多

关键词 PD-L1 红色荧光蛋白 融合基因 混和淋巴细胞培养

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融合蛋白TNFR1/DED介导舌癌细胞凋亡的实验研究

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作者 刘大庆 司徒镇强 +3 位作者 周树夏 曹云新 王成济 杨安钢 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期62-66,共5页

目的 :构建含FADD及TNFR1基因功能结构域的融合基因TFL ,稳定转染入舌癌细胞后 ,通过体内、外实验初步观察融合蛋白TNFR1/DED在重组人肿瘤坏死因子 α(rhTNF α)作用下介导舌癌细胞凋亡的效应。方法 :反转录及重组PCR构建融合基因TFL ... 目的 :构建含FADD及TNFR1基因功能结构域的融合基因TFL ,稳定转染入舌癌细胞后 ,通过体内、外实验初步观察融合蛋白TNFR1/DED在重组人肿瘤坏死因子 α(rhTNF α)作用下介导舌癌细胞凋亡的效应。方法 :反转录及重组PCR构建融合基因TFL ;鉴定融合蛋白TNFR1/DED在建系舌癌细胞T TFL中的表达 ,通过MTT法、形态学观察、DAN片段及体内抑瘤实验 ,观察融合蛋白TNFR1/DED介导舌癌细胞凋亡的效应。结果 :获得了人FADD及TNFR1基因并构建成功融合基因TFL ,转染入Tca 8113细胞后 ,能表达融合蛋白TNFR1/DED活性 ,体外实验观察到rhTNF α可有效地杀伤舌癌细胞 ,体内可明显抑制移植瘤的生长 ,且荷瘤动物内脏器官无病理性改变。结论 :融合蛋白TNFR1/DED可有效地介导舌癌细胞凋亡 ,为舌癌基因治疗研究提供实验基础。 展开更多

关键词 Fas-相关死亡结构域蛋白 肿瘤坏死因子受体1 融合蛋白 舌癌细胞 基因治疗

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重组人单核细胞趋化蛋白-1在大肠杆菌中表达的优化

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作者 苗红 郭葆玉 +1 位作者 杨旭 袁鹏群 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第9期830-832,共3页

目的 :优化重组人单核细胞趋化蛋白 - 1(rhu MCP- 1)在大肠杆菌 DE3中的表达 ,生产 rhu MCP- 1。 方法 :应用 NBS15 L T.DR发酵罐 ,研究了诱导时不同的 p H值、温度、搅拌速率、通气量和异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG)浓度对表达的影响 ,并... 目的 :优化重组人单核细胞趋化蛋白 - 1(rhu MCP- 1)在大肠杆菌 DE3中的表达 ,生产 rhu MCP- 1。 方法 :应用 NBS15 L T.DR发酵罐 ,研究了诱导时不同的 p H值、温度、搅拌速率、通气量和异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG)浓度对表达的影响 ,并利用正交设计对发酵条件进行优化。 结果 :正交试验表明溶氧条件对 rhu MCP- 1表达水平的影响较显著 ,其中搅拌速率和通气量为最大的影响因素 ,搅拌速率为 30 0 r/ m in和通气量 10 L / min时 ,表达水平最高 ,重组蛋白的含量可达 40 %以上。 结论 :本实验为该工程菌的中试提供了最佳的表达诱导条件 。 展开更多

关键词 单核细胞趋化蛋白-1 重组融合蛋白质类 大肠杆菌 正交设计试验 基因表达

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GFP-SUMO-3融合蛋白的重组及其在LNCaP细胞中的表达和定位

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作者 伍贤军 缪璇 +3 位作者 程秀 王妍青 辻一郎 李晓萌 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1024-1027,1175,共5页

目的:构建以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组真核表达载体pEGFP-N1-SUMO-3,观察GFP-SUMO-3融合蛋白在人前列腺癌细胞LNCaP中的表达与定位。方法:采用PCR扩增SUMO-3基因全长cDNA编码区序列,克隆入pEGFP-N1真核表达载体。重组质粒pEGFP... 目的:构建以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组真核表达载体pEGFP-N1-SUMO-3,观察GFP-SUMO-3融合蛋白在人前列腺癌细胞LNCaP中的表达与定位。方法:采用PCR扩增SUMO-3基因全长cDNA编码区序列,克隆入pEGFP-N1真核表达载体。重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3通过酶切和测序鉴定正确后,脂质体法将重组质粒转染至LNCaP中,利用GFP抗体通过Western blotting检测GFP-SUMO-3融合蛋白的表达,通过荧光显微镜观察其在细胞中的表达及分布。结果:重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定,得到大小分别为4 700和312bp的条带,与预期结果一致。测序结果显示,GFP在N端,是阅读框正确的SUMO-3的基因序列。在LNCaP细胞中过表达GFP-SUMO-3融合蛋白,Western blotting得到相对分子质量为39 000的蛋白表达条带,与GFP-SUMO-3大小相符。荧光显微镜观察,转染重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3的细胞中呈绿色荧光,主要在细胞核内表达,与DAPI重合。结论:成功构建重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3,并表达代绿色荧光蛋白的SUMO-3融合蛋白,鉴定出SUMO-3在LNCaP细胞中的核定位性。 展开更多

关键词 gfp-SUMO-3融合蛋白 重组蛋白质类 LNCAP细胞 基因表达

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甘露糖外切酶的细胞生物学定位研究 被引量：1

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作者 莫蓓莘 《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS 北大核心 2006年第4期358-361,共4页

用不同试剂从西红柿种子提取甘露聚糖外切酶,结果表明甘露聚糖外切酶只能被含高盐的缓冲液(0.1mol/LHepes+500mmol/LNaCl,pH7.0)提取出来,单独的低盐缓冲液(0.1mol/LHepes,pH7.0)或用非盐洗涤剂代替高盐则不能提取该酶.通过基因枪将甘... 用不同试剂从西红柿种子提取甘露聚糖外切酶,结果表明甘露聚糖外切酶只能被含高盐的缓冲液(0.1mol/LHepes+500mmol/LNaCl,pH7.0)提取出来,单独的低盐缓冲液(0.1mol/LHepes,pH7.0)或用非盐洗涤剂代替高盐则不能提取该酶.通过基因枪将甘露聚糖外切酶和GFP融合蛋白转化洋葱表皮细胞,发现转化了甘露聚糖外切酶和GFP融合蛋白的洋葱表皮细胞壁上有荧光,表明甘露聚糖外切酶可能定位在细胞壁上. 展开更多

关键词 基因枪 gfp 洋葱表皮细胞 甘露聚糖外切酶 细胞壁

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瘦素与绿色荧光蛋白融合基因的合成及其高效表达

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作者 庞实锋 吴晓萍 +4 位作者 李校堃 郑青 于平野 曲红艳 王艳萍 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期276-279,共4页

目的 :为了便于追踪瘦素 (Leptin)在体内的去向 ,对其进行体内定位 ,设计合成Leptin荧光分子蛋白探针。方法 :用PCR技术将LeptincDNA与绿色荧光蛋白cDNA构建成融合基因LG ,然后将其克隆进原核表达载体pET3c中 ,构建成原核表达工程菌BL2 ... 目的 :为了便于追踪瘦素 (Leptin)在体内的去向 ,对其进行体内定位 ,设计合成Leptin荧光分子蛋白探针。方法 :用PCR技术将LeptincDNA与绿色荧光蛋白cDNA构建成融合基因LG ,然后将其克隆进原核表达载体pET3c中 ,构建成原核表达工程菌BL2 1(DE3) /pET3c LG。用Western blot杂交检测重组蛋白的免疫原性 ,用荧光显微镜观察融合蛋白及其诱导菌休的发光活性。结果 :DNA测序结果证实设计合成的融合基因与预期一致 ;构建的工程菌BL2 1(DE3) /pET3c LG获得了表达 ,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的 4 0 %以上 ;Western blot杂交检测表明重组蛋白具有Leptin的免疫原性 ;经IPTG诱导后的菌体及蛋白粗提液在荧光显微镜下可观察到其能发射出强烈的绿色荧光。结论 :融合基因在大肠杆菌中实现了高效表达 ,表达的融合蛋白具Leptin的免疫原性和GFP的发光特性。为利用绿色荧光蛋白标记Leptin在动物体内的药物治疗的研究提供了一种新的途径。 展开更多

关键词 瘦素 绿色荧光蛋白(gfp) 融合基因 高效表达

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