不同原理的PCR方法用于地中海贫血产前诊断的验证应用 被引量：9

1

作者 肖奇志 王格 +3 位作者 李恋湘 李磊 谢建红 周玉球 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第6期994-996,共3页

目的:评估两种不同技术原理的PCR方法用于地中海贫血(下称"地贫")产前诊断的必要性和可行性。方法 :采用双盲法,对509份产前诊断标本分别采用单管多重PCR法(single-tube multiplex PCR,STMP)+反向点杂交法(reverse dot blot,R... 目的:评估两种不同技术原理的PCR方法用于地中海贫血(下称"地贫")产前诊断的必要性和可行性。方法 :采用双盲法,对509份产前诊断标本分别采用单管多重PCR法(single-tube multiplex PCR,STMP)+反向点杂交法(reverse dot blot,RDB)、探针熔解曲线法(probe melting curve assay,PMCA)检测常见α-地贫和β-地贫基因突变。两种方法所得结果不一致或少见类型地贫突变时,采用DNA测序分析法确诊。所有产前诊断结果均进行验证或随访。结果 :经STMP+RDB、PMCA检测突变谱不同,α-地贫和β-地贫各有1例结果不同。另STMP+RDB检测灵敏度高于PMCA,其差异性在标本受母血污染时有提示作用。结论:两种不同技术原理的PCR方法进行地贫产前诊断,是必要和可行的,两者具有互补性,可确保结果的可靠性和减少单一技术的缺陷。 展开更多

关键词 地中海贫血 多重PCR 反向点杂交 探针熔解曲线 产前诊断

在线阅读 下载PDF 职称材料

反向斑点杂交法快速检测甘薯羽状斑驳病毒和甘薯G病毒 被引量：14

2

作者 何海旺 何虎翼 +5 位作者 谭冠宁 刘义明 何新民 唐洲萍 李丽淑 王晖 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期43-48,共6页

【目的】以克隆得到的甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)和甘薯G病毒(Sweet potato virus G,SPVG)基因片段为探针建立反向斑点杂交技术体系,应用于甘薯组培脱毒苗带毒情况检测,为生产优质甘薯组培脱毒苗提供... 【目的】以克隆得到的甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)和甘薯G病毒(Sweet potato virus G,SPVG)基因片段为探针建立反向斑点杂交技术体系,应用于甘薯组培脱毒苗带毒情况检测,为生产优质甘薯组培脱毒苗提供保障。【方法】根据已公布的侵染甘薯的SPFMV和SPVG的核苷酸序列设计两对特异引物,以RT-PCR法从染病的甘薯叶片扩增SPFMV和SPVG的两个片段,并以克隆到的两个病毒片段及内参基因Actin片段为探针建立反向斑点杂交体系。【结果】分别克隆出长度约310和500 bp的片段,经BLAST比对,所获得的310 bp片段为SPFMV的外壳蛋白基因片段,同源性为97%,500 bp片段为SPVG的外壳蛋白基因片段,同源性为99%。分别用带有SPFMV和SPVG片段的重组质粒pUC-SPFMV和pUC-SPVG进行反向斑点杂交,发现不同病毒能获得单一信号,无交叉现象。以染病甘薯和脱毒甘薯苗为样品,用该种病毒的探针进行反向斑点杂交,染病植株样品中能获得单一信号,而脱毒苗甘薯样品未见任何信号,杂交结果与RT-PCR检测结果一致。【结论】用建立的反向斑点杂交技术体系能有效检测甘薯中的SPFMV和SPVG,无交叉信号,可用于甘薯组培脱毒苗的前期检测。 展开更多

关键词 甘薯 甘薯羽状斑驳病毒 甘薯G病毒毒 病毒检测 反向斑点杂交技术

在线阅读 下载PDF 职称材料

用抑制消减杂交法分离巴西橡胶树胶乳特异表达基因 被引量：8

3

作者 邓柳红 罗明武 +2 位作者 曾会才 杨卫帆 张春发 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第6期32-36,共5页

采用巴西橡胶树常割树胶乳的Poly(A+)RNA为Tester,叶片Poly(A+)RNA为Driver,通过抑制消减杂交法(suppressivesubtractivehybridization,SSH)构建了一个胶乳特异表达基因差减文库,通过菌落PCR及反式NorthernDot-Blot筛选鉴定阳性差异片段... 采用巴西橡胶树常割树胶乳的Poly(A+)RNA为Tester,叶片Poly(A+)RNA为Driver,通过抑制消减杂交法(suppressivesubtractivehybridization,SSH)构建了一个胶乳特异表达基因差减文库,通过菌落PCR及反式NorthernDot-Blot筛选鉴定阳性差异片段,获得79个胶乳特异表达阳性克隆,部分阳性克隆还通过NorthernBlot杂交及RT-PCR进一步验证。随机挑选部分阳性克隆序列比较分析,结果表明有部分克隆与巴西橡胶树中已知的基因相同,而多数克隆在巴西橡胶树中是新发现,它们与橡胶生物合成、物质代谢运输、信号传导和形态建成等相关。 展开更多

关键词 巴西橡胶树 抑制消减杂交法 胶乳 反式Northern dot—blot

在线阅读 下载PDF 职称材料

利用孕妇血浆中的胎儿DNA进行β-地中海贫血的产前诊断 被引量：12

4

作者 李广华 荣卡彬 +5 位作者 罗燕飞 陈冬 龚彩平 吴劲 邸玉玮 葛艳芬 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1437-1439,共3页

目的利用孕妇血浆中游离胎儿DNA(cffDNA)对广东省最常见17种β地中海贫血的突变基因进行扩增,探讨非创引个伤常性物见产,对位前c点诊ffD和断Nβ9A-个地进少中行见海二位贫次点血P突C的R变可,反的行向共性斑。17点方种杂法β地交贫技①... 目的利用孕妇血浆中游离胎儿DNA(cffDNA)对广东省最常见17种β地中海贫血的突变基因进行扩增,探讨非创引个伤常性物见产,对位前c点诊ffD和断Nβ9A-个地进少中行见海二位贫次点血P突C的R变可,反的行向共性斑。17点方种杂法β地交贫技①基术羊因检水;测途②β径抽地:取中抽孕海取妇贫孕外血妇周的羊血突水,变共柱基9分例因离,。采法结用提果反取向及9例斑凝孕点胶妇杂回中交收有技纯5术化例检D经N测羊A中,水设国检计人测群3对证8实胎儿有父系的β地贫基因,有2例孕妇外周血中检测到胎儿(父系)β地贫基因,与羊水检测相符。结论利用cffDNA进行β-地中海贫血的检测方法可行,但由于母源性DNA背景的污染,以及胎儿DNA因含量而导致检出率低,希望进一步改进该技术后有望可用于β-地中海贫血的诊断。 展开更多

关键词 Β地中海贫血 游离胎儿DNA 反向斑点杂交

在线阅读 下载PDF 职称材料

黑胫病菌诱导的烟草SSH文库构建及其分析 被引量：11

5

作者 苏振刚 杨爱国 +7 位作者 孙玉合 罗成刚 刘贯山 周佳 李元元 杨帆 赵百英 王元英 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1763-1770,共8页

黑胫病是危害严重的世界性烟草主要病害之一,探究烟草对黑胫病的抗病机制,可以为该病的综合防治提供理论依据。本研究以烟草黑胫病抗性品种革新3号为材料,利用黑胫病0号生理小种诱导其水平抗性,分别在接种后0.5、1、3、6、10和16d取样,... 黑胫病是危害严重的世界性烟草主要病害之一,探究烟草对黑胫病的抗病机制,可以为该病的综合防治提供理论依据。本研究以烟草黑胫病抗性品种革新3号为材料,利用黑胫病0号生理小种诱导其水平抗性,分别在接种后0.5、1、3、6、10和16d取样,通过抑制差减杂交技术(SSH)构建cDNA文库,获得了960个阳性克隆。利用反向Northern斑点杂交技术对其中240个阳性克隆进行杂交筛选,筛选出57个表达差异明显的基因,序列拼接后获得33条高质量EST,测序及其比对分析表明,革新3号对烟草黑胫病抗性相关基因主要涉及抗病防卫、光合作用、信号传导和能量代谢等方面。进一步基因功能分析显示,病程相关PR1b蛋白、半胱氨酸蛋白、延伸因子1-α、α-微管蛋白、细胞色素P450、精胺合成酶、水通道蛋白、过氧化物酶体膜蛋白、甘氨酸延伸因子等可能参与了烟草与黑胫病菌非亲和互作过程。 展开更多

关键词 烟草 黑胫病病菌 抑制差减杂交 反向Northern斑点杂交 非亲和互作

在线阅读 下载PDF 职称材料

由HbH病和重型β地中海贫血引起的一个罕见中间型地中海贫血病例及其产前诊断应用 被引量：6

6

作者 李强 李莉艳 +2 位作者 莫秋华 冯晓勤 徐湘民 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期16-19,共4页

目的分析1例中间型地中海贫血(地贫)患者的基因型与表型的关系,探索进行重症β地贫复合血红蛋白H病这类复杂基因型组合方式的产前诊断临床实践。方法表型检测采用标准的血液学分析技术测量红细胞参数和血红蛋白组分。采用反向点杂交技... 目的分析1例中间型地中海贫血(地贫)患者的基因型与表型的关系,探索进行重症β地贫复合血红蛋白H病这类复杂基因型组合方式的产前诊断临床实践。方法表型检测采用标准的血液学分析技术测量红细胞参数和血红蛋白组分。采用反向点杂交技术诊断β地贫基因突变,采用缺口聚合酶链反应技术检测α地贫缺失突变。通过基于家系调查的表型与基因型分析探讨该病例的发病机制。利用羊水细胞DNA对该家系1例地贫高风险胎儿进行产前基因诊断。结果先证者诊断为β0/β+地贫(βCD17A>T/βIVS2-654C>T)双重杂合子复合血红蛋白H病(--SEA/-α4.2)的偏重的中间型地贫患儿,其父母分别为β地贫杂合子合并轻型α地贫和β地贫杂合子合并静止型α地贫个体。在此基础上,我们对该家庭的地贫高风险胎儿进行了产前基因诊断,结果显示胎儿的基因型为重症β地贫合并静止型α地贫,通过遗传咨询实施了中止妊娠。结论首次报道罕见中间型地贫案例,为国内外产前诊断提供可借鉴的临床经验。 展开更多

关键词 中间型地中海贫血 聚合酶链反应 反向斑点杂交 产前诊断

在线阅读 下载PDF 职称材料

不同检测方法对肺结核患者肺泡灌洗液中结核杆菌的诊断价值 被引量：8

7

作者 蒋莎莉 梁伟军 +3 位作者 朱德茂 罗海军 谢晋予 刘爱凤 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期647-651,共5页

目的:探讨不同检测方法对肺结核患者肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中结核杆菌的诊断价值。方法:收集2013年1月至2015年12月在长沙市中心医院住院的100例患者的BALF,其中临床确诊为肺结核患者65例,另选取35例作为对照,... 目的:探讨不同检测方法对肺结核患者肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中结核杆菌的诊断价值。方法:收集2013年1月至2015年12月在长沙市中心医院住院的100例患者的BALF,其中临床确诊为肺结核患者65例,另选取35例作为对照,分别应用BALF涂片法、聚合酶链反应(PCR)、膜-反向斑点杂交技术(reverse dot blot,RDB)同步检测肺结核杆菌。结果:BALF涂片法,PCR检测,RDB法对结核杆菌诊断阳性率依次为43.08%,73.84%,92.31%,3种检测方法阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。BALF涂片法灵敏度、特异度、符合率、阴性预测值分别为43.08%,88.57%,59.00%,45.59%;PCR检测分别为73.85%,100.00%,83.00%,67.31%;RDB法分别为92.31%,100.0%,95.00%,87.50%。结论:RDB法不仅能准确诊断结核杆菌,且能快速、简单地分辨肺结核杆菌耐链霉素(SM)、利福平(RFP)、异烟肼(INH)基因型,具有较高的临床应用价值。 展开更多

关键词 肺泡灌洗液 涂片检查法 聚合酶链反应 膜-反向斑点杂交技术 结核杆菌

在线阅读 下载PDF 职称材料

反向点杂交法检测中国人N-乙酰化酶基因型 被引量：5

8

作者 陈冰 李金恒 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期1269-1272,共4页

目的　建立快速方便的反向点杂交法 (RDB)检测中国人N 乙酰化酶 (NAT2 )基因型。方法　采用PCR法扩增生物素标记的DNA片段 ,与固定在尼龙膜上的等位基因特异性寡核苷酸探针进行杂交 ,通过非同位素法显色检测杂交结果 ,分析NAT2 5种主要... 目的　建立快速方便的反向点杂交法 (RDB)检测中国人N 乙酰化酶 (NAT2 )基因型。方法　采用PCR法扩增生物素标记的DNA片段 ,与固定在尼龙膜上的等位基因特异性寡核苷酸探针进行杂交 ,通过非同位素法显色检测杂交结果 ,分析NAT2 5种主要突变位点。用本法对 4 8名肺结核患者NAT2基因型进行了分析。结果　RDB法与等位基因特异扩增法结果完全一致。 4 8名肺结核患者NAT2 5、 6、 73种突变型等位基因的基因频率分别为 1 0 4 %、2 2 9%和 15 6 %。野生型纯合子、杂合子和突变型纯合子分别为 33 3%、5 4 2 %和 12 5 %。结论　RDB法检测NAT2基因型准确、方便 ,适用于指导临床合理用药。 展开更多

关键词 N-乙酰化酶(NAT2) 多态性 反向点杂交法(rdb) 等位基因特异性寡核苷酸探针(ASO) 基因分型

在线阅读 下载PDF 职称材料

反向点杂交法检测广东地区丙型肝炎病毒基因型和基因亚型 被引量：3

9

作者 魏君锋 张太松 +9 位作者 黄辉红 曾艳丽 张帆 王俊洁 周斌 吴英松 刘叔文 侯金林 郭亚兵 周元平 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期2270-2272,2276,共4页

目的建立并应用HCV基因分型技术PCR-反向点杂交法(PCR-RDH),调查广东地区丙型肝炎病毒(HCV)基因型和亚型的分布情况。方法应用生物信息学软件针对HCV5'端非编码区(5'UTR)和核心蛋白区(C区)设计特异性捕获探针及生物素标记引物,... 目的建立并应用HCV基因分型技术PCR-反向点杂交法(PCR-RDH),调查广东地区丙型肝炎病毒(HCV)基因型和亚型的分布情况。方法应用生物信息学软件针对HCV5'端非编码区(5'UTR)和核心蛋白区(C区)设计特异性捕获探针及生物素标记引物,建立HCV基因分型的PCR-反向点杂交技术。应用本技术对115例慢性丙型肝炎患者血清标本进行HCV基因型和亚型检测,同时对其中38份标本中的HCV进行RT-PCR扩增、测序、系统进化树分析确定HCV基因型和亚型,以评价反向点杂交法的准确性及临床应用价值。结果 115份血清标本中,反向点杂交法HCV基因型及亚型检出率为96.5%(111/115),15份阴性对照全部为阴性。111例检出基因型的标本中1b型63例(56.8%)、2a型9例(8.1%)、3a型4例(3.6%)、3b型6例(5.4%)、6a型28例(25.2%)、1b/2a混合型1例(0.9%)。经测序分型确定此法检测准确度为100%,特异度为100%。结论 HCV基因型反向点杂交法检测准确可靠、简便经济、高效,适用于临床检测。广东地区的HCV基因型分布以1b型为主,呈现出1b型比例下降,3a、6a型比例升高的趋势。 展开更多

关键词 反向点杂交 丙型肝炎病毒 基因型 基因亚型

在线阅读 下载PDF 职称材料

反向斑点杂交技术检测结核分枝杆菌3种耐药相关基因 被引量：3

10

作者 罗丹 向延根 +3 位作者 潘建华 彭雪峰 邓为之 石国民 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期759-762,F0003,共5页

目的:观察膜反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌(MTB)对异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)耐药性的效果。方法:用ropB、katG、inhA、rpsL基因的寡核苷酸探针与结核分枝杆菌PCR产物进行反向斑点杂交,并将结果与绝对浓度法药敏试... 目的:观察膜反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌(MTB)对异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)耐药性的效果。方法:用ropB、katG、inhA、rpsL基因的寡核苷酸探针与结核分枝杆菌PCR产物进行反向斑点杂交,并将结果与绝对浓度法药敏试验结果进行比较。结果:INH、RFP和SM的耐药基因检测灵敏度分别为84.88%、87.10%和79.17%,符合率为97.33%、94.74%和88.37%。结论:膜反向斑点杂交技术是检测部分MTB耐INH、RFP和SM基因型快速、简便的方法。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 药物耐受性 反向斑点杂交 聚合酶链式反应 基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

反向斑点杂交技术检测HBV YMDD基序变异的应用和评价 被引量：4

11

作者 张太松 董瑞华 +5 位作者 李建芳 林炳生 雍万军 胡守旺 李明 周新宇 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期428-432,共5页

【目的】采用反向斑点杂交技术对拉米夫定治疗后的慢性乙型肝炎患者血清中HBV YMDD基序变异进行检测,并对其临床应用进行方法学评价。【方法】提取242例慢性乙型肝炎患者血清中HBV DNA,经聚合酶链反应后进行膜条杂交并同测序比较分析检... 【目的】采用反向斑点杂交技术对拉米夫定治疗后的慢性乙型肝炎患者血清中HBV YMDD基序变异进行检测,并对其临床应用进行方法学评价。【方法】提取242例慢性乙型肝炎患者血清中HBV DNA,经聚合酶链反应后进行膜条杂交并同测序比较分析检测结果的一致性,随后对该方法进行灵敏度和混合感染检测能力的评价。【结果】242例样本检测结果有236例与测序结果相符,反向斑点杂交检测结果同测序结果的符合率达97.5%;混合型感染58例,占样品总数的24%。反向斑点杂交技术检测HBV YMDD基序变异的灵敏度达103IU/mL,在病毒混合感染群体中能检测出约占10%的突变型病毒株。【结论】反向斑点杂交技术检测HBV YMDD基序变异具有简单、准确、经济实用的特点,具有很好的临床应用前景。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒(HBV) 突变 耐药 反向斑点杂交

在线阅读 下载PDF 职称材料

β-地中海贫血杂合子携带α-地中海贫血1基因发生率 被引量：10

12

作者 韩俊英 曾瑞萍 胡彬 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第1期11-13,共3页

【目的】研究广东地区人群中 β 地中海贫血 (β 地贫 )杂合子携带α 地中海贫血 (α 地贫 ) 1基因的发生率。【方法】采用反向点杂交法检测 β 地贫基因。采用跨越缺失区断裂点PCR法检测α 地贫 1基因。【结果】在 5 0 0例 β 地贫杂合... 【目的】研究广东地区人群中 β 地中海贫血 (β 地贫 )杂合子携带α 地中海贫血 (α 地贫 ) 1基因的发生率。【方法】采用反向点杂交法检测 β 地贫基因。采用跨越缺失区断裂点PCR法检测α 地贫 1基因。【结果】在 5 0 0例 β 地贫杂合子DNA标本中 ,共检出 43例合并α 地贫 1,检出率为 8.6 %。【结论】广东地区 β 地贫杂合子中合并α 地贫 1的发生率为 8.6 % ,在遗传咨询和产前诊断过程中需要引起重视。 展开更多

关键词 A-地中海贫血 遗传学 Β-地中海贫血 杂合子 聚合酶链反应

在线阅读 下载PDF 职称材料

奶牛乳房炎抗性基因的反向Northern斑点杂交差异筛选 被引量：6

13

作者 曹随忠 李宏滨 +3 位作者 姚学萍 王爱华 赵兴绪 杜立新 《家畜生态学报》 2007年第3期57-61,共5页

分别用地高辛标记患乳房炎奶牛和健康奶牛外周血白细胞cDNA探针,对已构建的奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库应用反向Northern斑点杂交技术进行差异筛选,筛选出的50个差异表达克隆测序后获得48个EST序列。根据在GenBank非冗余核酸数据库(nr)... 分别用地高辛标记患乳房炎奶牛和健康奶牛外周血白细胞cDNA探针,对已构建的奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库应用反向Northern斑点杂交技术进行差异筛选,筛选出的50个差异表达克隆测序后获得48个EST序列。根据在GenBank非冗余核酸数据库(nr)和EST数据库中Blastn序列比对结果,将这些EST分为3类:第一类代表已知基因,共35个;第二类代表已知EST,共5个;第三类为新EST,共3个。35个代表已知基因的ESTs按照基因功能分为八类:信号转导与细胞间通信(8.57%)、细胞结构与运动(11.43%)、细胞凋亡(5.72%)、细胞与机体防御(20.00%)、物质转运(8.57%)、翻译与表达调控(20.00%)、代谢(14.20%)及其它(11.43%)。结合相关文献初步探讨了部分患乳房炎奶牛外周血白细胞差异表达基因的功能和意义,其中BNBD5、IgJ、MIP-3、MnSOD、AHCY、WIP等基因可能在奶牛乳房炎抗性中发挥重要作用。 展开更多

关键词 反向Northern斑点杂交 CDNA文库 乳房炎抗性相关基因 差异筛选

在线阅读 下载PDF 职称材料

新疆地区人乳头瘤病毒感染的基因型研究 被引量：3

14

作者 李辉 卞文安 +1 位作者 赵旌 于宁 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期961-963,共3页

目的:应用PCR-反向点杂交(PCR-reverse dot blot,PCR-RDB)技术对新疆地区人乳头瘤病毒(Human papilloma virus-es,HPV)进行基因分型。方法:收集疑似HPV感染病例标本335例,提取HPV基因组DNA,应用PCR-RDB技术扩增HPV的L1基因并进行分型,... 目的:应用PCR-反向点杂交(PCR-reverse dot blot,PCR-RDB)技术对新疆地区人乳头瘤病毒(Human papilloma virus-es,HPV)进行基因分型。方法:收集疑似HPV感染病例标本335例,提取HPV基因组DNA,应用PCR-RDB技术扩增HPV的L1基因并进行分型,计算不同基因型HPV的感染率,组间率的比较采用χ2检验。结果:335例病例标本中检出HPV阳性标本108例,阳性率为32.2%,共检出HPV16、18、33、45、56、68、6、11和66共9种基因型,其中HPV16、18和56亚型的感染较高。分组统计结果显示,HPV阳性率和高危型HPV的检出率在不同类型疾病患者中是不同的,在尖锐湿疣、高度子宫颈上皮内瘤变Ⅱ/Ⅲ和宫颈癌患者中HPV阳性率和高危型HPV的检出率均显著高于宫颈炎组和宫颈糜烂疾病组(P<0.05),而随着年龄的不断增加,HPV感染率降低。HPV的感染率在19～36年龄组较高,随着年龄的增加,HPV感染率有降低趋势。结论:在本地区宫颈病变患者中HPV的感染率较高,而基于PCR-RDB的基因分型可为HPV感染的诊断、治疗和随访提供依据。 展开更多

关键词 人类乳头瘤病毒 PCR-反向点杂交 妇科疾病

在线阅读 下载PDF 职称材料

反向斑点杂交检测泰泽病原体 被引量：3

15

作者 赵婷婷 严磊 +4 位作者 魏立雯 韦莉 王会娟 赖国旗 谭毅 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2014年第3期72-77,共6页

目的建立一种简洁稳定、特异灵敏的检测泰泽病原体(Tyzzer’s organism)的反向斑点杂交方法(reverse dot blot,RDB)。方法根据泰泽病原体16S rDNA保守基因组序列设计引物和特异性探针,上游引物用生物素标记,进行PCR扩增,建立反向斑点杂... 目的建立一种简洁稳定、特异灵敏的检测泰泽病原体(Tyzzer’s organism)的反向斑点杂交方法(reverse dot blot,RDB)。方法根据泰泽病原体16S rDNA保守基因组序列设计引物和特异性探针,上游引物用生物素标记,进行PCR扩增,建立反向斑点杂交方法,用此法进行了特异性和灵敏度实验,同时,用RDB、ELISA和IFA对41只小鼠、38只大鼠进行了检测。结果 RDB特异性强,最低检测限为4.5 ng/μL。对79例实验动物的检测中,与ELISA检测结果一致性为100%,阳性率是7.59%(6/79);与IFA一致性为92.4%(73/79),IFA阳性率是0%。结论建立了PCR扩增与分子杂交相结合的准确、灵敏、特异的泰泽病原体反向斑点杂交检测方法。 展开更多

关键词 泰泽病原体 反向斑点杂交 实验动物

在线阅读 下载PDF 职称材料

应用反向斑点杂交技术进行脐血HLA-DRB基因分型方法的建立 被引量：4

16

作者 黄以宁 廖灿 +3 位作者 汤雪薇 李焱 谢杏梅 曾瑞萍 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第2期148-152,共5页

HLA分子的多态性对于移植有十分重要的意义。常用的HLA基因分型方法中SSOP基因分型方法有较高分辨率 ,但操作过程复杂 ,仅适于大样本的HLA分型。PCR SSP基因分型方法分辨率较低 ,但操作过程简单 ,适于临床要求。有必要建立一种简便、快... HLA分子的多态性对于移植有十分重要的意义。常用的HLA基因分型方法中SSOP基因分型方法有较高分辨率 ,但操作过程复杂 ,仅适于大样本的HLA分型。PCR SSP基因分型方法分辨率较低 ,但操作过程简单 ,适于临床要求。有必要建立一种简便、快速、价廉、高分辨率的基因分型方法。本研究取 6 3份已知HLA DRB型的脐血标本 ,经盐酸胍方法提取DNA用于反向斑点杂交 (RDB)基因分型 ,同时采用SSOP和PCR SSP方法进行比较。结果表明 ,所有样本用RDB方法基因分型均获得成功 ,可准确地分辨 6 0个HLA DRB等位基因 ,且结果与用SSOP和PCR SSP方法的结果完全一致。结论提示 ,RDB方法可准确地分辨HLA DRB等位基因 ,分辨率高 ,操作简单 。 展开更多

关键词 反向斑点杂交技术 HLA-DRB基因分型 脐血 特异性序列引物PCR 序列特异性寡核苷酸探针 白细胞抗原

在线阅读 下载PDF 职称材料

逆向点杂交技术在丙型肝炎病毒基因分型中的应用 被引量：2

17

作者 曾劲伟 杨光 +1 位作者 崔金环 陈姝 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第17期2817-2819,共3页

目的:改进并应用本实验室创建的丙型肝炎病毒(HCV)基因分型方法检测HCV基因分型。方法:应用PCR-逆向点杂交技术(PCR-RBD),联合HCV的核心区和5′非编码区设计引物和分型探针,对122份HCV RNA阳性的血清标本及作为阴性对照的20份抗HCV阴性... 目的:改进并应用本实验室创建的丙型肝炎病毒(HCV)基因分型方法检测HCV基因分型。方法:应用PCR-逆向点杂交技术(PCR-RBD),联合HCV的核心区和5′非编码区设计引物和分型探针,对122份HCV RNA阳性的血清标本及作为阴性对照的20份抗HCV阴性的血清标本进行基因分型,并通过与基因测序结果比较确定本方法的有效性。结果:122份受试标本共检出5种HCV基因型,分别为1a、1b、2a、3b和6a。20份阴性对照全部阴性。本研究的基因分型结果与测序分型结果一致。结论:联合HCV核心区和5′非编码区应用PCR-RBD技术可以准确有效地进行HCV基因分型,适用于常规临床检测与流行病学研究。 展开更多

关键词 肝炎病毒属 丙型肝炎病毒 基因分型 逆向点杂交

在线阅读 下载PDF 职称材料

用反相杂交技术对HLA-DQA1基因分型及其应用 被引量：2

18

作者 林源 阙庭志 +2 位作者 李莉 赵珍敏 周月琴 《法医学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期12-13,共2页

目的 :HLA -DQA1其因的分型研究及在实际办案中的应用。方法 :PCR结合反相杂交检测技术对HLA -DQA1基因进行分型。结果 :检见7种基因 ,24种基因型 ,获得上海地区HLA -DQA1基因的基因频率及基因型的频率分布数据。结论 :对法医学中常见... 目的 :HLA -DQA1其因的分型研究及在实际办案中的应用。方法 :PCR结合反相杂交检测技术对HLA -DQA1基因进行分型。结果 :检见7种基因 ,24种基因型 ,获得上海地区HLA -DQA1基因的基因频率及基因型的频率分布数据。结论 :对法医学中常见的血液 (痕 )、牙齿、精斑、混合斑、人体组织等检材进行HLA -DQA1分型检测 ,其结果稳定可靠 。 展开更多

关键词 PCR技术 HLA-DQA1基因 亲权鉴定 个体识别

在线阅读 下载PDF 职称材料

无核荔枝果实形成差异表达基因cDNA的克隆 被引量：4

19

作者 禤维言 郑学勤 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期597-601,共5页

采用抑制差减杂交技术(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)分离与海南无核荔枝果实形成相关的差异表达基因的cDNA片段,为克隆相关基因提供研究基础。分别以无核荔枝的有核幼果为driver;无核幼果为tester,建立差减cDNA文库。经R... 采用抑制差减杂交技术(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)分离与海南无核荔枝果实形成相关的差异表达基因的cDNA片段,为克隆相关基因提供研究基础。分别以无核荔枝的有核幼果为driver;无核幼果为tester,建立差减cDNA文库。经Reverse Northern Dot-Blot筛选该文库,共获得61个阳性克隆,随机选取17个克隆进行测序,共获得10条非重复序列,对其中较长的7个序列进行同源分析,结果表明:有6个序列在荔枝中为首次报道。 展开更多

关键词 无核荔枝 无核果实 抑制差减杂交(SSH) reverse Northern dot-blot

在线阅读 下载PDF 职称材料

膜反向斑点杂交法检测广东人G6PD基因6种常见突变 被引量：1

20

作者 郑卫东 张太松 +3 位作者 陈冬 葛艳芬 林婷 胡斌 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期463-466,共4页

【目的】探讨膜反向斑点杂交法在广东人G6PD基因6种常见突变同步检测中的应用。【方法】用高铁血红蛋白还原试验和G6PD/6-PGD酶活性比值法进行G6PD缺乏症筛查。应用多重PCR方法扩增G6PD基因目的片段。用Premier Primer6.0软件设计和优... 【目的】探讨膜反向斑点杂交法在广东人G6PD基因6种常见突变同步检测中的应用。【方法】用高铁血红蛋白还原试验和G6PD/6-PGD酶活性比值法进行G6PD缺乏症筛查。应用多重PCR方法扩增G6PD基因目的片段。用Premier Primer6.0软件设计和优化针对广东人常见6种G6PD基因突变型的特异性寡核甘酸探针,用乙基-3-二甲氨基丙碳二亚胺(EDC)法处理尼龙膜并固定探针,制成G6PD基因突变检测用膜条。多重PCR扩增产物与固定在膜条上寡核苷酸探针进行杂交,通过显色反应判读结果。以G6PD基因测序为金标准,对膜反向斑点杂交法进行评价。【结果】26例标本中膜反向斑点杂交法检测结果:95A→G突变型5例,1024C→T突变型3例,1376G→T突变型8例,1388G→A突变型7例,392G→T突变型1例,未发现1311C→T突变型,有两例检测为阴性。膜反向斑点杂交法未能测出的2例标本经基因测序证实存在392G→T突变,其余24例膜反向斑点法与基因测序法的结果完全一致,符合率为92.3%(24/26)。【结论】在优化探针设计和杂交条件前提下,膜反向斑点杂交法可用于广东人G6PD基因6种常见突变型的同步检测。 展开更多

关键词 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 基因突变 反向斑点杂交法(rdb)

在线阅读 下载PDF 职称材料