基于免疫组库测序的肝硬化典型证候患者外周血T细胞受体β链CDR3多样性分析

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作者 王佳 胡宇婷 +3 位作者 龚跃峰 朱健 苏式兵 陆奕宇 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 北大核心 2024年第7期1916-1924,共9页

目的 本研究通过免疫组库测序,分析肝硬化不同典型证候患者外周血TCR β链CDR3的多样性,探讨肝硬化证候的物质基础及其规律。方法 20例肝硬化患者为病例组,包括肝胆湿热(LGHD)、肝郁脾虚(LDSD)、肝肾阴虚(LKYD)3种证型,10例健康患者为... 目的 本研究通过免疫组库测序,分析肝硬化不同典型证候患者外周血TCR β链CDR3的多样性,探讨肝硬化证候的物质基础及其规律。方法 20例肝硬化患者为病例组,包括肝胆湿热(LGHD)、肝郁脾虚(LDSD)、肝肾阴虚(LKYD)3种证型,10例健康患者为正常对照组。从外周血样品中提取DNA,对TCRβ链CDR3进行多重PCR扩增,然后对产物进行高通量测序,分析其TCR β链CDR3的多样性。结果 肝硬化证候LDSD的CDR3独有nt序列数与CDR3独有aa序列数均少于LKYD(P<0.05);LGHD和LKYD的Clonality、Pielous、Shannon.Index和DE50具有显著性差异(P<0.05);3种证型的V和J区基因中多个片段使用频率及V-J基因重组有显著性差异:在LGHD和LDSD中,TRBV21-1、TRBV12-4、TRBV11-1亚型及7对V-J重组有统计学差异(P<0.05);在LGHD和LKYD中,TRBV10-2、TRBV7-6、TRBV5-8亚型及30对V-J重组有统计学差异(P<0.05);在LDSD和LKYD中,TRBJ1-5亚型及18对V-J重组有统计学差异(P<0.05)。结论本研究通过挖掘肝硬化不同证候的免疫学特征,发现肝硬化证候TCR CDR3的多样性具有显著差异且符合由实向虚的证型变化规律,为寻找“病证结合”“辨证论治”的客观依据提供新的支撑,以期发现肝硬化不同证候人群适应性免疫基因重排的表达差异和特异性标记。 展开更多

关键词 肝硬化 中医证候 免疫组库测序 t细胞受体 互补决定区3

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Jurkat细胞TCR基因重排对BV CDR3的影响 被引量：7

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作者 邹红云 马骊 +3 位作者 姚新生 温茜 罗微 王小宁 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期939-943,共5页

目的探讨Jurkat细胞TCRBD2-BJ2基因重排对TCRβ链可变区互补决定区3(BVCDR3)可能产生的影响,为深入研究TCR基因重排奠定实验基础。方法RT-PCR扩增TCRBV26个亚家族CDR3区,结合TCR基因扫描(GeneScan)和基因测序技术,监测Jurkat细胞在增殖... 目的探讨Jurkat细胞TCRBD2-BJ2基因重排对TCRβ链可变区互补决定区3(BVCDR3)可能产生的影响,为深入研究TCR基因重排奠定实验基础。方法RT-PCR扩增TCRBV26个亚家族CDR3区,结合TCR基因扫描(GeneScan)和基因测序技术,监测Jurkat细胞在增殖传代过程中以及在T细胞激活剂和超抗原SEA等刺激诱导后TCRBVCDR3谱系漂移及长度和序列变化。结果表达TCRBV8家族的单克隆细胞株Jurkat,在增殖传代过程中,以及经刺激诱导48或72h后,未监测到有TCRBV8以外的新的BV亚家族出现,BV8CDR3长度和一级核苷酸序列也未发生变化。结论Jurkat细胞发生的TCR基因重排可能不引起TCRBVCDR3改变,因而对TCRBVCDR3区抗原识别特异性(即抗原特异性漂移)并未产生影响,但并不排除TCR发生改变的可能性。 展开更多

关键词 JURKAt细胞 基因重排 基因扫描 tCR BV CDR3

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原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤T细胞γ受体、IgH基因重排 被引量：6

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作者 孔蕴毅 王坚 +4 位作者 束木娟 孙孟红 施达仁 许越香 孔今城 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期3-6,共4页

目的:探讨原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤(C-ALCL)临床病理特点和基因诊断方法。方法:对6例C-ALCL的临床表现、病理形态学和免疫组化染色进行观察,并用PCR方法对石蜡标本进行T细胞γ受体(TCRγ)和重链免疫球蛋白(IgH)基因重排检测。结果... 目的:探讨原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤(C-ALCL)临床病理特点和基因诊断方法。方法:对6例C-ALCL的临床表现、病理形态学和免疫组化染色进行观察,并用PCR方法对石蜡标本进行T细胞γ受体(TCRγ)和重链免疫球蛋白(IgH)基因重排检测。结果:临床起病以孤立性结节多见,病情进展缓慢,个别可自行消退。5例患者经治疗病情稳定,1例死于淋巴结及肝脏转移。镜下以75%以上CD30+间变性大细胞弥漫浸润真皮及皮下脂肪组织为特点,多数瘤细胞表达T细胞免疫表型。5例标本TCRγ基因重排阳性。结论:C-ALCL是少见的原发皮肤的低度恶性T细胞性淋巴瘤,预后较好。综合临床表现、组织病理改变、免疫组化及基因重排检测有助于本病的正确诊断。 展开更多

关键词 淋巴瘤 t细胞 皮肤 基因重排 t细胞γ受体 免疫球蛋白 重链

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系统性红斑狼疮患者外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移和序列鉴定 被引量：10

4

作者 罗微 马骊 +4 位作者 姚新生 邹红云 温茜 阮光萍 王小宁 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1128-1131,共4页

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移,为SLE的免疫应答机制和个性化治疗研究提供基础。方法采用免疫扫描谱型分析技术,分析5例正常献血员的CDR3分布特征及5例SLE患者PBMC中T细胞TCRβ链CDR3的优势利用情况,... 目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移,为SLE的免疫应答机制和个性化治疗研究提供基础。方法采用免疫扫描谱型分析技术,分析5例正常献血员的CDR3分布特征及5例SLE患者PBMC中T细胞TCRβ链CDR3的优势利用情况,对克隆性增生T细胞的CDR3区进行序列分析。结果5例正常献血员PBMCTCRBVCDR3谱型均呈高斯分布,5例活动型SLE患者24TCRBVCDR3家族均出现不同的优势表达,对单/寡克隆性增生T细胞β链CDR3区基因进行测序,证实存在不同的CDR3序列。结论SLE活动期外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系出现明显漂移,提示CDR3的选择性表达可能与SLE的免疫发病机理有关,特异应答的T细胞TCRCDR3序列的确定,将为SLE的发病机制研究和个性化治疗提供新的方法与手段。 展开更多

关键词 系统性红斑狼疮 t淋巴细胞受体 互补决定区3 免疫扫描谱型分析 基因扫描

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肝脾T细胞淋巴瘤临床病理学分析 被引量：6

5

作者 张爽 农琳 +1 位作者 任雅丽 李挺 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期387-391,共5页

目的:探讨肝脾T细胞淋巴瘤(hepatosplenic T cell lymphoma,HSTCL)的临床病理特征和病理诊断。方法:复习3例HSTCL患者的临床病理资料,免疫表型,EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)原位杂交及T细胞受体γ(T cell receptor γ,TCRγ)基因重... 目的:探讨肝脾T细胞淋巴瘤(hepatosplenic T cell lymphoma,HSTCL)的临床病理特征和病理诊断。方法:复习3例HSTCL患者的临床病理资料,免疫表型,EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)原位杂交及T细胞受体γ(T cell receptor γ,TCRγ)基因重排检测。结果:3例HSTCL中,骨髓1例呈间质和窦性浸润,2例呈间质及弥漫性浸润;肝1例和脾1例呈窦性浸润。免疫组化:3例均CD3、TIA-1强阳性,而粒酶B阴性;CD56阴性;TCRβ阴性;3例EBV原位杂交均阴性。TCRγ基因重排检测2例呈单克隆性,1例呈弥散态。结论:HSTCL是一种罕见的非活化T细胞毒性的外周T细胞淋巴瘤(peripheral T cell lymphoma,PTCL),EBV原位杂交阴性和TCRγ基因克隆性重排有助于诊断和鉴别诊断。我国病例与国际报道病例临床病理特征基本一致。 展开更多

关键词 淋巴瘤 t细胞 外周 骨髓 原位杂交 基因重排 γ链t细胞抗原受体

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猪T细胞受体β链基因的克隆及生物信息学分析 被引量：9

6

作者 李玩生 刘磊 +2 位作者 冯海燕 房永祥 景志忠 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期1-6,13,共7页

以GenBank上登载的猪的T细胞受体β(pTCR-β)基因为参考序列,用RT-PCR法从猪的外周血淋巴细胞中克隆了TCR-β链基因,并进行生物信息学分析.结果表明:pTCR-β基因含有一个完整的开放阅读框架(ORF),大小为849bp,编码283个氨基酸,且含有一... 以GenBank上登载的猪的T细胞受体β(pTCR-β)基因为参考序列,用RT-PCR法从猪的外周血淋巴细胞中克隆了TCR-β链基因,并进行生物信息学分析.结果表明:pTCR-β基因含有一个完整的开放阅读框架(ORF),大小为849bp,编码283个氨基酸,且含有一段27个氨基酸的信号肽序列,与参考序列相比,在核苷酸序列上的同源性为80.4%,在氨基酸序列上的同源性为70.3%;生物信息学结构预测发现2个结构域,一个为IG结构域,由第32-138位共107个氨基酸残基组成;另一个为IG-LIKE结构域,由第164-211位共48个氨基酸残基组成. 展开更多

关键词 猪tCR-β链基因 基因克隆 生物信息学 结构预测

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正常人外周血αβ T细胞TCR β链CDR3多态性和长度分析 被引量：16

7

作者 胡云良 杨介钻 +1 位作者 倪莉 姚新生 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期492-498,共7页

采用免疫扫描谱型分析技术,分析正常人外周血T细胞TCRβ链CDR3的多态性和长度分布.提取6例正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell-PBMC)的总RNA,逆转录成cDNA,以24个TCR BV基因家族为上游引物,共同的TCR BC基因为... 采用免疫扫描谱型分析技术,分析正常人外周血T细胞TCRβ链CDR3的多态性和长度分布.提取6例正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell-PBMC)的总RNA,逆转录成cDNA,以24个TCR BV基因家族为上游引物,共同的TCR BC基因为下游引物(荧光标记),6例样品PCR产物的基因扫描分析表明,24个TCRBV家族的CDR3谱型分析在1.5%琼脂糖凝胶电泳图上显示1个模糊条带.序列测定结果显示,各TCR BV家族的CDR3谱型均超过8个条带.GeneScan分析证明,正常人外周血T细胞的24个TCR BV家族的CDR3谱型为标准的高斯分布,各家族的CDR3表达频率相近,呈现不同的CDR3多态性和不同的CDR3长度.多数TCR BV家族产物为框架内重排(相邻2个PCR产物相差3个碱基),少数TCR BV家族表现为两个峰群的重排.该研究对正常人TCRβ链CDR3谱系的详细分析将为T细胞应答、TCR重组等研究提供基础.利用免疫谱型分析技术能监测到TCR CDR3谱型分布特征和表达频率的变化. 展开更多

关键词 t淋巴细胞受体 互补决定区3 免疫扫描谱型分析 基因扫描

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皮肤T细胞淋巴瘤皮损与外周血中TCRγ基因重排的检测 被引量：4

8

作者 薛峰 沈小雁 +3 位作者 施若非 李霞 陈小英 郑捷 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期766-768,共3页

目的:了解已确诊为皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)患者的皮损和外周血中T细胞受体γ链基因重排(TCRγGR)情况。方法:利用PCR测定21例CTCL患者皮损及外周血TCRγGR,扩增产物经琼脂糖及变性梯度凝胶电泳检测。结果:CTCL患者皮损中TCRγGR阳性率显... 目的:了解已确诊为皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)患者的皮损和外周血中T细胞受体γ链基因重排(TCRγGR)情况。方法:利用PCR测定21例CTCL患者皮损及外周血TCRγGR,扩增产物经琼脂糖及变性梯度凝胶电泳检测。结果:CTCL患者皮损中TCRγGR阳性率显著高于外周血(P<0.05);病程≥12个月的患者外周血中TCRγGR阳性率显著高于病程<12个月的患者(P<0.05);年龄≥60岁患者皮损和外周血中TCRγGR阳性率显著高于<60岁患者(P<0.05)。结论:在CTCL患者中存在TCRγGR,早期出现在皮损中的TCRγGR可作为CTCL辅助诊断,并有益于CTCL的早期诊断,外周血中检测出TCRγGR可作为皮损阳性结果的补充。 展开更多

关键词 淋巴瘤 t细胞 皮肤 受体 t细胞 γ链基因重排

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活动性肺结核患者α/βTCR基因重排及CDR3谱型分析 被引量：11

9

作者 张建波 方毅敏 +5 位作者 黄艳 江丽芳 董涛 朱晓敏 方丹云 赖小敏 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1136-1139,1143,共5页

目的:建立多重PCR方法扩增α/βTCR全长序列,分析活动性肺结核患者病变局部T淋巴细胞α/βTCR基因重排特点及CDR3谱型。方法:分离结核患者肺泡灌洗液中的淋巴细胞,提取RNA后用SMART方法逆转录,运用根据现有文献设计的α和βTCR扩增引物... 目的:建立多重PCR方法扩增α/βTCR全长序列,分析活动性肺结核患者病变局部T淋巴细胞α/βTCR基因重排特点及CDR3谱型。方法:分离结核患者肺泡灌洗液中的淋巴细胞,提取RNA后用SMART方法逆转录,运用根据现有文献设计的α和βTCR扩增引物,进行多重PCR扩增以获得其全长序列,构建重组质粒并测序,利用DNAstar及网上TCR资源分析序列。结果:3例患者共获得24个α链序列,13个β链序列。α链以AV1S2(54%)、AV12S3(41%)、AV12S2(5%)为主;β链以BV2(38%)、BV29S1(46%)、BV14(3%)、BV4S2(3%)为主。同一病例及不同病例之间CDR3区呈现多样性,但是标本1、标本3各有一条β链的CDR3氨基酸序列相同:SVGTGTLHQETQY;标本2和标本3的各有2条α链CDR3序列相同:AVRDWAGNMLT;标本2的一个α链和标本3的一个α链的CDR3均有:AV…DNN…RLM序列。结论:建立了TCRα和β链全长序列的多重PCR扩增方法。结核患者病变局部克隆性增殖的TCRα和β链谱型呈限制性取用,克隆增生的T淋巴细胞来自不同的亚群,但是相同的CDR3序列对于识别MTB多肽可能具有特异性。 展开更多

关键词 活动性肺结核 t细胞受体 基因重排 CDR3 多重PCR

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非小细胞肺癌患者T细胞受体Vβ表达和克隆性研究 被引量：3

10

作者 周昕熙 李锦添 +3 位作者 吴一龙 王思愚 杨学宁 陈诗萍 《中国肺癌杂志》 CAS 2003年第2期107-110,共4页

目的　了解非小细胞肺癌 (non small celllungcancer ,NSCLC)患者外周血淋巴细胞 (PBL)、肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)及非癌肺组织淋巴细胞中T细胞受体 (TCR)Vβ优势表达情况及优势亚家族的克隆性分布。方法　收集 2 4例NSCLC患者外周血、... 目的　了解非小细胞肺癌 (non small celllungcancer ,NSCLC)患者外周血淋巴细胞 (PBL)、肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)及非癌肺组织淋巴细胞中T细胞受体 (TCR)Vβ优势表达情况及优势亚家族的克隆性分布。方法　收集 2 4例NSCLC患者外周血、肺癌组织和非癌肺组织 ,提取RNA ,经反转录多聚酶链反应 (RT PCR) ,扩增TCRVβ 2 4个亚家族基因的互补决定区 3(CDR3) ,PCR产物进一步经基因扫描分析 ,以 10例正常人外周血结果作对照 ,比较不同来源T细胞TCRVβ亚家族的表达情况。 结果　NSCLC患者仅存在部分亚家族的T细胞 ,其中TCRVβ5的表达率在TIL中 (6/18,33.3% )明显高于PBL(1/2 4,4.2 % )和非癌肺组织(0 /12 ) ,P值均 <0 .0 5 ,而且 6例表达Vβ5的TIL中 2例为寡克隆增殖 ,4例为多克隆增殖。 结论　NSCLC患者TCRVβ 2 4个亚家族呈倾斜性分布和克隆性增殖 ,提示NSCLC的TIL中可能存在肿瘤相关抗原 (TAA) 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 克隆 t细胞受体VΒ 肺肿瘤 NSCLC 淋巴细胞

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抗病毒治疗对CHB患者外周血TCRβ链CDR3谱系的影响 被引量：4

11

作者 陈宇 姚新生 +4 位作者 邱隆敏 马锐 庄勤建 吕红 伍绍强 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期100-104,109,共6页

目的:分析慢性乙型肝炎(CHB)患者抗病毒治疗前后T淋巴细胞受体(TCR)β链各家族互补决定区3(CDR3)谱系的变化,了解抗病毒治疗前后T细胞应答的变化。方法:采用荧光定量PCR(FQ-PCR)溶解曲线法对11例CHB患者抗病毒治疗前后外周血单个核细胞(... 目的:分析慢性乙型肝炎(CHB)患者抗病毒治疗前后T淋巴细胞受体(TCR)β链各家族互补决定区3(CDR3)谱系的变化,了解抗病毒治疗前后T细胞应答的变化。方法:采用荧光定量PCR(FQ-PCR)溶解曲线法对11例CHB患者抗病毒治疗前后外周血单个核细胞(PBMC)T淋巴细胞受体β链可变区(TCR BV)基因各家族CDR3谱系进行分析,了解抗病毒治疗前后T细胞应答的变化。分析TCR CDR3谱系与CHB患者血清病毒载量的关系。结果:11例CHB患者抗病毒治疗后多个TCR CDR3谱系均出现了不同程度偏移。低病毒载量组(HBV DNA≤104拷贝/ml)治疗后谱型偏移率显著高于高病毒载量组(HBV DNA≥105拷贝/ml)。结论:CHB患者抗病毒治疗后单寡谱型偏移率与治疗前血清HBV DNA的水平相关。 展开更多

关键词 慢性乙型肝炎 t淋巴细胞受体 互补决定区 荧光定量PCR

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慢性无症状乙型肝炎病毒携带者外周血T细胞受体谱型分析 被引量：4

12

作者 张光文 姚新生 +3 位作者 马世武 于乐成 王战会 侯金林 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期246-249,共4页

目的分析慢性无症状乙型肝炎病毒携带者(AsC)外周血T细胞TCR-β链CDR3谱型的变化,了解AsC患者T淋巴细胞克隆性增生情况。方法利用逆转录-聚合酶链反应扩增T细胞受体(TCR)各BV家族CDR3区基因,利用谱型分析技术比较各家族CDR3长度分布,了... 目的分析慢性无症状乙型肝炎病毒携带者(AsC)外周血T细胞TCR-β链CDR3谱型的变化,了解AsC患者T淋巴细胞克隆性增生情况。方法利用逆转录-聚合酶链反应扩增T细胞受体(TCR)各BV家族CDR3区基因,利用谱型分析技术比较各家族CDR3长度分布,了解AsCT淋巴细胞克隆性增生情况。对单克隆或寡克隆性增生家族的PCR产物进行序列测定和氨基酸序列分析,进一步了解克隆增生T淋巴细胞的均一性。结果4名正常人的TCRCDR3谱型均呈现正态分布,而9例AsC中均存在不同BV家族的T细胞克隆性增生,CDR3区直接测序结果证实增生的T细胞克隆具有不同长度和序列的氨基酸序列。结论AsC外周血T淋巴细胞存在克隆性增生,且增生的T淋巴细胞不具有均一性。 展开更多

关键词 肝炎病毒 乙型 受体 抗原 t细胞 互补决定区

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抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体介导的αβT细胞CDR3谱系漂移 被引量：4

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作者 罗微 温茜 +1 位作者 周明乾 马骊 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期919-923,共5页

目的探讨抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体(BHL-1)介导的αβT细胞CDR3谱系漂移,为双特异性抗体介导的T细胞免疫应答机制提供理论基础。方法采用免疫扫描谱型分析技术,分析6例正常献血员T细胞在人卵巢癌SKOV3细胞联合BHL-1刺激前后的... 目的探讨抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体(BHL-1)介导的αβT细胞CDR3谱系漂移,为双特异性抗体介导的T细胞免疫应答机制提供理论基础。方法采用免疫扫描谱型分析技术,分析6例正常献血员T细胞在人卵巢癌SKOV3细胞联合BHL-1刺激前后的TCR库多样性变化(CDR3谱型分布特征)及刺激后T细胞TCRα、β链CDR3优势利用情况,对克隆性增生T细胞的CDR3区进行序列分析。结果刺激前6例正常献血员TCR CDR3谱型均呈高斯分布,刺激后发生CDR3谱系漂移,部分TCR Vα、Vβ家族出现优势增生,明确了BHL-1介导下单克隆增生T细胞的α、β链CDR3序列。结论 SKOV3联合BHL-1诱导的T细胞CDR3谱系出现明显漂移,提示CDR3的选择性表达可能与BHL-1介导的特异性T细胞免疫反应有关,特异应答T细胞TCR CDR3序列的确定,将为卵巢癌的T细胞免疫治疗提供基础。 展开更多

关键词 双特异性抗体 抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体 t细胞受体 互补决定区3 基因扫描

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采用荧光定量PCR溶解曲线法监测人TCR alpha链CDR3谱系漂移技术的初步探讨 被引量：6

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作者 汤贤英 孙永苹 +4 位作者 马锐 朱红倩 田祖国 孙万邦 姚新生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期727-730,共4页

目的:初步探讨荧光定量PCR溶解曲线分析技术监测人外周血T细胞TCRalpha链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。方法:提取4例正常人、2例淋巴瘤型白血病患者PBMC中的总RNA,逆转录成cDNA,以32个人TCRalpha链胚系可变区基因家族(TRAV)设计上... 目的:初步探讨荧光定量PCR溶解曲线分析技术监测人外周血T细胞TCRalpha链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。方法:提取4例正常人、2例淋巴瘤型白血病患者PBMC中的总RNA,逆转录成cDNA,以32个人TCRalpha链胚系可变区基因家族(TRAV)设计上游引物,共同的TCRalpha胚系链恒定区基因家族(TRAC)设计下游引物,荧光定量PCR(FQ-PCR)扩增32个TRAV基因各家族CDR3谱系,溶解曲线法分析各家族CDR3谱系的单/寡/多克隆增生。结果:正常人外周血T细胞TCRalpha链32个家族CDR3表达频率不一致,各家族PCR产物的溶解曲线谱型图(melting curve spectratyping)呈现熔点不同的CDR3多态性,为多克隆增生的高斯分布,2例淋巴瘤型白血病患者外周血T细胞TCRalpha链32个家族CDR3表达频率不一致,部分家族呈缺失状态,患者各家族PCR产物的溶解曲线谱型图上,多数家族为多克隆增生的高斯分布,但每个患者均出现数量不等的单克隆和寡克隆增生家族。结论:荧光定量PCR溶解曲线分析TCRalpha链CDR3谱系漂移技术方法稳定简便,能较好地监测正常人和临床样本外周血T细胞TCRalpha链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。 展开更多

关键词 t淋巴细胞受体 互补决定区3 荧光定量PCR 溶解曲线

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乙型肝炎患者治疗前后外周血CD4^+CD25^+Tregs TCR CDR3谱系漂移特征分析 被引量：6

15

作者 潘宗琴 吕红 +2 位作者 庄勤建 姚新生 邱隆敏 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期889-894,899,共7页

目的:探讨AHB患者急性期及恢复期、CHB患者恩替卡韦治疗前后外周血PBMC中CD4^+CD25^+Tregs TCR CDR3谱系漂移特征的变化。方法:采集4例正常人、3例AHB患者(急性期和恢复期)及4例CHB患者恩替卡韦治疗前后外周抗凝静脉血,分离外周血PBMC;... 目的:探讨AHB患者急性期及恢复期、CHB患者恩替卡韦治疗前后外周血PBMC中CD4^+CD25^+Tregs TCR CDR3谱系漂移特征的变化。方法:采集4例正常人、3例AHB患者(急性期和恢复期)及4例CHB患者恩替卡韦治疗前后外周抗凝静脉血,分离外周血PBMC;磁珠分选法分选CD4^+CD25^+Tregs,提取总RNA,逆转录合成c DNA;根据TCRβ链24个可变区基因(TRBV)家族设计相应的上游引物,并在β链恒定区(BC)设计一条共用的FAM荧光标记下游引物及对照引物。PCR扩增出24个包含完整CDR3区的TRBV家族的PCR产物,电泳鉴定目的片段;PCR产物送上海基康用毛细管电泳法进行基因扫描;用Peak Scanner Software v1.0软件分析研究对象TRBV家族CDR3谱系特征;采用配对t检验(paired-sample t test)检测AHB患者急性期及恢复期、CHB患者恩替卡韦治疗前后TRBV家族谱系漂移率差异。结果:3例AHB患者急性期呈现普遍谱系漂移的TRBV4、10、14、16、19家族在恢复期多转变为正态的多峰谱型,AHB患者恢复期外周血CD4^+CD25^+Tregs TRBV家族CDR3谱型漂移率显著低于急性期(t=9.456,P=0.011);TRBV8、11、13.2、15、16、18、20在3例CHB患者抗HBV治疗前出现克隆增生,TRBV1、5.2、6、12、14、24在3例CHB患者抗HBV治疗后出现克隆增生。CHB患者抗病毒治疗后TRBV家族CDR3谱型漂移率高于治疗前(t=-0.666,P=0.553)。结论:AHB患者急性期呈现谱系漂移的TRBV4、10、14、16、19家族在恢复期多转变为正态的多峰谱型,推测这种转变可能与HBsAg、HBeAg转阴相关。CHB患者在治疗前TRBV8、11、13.2、15、16、18、20家族克隆增生的Tregs可能通过下调机体的细胞免疫应答,阻碍病毒清除;随着药物导致病毒载量的显著下降,TRBV1、5.2、6、12、14、24家族克隆增生的Tregs可能更有助于诱导机体出现免疫耐受,导致HBV不能彻底清除。 展开更多

关键词 慢性乙型肝炎 急性乙型肝炎 t淋巴细胞受体 互补决定区3 调节性t细胞 恩替卡韦

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IL-2体外诱导健康人外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移的研究 被引量：3

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作者 常红 罗薇 +5 位作者 马骊 周明乾 温茜 吴远彬 黄宇贤 郭坤元 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期433-435,438,共4页

目的研究IL-2对体外培养的T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移的影响。方法分离健康志愿者外周血T细胞,加入IL-2,常规体外培养,乳酸脱氢酶释放法检测其非特异性杀伤活性;采用免疫谱型分析技术,分析其CDR3长度以判断T细胞的克隆性。结果3例健康志... 目的研究IL-2对体外培养的T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移的影响。方法分离健康志愿者外周血T细胞,加入IL-2,常规体外培养,乳酸脱氢酶释放法检测其非特异性杀伤活性;采用免疫谱型分析技术,分析其CDR3长度以判断T细胞的克隆性。结果3例健康志愿者外周血T细胞对鼻咽癌细胞系CNE2没有杀伤作用;PBMC的TCRVβCDR3谱型均呈高斯分布,经IL-2体外培养后部分家族出现不同的优势表达。结论IL-2对体外培养的T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移有一定影响,对其非特异性杀伤无影响。 展开更多

关键词 IL-2 t细胞受体 互补决定区3 免疫扫描谱型分析

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慢性乙型肝炎患者外周血CD8^+T细胞TCR Vβ基因亚家族克隆化的研究 被引量：4

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作者 熊英 宋玉国 +1 位作者 毕胜利 谭岩 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期751-756,共6页

目的:分析慢性乙型肝炎(CHB)患者CD8+T细胞TCR Vβ基因亚家族克隆化特征。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增8例CHB患者外周血CD8+T细胞TCR Vβ基因22个亚家族的CDR3区,基因扫描技术对TCR Vβ亚家族的克隆化进行鉴定。结果:基... 目的:分析慢性乙型肝炎(CHB)患者CD8+T细胞TCR Vβ基因亚家族克隆化特征。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增8例CHB患者外周血CD8+T细胞TCR Vβ基因22个亚家族的CDR3区,基因扫描技术对TCR Vβ亚家族的克隆化进行鉴定。结果:基因扫描显示所有8例CHB患者CD8+T细胞TCR Vβ基因亚家族均出现一个或一个以上单克隆或寡克隆增生。Vβ8、Vβ11、Vβ12出现单克隆增生的频率相对较高。8例健康者TCR Vβ基因亚家族均为多克隆。结论:CHB患者外周血CD8+T细胞TCR Vβ亚家族存在克隆性增生。 展开更多

关键词 慢性乙型肝炎 t细胞抗原受体 VΒ基因 互补决定区3(CDR3) 克隆化

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慢性粒细胞白血病病人TCRζ链表达特点 被引量：2

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作者 陈思 李扬秋 +3 位作者 陈少华 杨力建 吴秀丽 岑东芝 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1111-1113,共3页

目的:建立实时定量PCR方法检测TCRζ链表达水平的方法,了解慢性粒细胞白血病(CML)外周血TCRζ链表达水平。方法:采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR,相对定量检测30例CML患者和30例正常人外周血的单个核细胞的TCRζ链表达情况,以β2微球蛋白基... 目的:建立实时定量PCR方法检测TCRζ链表达水平的方法,了解慢性粒细胞白血病(CML)外周血TCRζ链表达水平。方法:采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR,相对定量检测30例CML患者和30例正常人外周血的单个核细胞的TCRζ链表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式:2-△△Ct计算CML病人与正常人TCRζ链表达差异倍数。结果:成功建立SYBR GreenⅠ荧光实时定量PCR检测TCRζ链表达检测技术。18例CML患者TCRζ链出现表达低于正常人,而12例CML患者TCRζ链出现表达高于正常人。结论:CML病人中TCRζ链表达水平可分为表达下调(60%)和表达上调(40%)2组,提示部分CML病人的细胞免疫缺陷可能与其TCRζ链表达下调有关。 展开更多

关键词 t细胞受体ξ链 实时定量PCR 白血病 髓样 慢性

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猪T细胞受体α链基因的克隆、序列分析及其结构预测 被引量：3

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作者 冯海燕 莫斯科 +1 位作者 房永祥 景志忠 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第1期23-29,共7页

旨在为研究猪T细胞受体分子结构与功能,并首次在国内克隆了猪T细胞受体α链基因。以GenBank上登载的猪T细胞受体（Tcell receptor,TCR）α链（AB087988）为参考序列,从甘肃合作猪外周血液淋巴细胞中用RT-PCR的方法克隆了TCR-α链基因（p... 旨在为研究猪T细胞受体分子结构与功能,并首次在国内克隆了猪T细胞受体α链基因。以GenBank上登载的猪T细胞受体（Tcell receptor,TCR）α链（AB087988）为参考序列,从甘肃合作猪外周血液淋巴细胞中用RT-PCR的方法克隆了TCR-α链基因（pTCR-α）。结果表明：克隆的TCR-α基因具有完整的ORF,全长819 bp,编码272个氨基酸,预测蛋白分子量为30 kDa,含18个强碱性氨基酸,23个强酸性氨基酸,87个疏水性氨基酸和103个极性氨基酸,含有一段20个氨基酸的信号肽序列;与GenBank上登载的TCR-α参考序列（AB087988）的同源性为94.6%,与其他具有完整ORF的猪TCR-α相比,同源性为54.4%-80.3%。推测可能是一新的TCR-α基因转录本。同时,应用生物信息学技术分析了其基因序列及编码蛋白的结构特征,这为猪T细胞受体分子结构与功能的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 猪t细胞受体α链基因 基因克隆 序列分析 生物信息学

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实时定量PCR检测GVHD患者TCR V_γ亚家族基因表达水平 被引量：2

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作者 吴秀丽 刘启发 +4 位作者 范志平 陈少华 杜璇 孙竞 李扬秋 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1790-1792,共3页

目的了解异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病(GVHD)疾病状态下T细胞受体(TCR) Vγ亚家族T细胞水平的变化情况。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应对18例GVHD患者外周血单个核细胞TCR VγI～III亚家族基因表达水平进行相对定量检测;1... 目的了解异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病(GVHD)疾病状态下T细胞受体(TCR) Vγ亚家族T细胞水平的变化情况。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应对18例GVHD患者外周血单个核细胞TCR VγI～III亚家族基因表达水平进行相对定量检测;12例健康成人外周血样本作为对照。结果GVHD患者外周血中TCR VγII的表达量显著低于正常对照;GVHD患者TCR VγI～III亚家族的表达模式也发生了改变,TCR VγII的表达量比TCR VγI或TCR VγIII的表达量低。结论TCR VγII亚家族的表达低下可能与GVHD的发病相关。 展开更多

关键词 移植物抗宿主病 实时荧光定量聚合酶链反应 t细胞受体Γ 基因表达

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