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牦牛乳球蛋白基因5′调控区的分离、克隆及序列分析 被引量:2
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作者 刘建忠 朱艳君 +1 位作者 周丽芳 马季骅 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期553-556,共4页
根据文献设计1对PCR引物,寡聚核苷酸序列上游引物为:5-′gCg,AAT,TCA,TCC,CAC,gTg,CCT,gC-3′,下游引物:5-′gAg,AAT,TCC,Tgg,ggA,ggg,ACC,TT-3′。经68℃退火及30轮循环的PCR程序后扩增出长度为1 447 bp的DNA片段,将该片段从琼脂糖凝... 根据文献设计1对PCR引物,寡聚核苷酸序列上游引物为:5-′gCg,AAT,TCA,TCC,CAC,gTg,CCT,gC-3′,下游引物:5-′gAg,AAT,TCC,Tgg,ggA,ggg,ACC,TT-3′。经68℃退火及30轮循环的PCR程序后扩增出长度为1 447 bp的DNA片段,将该片段从琼脂糖凝胶中回收,克隆到pMD18-T Vector后进行序列测定。序列分析结果表明,牦牛乳球蛋白基因5′调控区与文献报道的奶牛该基因同源性为97.65%,突出的碱基差异为牦牛乳球蛋白基因5′调控区发生了1个位点连续3个碱基的缺失突变和另一位点1个碱基的插入突变。该研究也为开展以牦牛乳球蛋白基因5′调控区为启动子的乳腺生物反应器研究准备了条件。 展开更多
关键词 乳球蛋白基因 5’调控区 牦牛 PCR扩增
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蚕豆萎蔫病毒2的分子鉴定及RNA1组分5′末端核苷酸序列分析 被引量:4
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作者 刘炜炜 许文博 +1 位作者 刘升学 黄家风 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2012年第6期695-699,共5页
用蚕豆病毒属(Fabavirus)的兼并引物Fab5′R1F和Fab5R′1R对自然感病的4株加工番茄、1株辣椒和2株一串红病株进行RT-PCR,将扩增到的长约400bp的片段进行克隆和测序。结果发现:来自7个病株的9个病毒分离物均为蚕豆萎蔫病毒2(BBWV-2)基因... 用蚕豆病毒属(Fabavirus)的兼并引物Fab5′R1F和Fab5R′1R对自然感病的4株加工番茄、1株辣椒和2株一串红病株进行RT-PCR,将扩增到的长约400bp的片段进行克隆和测序。结果发现:来自7个病株的9个病毒分离物均为蚕豆萎蔫病毒2(BBWV-2)基因组RNA1组分5′末端的353~392个核苷酸;同源性比较表明,9个序列之间的同源性为90.4%~99.2%,与已报道的BBWV2的同源性为89.5%~95.9%。序列比对发现,BBWV2基因组RNA1组分5′末端非编码区包含了由11个碱基(AAACAGCUUUC)组成的重复序列,而分别来自加工番茄分离物XJ14-1b和一串红的分离物S12在重复序列区段内比其它所有分离物缺少了包括2个重复序列在内的36个碱基。 展开更多
关键词 蚕豆病毒属 BBWV2 分子鉴定 5′末端 序列分析
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人类Pax-5基因外显子1B的5'侧翼区碱基序列分析
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作者 刘茂林 Mizanur Rahman +1 位作者 平林泰彦 佐佐木毅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期318-321,共4页
目的:探讨Pax- 5基因表达在B细胞分化发育的调节机制。方法:利用分子克隆及亚克隆技术对Pax-5基因外显子1B的5’侧翼区分离克隆。用双链双脱氧终止法进行核苷酸序列测定,并对侧序资料进行序列程序分析。结果:整段碱基序列(6671 hp... 目的:探讨Pax- 5基因表达在B细胞分化发育的调节机制。方法:利用分子克隆及亚克隆技术对Pax-5基因外显子1B的5’侧翼区分离克隆。用双链双脱氧终止法进行核苷酸序列测定,并对侧序资料进行序列程序分析。结果:整段碱基序列(6671 hp)分析表明:无TATA盒共同序列存在,近段启动子包括3个CAT盒,1个SP1和1个E盒;上游进一步推测的调节位点显示6个LMO2COM,5个NFAT,2个LPOLYA-B,3个GATA1,2个AP4,10个AZF1,1个ETS1-B,1个GATA3,1个NKX25,2个RORA1,1个LYFI,2个Ikaros2,2个ICF11,1个GATA-C和1个FREAC7确定在序列上。结论:Pax-5基因外显子1B的5’侧翼区与Pax-5表达的调节有关,且对保证B细胞谱系和B细胞发育起重要调节作用。 展开更多
关键词 Pax-5基因 5′侧翼区序列 启动子 推测调节位点 基因表达
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新疆绵羊β-乳球蛋白(BLG)5′端调控区的克隆与序列测定
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作者 王鹏雁 蒋建军 +1 位作者 陈创夫 李彦芳 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2008年第2期202-205,共4页
用聚合酶链式反应(PCR)技术,从新疆绵羊全血中扩增了β-乳球蛋白5′端调控区890bp的片段。通过T4DNA连接酶将其连接于质粒载体pGEM-T上,转化至受体菌DH5α中。提取质粒经PCR扩增、酶切鉴定,证明重组质粒pT-BLG中含有β-乳球蛋白5′端调... 用聚合酶链式反应(PCR)技术,从新疆绵羊全血中扩增了β-乳球蛋白5′端调控区890bp的片段。通过T4DNA连接酶将其连接于质粒载体pGEM-T上,转化至受体菌DH5α中。提取质粒经PCR扩增、酶切鉴定,证明重组质粒pT-BLG中含有β-乳球蛋白5′端调控区基因片段。经核苷酸序列测定,克隆的片段与发表的基因序列高度一致。 展开更多
关键词 绵羊 β-乳球蛋白5′端调控区
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小菜蛾MAP4K4基因上游5′-侧翼序列克隆与结构分析
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作者 郭乐 郭兆将 +4 位作者 康师 孙丹 周君雷 龚莉君 张友军 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期38-46,74,共10页
本实验室前期研究表明,小菜蛾通过有丝分裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号途径上游转录激活的关键基因MAP4K4反式调控多个中肠受体基因的表达,从而介导其对苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)产生... 本实验室前期研究表明,小菜蛾通过有丝分裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号途径上游转录激活的关键基因MAP4K4反式调控多个中肠受体基因的表达,从而介导其对苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)产生的Cry1Ac杀虫蛋白的高抗性。为进一步明确MAP4K4基因转录激活而过量表达的顺式调控机制,本文利用小菜蛾基因组数据库中MAP4K4基因序列信息,首先克隆了Bt Cry1Ac敏感小菜蛾种群MAP4K4基因上游5′-侧翼序列,得到了两种不同形式的5′-侧翼序列:MAP4K4-1和MAP4K4-2。随后,预测分析了其中的潜在功能顺式作用元件,同时发现其中核苷酸的转换会导致顺式作用元件的改变。本研究初步揭示了小菜蛾MAP4K4基因的5′-侧翼序列的遗传多样性,为后续明确MAP4K4的顺式调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 小菜蛾 MAPK信号途径 MAP4K4 5′-侧翼序列 顺式调控机制
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‘红肉蜜柚’CmMYB330基因的分离与表达分析 被引量:6
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作者 杨华丽 蔡韡韡 +4 位作者 吕恃衡 徐世荣 余磊 潘腾飞 潘东明 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期268-278,共11页
【目的】分析‘红肉蜜柚’果实汁胞粒化相关的MYB转录因子基因特征与表达模式,探讨MYB转录因子在蜜柚汁胞木质素代谢过程中的作用机制,为研究蜜柚汁胞粒化发生机制提供借鉴。【方法】以‘红肉蜜柚’果实汁胞为试材,参考甜橙MYB全基因组... 【目的】分析‘红肉蜜柚’果实汁胞粒化相关的MYB转录因子基因特征与表达模式,探讨MYB转录因子在蜜柚汁胞木质素代谢过程中的作用机制,为研究蜜柚汁胞粒化发生机制提供借鉴。【方法】以‘红肉蜜柚’果实汁胞为试材,参考甜橙MYB全基因组分析,利用生物信息学分析和PCR技术克隆Cm MYB330的编码区序列及其5’端调控序列,并对序列进行生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR技术对Cm MYB330在‘红肉蜜柚’果实汁胞不同发育时期和不同部位的表达情况进行分析。利用农杆菌介导法将Cm MYB330与GFP的融合表达载体注射转化到烟草叶片中进行亚细胞定位分析。利用酵母双杂交系统对Cm MYB330进行转录激活活性分析。【结果】Cm MYB330的编码区序列长度为942 bp,编码313个氨基酸,预测为核定位蛋白,为典型的R2R3 MYB转录因子。Cm MYB330与甜橙Cs1g19400.1、Am MYB330等亲缘关系近,都属于R2R3 MYB第4亚组。Cm MYB330的5’端调控序列为起始密码子上游-1 748 bp序列,预测该序列含有TATA-box、CAAT-box 2个启动子核心元件,3个MBS,1个AC-I,1个5UTR Py-rich stretch,还有大量激素(如赤霉素、乙烯、水杨酸等)响应元件。Cm MYB330表达量在‘红肉蜜柚’果实汁胞发育过程中有起伏,但总体呈现上升趋势,表达量在花后208 d达到最大,之后开始下降。在转化p-super1300-Cm MYB330-GFP的烟草叶片细胞核中检测到绿色荧光信号,与预测结果一致,说明Cm MYB330定位在细胞核中。在Y2H Gold酵母中,Cm MYB330表现为没有转录激活活性。【结论】克隆了‘红肉蜜柚’MYB转录因子Cm MYB330编码区序列及其5’端调控序列,Cm MYB330属于R2R3 MYB第4亚组,与汁胞粒化相关,为核定位蛋白,同时分析了其在‘红肉蜜柚’果实汁胞发育过程中的表达水平,总体呈上升趋势。为进一步研究Cm MYB330与蜜柚汁胞粒化的关系奠定了基础。 展开更多
关键词 '红肉蜜柚’ 转录因子 CmMYB330 5’端调控序列 表达分析
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夜来香SAMT基因的分离与原核表达 被引量:4
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作者 杨华丽 吕恃衡 +4 位作者 蔡韡韡 郑鸿昌 潘东明 李子真 陈桂信 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2015年第10期1831-1838,共8页
为探究夜来香(Cestrum nocturnum)花香基因SAMT在花香代谢中的调控作用,以花瓣为材料,采用RTPCR和RACE技术相结合,克隆夜来香SAMT基因的全长c DNA。结果表明:该c DNA的序列长度为1 493 bp,编码365个氨基酸,其中包含1 098 bp ORF、130 b... 为探究夜来香(Cestrum nocturnum)花香基因SAMT在花香代谢中的调控作用,以花瓣为材料,采用RTPCR和RACE技术相结合,克隆夜来香SAMT基因的全长c DNA。结果表明:该c DNA的序列长度为1 493 bp,编码365个氨基酸,其中包含1 098 bp ORF、130 bp 5′UTR和265 bp 3′UTR,将其命名为Cn SAMT;生物信息学分析结果表明:该基因所编码的氨基酸序列与烟草、番茄的同源性分别为98%和98%,属于甲基转移酶-7家族;原核表达结果表明:Cn SAMT的蛋白表达产物约为42 ku,与软件预测的结果大致相同。采用染色体步移技术,克隆夜来香Cn SAMT的5′端调控序列,结果表明:该序列长度为993 bp,且该序列除了含有TATA-box、CAAT-box等启动子核心元件外,还含有光、生长素、脱落酸、热胁迫、缺氧胁迫等外界环境条件响应的顺式作用元件。 展开更多
关键词 夜来香 SAMT基因 原核表达 5′端调控序列
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马铃薯卷叶病毒基因功能的研究进展
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作者 刘俊莹 张剑峰 +1 位作者 张华鹏 王聪聪 《中国马铃薯》 2011年第6期371-376,共6页
马铃薯卷叶病毒(PLRV)基因组具有较高的同源性和稳定性,不同株系间致病力不同。目前在VPg蛋白氨基酸序列和功能方面以及基因组功能方面取得了较大的进展。综述PLRV基因组核苷酸序列及其表达蛋白质在病毒侵染后的病害症状表达,病毒本身... 马铃薯卷叶病毒(PLRV)基因组具有较高的同源性和稳定性,不同株系间致病力不同。目前在VPg蛋白氨基酸序列和功能方面以及基因组功能方面取得了较大的进展。综述PLRV基因组核苷酸序列及其表达蛋白质在病毒侵染后的病害症状表达,病毒本身的复制增殖,以及病毒的传播等方面的作用。随着对基因组功能的研究更加深入,一定会给马铃薯的抗病育种带来更多可能。 展开更多
关键词 5'末端序列 VPg蛋白 蛋白质功能
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