白花丹醌对瘦素刺激人肝星状细胞转化生长因子-β_1表达的影响 被引量：9

1

作者 韦燕飞 刘雪梅 +4 位作者 唐爱存 彭岳 钟振国 方卓 赵铁建 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期710-713,共4页

目的研究白花丹醌对瘦素刺激体外培养人HSC-LX2TGF-β1 mRNA和蛋白表达的影响。方法体外培养HSC-LX2,瘦素(leptin)刺激24h,各药物与细胞共孵育24h后,采用荧光PCR检测各组TGF-β1 mRNA的表达和免疫组织化学方法检测TGF-β1蛋白表达情况... 目的研究白花丹醌对瘦素刺激体外培养人HSC-LX2TGF-β1 mRNA和蛋白表达的影响。方法体外培养HSC-LX2,瘦素(leptin)刺激24h,各药物与细胞共孵育24h后,采用荧光PCR检测各组TGF-β1 mRNA的表达和免疫组织化学方法检测TGF-β1蛋白表达情况。结果与leptin组比较,白花丹醌各剂量组作用24h后,HSC-LX2细胞中TGF-β1 mRNA的水平明显降低,尤以中、高剂量组明显(P<0.01);免疫组化结果显示白花丹醌各剂量组对HSC-LX2细胞TGF-β1蛋白表达有一定的抑制作用,且作用呈剂量依赖性。结论白花丹醌抗肝纤维化作用机制之一是从mRNA和蛋白水平抑制TGF-β1表达,从而抑制HSCECM的合成,发挥抗肝纤维化作用。 展开更多

关键词 白花丹醌 瘦素 肝星状细胞 肝纤维化 增殖 转化生长因子-β1

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pcDU_6质粒载体介导的TGFβ_1 shRNA抑制TGFβ_1在人腹膜间皮细胞中的表达 被引量：3

2

作者 刘虹 刘伏友 +2 位作者 彭佑铭 袁芳 刘映红 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期552-557,共6页

目的 :研究pcDU6质粒载体介导的转化生长因子β1短发夹RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)对人腹膜间皮细胞 (HPMCs)转化生长因子 β1(TGFβ1)表达的影响。方法 :针对TGFβ1的以GGCC开始的 2 1碱基大小的片段 ,分别设计 2对寡核苷酸 ,形成双... 目的 :研究pcDU6质粒载体介导的转化生长因子β1短发夹RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)对人腹膜间皮细胞 (HPMCs)转化生长因子 β1(TGFβ1)表达的影响。方法 :针对TGFβ1的以GGCC开始的 2 1碱基大小的片段 ,分别设计 2对寡核苷酸 ,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的 pcDNA3.1( )载体 (命名为 pcDU6) ,2对DNA双链通过BamHI酶切位点连接后形成中间由 6碱基序列间隔的反向互补序列 ,构建成TGFβ1短发夹RNA的产生质粒。采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞 ,建立稳定的体外培养模型。用脂质体转染表达转化生长因子β1shRNA的pcDU6载体质粒和表达反义TGFβ1RNA的pcDNA3.1( )的载体质粒入 4 .2 5 %D 葡萄糖和LPS刺激下人腹膜间皮细胞。采用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)半定量分析HPMC中TGFβ1mRNA的表达。采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMC培养液中TGFβ1蛋白质水平。结果 :HPMC在 4 .2 5 %D 葡萄糖和LPS的刺激下可明显上调TGFβ1的表达 (P <0 .0 1)。pcDU6载体质粒介导的转化生长因子 β1shRNA干扰组较 pc DU6空载体组明显下调TGFβ1的表达 (P <0 .0 1)。pcDU6载体质粒介导的转化生长因子 β1shRNA干扰组间比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;pcDNA3.1( )的载体质粒介导的反义RNA组与 展开更多

关键词 TGFβ1 DU 转化生长因子β1 表达 HPMC 人腹膜间皮细胞 RNA干扰 质粒介导 PCDNA3 酶切位点

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Troglitazone对人腹膜间皮细胞TGF-β_1和纤维连接蛋白表达的影响 被引量：5

3

作者 刘虹 彭佑铭 +4 位作者 刘伏友 刘映红 李玲艳 李军 陈星 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期473-479,共7页

目的:研究过氧化物增生体激活受体γ(PPAR-γ)激动剂troglitazone(曲格列酮,TGZ)对高浓度葡萄糖刺激下体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMCs)中TGF-β1和细胞外基质纤维连接蛋白(Fn)表达的影响。方法:采用胰蛋白酶消化法从人大网膜组织中分... 目的:研究过氧化物增生体激活受体γ(PPAR-γ)激动剂troglitazone(曲格列酮,TGZ)对高浓度葡萄糖刺激下体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMCs)中TGF-β1和细胞外基质纤维连接蛋白(Fn)表达的影响。方法:采用胰蛋白酶消化法从人大网膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型。根据细胞增殖与毒性实验选择troglitazone的最佳浓度15μmol/L,干预高浓度葡萄糖(30mmol/LD-葡萄糖)刺激下的人腹膜间皮细胞。采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)半定量检测HPMCs中PPAR-γ,TGF-β1以及Fn的 mRNA表达;采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMCs培养液中TGF-β1蛋白质水平;Western印迹检测Fn蛋白质水平。结果:高糖(30mmol/LD-葡萄糖)刺激可在 mRNA和蛋白质水平明显上调HPMCs表达TGF-β1和Fn(P<0.01),troglitazone干预高糖孵育的HPMCs,可使TGF-β1和Fn mRNA和蛋白质的表达明显下调(P<0.05)。结论:Troglitazone能够明显抑制在高糖刺激下的HPMCsTGF-β1和Fn的表达,这可能为临床防治长期腹膜透析患者的腹膜纤维化提供一种较为有效的方法。 展开更多

关键词 PPAR-Γ TROGLITAZONE 人腹膜间皮细胞 转化生长因子-β1 纤维连接蛋白

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人参皂苷Rb1对白消安诱导人脐静脉内皮细胞表达PAI-1、TF和TGF-β_1的影响 被引量：3

4

作者 谢薇 夏凌辉 +2 位作者 方峻 陈红霞 魏文宁 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1856-1858,共3页

目的:探讨人参皂苷Rb1对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用机制。方法:体外培养HU-VECs,分别用白消安(BU)和人参皂苷Rb1干预,以RT-PCR、实时荧光定量PCR以及ELISA方法检测其PAI-1、TF和TGF-β1 mRNA和蛋白的表达。结果:60 mg/L BU使HU... 目的:探讨人参皂苷Rb1对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用机制。方法:体外培养HU-VECs,分别用白消安(BU)和人参皂苷Rb1干预,以RT-PCR、实时荧光定量PCR以及ELISA方法检测其PAI-1、TF和TGF-β1 mRNA和蛋白的表达。结果:60 mg/L BU使HUVECs PAI-1、TF和TGF-β1蛋白水平明显增高及mRNA表达显著增强,80 mg/L人参皂苷Rb1则可明显抑制BU对HUVECs的这种作用。结论:BU可能通过激活TGF-β1信号转导途径而上调PAI-1及TF的表达,增强HUVECs促凝活性;人参皂苷Rb1则可能通过抑制这一途径降低PAI-1及TF表达,保护HUVECs,纠正其高凝、低纤溶活性的异常状态。 展开更多

关键词 人脐静脉内皮细胞 白消安 人参属 纤溶酶原激活物抑制物1 凝血致活酶 转化生长因子β

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转化生长因子β_1诱导人肾小管上皮细胞表达结缔组织生长因子 被引量：1

5

作者 卓文磊 张璟 +2 位作者 杨惠标 王彦 黄云剑 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第19期1717-1719,共3页

目的　研究转化生长因子 β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)对人肾小管上皮细胞 (humanproximaltubularep ithelialcells ,HTECs)表达结缔组织生长因子 (connectivetissuegrowthfactor ,CTGF)的影响。方法　体外培养的HTEC被根... 目的　研究转化生长因子 β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)对人肾小管上皮细胞 (humanproximaltubularep ithelialcells ,HTECs)表达结缔组织生长因子 (connectivetissuegrowthfactor ,CTGF)的影响。方法　体外培养的HTEC被根据随机数字表分为 3组 :对照组 (C组 ) :无血清培养基 (freeserummedium ,FSM)培养 ;TGFβ1a和TGFβ1b组 (Ta 组和Tb 组 ) :分别用含不同浓度TGFβ1(Ta 组 :2 0ng/ml,Tb 组 :40ng/ml)的FSM培养 ,96h后 ,分别用RT PCR和免疫组化方法检测HTEC表达CT GFmRNA和蛋白。结果　①C组 :CTGFmRNA和蛋白表达为阴性 ;②Tb 组和Ta 组 :CTGFmRNA和蛋白表达皆呈阳性。Tb 组和Ta 组相比 ,CTGF的mRNA和蛋白表达量皆显著增加 (P <0 .0 1)。结论　TGFβ1能呈剂量依赖性地诱导HTEC合成CTGF。 展开更多

关键词 TGFβ1 结缔组织生长因子 转化生长因子β1 蛋白表达 肾小管上皮细胞 RNA CTGF 无血清培养基 体外培养 RT-PCR

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缺氧再给氧上调人血管内皮细胞TGFβ_1的基因转录 被引量：1

6

作者 尹志康 吴小候 +2 位作者 何云峰 刘川 杜虎 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第6期694-696,共3页

目的:探讨缺氧再给氧对人血管内皮细胞中的TGFβ1基因转录的影响。方法:建立人脐静脉内皮细胞株的缺氧再给氧模型,采用改良的RT-PCR,半定量分析缺氧再给氧后内皮细胞中TGFβ1的mRNA的变化。结果:缺氧再给氧组与对照组相比,TGFβ1的mRNA... 目的:探讨缺氧再给氧对人血管内皮细胞中的TGFβ1基因转录的影响。方法:建立人脐静脉内皮细胞株的缺氧再给氧模型,采用改良的RT-PCR,半定量分析缺氧再给氧后内皮细胞中TGFβ1的mRNA的变化。结果:缺氧再给氧组与对照组相比,TGFβ1的mRNA明显升高。结论:缺氧再给氧上调血管内皮细胞TGFβ1基因的转录。 展开更多

关键词 缺氧再给氧 人脐静脉内皮细胞 TGFβ1

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rhTGF－β_1对人白血病细胞系诱导分化的超微结构研究 被引量：2

7

作者 冯茹 沈素芸 《第一军医大学学报》 CSCD 1995年第4期330-332,共3页

以ＨＬ＿（６０）、Ｕ＿（９３７）细胞系为体外模型，应用透射电子显微镜技术，观察了重组人转化生长因子β＿１（ｒｈＴＧＦ－β＿１）对以上两种人白血病细胞系超微结构的影响，结果显示：Ｕ＿（９３７）细胞对ｒｈＴＧＦ－β＿１的... 以ＨＬ＿（６０）、Ｕ＿（９３７）细胞系为体外模型，应用透射电子显微镜技术，观察了重组人转化生长因子β＿１（ｒｈＴＧＦ－β＿１）对以上两种人白血病细胞系超微结构的影响，结果显示：Ｕ＿（９３７）细胞对ｒｈＴＧＦ－β＿１的反应比ＨＬ＿（６０）细胞敏感，经ｒｈＴＧＦ－β＿１６ｎｇ／ｍｌ作用４天后，Ｕ＿（９３７）细胞之胞核不规则，核仁减少或消失，出现较多的粗面内质网，胞浆中可见吞噬小体，进一步证实ｒｈＴＧＦ－β＿１可诱导Ｕ＿（９３７）细胞向成熟分化，分化途经仍为单核巨噬细胞系。 展开更多

关键词 人转化生长因子 白血病 细胞 超微结构

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基因转染3T3细胞的hTGFβ_1表达

8

作者 刘方军 曹谊林 +3 位作者 崔磊 刘伟 商庆新 刘德莉 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2002年第5期388-390,共3页

目的鉴定重组pcDNA3.1-TGFβ1 载体在真核细胞中的表达 ,为其在软骨组织工程中的基因转染创造条件。　方法利用脂质体Fugene 6将TGFβ1 真核表达载体转染至NIH3T3细胞 ,RT -PCR、ELISA检测hTGFβ1 基因的表达 ,并利用CCL 6 4细胞株鉴定... 目的鉴定重组pcDNA3.1-TGFβ1 载体在真核细胞中的表达 ,为其在软骨组织工程中的基因转染创造条件。　方法利用脂质体Fugene 6将TGFβ1 真核表达载体转染至NIH3T3细胞 ,RT -PCR、ELISA检测hTGFβ1 基因的表达 ,并利用CCL 6 4细胞株鉴定重组hTGFβ1 的生物学活性。　结果质粒转染 3T3细胞后 ,hTGFβ1 mRNA及其蛋白的表达均显著增强 ,且分泌表达的hTGFβ1 能明显抑制CCL 6 4细胞的生长。　结论重组载体在 3T3细胞中能表达具有一定生物学活性的hTGFβ1 。 展开更多

关键词 hTGFβ1 基因重组 组织工程 DNA转移

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TGF-β_1对胎儿晶状体上皮细胞增殖的作用

9

作者 高福禄 牛嗣云 +2 位作者 庞小静 王春艳 赵艳芝 《眼科新进展》 CAS 2002年第5期328-330,共3页

　目的　探讨转化生长因子-β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)对胎儿晶状体上皮细胞增殖的作用。方法用 SP免疫组织化学法对 48例人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞进行细胞增殖核抗原 (proliferating cell nuclear anti-gen,PCNA)... 　目的　探讨转化生长因子-β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)对胎儿晶状体上皮细胞增殖的作用。方法用 SP免疫组织化学法对 48例人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞进行细胞增殖核抗原 (proliferating cell nuclear anti-gen,PCNA)、TGF-β1免疫组织化学染色。结果　 PCNA、TGF-β1在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达 ;免疫阳性细胞随着胎龄的增加而减少。PCNA阳性细胞核为桔黄色或棕黄色 ;TGF-β1阳性细胞浆为桔黄色或棕黄色的颗粒状或斑块状 ;经相关分析 :TGF-β1与 PCNA呈正相关。结论　 PCNA、TGF-β1在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达 ;TGF-β1与 PCNA呈正相关 。 展开更多

关键词 晶状体上皮细胞 细胞增殖核抗原 转化生长因子-β1 胎儿 免疫组织化学

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14例身材矮小儿童神经纤维瘤病Ⅰ型的临床诊治及遗传学特征

10

作者 杨翱宇 符皓 梁雁 《医药导报》 CAS 北大核心 2024年第12期1981-1987,共7页

目的总结分析14例身材矮小神经纤维瘤病Ⅰ型(NF1)患儿的临床特征,以期提高临床医生对该病的认识,实施早期诊断与干预。方法收集2017年5月—2024年6月在华中科技大学同济医学院附属同济医院以“身材矮小”就诊的14例NF1患儿的病例资料,... 目的总结分析14例身材矮小神经纤维瘤病Ⅰ型(NF1)患儿的临床特征,以期提高临床医生对该病的认识,实施早期诊断与干预。方法收集2017年5月—2024年6月在华中科技大学同济医学院附属同济医院以“身材矮小”就诊的14例NF1患儿的病例资料,对其临床特征、治疗情况和随访监测情况进行分析总结。结果14例患儿男女各7例。诊断时平均年龄为(6.61±3.53)岁,身高标准差分值(SDS)为-2.60±0.66。14例患儿全身皮肤均散在分布牛奶咖啡斑,平均(9.64±4.86)个,最大直径6 cm。行基因检测后共发现5种NF1基因变异:无义突变(6例),错义突变(4例),移码突变(2例),剪切突变(1例),整码突变(1例)。在随访过程中3例患儿在青春期出现了皮肤神经纤维瘤,4例患儿在青春期出现牛奶咖啡斑数量增加,1例患儿出现胫骨假关节。10例患儿行生长激素激发试验,有2例患儿伴有生长激素缺乏,应用了重组人生长激素(rhGH)治疗,生长速率较治疗前稍有增加,其余未使用rhGH治疗的12例患儿,随访期间生长速率未出现明显变化。结论1NF1的临床表现多样,且呈年龄依赖性。身材矮小的患儿若合并全身多处牛奶咖啡斑,需警惕NF1的可能,必要时行基因检测,明确诊断后,需定期进行监测随访,以评估疾病的进展情况,早期发现问题并及早干预。 展开更多

关键词 神经纤维瘤病1型 身材矮小 牛奶咖啡斑 重组人生长激素

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重组人生长激素治疗前后糖尿病足患者血清中IGF-1、IGFBP-3和血浆蛋白水平的变化及其意义 被引量：14

11

作者 尚涛 任艳丽 +1 位作者 李静 张英 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1209-1214,共6页

目的:检测糖尿病足(DF)患者血清中胰岛素样生长因子1(IGF-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)和血浆蛋白的水平,探讨重组人生长激素(rhGH)对DF患者的治疗作用。方法:选取DF患者(DF组,n=40)、糖尿病患者(DM组,n=40)和健康成年人(正... 目的:检测糖尿病足(DF)患者血清中胰岛素样生长因子1(IGF-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)和血浆蛋白的水平,探讨重组人生长激素(rhGH)对DF患者的治疗作用。方法:选取DF患者(DF组,n=40)、糖尿病患者(DM组,n=40)和健康成年人(正常对照组,n=40)为研究对象。将DF组患者按照患者意愿分为rhGH治疗组和常规治疗组,每组各20例。rhGH治疗组患者给予0.4IU·kg-1·d-1rhGH注射液,皮下注射,每个疗程15d,2个疗程间隔5d,总计3个疗程;常规治疗组患者给予同等剂量生理盐水皮下注射。比较各组研究对象一般临床资料、治疗前后血清IGF-1和IGFBP-3水平、患者病情分级构成、血浆蛋白总蛋白(TP)、转铁蛋白(TRF)、空腹血糖(FBG)水平及DF组患者和正常对照组研究对象rhGH治疗有效率和创面愈合时间。结果:DF组患者血清IGF-1和IGFBP-3水平明显低于DM组和正常对照组(P<0.01);DM组患者血清IGF-1和IGFBP-3水平明显低于正常对照组(P<0.05)。rhGH治疗组患者治疗后血清IGF-1、IGFBP-3和血浆TP、TRF水平与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05),且均高于常规治疗组治疗后的相应指标(P<0.05);DM组和正常对照组研究对象FBG水平比较差异无统计学意义(P<0.05)。rhGH治疗组患者有效率明显高于常规治疗组(P<0.05)。结论:DF患者经rhGH治疗后有效率提高,适合临床推广。 展开更多

关键词 重组人生长激素 糖尿病足 胰岛素样生长因子1 血浆总蛋白 转铁蛋白

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ET-1、rhEGF、bFGF对培养的兔角膜内皮细胞的影响 被引量：6

12

作者 胡维琨 张虹 +2 位作者 李贵刚 王毓琴 李鹏程 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期501-503,511,518,共5页

目的　研究内皮素 1(ET 1)、重组人表皮生长因子 (rhEGF)、碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对培养的兔角膜内皮细胞增殖能力的影响及其相互作用。方法　在体外培养的兔角膜内皮细胞中单独使用或联合应用ET 1、rhEGF、bFGF ,采用MTT方法... 目的　研究内皮素 1(ET 1)、重组人表皮生长因子 (rhEGF)、碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对培养的兔角膜内皮细胞增殖能力的影响及其相互作用。方法　在体外培养的兔角膜内皮细胞中单独使用或联合应用ET 1、rhEGF、bFGF ,采用MTT方法观察对细胞增殖的影响 ,免疫组化染色法和计算机图像分析系统检测对细胞增殖细胞核抗原 (PCNA)表达的影响。结果　一定浓度ET 1促进培养的兔角膜内皮细胞的增殖 ,且呈剂量相关性。 10 pmol/L时起作用 ,2 0 0 pmol/L时发挥最大作用。 10ng/mlrhEGF、 2ng/mlbFGF也促进培养的兔角膜内皮细胞的增殖。联合应用ET 1+rhEGF、ET 1+bFGF、ET 1+rhEGF +bFGF ,细胞吸光度 (A)值明显高于单独使用相应药物时A值之和。ET 1、rhEGF、bFGF单独使用可促进培养的兔角膜内皮细胞PCNA表达 ,联合应用时PCNA表达平均吸光度A值明显强于单独使用相应药物时表达强度之和。结论　ET 1可作为一种生长因子 ,它和rhEGF、bFGF单独使用可促进培养的兔角膜内皮细胞增殖能力 ,联合应用时具有协同作用。 展开更多

关键词 ET-1 RHEGF BFGF 兔 角膜 内皮细胞 RHEGF 内皮素-1 细胞增殖 增殖细胞核抗原

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人重组转化生长因子β1促进牙髓干细胞的增殖和矿化 被引量：8

13

作者 贾维茜 赵玉鸣 葛立宏 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期680-684,共5页

目的:研究人重组转化生长因子β1(recombinant human transforming growth factorβ1,rh TGF-β1)对牙髓干细胞生物学性能的影响,包括确定促进牙髓干细胞增殖的最佳作用浓度和该浓度下对牙髓干细胞分化的作用。方法:分离培养人健康第三... 目的:研究人重组转化生长因子β1(recombinant human transforming growth factorβ1,rh TGF-β1)对牙髓干细胞生物学性能的影响,包括确定促进牙髓干细胞增殖的最佳作用浓度和该浓度下对牙髓干细胞分化的作用。方法:分离培养人健康第三磨牙牙髓干细胞,分别加入1μg/L、6μg/L、10μg/L的rh TGF-β1,CCK-8(cell counting kit-8)法检测对牙髓干细胞增殖的影响,选择出最佳浓度在成骨/成牙本质诱导条件下连续培养,酶标仪检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)光密度值,二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,BCA)蛋白质定量试剂盒计算总蛋白含量,两者比值作为ALP相对活性的指标。茜素红染色观察矿化结节形成能力,染色液洗脱后检测光密度值,比较rh TGF-β1对牙髓干细胞增殖和分化的作用。结果:牙髓干细胞具有体外形成矿化结节的能力,6μg/L rh TGF-β1可促进牙髓干细胞增殖;连续培养7 d后,6μg/L rh TGF-β1组细胞ALP的光密度值为0.31±0.03,显著高于对照组0.02±0.01(P<0.05);6μg/L rh TGF-β1组总蛋白含量为(2 775.46±83.54)mg/L,对照组为(1 432.20±110.83)mg/L(P<0.05);ALP相对光密度值,6μg/L rh TGF-β1组较对照组提高了6倍。茜素红染色下显示矿化结节形成增加,洗脱液光密度值6μg/L rh TGF-β1组和对照组分别为0.83±0.02和0.55±0.05,P<0.05。结论:6μg/L rh TGF-β1具有促进牙髓干细胞增殖和促进体外成牙本质分化的作用。 展开更多

关键词 牙髓干细胞 人重组转化生长因子β1 成牙本质细胞 分化

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重组截短型人角质细胞生长因子-1的表达及纯化 被引量：3

14

作者 邓林 刘孝菊 +5 位作者 龚守良 王会岩 田海山 王晓杰 马吉胜 李校堃 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期629-633,共5页

目的:构建高效表达N端缺失的23个氨基酸重组人角质细胞生长因子1(rhKGF1dest23)的基因工程菌,为治疗放化疗后口腔黏膜炎的新药开发提供实验数据。方法:利用PCR方法分别以pET3c-hKGF1及sumo-EGF为模板合成N端缺失的23个氨基酸rhKGF1dest2... 目的:构建高效表达N端缺失的23个氨基酸重组人角质细胞生长因子1(rhKGF1dest23)的基因工程菌,为治疗放化疗后口腔黏膜炎的新药开发提供实验数据。方法:利用PCR方法分别以pET3c-hKGF1及sumo-EGF为模板合成N端缺失的23个氨基酸rhKGF1dest23及sumo基因片段,构建4种原核表达载体pET22b-rhKGF1dest23、pET22b-sumo-rhKGF1dest23、pET3c-rhKGF1dest23和pET3c-sumo-rhKGF1dest23,分别转化原核表达宿主菌Rosetta(DE3)plysS、BL21(DE3)、BL21(DE3)StarplysS、origima(DE3)和BL21AI,筛选rhKGF1dest23蛋白表达的最佳质粒与宿主菌组合。CM离子交换和肝素亲和层析法纯化rhKGF1dest23蛋白,Westernblotting法鉴定rhKGF1dest23蛋白。结果:pET22b-rhKGF1dest23质粒与BL21AI宿主菌为最佳组合表达,经IPTG与阿拉伯糖诱导,SDS-PAGE电泳后表明目的蛋白大部分以可溶性形式存在,约占菌体总蛋白的10%,经CM和肝素两步纯化后rhKGF1dest23蛋白纯度为95%以上,Westernblotting法鉴定为rhKGF1dest23蛋白。结论:成功构建表达人KGF1dest23重组蛋白的基因工程菌,经IPTG与阿拉伯糖诱导,CM弱阳离子与肝素亲合层析后,得到了纯化的rhKGF1dest23蛋白。 展开更多

关键词 高效表达 重组截短人角质细胞生长因子-1 纯化

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TRPC1在TGF-β1诱导支气管上皮细胞间充质转化中的作用 被引量：9

15

作者 岳喜磊 成莹 +3 位作者 许继德 钟长江 杨春涛 汪鹏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期492-498,共7页

目的:探究经典瞬时受体电位通道1(TRPC1)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人支气管上皮细胞(16HBE)间充质转化(EMT)中的作用。方法:以16HBE细胞株为研究对象,免疫荧光、RT-PCR和Western blotting检测16HBE细胞EMT过程中TRPC1 mRNA和蛋白... 目的:探究经典瞬时受体电位通道1(TRPC1)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人支气管上皮细胞(16HBE)间充质转化(EMT)中的作用。方法:以16HBE细胞株为研究对象,免疫荧光、RT-PCR和Western blotting检测16HBE细胞EMT过程中TRPC1 mRNA和蛋白的表达;Western blotting检测TRPC1阻断剂和siRNA干扰对16HBE细胞EMT的影响。结果:(1)TGF-β1刺激后细胞形态明显改变,E-钙黏蛋白表达减少(P<0.01),而α-SMA蛋白表达增加(P<0.05)。(2)TRPC1广泛存在于16HBE细胞,且TGF-β1刺激后TRPC1 mRNA和蛋白的表达增加(P<0.05)。(3)与TGF-β1组相比,阻断剂和TGF-β1共同作用组或siRNA和TGF-β1共同作用组细胞形态改变受抑制,E-钙黏蛋白和α-SMA蛋白表达受抑制(P<0.05)。结论:TGF-β1诱导16HBE细胞发生EMT,其机制可能与其上调16HBE细胞TRPC1有关。 展开更多

关键词 转化生长因子β1 人支气管上皮细胞 瞬时受体电位通道1 上皮细胞间充质转化

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rhBMP_2作用下人牙乳头细胞内Smad1分子的转位变化 被引量：3

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作者 何文喜 牛忠英 +1 位作者 赵守亮 陈健 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期398-400,共3页

目的:观察骨形成蛋白(bone morphogenetic protein)特异的细胞内信号转导分子Smadl在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程,从细胞内信号转导水平探讨牙齿发育过程中成牙本质细胞的分化机制。方法:原代培养人牙乳头细胞,用转化生长因子β... 目的:观察骨形成蛋白(bone morphogenetic protein)特异的细胞内信号转导分子Smadl在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程,从细胞内信号转导水平探讨牙齿发育过程中成牙本质细胞的分化机制。方法:原代培养人牙乳头细胞,用转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)和重组人骨形成蛋白骨形成蛋白2(recombinant hu-man bone morphogenetic protein,rhBMP2)刺激培养的细胞,对照组用0.2％FCS的DMEM的培养液培养,不加任何刺激。免疫组化观察。结果:TGF-β1和rhBMP2刺激组均可见Smadl蛋白表达,但与对照组相比无明显差异;rhBMP2组可见Smadl从胞浆转位至核内聚集,TGF-β1组未见此作用。结论:首次观察到Smadl基因在人牙乳头细胞内的表达并参与信号转位过程,提示BMP2在牙乳头细胞内信号传递可能是通过Smadl转位至核内引起基因表达实现的。 展开更多

关键词 重组人骨形成蛋白2 人牙乳头细胞 SMAD1 转化生长因子β1 牙齿发育 细胞分化 成牙本质细胞

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胰岛素样生长因子-1对甲状旁腺激素介导成骨细胞增殖及成骨活性的影响 被引量：7

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作者 刘冰 卢蕾阳 +1 位作者 高飞 杨静 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1298-1301,共4页

目的通过构建乳鼠颅盖骨成骨细胞分离培养与鉴定方法,研究胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor-1,IGF-1)及IGF-1联合重组人甲状旁腺激素1-34(recombinant human parathyroid hormone 1-34,rhPTH1-34)对成骨细胞增殖及I型胶... 目的通过构建乳鼠颅盖骨成骨细胞分离培养与鉴定方法,研究胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor-1,IGF-1)及IGF-1联合重组人甲状旁腺激素1-34(recombinant human parathyroid hormone 1-34,rhPTH1-34)对成骨细胞增殖及I型胶原蛋白mRNA表达的影响。方法培养乳鼠成骨细胞,并观察其形态及功能,以原代培养乳鼠成骨细胞为实验模型,分空白组、PTH组、IGF-1组及不同浓度IGF-1作用的PTH介导的成骨细胞组(0、10、50、100 ng/L)。通过不同剂量的胰岛素样生长因子-1(0、10、50、100 ng/L)联合10-9mol/L重组人甲状旁腺素刺激体外培养的成骨细胞,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力,RT-PCR法检测成骨细胞I型胶原蛋白mRNA的表达。结果 PTH和IGF-1均可促进成骨细胞增殖;IGF-1联合PTH可以促进成骨细胞增殖,且具有剂量依赖性。PTH联合IGF-1使成骨细胞增殖能力增强、I型胶原蛋白mRNA表达增强。IGF-1可以促进成骨细胞I型胶原蛋白mRNA的表达,且具有剂量依赖性。IGF-1可以促进成骨细胞I型胶原蛋白mRNA的表达,且具有剂量依赖性。结论 PTH与IGF-1均可刺激成骨细胞增殖和分化,IGF-1可促进PTH对成骨细胞的分化、增殖。两者合用其作用增强,有协同促进作用。 展开更多

关键词 重组人甲状旁腺激素1-34 胰岛素样生长因子-1 成骨细胞 增殖 I型胶原蛋白mRNA

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兔髓核细胞体外培养和重组人转化生长因子-β1对其代谢影响的研究 被引量：5

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作者 张传志 周跃 +4 位作者 李长青 周琳 郭国宁 曹国勇 李华壮 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 2006年第4期280-283,i0001,共5页

目的:探讨体外单层和立体培养兔髓核细胞时的变化及重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1,10ng/ml)对其代谢的影响。方法:体外培养兔髓核细胞,分为3组。A组,单层培养组;B组,Ⅱ型胶原支架立体培养组;C组,Ⅱ型胶原支架立体培养+rhTGF-β1(10n... 目的:探讨体外单层和立体培养兔髓核细胞时的变化及重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1,10ng/ml)对其代谢的影响。方法:体外培养兔髓核细胞,分为3组。A组,单层培养组;B组,Ⅱ型胶原支架立体培养组;C组,Ⅱ型胶原支架立体培养+rhTGF-β1(10ng/ml)组。利用倒置显微镜、扫描电镜、RT-PCR、3H-proline掺入法观察髓核细胞形态学、基因表达水平和总胶原合成的变化。结果:B、C组兔髓核细胞由A组的多角形转为类圆形;与A组相比,B组Ⅱ型胶原、集聚蛋白多糖基因表达水平升高(P<0.05),总胶原合成升高(P<0.01)。与B组相比,C组Ⅱ型胶原、集聚蛋白多糖、核心蛋白多糖基因表达水平增高(P<0.01、P<0.01、P<0.05),总胶原合成升高(P<0.01)。结论:兔髓核细胞由单层培养转到Ⅱ型胶原支架上培养时其基因表达和总胶原合成增强。rhTGF-β1(10ng/ml)可增强立体培养的兔髓核细胞基因表达和总胶原合成。 展开更多

关键词 组织工程 细胞培养 髓核细胞 重组人转化生长因子-β1 兔

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LOX-1在ox-LDL诱导人肾小球系膜细胞TGF-β1表达的作用 被引量：8

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作者 李萍 张海燕 +1 位作者 盛志业 刘国良 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期23-26,共4页

目的:探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人肾小球系膜细胞(HGMC)表达转化生长因子(TGF-β1)中的作用。方法:体外培养HGMC,在不同时间加入不同浓度的ox-LDL及LOX-1阻滞性抗体JTX92,用半定量RT-PC... 目的:探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人肾小球系膜细胞(HGMC)表达转化生长因子(TGF-β1)中的作用。方法:体外培养HGMC,在不同时间加入不同浓度的ox-LDL及LOX-1阻滞性抗体JTX92,用半定量RT-PCR法检测细胞LOX-1和TGF-β1mRNA表达,用Westernblot法检测细胞LOX-1蛋白合成,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养液中TGF-β1浓度。结果:ox-LDL以时间和浓度依赖的方式增加LOX-1mRNA和蛋白表达的同时,也以时间和浓度依赖的方式增加细胞内TGF-β1mRNA表达和培养液中TGFβ1蛋白的含量,JTX92(10μg/ml)可以明显抑制LOX-1和TGF-β1的表达(P<0.01)。结论:ox-LDL通过激活LOX-1调节HGMCTGF-β1基因表达、蛋白合成与分泌。 展开更多

关键词 血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1 转化生长因子β1 人肾小球系膜细胞 糖尿病肾病

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重组人胰岛素样生长因子-1纯化及其鉴定的研究 被引量：3

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作者 段宇 赵红 +1 位作者 汪承亚 陈家伟 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期557-560,共4页

目的:利用亲和层析法将家蚕幼虫中高效表达的重组人胰岛素样生长因子(recombinanthumaninsulin鄄likegrowthfactor鄄1,rhIGF鄄1)纯化并鉴定,以得到具有免疫学活性和生物学活性的rhIGF鄄1生物制品。方法:蚕血淋巴中rhIGF鄄1初步提纯去除... 目的:利用亲和层析法将家蚕幼虫中高效表达的重组人胰岛素样生长因子(recombinanthumaninsulin鄄likegrowthfactor鄄1,rhIGF鄄1)纯化并鉴定,以得到具有免疫学活性和生物学活性的rhIGF鄄1生物制品。方法:蚕血淋巴中rhIGF鄄1初步提纯去除杂质,采用亲和层析法纯化rhIGF鄄1。以ELISA法测定纯化产物中rhIGF鄄1含量,用SDS鄄PAGE和Western鄄blot分析鉴定rhIGF鄄1纯度及免疫学活性,4-甲基偶氮唑蓝(tetrazoliumsalt,MTT)法观察其对MCF鄄7细胞增殖的影响。结果:纯化后rhIGF鄄1纯度约为40%,Westernblot分析发现,主要纯化产物相对分子质量为7.5ku的成熟hIGF鄄1,所含非目的产物与hIGF鄄1无免疫交叉反应。细胞活性刺激实验显示,rhIGF鄄1纯品对MCF鄄7细胞有较好的刺激活性,促增殖能力优于来源于大肠杆菌的rhIGF鄄1产品。结论:蚕血淋巴中的rhIGF鄄1经亲和层析后初步得到纯化,并显示良好的免疫学活性和生物学活性。 展开更多

关键词 重组人胰岛素样生长因子—1 家蚕幼虫 亲和层析 纯化产物 活性

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