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RNA干扰血管内皮生长因子受体2基因表达提高结肠癌细胞对奥沙利铂敏感性的研究 被引量:1
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作者 杨平 魏建昌 +3 位作者 陈华翠 张通 曾山崎 曹杰 《中国医药导报》 CAS 2017年第20期16-19,共4页
目的研究RNA干扰血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)基因表达对人结肠癌细胞生长的抑制作用和对奥沙利铂的化疗增敏作用。方法构建靶向VEGFR-2基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达质粒并转染人结肠癌细胞株SW480;通过RT-PCR和Western blot方法... 目的研究RNA干扰血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)基因表达对人结肠癌细胞生长的抑制作用和对奥沙利铂的化疗增敏作用。方法构建靶向VEGFR-2基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达质粒并转染人结肠癌细胞株SW480;通过RT-PCR和Western blot方法检测VEGFR-2 siRNA对人结肠癌细胞株SW480 VEGFR-2mRNA和蛋白表达的影响;采用MTT实验和流式细胞术检测该siRNA及协同奥沙利铂对细胞增殖及凋亡的影响。结果 VEGFR-2 siRNA显著下调结肠癌细胞VEGFR-2 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。VEGFR-2 siRNA协同奥沙利铂使结肠癌细胞的生长变得更加缓慢,增殖受到明显抑制,细胞抑制及凋亡明显增强(P<0.05)。结论RNA干扰VEGFR-2基因表达可以抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,促进其凋亡,并能提高结肠癌细胞对奥沙利铂的敏感性。 展开更多
关键词 结肠癌 血管内皮生长因子受体2 小分子干扰rna 奥沙利铂
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干扰和稳定表达GP5对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染早期复制的影响 被引量:1
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作者 宋林林 贾存瑜 +2 位作者 韩熙梦 周恩民 穆杨 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1231-1240,共10页
为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)主要结构蛋白GP5对病毒复制的影响及其机制,利用PiggyBac Transposon载体系统构建表达GP5的重组质粒(pPB-GP5),转染Marc-145细胞通过嘌呤霉... 为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)主要结构蛋白GP5对病毒复制的影响及其机制,利用PiggyBac Transposon载体系统构建表达GP5的重组质粒(pPB-GP5),转染Marc-145细胞通过嘌呤霉素抗性筛选和3次亚克隆,获得稳定表达GP5的Marc-145细胞,在确定GP5表达不影响细胞增殖的基础上,用PRRSV感染筛选的细胞,通过N基因拷贝数、N蛋白表达水平和病毒滴度检测确定GP5表达对病毒复制的影响,并采用ELISA方法检测培养上清中IFN-α、IFN-β、IFN-γ的水平;进一步针对PRRSV ORF5编码区设计合成3对特异性siRNA,转染Marc-145细胞6和12h后以0.1 MOI病毒感染细胞,感染后24h收集细胞,采用荧光定量PCR(qPCR)检测GP5mRNA的表达,采用Western blot检测PRRSV N蛋白的表达。结果显示:经RT-PCR、Western blot和IFA检测,确定GP5在Marc-145细胞中获得稳定表达,且不影响细胞增殖,但可以在感染早期促进PRRSV在细胞中的复制,这种促进作用可能是通过下调IFN的表达发挥的;与阴性对照siRNA相比,3对特异性siRNA均能抑制PRRSV复制,其中100nmol·L^(-1)的siRNA GP5-471的抑制效果最好。研究表明GP5在PRRSV复制中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5 小干扰rna 稳定表达 干扰素
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沉默IFITM1基因对卵巢癌CP70细胞增殖和侵袭能力的影响 被引量:3
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作者 杨蓉 高婷婷 +2 位作者 姚念玲 王建 陈必良 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期543-546,577,共5页
目的探讨siRNA沉默IFITM1基因表达对卵巢癌CP70细胞增殖和侵袭的影响。方法利用脂质体转染法将靶向IFITM1的小干扰RNA(siRNA)转染卵巢癌细胞株CP70;qRT-PCR和Western blot观察转染后CP70细胞IFITM1mRNA和蛋白表达的变化;平板克隆形成实... 目的探讨siRNA沉默IFITM1基因表达对卵巢癌CP70细胞增殖和侵袭的影响。方法利用脂质体转染法将靶向IFITM1的小干扰RNA(siRNA)转染卵巢癌细胞株CP70;qRT-PCR和Western blot观察转染后CP70细胞IFITM1mRNA和蛋白表达的变化;平板克隆形成实验和Transwell小室分别检测各组细胞增殖和侵袭能力的变化。结果转染组CP70细胞的IFITM1mRNA和蛋白表达明显受抑制;转染组、阴性对照组及转染试剂对照组形成克隆数分别为84、181、178,克隆形成率分别为42%、90.5%、89%,迁移出的细胞分别约为59个、121个、126个,转染组结果与其他两组之间有统计学差异,说明转染IFITM1siRNA抑制了卵巢癌CP70细胞增殖和侵袭能力。结论沉默IFITM1可以降低卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力,IFITM1可能成为卵巢癌治疗的潜在新靶点。 展开更多
关键词 IFITM1 小干扰rna 卵巢癌 细胞增殖 细胞侵袭
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