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mRNA疫苗-分子设计、递呈及免疫活化的分子机制
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作者 陈慧敏 刘飞飞 +2 位作者 尚珂 张春杰 陈松彪 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第2期186-192,共7页
疫苗免疫是防控传染病最有效且性价比最优的途径。2019年末新型冠状病毒肺炎(COVID-19,简称新冠)爆发以来,第三代颠覆性创新-mRNA核酸疫苗在阻击新冠道路上大放异彩。mRNA疫苗突破了传统疫苗的免疫激活模式,创新性地利用人体自身细胞生... 疫苗免疫是防控传染病最有效且性价比最优的途径。2019年末新型冠状病毒肺炎(COVID-19,简称新冠)爆发以来,第三代颠覆性创新-mRNA核酸疫苗在阻击新冠道路上大放异彩。mRNA疫苗突破了传统疫苗的免疫激活模式,创新性地利用人体自身细胞生产抗原,以此激活双重特异性免疫,形成免疫记忆,提供更持久的特异性免疫。相较于传统第一代(灭活疫苗)和第二代疫苗(基因工程疫苗),mRNA疫苗借助其平台化优势,在重大突发性传染病防控中发挥重要作用,成为全球首个进入临床的新冠疫苗,是疫苗研发领域风向标。本文主要针对mRNA疫苗分子设计、递呈以及其激活机体免疫应答的分子机制进行综述,旨在为后续新型mRNA疫苗在动物传染病防控中的应用提供理论依据。 展开更多
关键词 mrna疫苗 分子设计 递呈 免疫活化 动物传染病
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布鲁氏菌病诊断外泌体microRNA生物标志物的筛选和潜在miRNA-mRNA调控网络的构建
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作者 赵进 陈志强 +5 位作者 王冰丽 李书灵 朱晓玉 贾金彤 柳叶子 李智伟 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第3期269-277,共9页
目的 探索布鲁氏菌病新型辅助诊断生物标志物及其潜在的miRNA-mRNA调控网络。方法 通过高通量测序比较布鲁氏菌病患者和健康对照组血清外泌体中miRNA的表达差异。利用RT-qPCR验证显著上调的外泌体miRNA的表达。采用ROC曲线评估这些miRN... 目的 探索布鲁氏菌病新型辅助诊断生物标志物及其潜在的miRNA-mRNA调控网络。方法 通过高通量测序比较布鲁氏菌病患者和健康对照组血清外泌体中miRNA的表达差异。利用RT-qPCR验证显著上调的外泌体miRNA的表达。采用ROC曲线评估这些miRNA的诊断价值,并结合生物信息学分析miRNA在布鲁氏菌病感染中的潜在作用。结果 ROC曲线显示外泌体hsa-miR-11400(P<0.05)、hsa-miR-199a-5p(P<0.05)和hsa-miR-148a-5p(P<0.05)的曲线下面积分别为0.79、0.81和0.74。预测了465个差异表达基因,其中包括25个免疫相关靶基因,其中大多数与癌症蛋白多糖、NF-kappa B信号网络和IL-17信号通路密切相关。通过构建差异表达基因网络,PLXNA2、IL17RA、PRKCA、CD22、ACVR1B和CBL免疫基因可能分别受到hsa-miR-199a-5p和hsa-miR-148a-5p的调控。结论 表明外泌体miRNA可作为布鲁氏菌病的辅助诊断指标,且外泌体miRNA-mRNA调控网络为布鲁氏菌病的发病机制及治疗提供了新的见解。 展开更多
关键词 布鲁氏菌病 外泌体微小核糖核酸 生物标志物 miRNA-mrna调控网络
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H9亚型禽流感病毒mRNA疫苗的构建与效力评价 被引量:2
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作者 黄程 杨志远 +7 位作者 林健 程慧敏 王米 毛惠琳 王国良 刘贵明 赵际成 刘月焕 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1843-1853,共11页
H9亚型禽流感(avian influenza, AI)对养鸡业尤其肉鸡产业危害巨大,灭活疫苗不能有效阻止病毒在鸡上呼吸道感染复制,有必要研究H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)血凝素(hemagglutinin, HA)基因的mRNA疫苗。参考GenBank 202... H9亚型禽流感(avian influenza, AI)对养鸡业尤其肉鸡产业危害巨大,灭活疫苗不能有效阻止病毒在鸡上呼吸道感染复制,有必要研究H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)血凝素(hemagglutinin, HA)基因的mRNA疫苗。参考GenBank 2022年公开的HA基因序列,优化HA全长(HA)和HA胞外区(HAe)序列,连接至pUC57载体构建体外转录模板,经体外转录、加帽、纯化,采用脂质纳米颗粒(Lipid nanoparticles, LNP)包封mRNA,并转染人胚肾细胞(293T)、仓鼠肾细胞(BHK-21)和鸡胚成纤维细胞(DF-1),Western blot检测HA表达。20只3周龄SPF鸡,随机分成4组,每组5只,分别经腿部肌肉接种0.3 mL PBS、25μg HA mRNA LNP、25μg HAe mRNA LNP和0.3 mL H9亚型AI灭活疫苗。免疫后4周采集血清,检测血凝抑制(hemagglutination inhibition, HI)抗体,每只鸡滴鼻点眼H9N2亚型AIV 0.2 mL(含10^(6.0)EID_(50)),攻毒后5日采集咽喉拭子和外周血单个核细胞,分别检测病毒分离情况及IFN-γ、IL-4的表达水平,观察气管组织病理学变化。Western blot结果显示两种mRNA HA蛋白均成功表达,经LNP包封后可有效在细胞内完成翻译。HA mRNA LNP和HAe mRNA LNP免疫SPF鸡后HI抗体效价(log2)平均值分别为5.6和3。H9亚型AI灭活疫苗免疫后HI抗体效价(log2)平均值为9.8,极显著高于2个mRNA LNP组(P<0.01)。非免疫对照、HA mRNA LNP、HAe mRNA LNP和H9亚型AI灭活疫苗组病毒分离结果分别为5/5、1/5、4/5和2/5。HA mRNA LNP组IFN-γ表达水平显著高于其他组(P<0.05),HAe mRNA LNP组IL-4表达水平显著低于其他组(P<0.05)。气管组织病理学变化结果表明HA mRNA LNP和H9亚型AI灭活疫苗免疫可有效减轻H9亚型AIV对SPF鸡气管上皮细胞的损伤。构建的H9亚型AIV HA全长mRNA疫苗免疫鸡能提供有效保护,而HA胞外区mRNA疫苗不能提供有效的免疫保护。 展开更多
关键词 H9亚型 禽流感病毒 mrna疫苗 LNP 免疫保护
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mRNA疫苗:胰腺癌个性化治疗新曙光 被引量:1
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作者 王新景 王蔚 沈柏用 《临床肝胆病杂志》 北大核心 2025年第4期619-624,共6页
胰腺癌作为恶性程度最高的实体肿瘤之一,其5年生存率长期维持在约13%,且80%的患者在确诊时已失去手术机会。此外,传统放化疗及靶向治疗因肿瘤异质性高、免疫抑制微环境复杂而效果有限。近年来,mRNA疫苗凭借其独特的技术优势,成为肿瘤免... 胰腺癌作为恶性程度最高的实体肿瘤之一,其5年生存率长期维持在约13%,且80%的患者在确诊时已失去手术机会。此外,传统放化疗及靶向治疗因肿瘤异质性高、免疫抑制微环境复杂而效果有限。近年来,mRNA疫苗凭借其独特的技术优势,成为肿瘤免疫治疗的新焦点。基于非整合性mRNA模板,mRNA疫苗可精准编码肿瘤新抗原,在宿主体内高效表达并诱导多维度免疫应答。针对胰腺癌,研究热点集中在肿瘤相关抗原疫苗及肿瘤特异性抗原疫苗的研发与优化。当前研究主要关注基于测序的新抗原表位优化、靶向递送技术和人工智能驱动的免疫应答预测模型,以期推动mRNA疫苗在胰腺癌精准治疗中的应用。未来研究需进一步突破肿瘤微环境中关键免疫抑制分子的靶向阻断,精准识别肿瘤特异性抗原表位,开发高效新型疫苗,为胰腺癌患者带来新的治疗希望。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 mrna疫苗 免疫疗法 主动
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益精利浊法治疗慢性非细菌性前列腺炎临床效果及对前列腺液TNF-α、IL-8的影响
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作者 王志强 曾广启 +3 位作者 刘春辉 关雁 陕文生 杨杰 《辽宁中医杂志》 北大核心 2025年第6期99-102,共4页
目的观察益精利浊法治疗慢性非细菌性前列腺炎(chronic non-bacterial prostatitis,CNP)临床效果及对前列腺液肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-ɑ,TNF-ɑ)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,I... 目的观察益精利浊法治疗慢性非细菌性前列腺炎(chronic non-bacterial prostatitis,CNP)临床效果及对前列腺液肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-ɑ,TNF-ɑ)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)等的影响。方法选取2023年1月—2023年12月于该院进行治疗的CNP患者130例,随机分成对照组与治疗组,对照组采用常规西医治疗,治疗组在对照组的基础上增加益精利浊法治疗,观察比较两组患者疗效、前列腺液中炎症因子水平、美国国立卫生研究院慢性前列腺炎积分指数(National Institute of Health-Chronic Prostatitis Symptom Index,NIH-CPSI)评分以及不良反应发生情况。结果治疗组总有效率显著高于对照组(P<0.05)。治疗后两组NIH-CPSI评分均有显著下降,治疗组更低(P<0.05)。治疗后两组IL-8、IL-1β、TNF-ɑ水平较治疗前有所下降,且治疗组更低(P<0.05)。治疗组与对照组不良反应总发生率分别为12.31%(8/65)与10.77%(7/65),差异无统计学意义(P>0.05)。结论益精利浊法治疗CNP患者疗效较好,能明显改善NIH-CPSI评分,调节炎症因子水平,且安全性较高。 展开更多
关键词 益精利浊法 慢性非细菌性前列腺炎 tnf IL-8 NIH-CPSI评分
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circRNA-miRNA-mRNA调控网络的挖掘以筛选缺血性脑卒中的潜在治疗药物 被引量:1
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作者 吴玉敏 王钟兴 于瑜 《中山大学学报(医学科学版)》 北大核心 2025年第3期456-465,共10页
【目的】挖掘缺血性脑卒中潜在的circRNA-miRNA-mRNA调控网络及其相应的治疗药物。【方法】利用GEO数据库发布的数据并选择研究大脑中动脉栓塞(MCAO)小鼠RNA表达水平的3个数据集GSE115697、GSE51586和GSE137482,使用R中的Limma包来筛选... 【目的】挖掘缺血性脑卒中潜在的circRNA-miRNA-mRNA调控网络及其相应的治疗药物。【方法】利用GEO数据库发布的数据并选择研究大脑中动脉栓塞(MCAO)小鼠RNA表达水平的3个数据集GSE115697、GSE51586和GSE137482,使用R中的Limma包来筛选差异表达的mRNA(DEmRNA)、DEcircRNA和DEmiRNA。采用MiRWalk、StarBase等多种生物信息学方法结合的综合策略来挖掘与脑卒中相关的circRNA-miRNA-mRNA网络,由Cytoscape软件完成核心子网络的筛选和可视化输出。通过基因本体(GO)富集分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析研究ceRNA网络的功能,以富集超过10个基因且假发现率(FDR)<0.05的通路认为具有统计学意义。最后使用药物基因组学数据库connectivity map(CMap)筛选潜在的脑卒中治疗药物,并对野生型小鼠构建MCAO模型验证药物治疗效果。【结果】共筛选得出1249个DEmRNA、294个DEmiRNA和70个DEcircRNA,并发现3个circRNA-miRNA-mRNA调控网络可能与缺血性脑卒中密切相关。根据上述结果筛选得出Austricine、Metyrapone和Desoxypeganine这3种最有可能逆转由脑卒中相关ceRNA网络引起的改变的药物,并以Metyrapone为例验证所筛选药物对缺血性脑卒中确实可以改善术后第一(P=0.0014)、二天(P=0.0161)的神经功能损伤和减少脑梗死体积(P=0.0049),发挥脑保护作用。【结论】本研究从circRNA-miRNA-mRNA网络视角为缺血性脑卒中的发病机制提供了新的见解,本文预测得出的3种药物为缺血性脑卒中的治疗方法提供了新的线索。 展开更多
关键词 缺血性脑卒中 circRNA mrna 竞争性内源性RNA CMap数据库
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猪群疫病mRNA疫苗研究进展
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作者 殷靖淇 沙洲 +6 位作者 张海光 崔进 郑辉 董雅琴 魏荣 古少鹏 尼博 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第9期4346-4357,共12页
mRNA疫苗是将编码目的蛋白或多肽的mRNA大分子传递至细胞中,经翻译后产生相应抗原蛋白,诱导机体产生免疫应答,以达到免疫预防目的和效果的疫苗。目前,鉴于传统疫苗不能完全满足防疫需求,mRNA疫苗凭借其研发周期短、安全性高及免疫效力... mRNA疫苗是将编码目的蛋白或多肽的mRNA大分子传递至细胞中,经翻译后产生相应抗原蛋白,诱导机体产生免疫应答,以达到免疫预防目的和效果的疫苗。目前,鉴于传统疫苗不能完全满足防疫需求,mRNA疫苗凭借其研发周期短、安全性高及免疫效力强等特点,已成为重大动物疫病防控的主要研究方向之一,有效的mRNA疫苗可减少猪病的发生和传播。笔者对mRNA疫苗的类型及结构、关键技术及已报道的mRNA疫苗在猪流行性腹泻、口蹄疫、猪繁殖与呼吸综合征、非洲猪瘟、猪伪狂犬病、猪流感等猪病领域的研究进行总结,展望mRNA疫苗在猪病防控、疫苗研发领域的应用,以期为猪群疫病mRNA疫苗的研制及开发提供参考。 展开更多
关键词 mrna疫苗 免疫 预防 猪病
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靶向mRNA测序技术在血液病融合基因诊断中的应用
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作者 王曼 张灵 +7 位作者 陈艳 解珺丹 姚红 姚利 岑建农 陈子兴 陈苏宁 沈宏杰 《中国实验血液学杂志》 北大核心 2025年第4期1209-1216,共8页
目的:探讨靶向mRNA测序技术在血液病融合基因诊断中的应用。方法:回顾性分析2015年1月到2023年6月苏州大学附属第一医院收治的105例嗜酸细胞比例异常升高患者、291例急性白血病患者的骨髓或外周血RNA标本,采用实验室自建靶向mRNA测序技... 目的:探讨靶向mRNA测序技术在血液病融合基因诊断中的应用。方法:回顾性分析2015年1月到2023年6月苏州大学附属第一医院收治的105例嗜酸细胞比例异常升高患者、291例急性白血病患者的骨髓或外周血RNA标本,采用实验室自建靶向mRNA测序技术检测结构变异。结果:105例嗜酸细胞比例异常升高患者中检测到结构变异患者6例,其中5例融合基因检测结果可以作为髓系肿瘤伴嗜酸细胞增多症诊断指标,另外在1例非特指型慢性嗜酸性粒细胞白血病患者中检测到IL3∷ETV6融合基因。119例急性髓细胞白血病患者中采用靶向mRNA测序技术检测出结构变异患者占31.9%(38/119),高于多重定量PCR检测检出率的20.2%(24/119)(P<0.05)。在急性髓细胞白血病患者中检测到1例具有罕见双融合基因NUP98∷PRRX2和KCTD5∷JAK2。172例多重定量PCR检测阴性的急性B淋巴细胞白血病患者中采用靶向mRNA测序技术检测出结构变异患者104例,检出率达到60.5%(102/172)。结论:靶向mRNA测序技术能有效检测血液病融合基因,在血液病诊断、分型中具有潜在的临床应用价值。 展开更多
关键词 靶向mrna测序 血液病 融合基因 诊断
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mRNA疗法:过去、现在和未来
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作者 孙梦泽 李鹏翠 胡晓青 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第2期178-189,共12页
信使mRNA(messenger RNA,mRNA)疗法是通过将效应分子以mRNA的形式递送至细胞内以治疗疾病的方法。mRNA各个部分序列高度可变的特点为高通量药物开发以及个性化治疗提供了潜在解决方案。本文从mRNA发展历程切入,概述了mRNA的发现发展及... 信使mRNA(messenger RNA,mRNA)疗法是通过将效应分子以mRNA的形式递送至细胞内以治疗疾病的方法。mRNA各个部分序列高度可变的特点为高通量药物开发以及个性化治疗提供了潜在解决方案。本文从mRNA发展历程切入,概述了mRNA的发现发展及其递送方法的演进过程。并针对mRNA所递送蛋白质的不同,分类别介绍mRNA在蛋白质替代疗法、癌症治疗、在体基因编辑和传染病预防中的应用。为将mRNA制剂应用于临床,需针对mRNA及其递送载体进行优化十分关键。本文进一步介绍如何通过核苷修饰和序列优化等方法提高mRNA的翻译效率以及稳定性,并系统比较新型环状mRNA与传统线性mRNA在疫苗开发方面的优劣。同时,针对mRNA的不同递送系统,本文总结脂质纳米颗粒等常用的递送手段,并详细阐述各个方法在靶向递送方面的最新进展。针对目前上市和在研的mRNA药物,本文系统总结其治疗的疾病、递送的效应分子以及所处的临床阶段。最后,本文展望了目前mRNA疗法所面临的问题以及能够潜在治疗的疾病,以期为mRNA疗法开发提供理论基础和参考依据。 展开更多
关键词 信使核糖核酸 mrna递送 mrna疗法
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原位杂交检测人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA在高危型人乳头瘤病毒分型检测阴性子宫颈高级别鳞状上皮内病变中的表达研究 被引量:1
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作者 刘玉珍 冯慧敏 张友忠 《实用妇产科杂志》 北大核心 2025年第5期393-399,共7页
目的:通过原位杂交检测技术探索高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)分型检测阴性的子宫颈高级别鳞状上皮内病变(HSIL)是否由人乳头瘤病毒(HPV)感染引起,进而为子宫颈HSIL的精确诊断及治疗提供新思路。方法:收集2020年1月至2022年10月就诊于山... 目的:通过原位杂交检测技术探索高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)分型检测阴性的子宫颈高级别鳞状上皮内病变(HSIL)是否由人乳头瘤病毒(HPV)感染引起,进而为子宫颈HSIL的精确诊断及治疗提供新思路。方法:收集2020年1月至2022年10月就诊于山东第二医科大学附属医院妇科行子宫颈活检或手术治疗的305例子宫颈HSIL患者的病历资料,其中HR-HPV分型检测阴性患者为研究组(15例),阳性患者为对照组(290例)。采用RNAscope原位杂交技术检测两组患者样本中HPV E6/E7 m RNA的表达,并使用染色强度半定量评分分析HPV E6/E7 m RNA的表达情况,同时采用免疫组织化学(IHC)方法检测p16、Ki-67的表达情况。结果:(1)305例HSIL患者中,15例(4.9%)HR-HPV分型检测为阴性。(2)研究组中73.3%(11/15)HPV E6/E7 m RNA呈阳性表达,与对照组100.0%(290/290)比较,差异有统计学意义(P<0.001)。(3)研究组p16的阳性表达率与对照组比较,差异有统计学意义(93.3%vs.100.0%,P=0.049),两组Ki-67阳性表达率均为100.0%。(4)组织病理学类型为子宫颈上皮内瘤变(CIN)2的样本中,研究组HPV E6/E7 m RNA总体评分明显低于对照组,差异有统计学意义(P=0.004);CIN3的样本中,研究组HPV E6/E7 m RNA总体评分虽低于对照组,但差异无统计学意义(P=0.158)。结论:子宫颈癌筛查中,单纯采用HR-HPV分型检测可能导致4.9%的HSIL患者因结果阴性而出现漏诊或误诊。HPV E6/E7 m RNA原位杂交检测技术可能有助于降低HR-HPV分型检测在HSIL中的假阴性率,并辅助预测子宫颈病变的发展方向,进而为实现个体化精准治疗提供新的思路。 展开更多
关键词 子宫颈 高级别鳞状上皮内病变 人乳头瘤病毒 人乳头瘤病毒E6/E7 mrna 原位杂交
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敖汉细毛羊的粗毛返祖性状相关lncRNA-mRNA的联合测序分析
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作者 罗睿杰 王建魁 曹素英 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第6期2685-2700,共16页
本研究从长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)切入,旨在探究敖汉细毛羊群体中粗毛返祖(ancestral-like coarse,ALC)个体的转录组特性。本研究采集了3只30日龄ALC羔羊和3只30日龄非返祖(称为MF)细毛羔羊的皮肤样本,进行RNA测序(RN... 本研究从长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)切入,旨在探究敖汉细毛羊群体中粗毛返祖(ancestral-like coarse,ALC)个体的转录组特性。本研究采集了3只30日龄ALC羔羊和3只30日龄非返祖(称为MF)细毛羔羊的皮肤样本,进行RNA测序(RNA-seq),挖掘与细毛羊“返祖”现象存在潜在关联的mRNA和lncRNA,通过生物信息学分析探究lncRNA在细毛羊毛囊发育中的作用,并进行lncRNA与mRNA的联合分析。本研究筛选出1540个差异表达lncRNA(differentially expressed lncRNA,DE-lncRNA)和513个差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),富集到Wnt、PPAR、MAPK等多个与毛囊发育相关的信号通路中,均存在显著下调。对差异显著(P<0.05)的DE-lncRNA进行分析,其中包含被认为与初级毛囊早期发育密切相关的lncRNA,如GTL 2等。对DE-lncRNA靶向基因和DEGs进行GO和KEGG富集分析,DE-lncRNA靶基因和DEGs富集到WNT、PPAR、MAPK等多个与毛囊发育相关的信号通路,以及与TGF-β负调控相关的生物学过程。此外,DE-lncRNA和DEGs富集分析都显示,ALC羔羊有多个物质和能量代谢通路上调。DEGs与DE-lncRNA相关性分析筛选出90个可能受DE-lncRNA调控的基因,ADIPOQ、BRCA1、CCAR2、KIF 20B、SOAT 1等基因涉及与细胞增殖、细胞命运决定、细胞周期调节、物质结合、催化活性等有关的过程。结果显示,ALC羔羊在毛囊相关的lncRNA方面与MF羔羊存在显著差异,ALC羔羊的初级毛囊可能处在全面退化的初始阶段;MAPK和PI3K/AKT信号通路在ALC绵羊幼龄返祖现象比较重要;ALC羔羊代谢相较于MF羔羊更旺盛,GTL 2等DE-lncRNA可能与ALC羊较强的适应性存在关联。本研究通过挖掘细毛羊ALC性状相关的lncRNA,为后期深入研究细毛羊毛囊发育机制提供参考线索,对细毛羊抗逆育种有重要参考价值。 展开更多
关键词 敖汉细毛羊 粗毛返祖性状 lncRNA mrna 生物信息学
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右归丸入血成分对Wnt/β-catenin、OPG/RANKL/RANK通路相关因子mRNA表达的影响
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作者 商佳璐 叶怡馨 +2 位作者 王娅红 章建华 尹华 《中国骨质疏松杂志》 北大核心 2025年第8期1152-1160,共9页
目的探讨右归丸入血成分对MC3T3-E1和RAW264.7细胞Wnt/β-catenin、OPG/RANKL/RANK通路相关因子mRNA表达的影响。方法用MC3T3-E1和RAW264.7细胞分别进行成骨和破骨的诱导培养,制备右归丸入血成分的单体干预液进行细胞干预,通过RT-qPCR检... 目的探讨右归丸入血成分对MC3T3-E1和RAW264.7细胞Wnt/β-catenin、OPG/RANKL/RANK通路相关因子mRNA表达的影响。方法用MC3T3-E1和RAW264.7细胞分别进行成骨和破骨的诱导培养,制备右归丸入血成分的单体干预液进行细胞干预,通过RT-qPCR检测MC3T3-E1细胞中Lrp6、Lrp5、β-catenin、Tcf7、Fzd2、OPG及RAW264.7细胞中Traf6、Nfatc1、Fos、Mmp9、Ctsk、Car2 mRNA的表达。结果与空白对照组相比,乌头碱能显著抑制Traf6、Fos和Mmp9的mRNA表达(P<0.05);次乌头碱和新乌头碱能显著抑制Fos的mRNA表达(P<0.05);苯甲酰乌头原碱可显著上调Lrp6、β-catenin、Tcf7、Fzd2和OPG的mRNA表达(P<0.05),显著下调Traf6、Fos和Mmp9的mRNA(P<0.05);苯甲酰次乌头原碱可促进Lrp5、β-catenin、Tcf7、Fzd2和OPG的mRNA表达(P<0.05);苯甲酰新乌头原碱可促进Lrp6、Lrp5、Tcf7和OPG的mRNA表达(P<0.05),抑制Traf6、Fos、Mmp9和Car2的表达(P<0.05);松脂醇二葡萄糖苷可促进Lrp5、β-catenin、Tcf7和OPG的mRNA表达(P<0.05),显著下调Traf6、Ctsk、Car2的mRNA表达(P<0.05);肉桂酸能显著上调Lrp5、Tcf7、Fzd2和OPG的mRNA表达(P<0.05),显著抑制Nfatc1和Fos的mRNA表达(P<0.05)。结论右归丸入血成分在一定浓度范围内可以通过调控Wnt/β-catenin、OPG/RANKL/RANK信号通路相关因子的基因表达影响骨形成和骨吸收,起到治疗骨质疏松的作用。 展开更多
关键词 右归丸入血成分 MC3T3-E1 RAW264.7 WNT/Β-CATENIN OPG/RANKL/RANK 信号通路 mrna 骨质疏松
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猪源大肠杆菌高致病性毒力岛结构基因进化分析及其对TNF/NF-κB通路的影响 被引量:1
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作者 王浩 王世玉 +5 位作者 肖金龙 沈珏 潘天灵 张靖松 肖鹏 高洪 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第1期392-403,共12页
旨在研究猪源大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)高致病性毒力岛(high pathogenicity island, HPI)结构基因的进化趋势及其对TNF/NF-κB通路的影响。本研究运用MEGA等软件分析HPI结构基因的遗传进化,使用R语言功能包挖掘E.coli感染细胞... 旨在研究猪源大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)高致病性毒力岛(high pathogenicity island, HPI)结构基因的进化趋势及其对TNF/NF-κB通路的影响。本研究运用MEGA等软件分析HPI结构基因的遗传进化,使用R语言功能包挖掘E.coli感染细胞的基因表达综合数据库(gene expression omnibus, GEO),并进行差异基因富集分析;使用分子对接预测HPI-Ybt与TNF/NF-κB通路相关蛋白的结合;将E.coli及前期构建的HPI缺陷株E.coliΔHPI感染IPEC-J2细胞,运用qPCR、ELISA和Western blot对TNF/NF-κB通路中的关键调控点进行检测。系统进化树分析显示,分离株YUNNAN001的intb基因与GQ891729.1亲缘关系最近,而与CQ903045.1亲缘关系较远。KEGG富集发现TNF和NF-κB通路均参与了E.coli感染,且共同基因有10个;火山图及热图富集显示,E.coli感染显著促进了TNF/NF-κB通路中PTGS2、NF-κB、TRAF6等的表达(P<0.05),分子对接显示,HPI-Ybt能与同属于TNF/NF-κB通路的10个蛋白相结合,其中与MAP3K14、TNFAIP3的结合最强;感染E.coli组的NF-κB、PTGS2、TNF-α、TRAF6、TRIF、ATF4、cxcl2和IL-6 mRNA水平显著高于E.coliΔHPI组(P<0.01),且相对于E.coliΔHPI组,E.coli组显著激活了TNF/NF-κB通路蛋白的表达;此外,与E.coliΔHPI组相比,E.coli感染显著升高了NF-κB和IL-6的水平(P<0.01)。结果提示,E.coli-HPI通过合成Ybt结合TNF/NF-κB通路中的关键蛋白,进而激活TNF/NF-κB通路。 展开更多
关键词 大肠杆菌 高致病性毒力岛 耶尔森杆菌素 进化分析 tnf/NF-κB信号通路
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mRNA疫苗在癌症免疫治疗中的应用
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作者 于晶 杨振军 《中国药科大学学报》 北大核心 2025年第4期444-452,共9页
癌症发病率与死亡率攀升,传统疗法局限性凸显,亟需更精准的免疫治疗方法。mRNA疫苗因其在抗原设计、生产和安全性上的优势,成为癌症免疫治疗领域的研究热点。本文综述了mRNA癌症疫苗的分子设计优化(如核苷修饰、UTR和ORF优化以增效和稳... 癌症发病率与死亡率攀升,传统疗法局限性凸显,亟需更精准的免疫治疗方法。mRNA疫苗因其在抗原设计、生产和安全性上的优势,成为癌症免疫治疗领域的研究热点。本文综述了mRNA癌症疫苗的分子设计优化(如核苷修饰、UTR和ORF优化以增效和稳定)、关键抗原类型(包括病毒抗原、肿瘤相关抗原TAA、肿瘤特异性抗原TSA/新抗原及免疫调节因子)、递送系统以及临床研究进展。该类疫苗通过在体内表达特定抗原,激活免疫系统以识别和清除癌细胞。目前已有多种mRNA疫苗进入临床试验,常联用免疫检查点抑制剂等。尽管其有很好的应用前景,但仍面临mRNA不稳定性、靶向递送困难、免疫耐受和肿瘤逃逸等挑战,未来需在抗原预测、靶向递送载体及联合用药上持续突破。 展开更多
关键词 mrna疫苗 新肿瘤抗原 癌症免疫治疗 免疫检查点抑制剂 个体化治疗
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猫传染性腹膜炎病毒mRNA疫苗转录载体的构建与鉴定
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作者 卢娜 高钰 +3 位作者 赵嘉伟 苏迪 陈家磊 罗忠礼 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第2期803-813,共11页
本研究旨在设计猫传染性腹膜炎病毒(feline infectious peritonitis virus,FIPV)mRNA疫苗体外转录载体,并评估其转录出的FIPV mRNA疫苗的免疫原性。选取FIPV的核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白,通过序列优化,结合CureVac mRNA技术平台,选择... 本研究旨在设计猫传染性腹膜炎病毒(feline infectious peritonitis virus,FIPV)mRNA疫苗体外转录载体,并评估其转录出的FIPV mRNA疫苗的免疫原性。选取FIPV的核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白,通过序列优化,结合CureVac mRNA技术平台,选择合适的非编码序列、信号肽序列和poly A尾部。将构建完成的目的序列克隆到pBluescript II KS(+)载体上,经过载体的线性化单酶切后,在体外进行转录,合成编码FIPV N基因的mRNA,并经过加帽、纯化和琼脂糖凝胶电泳分析。通过体外转染试验验证抗原蛋白在细胞内的表达情况。在小鼠体内接种FIPV N-mRNA疫苗后,检测其体液免疫和细胞免疫反应。琼脂糖凝胶试验表明,设计的mRNA体外转录载体成功制备出稳定单一的mRNA序列。转染进细胞后,可在12~24 h内稳定表达目标抗原蛋白。ELISA试验结果显示FIPV N-mRNA疫苗在小鼠体内引起了强烈的体液免疫反应,其特异性抗体、IL-4、TNF-α水平明显高于对照组。Elispot试验结果显示FIPV N-mRNA组脾细胞分泌的IFN-γ的含量显著高于对照组。以FIPV N蛋白为抗原的体外转录载体所转录的mRNA疫苗,在细胞内能够高效表达目的蛋白,具有良好的免疫原性,有效引起小鼠的体液免疫和细胞免疫反应。FIPV N-mRNA疫苗有望成为猫传染性腹膜炎的潜在候选疫苗,mRNA体外转录载体的制备为传染性疾病mRNA疫苗的设计与研发提供了重要的参考价值。 展开更多
关键词 猫传染性腹膜炎 猫传染性腹膜炎病毒N蛋白 mrna疫苗 体外转录载体
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载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3A蛋白在宫颈癌进化发育中的研究进展
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作者 贺海威 徐明娟 《海军军医大学学报》 北大核心 2025年第6期798-802,共5页
载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3A(APOBEC3A)突变是宫颈癌的一个主要驱动因素。APOBEC3A与人乳头瘤病毒(HPV)关系密切:一方面可以有效抑制HPV感染,另一方面又可以促进HPV DNA整合入宫颈角质细胞。本文综述了HPV与APOBEC3A错综复杂的相... 载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3A(APOBEC3A)突变是宫颈癌的一个主要驱动因素。APOBEC3A与人乳头瘤病毒(HPV)关系密切:一方面可以有效抑制HPV感染,另一方面又可以促进HPV DNA整合入宫颈角质细胞。本文综述了HPV与APOBEC3A错综复杂的相互作用,并分析了其所涉及的病毒机制和细胞信号通路。大量研究证实,APOBEC3A基因可以有效诱导包括宫颈癌在内的多种恶性肿瘤的进化发育,而在临床样本中,癌细胞中APOBEC3A蛋白的表达水平却并不太高。本文还展望了宫颈癌中的APOBEC3A活性的意义以及潜在的治疗价值。 展开更多
关键词 载脂蛋白B mrna编辑酶催化多肽样3A 宫颈肿瘤 进化 发育
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狂犬病mRNA疫苗的研究进展
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作者 焦文杰 印春生 +4 位作者 王诗妍 张石豪 倪静颖 韩凤烨 赵丹楠 《中国兽药杂志》 2025年第5期61-68,共8页
狂犬病作为一种古老且致命的人畜共患病,至今仍对全球公共卫生安全构成严重威胁。疫苗接种是阻断病毒传播的核心策略,而mRNA疫苗凭借其快速研发潜力、高效免疫原性及灵活的生产工艺,为狂犬病防控提供了新方向。聚焦狂犬病mRNA疫苗研发进... 狂犬病作为一种古老且致命的人畜共患病,至今仍对全球公共卫生安全构成严重威胁。疫苗接种是阻断病毒传播的核心策略,而mRNA疫苗凭借其快速研发潜力、高效免疫原性及灵活的生产工艺,为狂犬病防控提供了新方向。聚焦狂犬病mRNA疫苗研发进展,系统阐述了mRNA疫苗的分子设计原理和递送体系优化策略,结合临床前研究与I期试验数据介绍了狂犬病mRNA疫苗的免疫原性特征及其在病毒中和与长效免疫记忆中的潜在优势,从稳定性、长期安全性和免疫原性的个体差异等方面探讨了狂犬病mRNA疫苗面临的挑战并提出建议,相信狂犬病mRNA疫苗将在实现2030年全球消灭狂犬病目标中发挥重要战略价值。 展开更多
关键词 狂犬病 狂犬病mrna疫苗 mrna结构 mrna递送
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类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞特征基因TNFAIP6的鉴定及验证 被引量:1
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作者 雷蕾 吕玉欣 +1 位作者 张晶 陈陵 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第3期234-242,共9页
目的鉴定类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞的特征基因,并验证其对增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法从基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库下载4个独立的滑膜组织微阵列转录组测序数据集(GSE1919... 目的鉴定类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞的特征基因,并验证其对增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法从基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库下载4个独立的滑膜组织微阵列转录组测序数据集(GSE1919、GSE55235、GSE55457、GSE77298)和1个滑膜细胞单细胞测序数据集(GSE192504),利用差异基因分析、加权基因共表达网络分析(weighted gene co-expression network analysis,WGCNA)、单细胞测序数据分析等多种生物信息学分析方法鉴定RA成纤维样滑膜细胞的特征基因。利用RT-qPCR和Western blot检测肿瘤坏死因子α诱导蛋白6(TNF alpha induced protein 6,TNFAIP6)在人RA成纤维样滑膜细胞系MH7A体外模拟炎症环境下的表达水平。MH7A转染si-TNFAIP6进行基因沉默,采用CCK-8和Transwell实验检测沉默TNFAIP6对MH7A细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结果联合差异基因分析、WGCNA和单细胞测序数据分析,确定了1个RA成纤维样滑膜细胞特征基因(TNFAIP6)。RT-qPCR和Western blot显示,与无菌磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)处理比较,10 ng/mL浓度的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)显著上调MH7A细胞TNFAIP6的mRNA和蛋白表达(P<0.05)。CCK-8和Transwell实验显示,在MH7A细胞敲低TNFAIP6的表达后,敲低组(si-TNFAIP6)的细胞增殖、迁移和侵袭能力相较于对照组(FAM-si-NC)有显著的降低(P<0.05)。结论TNFAIP6在RA成纤维样滑膜细胞中特异性高表达,促进其增殖、迁移、侵袭能力,可能是RA成纤维样滑膜细胞异常活化的主要贡献者。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 成纤维样滑膜细胞 肿瘤坏死因子α诱导蛋白6
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后备母猪发情期和乏情期下丘脑-垂体-卵巢性腺轴miRNA-mRNA表达谱比较分析
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作者 吕玲燕 孙如玉 +9 位作者 林昌华 张胜斌 覃秀珍 柏秀芳 吴永绍 陈钊 刘磊 张冰 蒋家霞 张家庆 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第7期2965-2980,共16页
【目的】探讨miRNA-mRNA互作网络在后备母猪发情调控中的关键作用,以期解释其在后备母猪发情活动中的遗传机制。【方法】以发情期和乏情期后备母猪的下丘脑、垂体、卵巢组织为研究对象,测定血清中促卵泡激素(FSH)、孕酮(P4)、雌二醇(E2... 【目的】探讨miRNA-mRNA互作网络在后备母猪发情调控中的关键作用,以期解释其在后备母猪发情活动中的遗传机制。【方法】以发情期和乏情期后备母猪的下丘脑、垂体、卵巢组织为研究对象,测定血清中促卵泡激素(FSH)、孕酮(P4)、雌二醇(E2)等生殖激素浓度,通过小RNA测序(sRNA-Seq)并利用生物信息学软件筛选出不同情期差异表达miRNA,通过R语言对差异表达miRNA靶基因进行GO功能及KEGG通路富集分析,并随机选取4个差异表达miRNAs进行实时荧光定量PCR验证。【结果】后备母猪血清中生殖激素浓度与母猪所处的生理周期相吻合;在发情期和乏情期母猪中共检测到742个已知的miRNAs和229个新的miRNAs。发情期和乏情期母猪下丘脑中有57个差异表达miRNAs,其中24个上调,33个下调;垂体中有71个差异表达miRNAs,其中44个上调,27个下调;卵巢中有140个差异表达miRNAs,其中63个上调,77个下调。KEGG通路富集分析发现,后备母猪下丘脑中差异表达miRNA靶基因主要参与癌症中的蛋白聚糖、NOD样受体信号通路、Toll样受体信号通路、细胞因子受体相互作用等;垂体中差异表达miRNA靶基因主要参与甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸代谢过程,促性腺激素释放激素分泌,细胞黏附分子,新陈代谢信号通路等;卵巢中差异表达miRNA靶基因主要参与趋化因子信号通路、溶酶体、卵巢类固醇生成、胆固醇代谢、PPAR信号通路、ECM受体交互作用等。在与生殖相关的靶基因调控网络中筛选出可能由下丘脑-垂体-卵巢性腺轴介导调控后备母猪情期活动的关键miRNAs:miR-6240Z、ssc-miR-34a、ssc-miR-143-3P、ssc-miR-127、ssc-miR-21-5P、ssc-miR-381-3p。对后备母猪卵巢组织中4个差异表达miRNAs进行实时荧光定量PCR验证,其表达趋势与测序结果一致。【结论】本研究成功构建了发情期和乏情期后备母猪下丘脑-垂体-卵巢性腺轴miRNA表达谱,并对差异表达miRNA进行验证,筛选到与后备母猪情期活动显著相关的miRNA,为解析后备母猪发情机制提供了理论依据。 展开更多
关键词 miRNA-mrna 后备母猪 发情期 乏情期 下丘脑-垂体-卵巢性腺轴
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DH3-HPV DNA与Aptima HPV E6/E7 mRNA检测在子宫颈病变中的对比研究
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作者 顾雨佳 吕炳建 《实用妇产科杂志》 北大核心 2025年第4期336-340,共5页
目的:探究DH3-人乳头瘤病毒(HPV)DNA和Aptima HPV E6/E7 mRNA检测在发现子宫颈病变中的应用价值。方法:回顾性收集2022年1月1日至2023年12月31日在浙江大学医学院附属妇产科医院行DH3-HPV DNA、Aptima HPV E6/E7 mRNA检测病例各1254、8... 目的:探究DH3-人乳头瘤病毒(HPV)DNA和Aptima HPV E6/E7 mRNA检测在发现子宫颈病变中的应用价值。方法:回顾性收集2022年1月1日至2023年12月31日在浙江大学医学院附属妇产科医院行DH3-HPV DNA、Aptima HPV E6/E7 mRNA检测病例各1254、8263例,均有子宫颈活检病理随访结果。以子宫颈活检病理结果为金标准,比较DH3-HPV DNA和Aptima HPV E6/E7 mRNA检测低级别鳞状上皮内病变及以上子宫颈病变(LSIL^(+))、高级别鳞状上皮内病变及以上子宫颈病变(HSIL+)的敏感度和特异度。结果:DH3-HPV DNA检测阳性率75.44%(946/1254),Aptima HPV E6/E7 mRNA检测阳性率79.29%(6552/8263)。在年龄≥55岁女性人群中,Aptima HPV E6/E7 mRNA检测阳性率显著高于DH3-HPV DNA[84.70%(1583/1869)vs.76.34%(200/262),P<0.05]。DH3-HPV DNA、Aptima HPV E6/E7 mRNA检测LSIL^(+)的敏感度分别为90.63%(493/544)、91.79%(2953/3217),差异无统计学意义(P>0.05)。DH3-HPV DNA 16/18、Aptima HPV E6/E7 mRNA 16/18/45分型检测LSIL^(+)特异度分别为83.94%(596/710)、85.67%(4323/5046),差异无统计学意义(P>0.05)。DH3-HPV DNA、Aptima HPV E6/E7 mRNA检测HSIL+的敏感度分别为93.94%(124/132)、97.51%(782/802),差异无统计学意义(P>0.05)。Aptima HPV E6/E7 mRNA 16/18/45分型检测HSIL+特异度83.50%(6230/7461),显著高于DH3-HPV DNA 16/18分型检测81.02%(909/1122),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:DH3-HPV DNA与Aptima HPV E6/E7 mRNA检测子宫颈病变中敏感度相似,而Aptima HPV E6/E7 mRNA分型检测HSIL+的特异度高于DH3-HPV DNA分型检测;55岁以上女性,Aptima HPV E6/E7 mRNA检测阳性率高于DH3-HPV DNA,可能提示该年龄段人群HPV整合率较高。 展开更多
关键词 子宫颈癌 鳞状上皮内病变 人乳头瘤病毒E6/E7 mrna 人乳头瘤病毒分型 人乳头瘤病毒DNA
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