维生素C体外抑制SVCV入侵鲤鱼上皮瘤细胞的初步研究 被引量：2

1

作者 刘佳 卢玉婷 +3 位作者 刘芸娜 闫子豪 汪惠庆 李月红 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第10期10-14,共5页

为探究维生素C体外抑制鲤春病毒血症病毒(SVCV)侵染鲤鱼上皮瘤细胞(EPC)的能力,本试验构建了体外EPC模型,并运用MTT法、DAPI染色和活性氧测定等方法测定维生素C和SVCV对细胞活性的影响及维生素C对SVCV的抑制作用。结果显示,维生素C对SVC... 为探究维生素C体外抑制鲤春病毒血症病毒(SVCV)侵染鲤鱼上皮瘤细胞(EPC)的能力,本试验构建了体外EPC模型,并运用MTT法、DAPI染色和活性氧测定等方法测定维生素C和SVCV对细胞活性的影响及维生素C对SVCV的抑制作用。结果显示,维生素C对SVCV体外侵染EPC具有显著的抑制作用(P<0.05),且与维生素C浓度呈正相关。本试验可为SVCV的防治提供新的途径。 展开更多

关键词 维生素C 鲤春病毒血症病毒 鲤鱼上皮细胞 抑制

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重组酶聚合酶扩增技术快速检测鲤春病毒血症病毒(SVCV)方法的建立 被引量：12

2

作者 梁君妮 尹伟力 +3 位作者 谢爽 刘宁 段效辉 林森 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1037-1040,共4页

为建立鲤春病毒血症病毒(SVCV)的快速检测方法,本研究根据SVCV的G基因保守序列设计特异性引物,通过条件优化初步建立了基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的SVCV检测方法。该RPA方法最优扩增温度为30℃,恒温反应20 min内即可完成。特异性试... 为建立鲤春病毒血症病毒(SVCV)的快速检测方法,本研究根据SVCV的G基因保守序列设计特异性引物,通过条件优化初步建立了基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的SVCV检测方法。该RPA方法最优扩增温度为30℃,恒温反应20 min内即可完成。特异性试验结果显示,该方法与其它常见鱼类感染病毒无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法对SVCV质粒标准品的最低检出限为89.2拷贝/μL,高于传统的RT-PCR方法;利用已建立的RPA方法和RT-PCR方法对市场购买的80份临床样品进行检测,结果显示,RPA方法与RT-PCR方法检测结果一致,且RPA方法能够有效检出RT-PCR方法的弱阳性样品,表明RPA方法可以用于临床检测。本研究建立的检测SVCV的RPA方法具有快速、简便、特异性强、灵敏度高的特点,适合基层实验室及现地检测。 展开更多

关键词 重组酶聚合酶扩增技术 快速检测 鲤春病毒血症病毒

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鲤春病毒血症病毒(SVCV)人工感染锦鲤攻毒试验

3

作者 花麒 欧阳敏 +2 位作者 田飞焱 刘文珍 徐节华 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第9期86-89,I0007,共5页

为了研究鲤科鱼类感染鲤春病毒血症病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)后的病理变化,试验通过使用本中心实验室采集和保藏的鲤春病毒血症病毒株(JX14-012)对养殖的锦鲤(Cyprinus carpio koi)进行人工感染试验,然后对对照组和试验... 为了研究鲤科鱼类感染鲤春病毒血症病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)后的病理变化,试验通过使用本中心实验室采集和保藏的鲤春病毒血症病毒株(JX14-012)对养殖的锦鲤(Cyprinus carpio koi)进行人工感染试验,然后对对照组和试验组锦鲤进行鲤春病毒血症病毒检测,结果显示,试验组呈阳性,即已感染鲤春病毒血症病毒,对照组呈阴性;对试验组进行生化指标检测发现肝胰脏、肾脏受到严重损害导致功能不全;组织病理切片观察结果发现,脑、鳃、肝胰脏、脾脏、肾脏、肌肉各组织均出现不同程度的变性坏死。表明JX14-012病毒株对锦鲤进行攻毒能够使试验组锦鲤致病,该毒株感染锦鲤后可在其体内复制、增殖,且对锦鲤有一定的致病力。其表现出来的症状对进一步掌握鲤春病毒血症病毒病,及时诊断其危害具有重大的现实意义。 展开更多

关键词 人工感染 鲤春病毒血症病毒病 锦鲤

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鲤Rhbdd3重组乳酸菌微生物制剂的开发及效果评价

4

作者 刘亚楠 张小明 邵玲 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1019-1026,共8页

鱼类Rhbdd3(Rhomboid domain-containing protein 3)蛋白具有抗水生病毒感染功能,然而生产实践中缺乏其大量制备及应用方案。为研制鲤Rhbdd3蛋白重组微生物制剂,利用乳酸菌NICE表达系统,构建了Rhbdd3蛋白重组表达质粒pNZ8148-rhbdd3,并... 鱼类Rhbdd3(Rhomboid domain-containing protein 3)蛋白具有抗水生病毒感染功能,然而生产实践中缺乏其大量制备及应用方案。为研制鲤Rhbdd3蛋白重组微生物制剂,利用乳酸菌NICE表达系统,构建了Rhbdd3蛋白重组表达质粒pNZ8148-rhbdd3,并转化获得了重组乳酸乳球菌pNZ8148-rhbdd3 NZ9000。利用乳酸链球菌素nisin进行Rhbdd3蛋白的诱导表达,并通过SDS-PAGE和Western blotting进行验证。进一步,将重组乳酸乳球菌进行饲料拌喂并开展鲤春病毒血症病毒(SVCV)人工感染实验,检测鱼体免疫因子表达水平及攻毒后鱼体组织病毒载量。结果显示:经nisin诱导后,pNZ8148-rhbdd3 NZ9000能够表达约为39 kDa的特异性蛋白,与Rhbdd3蛋白大小一致。重组乳酸乳球菌的最佳nisin诱导浓度为100 ng/mL,最佳诱导时间为5 h。重组乳酸乳球菌饲喂后14 d,与对照组相比,实验组鲤鱼组织中免疫相关基因IFN1、IRF7、Viperin、Mx1和ISG15的表达水平均显著上调。此外,SVCV攻毒后,重组乳酸乳球菌饲喂组鱼体组织中病毒滴度较对照组显著降低,表明其可以抑制病毒的增殖。研究结果为Rhbdd3蛋白的大量制备和应用提供了一种可行方案,并为鱼类病毒性疾病的防控提供了一种有效措施。 展开更多

关键词 Rhbdd3蛋白 乳酸菌 鲤鱼 鲤春病毒血症病毒 微生物制剂

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鲤春病毒血症病毒糖蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备 被引量：8

5

作者 张家林 李强 +1 位作者 叶仕根 李华 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期454-458,共5页

利用原核表达系统表达纯化鲤春病毒血症病毒(SVCV)G蛋白,制备特异性单克隆抗体,扩增出鲤春病毒0504分离株G基因片段,并将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,经诱导表达、裂解离心包涵体,包涵体经His Bind亲和层析柱纯化及尿素浓度梯度... 利用原核表达系统表达纯化鲤春病毒血症病毒(SVCV)G蛋白,制备特异性单克隆抗体,扩增出鲤春病毒0504分离株G基因片段,并将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,经诱导表达、裂解离心包涵体,包涵体经His Bind亲和层析柱纯化及尿素浓度梯度复性后,作为抗原免疫Balb/c小鼠,制备单克隆抗体。结果表明:成功筛选出2株稳定分泌G蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为1C5、2D5,经Western-Blot检测表明,制备的单克隆抗体具有良好的特异性。本研究中成功制备的抗G蛋白单克隆抗体,可为建立新型鲤春病毒检测方法提供工具。 展开更多

关键词 鲤春病毒血症病毒(svcv) G蛋白 原核表达 单克隆抗体

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鲤春病毒血症病毒单克隆抗体制备及鉴定 被引量：4

6

作者 李月红 葛晨霞 +2 位作者 王龙涛 张培军 张林波 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期242-244,共3页

为制备鲤春病毒血症病毒(SVCV)单克隆抗体(MAb),本研究用纯化的SVCV免疫BALB/c鼠,通过杂交瘤细胞技术,制备2株抗SVCV的MAb,分别命名为2A3和3H7。经间接ELISA检测腹水效价为1:10240和1:12150。亚类鉴定证实,这2株亚类均为IgG1型。经非竞... 为制备鲤春病毒血症病毒(SVCV)单克隆抗体(MAb),本研究用纯化的SVCV免疫BALB/c鼠,通过杂交瘤细胞技术,制备2株抗SVCV的MAb,分别命名为2A3和3H7。经间接ELISA检测腹水效价为1:10240和1:12150。亚类鉴定证实,这2株亚类均为IgG1型。经非竞争酶免疫试验测定2A3和3H7的抗体亲和力常数分别为4.86×108L/mol和1.86×109L/mol,3H7相对亲和力高于2A3。MAb 2A3和3H7的饱和度均为1:400,叠加试验所得增值指数为63.2%,大于50%。抗体反应增值结果表明:两株MAb分别针对不同抗原位点。免疫印迹分析检测表明,两株纯化的MAb均可与SVCV抗原发生特异反应。 展开更多

关键词 鲤春病毒血症病毒 单克隆抗体 制备 鉴定

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鲤春病毒血症病毒Shlj1株糖蛋白空间结构及其B细胞抗原表位的预测 被引量：6

7

作者 纪锋 徐黎明 +4 位作者 赵景壮 刘淼 卢彤岩 贺文斌 尹家胜 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期440-446,共7页

为预测鲤春病毒血症病毒(Spring Viremia of Carp Virus,SVCV)Shlj1株糖蛋白(Glycoprotein,G)的空间结构及B细胞抗原表位,采用RT-PCR法从接种SVCV的鲤上皮细胞悬液提取的病毒总RNA中扩增糖蛋白基因,并通过序列测定获得Shlj1株糖蛋白基... 为预测鲤春病毒血症病毒(Spring Viremia of Carp Virus,SVCV)Shlj1株糖蛋白(Glycoprotein,G)的空间结构及B细胞抗原表位,采用RT-PCR法从接种SVCV的鲤上皮细胞悬液提取的病毒总RNA中扩增糖蛋白基因,并通过序列测定获得Shlj1株糖蛋白基因的核苷酸序列及氨基酸序列,利用Phyre2对Shlj1分离株的糖蛋白空间结构进行预测,使用DNAStar软件综合分析糖蛋白的柔性区域、亲水性、表面可能性和抗原指数参数。结果表明:获得的SVCV Shlj1株糖蛋白核苷酸序列长1527 bp,推导出其氨基酸序列为509aa;空间结构预测显示,SVCV Shlj1株糖蛋白存在一定数量的α-螺旋、β-折叠、β-转角及大量无规则卷曲结构,空间构象较规则;抗原指数及抗原表位指数分析显示,糖蛋白中存在许多抗原指数较高的区域,该区域平均抗原指数为1.025,最大值达1.250,其中5个区域(4~26、145~157、293~302、315~327、407~491氨基酸区段)可能是B细胞抗原表位的主要分布区域。本研究结果为SVCV糖蛋白表位疫苗的设计及单克隆抗体的制备奠定了理论基础。 展开更多

关键词 鲤春病毒血症病毒 糖蛋白 空间结构 B细胞抗原表位

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草鱼(Ctenopharyngodon idellus)性腺细胞系(GCO)特性和对鲤春病毒的敏感性 被引量：3

8

作者 王津津 刘莹 +7 位作者 于力 贾鹏 陈兵 史秀杰 郑晓聪 兰文升 何俊强 刘荭 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2016年第6期56-61,共6页

草鱼(Ctenopharyngodon idellus)性腺细胞系(GCO)是中国科学院水生生物研究所在20世纪70年代开展草鱼出血病研究时建立的一株细胞系,迄今已传至300多代,在中国鱼类病毒学研究领域发挥了重要作用。本研究采用形态学观察、细胞生长曲线测... 草鱼(Ctenopharyngodon idellus)性腺细胞系(GCO)是中国科学院水生生物研究所在20世纪70年代开展草鱼出血病研究时建立的一株细胞系,迄今已传至300多代,在中国鱼类病毒学研究领域发挥了重要作用。本研究采用形态学观察、细胞生长曲线测定、细胞周期测定、细胞核型分析、细胞凋亡检测、电镜观察等方法,对GCO的生长特性及鲤春病毒血症病毒(SVCV)在该细胞中的增殖特性等进行了研究。结果显示,GCO细胞的最适生长温度为25℃,在M199和MEM等细胞培养液中均能较好地生长,培养液中最适的胎牛血清浓度为10%。测定了GCO细胞系对SVCV病毒的敏感性,发现与鲤(Cyprinus carpio)上皮瘤细胞系(EPC)、肥头鲤(Pimephales promelas)细胞系(FHM)、大鳞大麻哈鱼(Oncorhynchus tshawytscha)胚胎细胞系(CHSE-214)等世界动物卫生组织(OIE)推荐和各检测实验室常用的鱼类细胞系相比,GCO细胞系对SVCV表现出非常高的敏感性。生长曲线、电镜观察和凋亡实验显示,SVCV能引起GCO细胞系出现明显而稳定的细胞病变,引起GCO细胞系出现凋亡,并在细胞质中大量增殖。结果表明,GCO细胞系适用于SVCV病毒的分离、检测以及病毒致病性的有关研究。GCO细胞的适宜生长温度为15–28℃,这一特点将使它可以广泛地用于多种水生动物病毒的分离。 展开更多

关键词 草鱼性腺细胞系 生物学特性 易感性 鲤春病毒血症病毒

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鲤春病毒糖蛋白(G)基因的分离及同源性比较 被引量：3

9

作者 耿波 孙效文 +2 位作者 牟振波 梁利群 欧阳红生 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第C00期450-454,共5页

通过RT—PCR和巢氏PCR方法从疑似鲤春病毒（SVCV）侵染的镜鲤肝组织中获得了鲤眷病毒糖蛋白（G）基因。通过序列测定与分析，所获得的鲤春病毒糖蛋白（G）基因由606个核苷酸组成。编码一个由202个氨基酸组成的糖蛋白。通过NCBI blast与... 通过RT—PCR和巢氏PCR方法从疑似鲤春病毒（SVCV）侵染的镜鲤肝组织中获得了鲤眷病毒糖蛋白（G）基因。通过序列测定与分析，所获得的鲤春病毒糖蛋白（G）基因由606个核苷酸组成。编码一个由202个氨基酸组成的糖蛋白。通过NCBI blast与9个来自不同国家或地区的鲤春病毒糖蛋白（G）基因序列比对分析，发现获得的鲤鱼春季病毒糖蛋白G基因DNA序列与美国分离的AY527273株同源性最高为99．8％，与中国分离的AY842485株同源性次高为98．7％，与英国分离的两个序列SVI538065和SVI538066株的同源性为98．2％，而与其它国家的分离株如SVUI8101、SVI318079、SVI538061、SVI538062、SVI538063的同源性最差，仅为89．4％-90．0％。氨基酸同源性分析结果与DNA同源性分析结果一致，所获得的鲤春病毒糖蛋白G基因氨基酸推导序列与其它9个分离株的氨基酸同源性在89．6％-99．5％之间。对SVCV不同分离株遗传变异和进化关系的分析为下一步开展SVCV快速诊断方法的研究和疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 鲤春病毒病 糖蛋白 序列同源性 分离株

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鲤春病毒血症病毒糖蛋白的高效表达和纯化 被引量：7

10

作者 兰文升 刘荭 +4 位作者 高隆英 史秀杰 郑晓聪 何俊强 卢体康 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第2期18-22,共5页

本研究从鲤春病毒血症病毒（Spring viremia of carp virus，SVCV）SVCV-741毒株克隆鲤春病毒血症病毒糖蛋白基因（sue—g），将svc-g亚克隆到原核表达载体pET-28a，转化大肠杆菌E．coli BL-21（DE3）后，用IPTG诱导培养，获得菌体总蛋... 本研究从鲤春病毒血症病毒（Spring viremia of carp virus，SVCV）SVCV-741毒株克隆鲤春病毒血症病毒糖蛋白基因（sue—g），将svc-g亚克隆到原核表达载体pET-28a，转化大肠杆菌E．coli BL-21（DE3）后，用IPTG诱导培养，获得菌体总蛋白。用SVCV毒株免疫山羊所得到的抗血清作为一抗进行免疫印迹实验，结果在硝酸纤维素滤膜上检测到50～71 kDa之间的特异性免疫条带，与SVCV糖蛋白预测分子量一致，研究证明了工程茵表达获得的重组蛋白具有与SVCV毒株相同的免疫原性，也证明了该蛋白的糖基化对其免疫表位是非必需的。本研究进一步通过发酵基因工程菌和蛋白质纯化过程，获得大量的鲤春病毒血症病毒糖蛋白，为后期免疫动物获得抗血清储备了原料，也为SVCV的免疫学检测方法的建立奠定了物质基础。 展开更多

关键词 糖蛋白 表达 鲤春病毒血症病毒

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鲤鱼春季病毒血症病毒磷蛋白基因的克隆与原核表达 被引量：2

11

作者 李月红 付云红 +2 位作者 Julia Pridgeon 宋琳 张东鸣 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2012年第7期59-63,共5页

【目的】克隆鲤鱼春季病毒血症病毒(SVCV)的磷蛋白(P蛋白)基因,并对其进行原核表达,为进一步制备SVCV P蛋白单克隆抗体及建立新的SVCV诊断方法奠定基础。【方法】采用RT-PCR方法扩增SVCV P蛋白基因,将其克隆入pET-28a(+)载体中,获得原... 【目的】克隆鲤鱼春季病毒血症病毒(SVCV)的磷蛋白(P蛋白)基因,并对其进行原核表达,为进一步制备SVCV P蛋白单克隆抗体及建立新的SVCV诊断方法奠定基础。【方法】采用RT-PCR方法扩增SVCV P蛋白基因,将其克隆入pET-28a(+)载体中,获得原核重组表达质粒pET28-P,进行原核表达。将该重组原核表达质粒转化至大肠杆菌Rosetta感受态细胞中,用0.4mmol/L IPTG进行诱导表达,用镍亲和层析试剂盒对表达产物进行纯化,分别用SDS-PAGE和Western Blotting方法对表达产物进行鉴定。【结果】成功克隆了SVCV P蛋白基因,该基因长度为933bp。成功构建了原核重组表达质粒pET28-P,其诱导表达产物分子质量约为37ku;表达的重组P蛋白可被SVCV阳性血清所识别。【结论】成功克隆了SVCV P蛋白基因,获得了分子质量约为37ku的重组P蛋白。 展开更多

关键词 鲤春病毒血症病毒 P蛋白 原核表达

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流式细胞仪在快速测定鲤春病毒血症病毒滴度中的应用 被引量：2

12

作者 王津津 贾鹏 +7 位作者 史秀杰 于力 阮周曦 郑晓聪 何俊强 兰文升 宋思静 刘荭 《中国动物检疫》 CAS 2015年第9期82-86,共5页

本研究建立了流式细胞仪快速检测鲤春病毒血症病毒(spring viraemia of carp virus,SVCV)滴度的方法。运用荧光激活细胞分选(fluorescence-activated cell sorting,FACS)技术检测SVCV A1株对草鱼性腺细胞系(GCO)的感染情况。用SVCV病毒... 本研究建立了流式细胞仪快速检测鲤春病毒血症病毒(spring viraemia of carp virus,SVCV)滴度的方法。运用荧光激活细胞分选(fluorescence-activated cell sorting,FACS)技术检测SVCV A1株对草鱼性腺细胞系(GCO)的感染情况。用SVCV病毒单克隆抗体为一抗,FITC标记的羊抗鼠抗体为二抗,运用FACS来检测感染后不同时间点,以及不同病毒接种量的阳性细胞率。感染第3天时为最佳的病毒滴度测定时间点,测得SVCV的病毒滴度为8.31×105 FIU/m L,最低检测病毒滴度为(1000 FIU/m L),与传统空斑试验(plaque assay,PA)相比,两种方法测得的结果基本一致。实验结果表明,FACS是一种简捷、高效、直接的检测SVCV滴度的方法,是一种新型的病毒滴度测定方法。 展开更多

关键词 鲤春病毒血症 草鱼性腺细胞系 流式细胞术 空斑试验 病毒滴度

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鲤春病毒血症病毒G蛋白的研究进展 被引量：2

13

作者 张家林 李洋 李强 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期20-24,共5页

鲤春病毒血症病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)是引起鱼类传染性病毒病鲤春病毒血症(Spring viremia of carp,SVC)的病原,对鲤科鱼类养殖业造成巨大的经济损失。囊膜糖蛋白G可介导病毒内吞,还是最主要的抗原决定簇蛋白,已成为... 鲤春病毒血症病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)是引起鱼类传染性病毒病鲤春病毒血症(Spring viremia of carp,SVC)的病原,对鲤科鱼类养殖业造成巨大的经济损失。囊膜糖蛋白G可介导病毒内吞,还是最主要的抗原决定簇蛋白,已成为国内外研究的热点。综述G蛋白在表达技术、病毒检测、疫苗研制等方面的研究状况,旨在为G蛋白的深入研究及鲤春病毒血症的防治提供参考。 展开更多

关键词 鲤春病毒血症病毒 糖蛋白 蛋白表达 检测 疫苗

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鲤春病毒血症病毒焦磷酸测序检测技术的建立 被引量：4

14

作者 刘瑶 尹伟力 +2 位作者 张四化 岳志芹 孙涛 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期449-455,共7页

通过收集鲤春病毒血症病毒基因序列,设计了鲤春病毒血症病毒最为保守的指纹序列,以及测序引物,建立了鲤春病毒血症病毒焦磷酸测序检测方法。对所构建的鲤春病毒血症病毒焦磷酸检测方法进行特异性试验和灵敏度检测,试验结果表明所建立的... 通过收集鲤春病毒血症病毒基因序列,设计了鲤春病毒血症病毒最为保守的指纹序列,以及测序引物,建立了鲤春病毒血症病毒焦磷酸测序检测方法。对所构建的鲤春病毒血症病毒焦磷酸检测方法进行特异性试验和灵敏度检测,试验结果表明所建立的方法特异性好,在8种鱼类病毒中能够特异性检测出目的病毒,检测方法灵敏度高,最低检出核酸量为10pg/μL。对建立的焦磷酸测序检测方法进行了实际应用研究,选取国内采集与进口的鱼类样本共计80批次进行鲤春病毒血症病毒检测。结果显示,焦磷酸测序检测方法可以有效的检出常规RT-PCR不能检出的假阴性样本和弱阳性样本,该方法的灵敏度和特异性可以满足水生动物疫病检测的需要。 展开更多

关键词 鲤春病毒血症病毒 焦磷酸测序 检测

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鲤春病毒血症病毒生物学研究进展 被引量：3

15

作者 刘佳 卢玉婷 +3 位作者 刘芸娜 闫子豪 汪惠庆 李月红 《水产科技情报》 2022年第1期48-52,共5页

近年来,鱼类急性出血性疾病——鲤春病毒血症的暴发屡屡给水产养殖业带来巨大的经济损失。鲤春病毒血症是由鲤春病毒血症病毒引起的,该病毒具有传染性强,发病率高的特点,目前尚无有效治疗药物。文章从流行特点、临床症状、生物学特征、... 近年来,鱼类急性出血性疾病——鲤春病毒血症的暴发屡屡给水产养殖业带来巨大的经济损失。鲤春病毒血症是由鲤春病毒血症病毒引起的,该病毒具有传染性强,发病率高的特点,目前尚无有效治疗药物。文章从流行特点、临床症状、生物学特征、检测技术和疫苗研究等方面总结概述了鲤春病毒血症病毒的生物学研究进展,可为进一步深入研究该病毒提供参考依据。 展开更多

关键词 鲤春病毒血症病毒 基因组 检测技术

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纳米磁珠现场提取鲤春病毒核酸的方法研究

16

作者 王姝 刘朋朋 +6 位作者 张雷 张伟 孙明 赵晓丽 刘翌 邓丛良 张利峰 《中国动物检疫》 CAS 2013年第5期46-48,共3页

使用纳米磁珠(MNP)提取鲤春病毒(SVCV)核酸,置25℃和4℃保存,分别在第1、4、11、20天时,用荧光RT-PCR方法检测。结果显示MNP提取到的SVCV核酸均出现典型扩增,并且与对照样品的Ct值接近,证实MNP可以有效地吸附鲤春病毒核酸,并能释放核酸... 使用纳米磁珠(MNP)提取鲤春病毒(SVCV)核酸,置25℃和4℃保存,分别在第1、4、11、20天时,用荧光RT-PCR方法检测。结果显示MNP提取到的SVCV核酸均出现典型扩增,并且与对照样品的Ct值接近,证实MNP可以有效地吸附鲤春病毒核酸,并能释放核酸。MNP提取的核酸保存20d后,荧光RT-PCR依然可检测到阳性,说明MNP提取到的病毒核酸能在常温或低温下保存。这样就能够在现场处理样品,方便样品的携带,节约运输成本,提高实验室的样品处理效率。 展开更多

关键词 纳米磁珠(MNP) 鲤春病毒(svcv) 荧光RT-PCR

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鲤春病毒血症病毒RT-RAA-LFD检测方法的建立 被引量：9

17

作者 朱裕敏 吴江 +7 位作者 廖立珊 王婉君 孙洁 陈兵 王津津 郑晓聪 贾鹏 刘荭 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期916-921,共6页

为建立一种可现场快速准确检测鲤春病毒血症病毒(SVCV)的方法,本研究结合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,根据SVCV L基因保守区域设计引物及探针,通过优化反应时间和温度等条件,初步建立了可用于SVCV现场可视化检测的RT-RA... 为建立一种可现场快速准确检测鲤春病毒血症病毒(SVCV)的方法,本研究结合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,根据SVCV L基因保守区域设计引物及探针,通过优化反应时间和温度等条件,初步建立了可用于SVCV现场可视化检测的RT-RAA-LFD方法。优化后的检测方法在35℃水浴锅中恒温反应15 min即可实现对SVCV目的基因片段的有效扩增。结果显示,该方法可以特异性的检测SVCV,并且不与病毒性出血败血症病毒、传染性鲑鱼贫血症病毒、病毒性神经坏死病毒等其他常见鱼类病毒发生交叉反应;对SVCV重组质粒标准品的检测限为2.42×10^(2)拷贝/μL,并具有较好的稳定性和重复性;采用该方法和病毒分离、套式RT-PCR、荧光定量RT-PCR、荧光定量RT-RAA共5种方法同时对45份临床样品检测,其中病毒分离、套式RT-PCR和荧光定量RT-PCR均检测到29份阳性样品,荧光定量RT-RAA和本研究建立的方法均检测到28份阳性样品,本研究与前3种方法的阳性符合率为97.8%,与荧光定量RT-RAA的阳性符合率为100%。上述结果表明,本研究建立的SVCV RT-RAA-LFD检测方法简便快捷、特异性强、敏感性高、结果可靠,且不依赖于复杂的仪器,可适用于现场和实验室对SVCV的快速检测。 展开更多

关键词 鲤春病毒血症病毒 重组酶介导扩增 侧向流试纸条 恒温扩增 快速检测

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江西省2005～2017年鲤春病毒血症病毒感染流行病学研究 被引量：4

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作者 田飞焱 欧阳敏 +5 位作者 谢世红 徐节华 刘文珍 孟霞 银旭红 花麒 《水产学杂志》 CAS 北大核心 2019年第2期32-36,共5页

2005—2017年,从江西省69个县(区、市)的渔场采集576份样品,用细胞分离法和聚合酶链式反应(PCR)监测鲤春病毒血症(SVC)病原,通过测序获得部分病毒分离株糖蛋白(G)的部分基因片段进行进化树分析,以了解江西省SVC的流行状况和特征。结果... 2005—2017年,从江西省69个县(区、市)的渔场采集576份样品,用细胞分离法和聚合酶链式反应(PCR)监测鲤春病毒血症(SVC)病原,通过测序获得部分病毒分离株糖蛋白(G)的部分基因片段进行进化树分析,以了解江西省SVC的流行状况和特征。结果共发现了23个鲤春病毒血症病毒(SVCV)分离株,阳性检出率为3.99%,阳性渔场分布区域较广,表明SVCV在江西省散在性分布;鲫Carassius auratus的SVCV携带率显著高于鲤Cyprinus carpio、草鱼Ctenopharyngodon idellus,与锦鲤Cyprinus carpio haematopterus相当,说明在本地区除锦鲤外,鲫也是SVCV高度易感种。SVCV G基因部分序列的进化树分析显示,江西地区SVCV分离株与其他SVCV中国分离株、美国分离株同源性较高,均属于SVCVⅠa基因亚型。江西省各主要水系均与鄱阳湖密切相连。为了降低SVC病原的传播和扩散风险,需扩大疫情监测范围(包括野生鱼类),加强生物安保意识的宣传,筑牢生物安全屏障。 展开更多

关键词 江西 鲤春病毒血症病毒 流行病学

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基于RPA的鲤春病毒血症病毒核酸检测技术的建立与评价 被引量：4

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作者 田城城 兰文升 叶仕根 《中国动物检疫》 CAS 2020年第2期99-106,共8页

重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)是近几年新发展并普及应用的一种核酸扩增技术,能够实现检测设备小型化,从而满足现场诊断(point-of-care testing,POCT)的需求。本研究以鲤春病毒血症病毒(springviraem... 重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)是近几年新发展并普及应用的一种核酸扩增技术,能够实现检测设备小型化,从而满足现场诊断(point-of-care testing,POCT)的需求。本研究以鲤春病毒血症病毒(springviraemiaofcarp virus,SVCV)为检测靶标,建立了SVCV的RPA检测技术,并分析了该方法的灵敏性、特异性和稳定性,评判了该技术应用于POCT的可能性。结果表明:基于RPA的检测方法灵敏度较高,检测下限可达4×10~3 PFU/mL,但比以Taq酶为基础的RT-PCR技术略低;特异性好,未发现对其他水生动物疫病病原,如传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)、病毒性出血性败血症病毒(VHSV)、传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)、传染性鲑鱼贫血病病毒(ISAV)等发生非特异性反应;稳定性良好,3次重复性试验的结果近乎一致。试验证明,该方法能够替代RT-PCR技术,应用于POCT的试剂和仪器设备研发。 展开更多

关键词 重组酶聚合酶扩增技术 鲤春病毒血症病毒 核酸检测 评价

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鲤Pdcd6ip蛋白真核表达载体的构建及抗病毒功能研究

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作者 邵玲 张明辉 彭军辉 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期529-536,共8页

为进一步研究程序性细胞死亡6互作蛋白Pdcd6ip(Programmed cell death 6-interacting protein)分子功能,探讨其表达对鲤春病毒血症病毒(Spring viraemia of carp virus,SVCV)增殖的影响,研究通过逆转录-聚合酶链式反应扩增得到两端带有N... 为进一步研究程序性细胞死亡6互作蛋白Pdcd6ip(Programmed cell death 6-interacting protein)分子功能,探讨其表达对鲤春病毒血症病毒(Spring viraemia of carp virus,SVCV)增殖的影响,研究通过逆转录-聚合酶链式反应扩增得到两端带有Nhe I和EcoR I酶切位点的pdcd6ip编码片段,并将其克隆至真核表达载体pCI-neo上,构建了真核表达质粒pCI-pdcd6ip。获得的过表达质粒转染至EPC细胞后进行RT-qPCR和western blot检测Pdcd6ip的表达情况,并利用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响。细胞转染后24h进行SVCV感染,检测Pdcd6ip过表达对SVCV增殖的影响。结果显示,Pdcd6ip蛋白真核重组质粒能够在EPC细胞中大量表达,转染后72h细胞活性较对照组无显著差异。同时,免疫荧光、RT-qPCR和western blot检测结果均显示,Pdcd6ip蛋白过表达后,SVCV M蛋白mRNA水平和蛋白表达水平较对照组显著下降,表明Pdcd6ip过表达显著抑制了SVCV的增殖。研究为抗SVCV药物的研发提供了新的研究基础和设计思路。 展开更多

关键词 鲤春病毒血症病毒 Pdcd6ip蛋白 过表达质粒 细胞活性 抗病毒 鲤

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