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FEA对PRV体内外感染诱导免疫细胞组蛋白乙酰化修饰的调节作用
1
作者 余小丽 袁海峰 +5 位作者 黄昌巧 蒋丽群 李艳华 胡效东 任春芝 胡庭俊 《饲料研究》 北大核心 2025年第4期56-61,共6页
研究旨在观察辣蓼黄酮乙酸乙酯部分(FEA)对猪伪狂犬病毒(PRV)感染小鼠和细胞组蛋白乙酰化修饰的调节作用。试验包括体内试验和体外试验两部分。体外试验设细胞对照组、曲古霉素A(TSA)组、PRV组、芦丁组及PRV+FEA 25组、PRV+FEA 50组、PR... 研究旨在观察辣蓼黄酮乙酸乙酯部分(FEA)对猪伪狂犬病毒(PRV)感染小鼠和细胞组蛋白乙酰化修饰的调节作用。试验包括体内试验和体外试验两部分。体外试验设细胞对照组、曲古霉素A(TSA)组、PRV组、芦丁组及PRV+FEA 25组、PRV+FEA 50组、PRV+FEA 100组。体内试验设空白对照组、TSA组、PRV组、芦丁组、PRV+FEA 50组、PRV+FEA 100组、PRV+FEA 200组。测定样品乙酰转移酶1(HAT1)、去乙酰转移酶1(HDAC1)的活性,HAT1和HDAC1的mRNA表达水平及组蛋白H3(AcH3)和H4(AcH4)乙酰化水平。结果显示,与PRV组相比,FEA组RAW264.7细胞HAT1的活性均极显著降低(P<0.01),PRV+FEA 25组、PRV+FEA 50组HDAC1的活性显著升高(P<0.05);PRV+FEA 50组、PRV+FEA 100组HAT1 mRNA的表达水平极显著降低(P<0.01),PRV+FEA 25组、PRV+FEA 50组HDAC1 mRNA表达水平显著提高(P<0.05);PRV+FEA 25组、PRV+FEA 100组AcH3乙酰化水平及PRV+FEA 50组、PRV+FEA 100组AcH4乙酰化水平极显著降低(P<0.01),PRV+FEA 50组AcH3乙酰化水平显著降低(P<0.05)。与PRV组相比,PRV+FEA 100组、PRV+FEA 200组小鼠脾脏细胞HAT1活性极显著降低(P<0.01),而HDAC1活性极显著提升(P<0.01);PRV+FEA 100组、PRV+FEA 200组小鼠脾脏HAT1 mRNA的表达水平极显著降低(P<0.01),PRV+FEA 50组小鼠脾脏HDAC1 mRNA的表达水平显著升高(P<0.05),PRV+FEA 100组、PRV+FEA 200组小鼠脾脏HDAC1 mRNA的表达水平极显著升高(P<0.01);PRV+FEA 50组、PRV+FEA 100组小鼠脾脏AcH3乙酰化表达水平以及PRV+FEA 100组、PRV+FEA 200组小鼠脾脏AcH4乙酰化表达水平极显著降低(P<0.01),PRV+FEA 200组小鼠脾脏AcH3乙酰化表达水平显著降低(P<0.05)。研究表明,FEA能够调控PRV体内外感染诱导的免疫细胞组蛋白乙酰化修饰水平。 展开更多
关键词 辣蓼黄酮乙酸乙酯部分 伪狂犬病毒 组蛋白乙酰化
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螺旋藻多糖对PRV感染小鼠脾脏氧化应激的调节作用
2
作者 赵雯 宾秀娟 +4 位作者 童艳梅 施君 周博武 曹迷霞 胡庭俊 《饲料工业》 CAS 北大核心 2024年第23期90-96,共7页
试验旨在探究螺旋藻多糖(PSP)对猪伪狂犬病毒(PRV)感染小鼠脾脏氧化应激的调节作用。将120只BALB/c小鼠随机分5组,分别为高剂量螺旋藻多糖组分1(PSP-1,4 mg)组、中剂量PSP-1(2 mg)组、低剂量PSP-1(1 mg)组、PRV组和空白对照组。高、中... 试验旨在探究螺旋藻多糖(PSP)对猪伪狂犬病毒(PRV)感染小鼠脾脏氧化应激的调节作用。将120只BALB/c小鼠随机分5组,分别为高剂量螺旋藻多糖组分1(PSP-1,4 mg)组、中剂量PSP-1(2 mg)组、低剂量PSP-1(1 mg)组、PRV组和空白对照组。高、中、低剂量PSP-1组及PRV组第1天经腹腔注射PRV溶液,空白对照组经腹腔注射灭菌生理盐水。随后1~6 d,高、中、低剂量PSP-1组分别灌胃相应剂量PSP-1,PRV组和空白对照组灌胃灭菌生理盐水,第7天剖杀。采用试剂盒法测定小鼠脾脏丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)酶活性;通过H.E.染色观察小鼠脾脏病理变化;通过免疫组化检测小鼠脾脏中血红素加氧酶-1(HO-1)、iNOS表达。结果显示,与PRV组相比,高剂量PSP-1组小鼠脾脏中MDA、NO含量及iNOS活性极显著降低(P<0.05),SOD活性极显著升高(P<0.05);H.E.染色结果显示,高、中、低剂量PSP-1处理后,小鼠脾脏病理变化有不同程度减轻;免疫组化结果显示,高、中、低剂量PSP-1处理PRV感染小鼠后,脾脏中HO-1的表达有不同程度的升高,iNOS的表达有不同程度的降低。说明PSP-1能够减轻PRV感染小鼠脾脏的损伤,缓解PRV感染小鼠引起的氧化应激。 展开更多
关键词 螺旋藻多糖 猪伪狂犬病毒 氧化应激 脾脏 免疫组化
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辣蓼黄酮正丁醇部位对PRV感染RAW264.7细胞氧化应激的干预作用及组蛋白乙酰化水平的影响
3
作者 柏晶晶 张文 +3 位作者 黄昌巧 袁海峰 周淑棉 胡庭俊 《饲料研究》 CAS 北大核心 2024年第16期85-91,共7页
试验旨在探究辣蓼黄酮正丁醇部位(FNB)对猪伪狂犬病毒(PRV)感染小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)氧化应激反应的干预作用及组蛋白乙酰化水平的影响。采用CCK-8法检测FNB对细胞的毒性作用,采用不同浓度的FNB(25、50、100 mg/L)处理PRV感染的RA... 试验旨在探究辣蓼黄酮正丁醇部位(FNB)对猪伪狂犬病毒(PRV)感染小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)氧化应激反应的干预作用及组蛋白乙酰化水平的影响。采用CCK-8法检测FNB对细胞的毒性作用,采用不同浓度的FNB(25、50、100 mg/L)处理PRV感染的RAW264.7细胞4、8、12 h,测定氧化应激相关因子和组蛋白乙酰化水平。结果显示,与PRV感染组相比,25 mg/L FNB作用于PRV感染的RAW264.7细胞12 h后,细胞内诱导性一氧化氮合酶(iNOS)活性及一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)水平降低,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、小鼠血红素氧合酶1(HO-1)和小鼠醌氧化还原酶1(NQO1)活性升高,iNOS mRNA的表达水平极显著下调(P<0.01),HO-1 mRNA的表达水平显著上调(P<0.05),核因子E2相关因子2(Nrf2)、NQO1的表达水平极显著上调(P<0.01)。与PRV感染组相比,25 mg/L FNB组处理12 h时后,细胞内组蛋白乙酰化酶(HAT)的活性降低,组蛋白去乙酰化酶(HDAC)的活性升高,细胞内HAT mRNA的表达水平下调,HDAC mRNA的表达水平上调。研究表明,FNB对PRV感染RAW264.7细胞诱导的氧化应激具有一定的调节作用,可通过提高细胞内多种抗氧化酶的基因表达水平发挥抗氧化作用,调节细胞内的乙酰化水平,降低PRV感染导致的氧化应激损伤。 展开更多
关键词 辣蓼黄酮正丁醇部位 猪伪狂犬病毒 氧化应激 组蛋白乙酰化
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猪瘟病毒E2基因部分表位区重组猪伪狂犬病病毒的构建及生物学特性研究
4
作者 王林青 张刘辉 +3 位作者 陈曦艋 马世杰 宋月 陈红英 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第4期1815-1824,共10页
【目的】猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)和猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)是当前影响生猪产业发展的两种重要病原,目前无高效的药物治疗方法,主要依靠疫苗接种进行预防。本试验旨在构建含有CSFV E2基因部分表... 【目的】猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)和猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)是当前影响生猪产业发展的两种重要病原,目前无高效的药物治疗方法,主要依靠疫苗接种进行预防。本试验旨在构建含有CSFV E2基因部分表位区的重组PRV毒株,并探究其生物学特性,为开发同时预防CSFV和PRV的二联疫苗提供参考。【方法】首先使用基因工程技术将包含CSFV E2蛋白B/C/D/A 4个表位区的一段基因插入pG-EGFP重组质粒的BamHⅠ位点,构建重组质粒pG-E2AD-EGFP;然后将质粒转染已接种PRV三基因缺失毒株rPRV NY-gE^(-)/gI^(-)/TK^(-)的ST细胞,在ST细胞内发生同源重组,利用蚀斑纯化法拯救出带绿色荧光蛋白的重组病毒rPRV-E2AD-EGFP。使用CRISPR/Cas9敲除载体敲除EGFP基因,经蚀斑纯化得到无荧光的重组病毒rPRV-E2AD。利用PCR扩增和Western blotting检测重组病毒rPRV-E2AD的E2基因A-D表位区表达情况。通过半数组织培养感染剂量(TCID50)法检测不同理化性质处理后病毒增殖情况,对重组病毒培养特性、理化特性进行评价。【结果】通过细胞内同源重组和病毒蚀斑纯化,得到了同时表达CSFV E2AD抗原和EGFP的重组病毒rPRV-E2AD-EGFP。通过CRISPR/Cas9技术敲除EGFP基因,得到了无EGFP基因表达的重组病毒rPRV-E2AD。Western blotting检测结果显示,该毒株表达蛋白大小约27 ku,与预期CSFV E2AD抗原大小一致。rPRV-E2AD毒株与亲本株在ST、IPEC-J2、PK-15、Vero细胞中生长特性基本一致,均在感染后12 h引起细胞融合,36 h出现细胞脱落。理化特性检测结果显示,重组毒株与亲本株在相同理化条件处理下,培养特性相似。【结论】本研究成功获得重组病毒rPRV-E2AD,且外源基因不影响亲本株的增殖特性,试验结果为研发重组CSFV E2基因活载体疫苗提供了候选毒株,也为PRV活载体疫苗的开发提供了研究基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒(CSFV) 伪狂犬病病毒(prv) 重组病毒 E2基因
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猪伪狂犬病病毒gB抗体竞争酶联免疫检测方法的建立
5
作者 刘梅芬 马震原 +9 位作者 王淑娟 闫若潜 班付国 赵雪丽 谢彩华 王东方 柴茂 刘影 杨海波 王翠 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期141-147,共7页
为建立猪伪狂犬病病毒gB抗体竞争酶联免疫检测方法,以大肠杆菌表达并纯化的gB蛋白为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗gB蛋白单克隆抗体为酶标抗体,经各反应条件的优化,成功建立了PRV gB抗体的竞争酶联免疫检测方法,并对该方法的... 为建立猪伪狂犬病病毒gB抗体竞争酶联免疫检测方法,以大肠杆菌表达并纯化的gB蛋白为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗gB蛋白单克隆抗体为酶标抗体,经各反应条件的优化,成功建立了PRV gB抗体的竞争酶联免疫检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了评估。PRV gB抗体竞争酶联免疫检测方法经优化后的最佳条件为:gB蛋白的最佳包被浓度为0.25μg/mL、包被量100μL/孔,酶标抗体的最佳稀释浓度为1∶1000,样品检测时间为30 min(抗原抗体反应)+15 min(底物显色);敏感性结果显示,PRV gB标准阳性血清(Z89)经1∶512稀释后经检测仍为阳性;特异性结果显示,猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、大肠杆菌抗体阳性血清的检测结果均为阴性;批内、批间重复试验结果显示,批内、批间变异系数分别为0.24%~9.45%、0.58%~11.61%,均小于12%。通过对采集的184份临床血清检测结果进行比较,该方法与商品化试剂盒的阳性符合率为96.23%,阴性符合率为96.95%,总符合率96.74%。本研究在国内首次建立PRV gB竞争酶联免疫检测方法,为PRV gB抗体快速检测提供了可靠的技术手段。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 gB蛋白 竞争酶联免疫
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表达猪圆环病毒2d型Cap蛋白的重组猪伪狂犬病病毒的构建
6
作者 焦显芹 马晓 +3 位作者 田润博 刘颖 马世杰 陈红英 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第5期2278-2286,共9页
【目的】利用同源重组技术和CRISPR/Cas9基因编辑技术,获得表达猪圆环病毒2d型(PCV2d)Cap蛋白的重组猪伪狂犬病病毒(PRV),为开发预防和控制PCV2d和PRV感染的疫苗提供技术支持。【方法】基于PCV2d KF1株ORF 2基因序列设计1对特异引物,以P... 【目的】利用同源重组技术和CRISPR/Cas9基因编辑技术,获得表达猪圆环病毒2d型(PCV2d)Cap蛋白的重组猪伪狂犬病病毒(PRV),为开发预防和控制PCV2d和PRV感染的疫苗提供技术支持。【方法】基于PCV2d KF1株ORF 2基因序列设计1对特异引物,以PCV2d KF1株DNA为模板扩增ORF 2基因。经限制性内切酶Bam HⅠ酶切后将ORF 2基因引入到含有绿色荧光蛋白(EGFP)基因的PRV转移载体pG中,获得重组质粒pG-PCV2d-EGFP。运用转染试剂ZLip2000将质粒pG-PCV2d-EGFP和PRV三基因缺失毒株gE^(-)/gI^(-)/TK^(-)PRV NY DNA共转染至ST单层细胞中拯救重组病毒,并利用CRISPR/Cas9 EGFP基因双敲除质粒敲除重组病毒中EGFP基因。经EGFP基因测序、PCR和Western blotting对获得的重组病毒进行鉴定。【结果】经8轮绿色荧光蚀斑筛选,纯化得到重组病毒rPRV-PCV2d-EGFP。CRISPR/Cas9 EGFP基因双敲除质粒敲除EGFP基因后,经3轮筛选没有绿色荧光的蚀斑,获得重组病毒rPRV-PCV2d。EGFP基因测序结果表明,rPRV-PCV2d中EGFP基因被剪截了1251 bp,PCR和Western blotting结果显示,rPRV-PCV2d携带的ORF 2基因能在ST细胞中转录与表达。【结论】本研究成功构建表达PCV2d Cap蛋白的重组病毒rPRV-PCV2d,为进一步研制重组活载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪伪狂犬病病毒 重组病毒活载体疫苗
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2022—2024年西南地区部分规模化猪场健康猪群4种重要疫病的病原学调查与分析
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作者 赵婵娟 鄢行安 曹立亭 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第5期33-42,共10页
在动物疫病防控中,定期的病原学检测能够为规模化猪场在疫病暴发前或发病初期提供明确的预警信号。本试验聚焦于西南地区的重庆、四川和贵州三省市,对部分规模化猪场中健康猪群携带的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)... 在动物疫病防控中,定期的病原学检测能够为规模化猪场在疫病暴发前或发病初期提供明确的预警信号。本试验聚焦于西南地区的重庆、四川和贵州三省市,对部分规模化猪场中健康猪群携带的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)和戊型肝炎病毒(HEV)进行调查和分析。在2022—2024年每年3—5月,从西南地区10个区县的47家规模化猪场的健康仔猪群中采集了5 349份全血样本和4 275份鼻拭子样本,通过聚合酶链式反应(PCR)对所有样本进行了PRRSV、PRV、CSFV和HEV检测。结果显示,PRRSV、PRV和CSFV在西南地区已得到有效控制。2022年、2023年和2024年,西南地区临床健康猪群中经典PRRSV(C-PRRSV)毒株的阳性率分别为0.22%(4/1 811)、0.27%(5/1 831)和0(0/1 707),高致病性PRRSV(HP-PRRSV)毒株的阳性率分别为0.28%(5/1 811)、0.16%(3/1 831)和0.18%(3/1 707);PRV的阳性率分别为0.07%(1/1 505)、0.19%(3/1 541)和0(0/1 229);CSFV的阳性率分别为0.28%(5/1 811)、0(0/1 831)和0(0/1 707)。然而,HEV的阳性率呈上升趋势,从2022年的0.11%(2/1 811)、2023年的0.44%(8/1 831)增加到2024年的1.23%(21/1 707)。结果表明,西南地区的规模化猪场已经实现了对PRRSV、PRV和CSFV的有效预防和净化;但在生猪流动性较大的区域,仍能零星监测到相关病毒。与此同时,快速上升的HEV阳性率应引起规模化猪场管理者的高度关注,对HEV的监测和防控需进一步加强。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 伪狂犬病病毒(prv) 猪瘟病毒(CSFV) 戊型肝炎病毒(HEV) 病原学调查
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猪伪狂犬病毒在空置猪场的分布研究
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作者 路浩 贺桂芬 +6 位作者 徐盟龙 李振坤 李阳 董芳婷 袁晋 张越 魏战勇 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第4期75-79,共5页
为了建立科学精准的针对伪狂犬病毒(PRV)的洗消体系,本试验于已空置6个月的规模化猪场采集了663份环境样品,利用荧光定量PCR方法对场内PRV分布情况进行了检测与分析。结果显示,该猪场洗消中心、猪舍和粪污处理区的PRV核酸检出率依次为25... 为了建立科学精准的针对伪狂犬病毒(PRV)的洗消体系,本试验于已空置6个月的规模化猪场采集了663份环境样品,利用荧光定量PCR方法对场内PRV分布情况进行了检测与分析。结果显示,该猪场洗消中心、猪舍和粪污处理区的PRV核酸检出率依次为25.00%(10/40)、42.11%(256/608)和0(0/15);其中,洗消中心的减速带的PRV核酸检出率最高,为100%(10/10);猪舍样品中配怀舍、育肥舍、分娩舍和保育舍的PRV核酸检出率分别为50.00%(76/152)、46.05%(70/152)、38.16%(58/152)和34.21%(52/152);猪舍中料桶、食槽、挡板、粪板上表面、粪板下表面和粪沟的PRV核酸检出率较高。总之,本试验初步明确了已空置6个月猪场的PRV核酸残留情况,并发现了若干日常洗消工作盲点和遗漏点,为猪场建立科学精准的洗消体系提供了数据支持。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒(prv) 空置猪场 分布
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云南地区部分猪场猪呼吸道疾病综合症(PRDC)患病猪群中PRRSV,PCV-2,CSFV,PRV混合感染调查 被引量：25
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作者 舒相华 尹革芬 +4 位作者 杨志雷 宋春莲 李文贵 潘伟荣 刘旭川 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期54-58,共5页
针对云南省不同地区不同季节猪呼吸道疾病综合征进行流行病学调查,根据其临床特征,在不同规模养殖场共采集1 164份血清样品,利用ELISA和RT-PCR方法检测其猪瘟抗原CSFV,猪繁殖与呼吸综合征抗原PRRSV,猪伪狂犬病PRV gE抗体及猪圆环病毒2型... 针对云南省不同地区不同季节猪呼吸道疾病综合征进行流行病学调查,根据其临床特征,在不同规模养殖场共采集1 164份血清样品,利用ELISA和RT-PCR方法检测其猪瘟抗原CSFV,猪繁殖与呼吸综合征抗原PRRSV,猪伪狂犬病PRV gE抗体及猪圆环病毒2型PCV-2特异抗体。结果表明:各季节和不同生长阶段猪群存在一种及两种以上的病毒混合感染,四重感染相对较少。从全年看单独感染占39.10%,PCV-2感染率最高,其次是PRV,PRRSV和CSFV;二重感染占26.13%,以PCV-2+PRV最常见,其次是PCV-2+PRRSV、PRV+PRRSV;三重感染占8.05%,PCV-2+PRRSV+PRV最常见;有四重感染出现,仅占1.57%。从季节来看,春季和夏季混合感染最高,分别为76.53%和60.74%,冬季和秋季的混合感染率分别为59.50%和53.55%。从年龄和性别看,育肥猪的混合感染率高于仔猪,分别为68.66%和61.11%,种公猪的感染率高于母猪,分别为70.00%和55.51%。说明4种病毒有单独感染或混合感染,推测其中PCV-2在混合感染中可能充当免疫抑制的角色,混合感染使PRDC症状更明显,死亡率增高。 展开更多
关键词 猪呼吸道疾病综合征 猪瘟病毒 猪圆环病毒2型 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪伪狂犬病病毒
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猪伪狂犬病病毒gE基因遗传变异及密码子使用偏好性分析
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作者 陈志安 章蓓雯 +9 位作者 何敏嘉 陈美椿 翁成桢 黄欣欣 李鸿喜 曾仲文 陈宝良 邱龙新 陈洪博 李晓冰 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第7期3264-3275,共12页
【目的】了解国内猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)的流行现状、流行毒株的遗传情况以及PRV gE基因的密码子使用偏好性和影响因素。【方法】本研究针对2019—2023年中国分离到的106条PRV gE基因序列,利用Mega 7.0软件构... 【目的】了解国内猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)的流行现状、流行毒株的遗传情况以及PRV gE基因的密码子使用偏好性和影响因素。【方法】本研究针对2019—2023年中国分离到的106条PRV gE基因序列,利用Mega 7.0软件构建系统发育树,通过Launch DnaSP 6.0软件进行基因选择压力和基因流分析,采用CodonW 1.4.2和SPSS 27.0.1软件进行密码子分析。【结果】遗传进化分析结果表明,国内流行的PRV毒株为基因Ⅱ型,可进一步分为基因型2.1和基因型2.2。基因流分析显示,基因Ⅱ型中基因型2.1和2.2核苷酸多样性(Pi)分别为0.006和0.002;种群间遗传分化系数(Fst)为0.381,同义替换率(Ks)和基因流量化指标(Z)分别为1.353和6.637。基因选择压力分析显示,基因Ⅱ型中基因型2.1和2.2的非同义突变与同义突变比值(dN/dS)分别为1.808和1.362。密码子碱基分析结果表明,基因Ⅱ型的2个亚型中,GC3含量均>50%,基因型2.1和2.2的不同基因编码区有效密码子数(ENC)值分别为30.04和30.06。密码子使用偏好性分析显示,基因型2.1和2.2的相关系数分别为0.115和0.173。相对同义密码子使用度(RSCU)分析显示,基因型2.1和2.2中高表达的密码子第3位均为G/C碱基,低表达的密码子第3位主要为A/U碱基;共25个密码子的RSCU>1,为优先使用密码子,其中13个具有高GC含量,16个以碱基C结尾。【结论】国内PRV流行株以基因Ⅱ型为主,其具有独特的碱基组成,GC含量较高、AU含量相对较低,表现出较低的偏好性,密码子使用受突变压力与自然选择的双重作用,其中自然选择起主导性作用。研究结果为国内猪伪狂犬病的流行趋势研判及防控策略制定提供了科学依据与技术支撑。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒(prv) GE基因 遗传多样性 密码子 偏好性
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猪伪狂犬病病毒分离鉴定及gE和gC基因遗传进化分析
11
作者 武月 石兴亚 +4 位作者 张帅 赵云环 郭立明 左玉柱 范京惠 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第5期2266-2277,共12页
【目的】探究伪狂犬病病毒(PRV)野毒株的变异情况及流行趋势,为PRV新型疫苗的研究提供数据参考。【方法】采集河北省保定市规模化养殖场经Bartha-K61疫苗免疫猪中疑似感染PRV的病料组织,通过PCR方式进行病原检测,将仅PRV阳性的组织滤液... 【目的】探究伪狂犬病病毒(PRV)野毒株的变异情况及流行趋势,为PRV新型疫苗的研究提供数据参考。【方法】采集河北省保定市规模化养殖场经Bartha-K61疫苗免疫猪中疑似感染PRV的病料组织,通过PCR方式进行病原检测,将仅PRV阳性的组织滤液接种PK-15细胞进行病毒分离与纯化,通过间接免疫荧光试验和电镜观察对分离到的病毒进行鉴定,测定分离毒株的病毒滴度并绘制生长曲线,对分离毒株进行血清中和试验、动物致病性研究及gE、gC基因序列分析。【结果】分离株在PK-15细胞中产生典型的拉丝、圆缩、聚集和脱落等病变。纯化后的病毒传代培养至F10代,经PCR隔代检测均能扩增出大小约为742 bp的目的条带,将分离株命名为BD-HB-2024。间接免疫荧光试验鉴定可见绿色荧光标记的细胞;透射电镜下观察到病毒颗粒直径约为150 nm,呈圆球状,符合PRV典型粒子特征。依照Reed-Muench法测定该毒株的半数组织培养感染剂量(TCID_(50))为105.55/0.1 mL。血清中和试验发现,抗Bartha-K61株的血清对该分离株的中和抗体效价为1∶11.22,而抗变异株血清的中和抗体效价为1∶89.13。该毒株对小鼠有一定的致病性,F10代病毒对小鼠的半数致死量(LD_(50))为10-2.5 TCID_(50)/0.1 mL。通过与国内PRV变异毒株gE、gC基因序列比对发现,核苷酸序列相似性分别为99.8%~99.9%和99.8%~100%。遗传进化树分析表明,该分离毒株与经典毒株SC、Italy2014和Kaplan等相似性较低,亲缘关系较远;与国内近几年分离到的变异株HNB、HLJ8、JM和SX1911等相似性较高,亲缘关系较近且位于同一进化分支,比对氨基酸序列后发现符合国内变异株的典型变化。【结论】本试验证实了该养殖场存在PRV的感染,并成功分离到1株PRV变异毒株,该研究为后续新型疫苗的研发和免疫防控方案的制备提供了参考依据。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒(prv) 变异株 分离鉴定 遗传进化
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山东省猪腹泻病例中PEDV、TGEV和PRV的感染调查与分析 被引量：16
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作者 王淞 曾昊 +10 位作者 陈智 焦安琪 张树金 于江 孙文博 张玉玉 陈蕾 杜以军 李俊 吴家强 王金宝 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第7期2165-2170,共6页
为了解山东省规模化猪场由猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪伪狂犬病毒(PRV)引起猪病毒性腹泻的流行情况,自2014年1月至2016年12月,对来自山东省各地规模化猪场的猪腹泻病料(共3 035份)进行PCR检测。结果显示,PEDV... 为了解山东省规模化猪场由猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪伪狂犬病毒(PRV)引起猪病毒性腹泻的流行情况,自2014年1月至2016年12月,对来自山东省各地规模化猪场的猪腹泻病料(共3 035份)进行PCR检测。结果显示,PEDV、PRV和TGEV阳性率分别为67.49%、9.33%和3.29%;3年间,PEDV阳性率在2014年第四季度最低,为48.15%,2015年第四季度阳性率最高,为88.57%,2016年各季度阳性率相对2015年呈波动下降趋势;TGEV阳性率在2014年第四季度最高,为18.52%,2015年第三季度阳性率为15.38%,2016年第一季度阳性率为6.67%,其他季度未检测出阳性病料;PRV阳性率在2016年第二季度最高,为15.68%,除2014年第一季度未检出阳性病料外,2014年第二季度阳性率最低,为2.56%。通过对69份被动送检的病料进行PEDV、TGEV和PRV混合感染检测发现,这部分病料中PEDV、TGEV、PRV阳性率分别为86.96%、5.80%和37.68%;总单独感染率为69.57%,PEDV、TGEV和PRV单独感染率分别为57.97%、1.45%和10.14%;总混合感染率为30.43%,PEDV/PRV、PEDV/TGEV和TGEV/PRV混合感染率分别为26.09%、2.90%和1.45%;总单独感染率比总混合感染率高。结果表明,山东省存在PEDV、PRV和TGEV 3种病毒流行,存在PEDV/TGEV、TGEV/PRV和PEDV/PRV的混合感染,混合感染中主要为PEDV/PRV混合感染,不存在PEDV/PRV/TGEV的混合感染。目前PEDV是引起山东省猪病毒性腹泻的主要病因,本试验结果可为山东省猪病毒性腹泻的诊断和控制提供参考。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪伪狂犬病毒 调查与分析
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致病性猪伪狂犬病病毒PRV-JF株的分离与鉴定 被引量：9
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作者 张超范 刘长明 +1 位作者 危艳武 刘霓虹 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期212-215,共4页
从临床疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织病料中,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染,采用无PCV1污染的猪肾细胞系(PK-15)分离培养,经蚀斑克隆纯化,培育1株细胞培养适应毒,命名为PRV-JF株。该分离株经细胞培养传代,... 从临床疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织病料中,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染,采用无PCV1污染的猪肾细胞系(PK-15)分离培养,经蚀斑克隆纯化,培育1株细胞培养适应毒,命名为PRV-JF株。该分离株经细胞培养传代,能够产生典型的细胞病变,病毒滴度随代次显著增加,第24代毒价达108.5 TCID50/mL。免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测病毒抗原分布在细胞核及细胞质内。病毒感染细胞可被已知PRV阳性血清中和。电镜负染观察到病毒粒子呈椭圆或圆形外观,无囊膜的病毒粒子直径约110 nm～150 nm,有囊膜的成熟病毒粒子直径约150 nm～180 nm。PCR鉴定该毒株含有gE基因,其序列与GenBank登录的7株PRV同源性为97.7%～100%。用不同剂量病毒培养物接种家兔于24 h～72 h内全部死亡。研究表明,PRV-JF分离株对易感动物具有高致病性,为进一步开展该病毒流行病学、致病机理、疫苗免疫与诊断研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 强毒株 分离 鉴定
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PRV、PPV双重PCR检测方法的建立及其应用 被引量：11
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作者 曲光刚 沈志强 +3 位作者 管宇 王金良 唐娜 谢金文 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2007年第11期22-23,共2页
为建立一种能够快速诊断猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)的方法,根据GenBank上发表的PRV、PPV核苷酸序列分别设计并合成了两对能特异性扩增PRV、PPV的引物,经过条件优化后,建立检测PRV、PPV的双重PCR方法,扩增两种病毒的片段分别为5... 为建立一种能够快速诊断猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)的方法,根据GenBank上发表的PRV、PPV核苷酸序列分别设计并合成了两对能特异性扩增PRV、PPV的引物,经过条件优化后,建立检测PRV、PPV的双重PCR方法,扩增两种病毒的片段分别为570bp、748bp。试验证明,该方法具有良好的特异性和敏感性,省时、省力、快速、敏感、高效的特点,为PRV与PPV的快速诊断试剂盒组装及流行病学的研究提供了技术支持。 展开更多
关键词 双重PCR 猪伪狂犬病毒 猪细小病毒
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大豆皂苷Bc对伪狂犬病病毒体外复制影响的研究
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作者 高柯欣 李艳华 +5 位作者 张艳禾 汤艳东 安同庆 蔡雪辉 周双海 王淑杰 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第6期545-552,共8页
为研究大豆皂苷Bc(SS-Bc)对伪狂犬病病毒(PRV)复制的影响,本研究采用CCK-8法测定SS-Bc对Vero E6细胞的半数细胞毒性浓度(CC_(50))为253.6μg/m L,同时测定了SS-Bc对PRV的半数抑制浓度(IC_(50))为21.61μg/m L。根据上述结果,将不同浓度... 为研究大豆皂苷Bc(SS-Bc)对伪狂犬病病毒(PRV)复制的影响,本研究采用CCK-8法测定SS-Bc对Vero E6细胞的半数细胞毒性浓度(CC_(50))为253.6μg/m L,同时测定了SS-Bc对PRV的半数抑制浓度(IC_(50))为21.61μg/m L。根据上述结果,将不同浓度的SS-Bc(15μg/mL、30μg/mL、60μg/mL)与PRV-GFP(MOI 0.01)共处理Vero E6细胞,通过倒置荧光显微镜观察含绿色荧光的细胞数量,结合Image J软件分析荧光强度,并采用Reed-Muech法测定细胞上清中的病毒滴度(TCID_(50));进一步采用不同浓度的SS-Bc(30μg/mL、60μg/mL)分别与不同MOI的PRV-GFP(MOI0.05、MOI 0.1及MOI 0.5)共处理Vero E6细胞,24 h后检测上述指标。结果显示,与阳性对照组相比,SS-Bc处理组细胞的相对荧光强度值和细胞上清中病毒的TCID_(50)均极显著降低(P<0.01),且对病毒的抑制作用呈剂量依赖性,60μg/mL时效果最佳;即使在较高MOI PRV感染下,SS-Bc仍极显著抑制该病毒的增殖(P<0.01)。为了确定SS-Bc的最佳给药方式,本实验于PRV-GFP(MOI 0.01)感染后不同时间,以SS-Bc(60μg/mL)处理Vero E6细胞24 h后检测上述指标。结果显示,所有药物处理组的CPE数量、相对荧光强度值和细胞上清中病毒的TCID_(50)均极显著低于阳性对照组(P<0.01),其中PRV感染后1 h和3 h给药时抑制病毒增殖的效果更佳。进一步体外模拟病毒感染各阶段,将SSBc(60μg/mL)与PRV-GFP(MOI 0.1和1)以不同方式处理后接种Vero E6细胞,采用荧光定量PCR(qPCR)检测病毒吸附、内化及复制阶段gB基因mRNA的相对转录水平,在释放阶段测定细胞上清中病毒的TCID_(50),分析SS-Bc对PRV感染的影响。结果显示SS-Bc在PRV的吸附和复制阶段均显著降低了gB基因mRNA的转录水平(P<0.05),但SS-Bc在病毒的内化和释放阶段均无显著影响。综上所述,本研究首次证实SS-Bc在体外能够显著抑制PRV的增殖,主要作用于病毒的吸附和复制阶段;且无论在病毒接种前、同时或接种后给药,SS-Bc均表现出良好的抗病毒效果,其中在病毒进入细胞后给药效果更佳。本研究为SS-Bc作为潜在的抗PRV药物提供了科学依据,并为SS-Bc的进一步研究和临床应用奠定了基础。 展开更多
关键词 大豆皂苷Bc 伪狂犬病病毒 抗病毒
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伪狂犬病病毒(PrV)糖蛋白gE基因在重组杆状病毒中的表达 被引量：4
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作者 倪建强 张绍杰 +5 位作者 冉智光 仇华吉 王柳 孟松树 王玫 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第3期213-215,共3页
应用PCR方法扩增出 1 .8Kb的伪狂犬病毒糖蛋白gE基因 ,克隆到pUC1 1 9中形成重组质粒pRZE。经测序鉴定后再将gE基因定向亚克隆到杆状病毒转移载体pVL1 392中 ,形成重组质粒pVLgE。将pVLgE与杆状病毒线性DNA(BAC_N_BlueDNA)共转染Sf9昆... 应用PCR方法扩增出 1 .8Kb的伪狂犬病毒糖蛋白gE基因 ,克隆到pUC1 1 9中形成重组质粒pRZE。经测序鉴定后再将gE基因定向亚克隆到杆状病毒转移载体pVL1 392中 ,形成重组质粒pVLgE。将pVLgE与杆状病毒线性DNA(BAC_N_BlueDNA)共转染Sf9昆虫细胞 ,经三轮蚀斑纯化 ,获得重组病毒rpVLgE。通过PCR方法鉴定证明gE基因正确插入到杆状病毒基因组中 ,直接免疫荧光试验和WesternBlot结果表明gE基因在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中获得高效表达。表达的gE蛋白将作为伪狂犬病强毒和gE基因缺失弱毒疫苗鉴别诊断ELISA方法的抗原 。 展开更多
关键词 糖蛋白E 猪 伪狂犬病 prv 基因表达 杆状病毒
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伪狂犬病病毒CD8^(+)T细胞表位的鉴定
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作者 黄香梅 王旭英 +9 位作者 耿鑫梅 奚媖牡 廖奕洁 张广欣 莫筱可 陈樱 欧阳康 韦祖樟 黄伟坚 覃一峰 《动物医学进展》 北大核心 2025年第4期52-58,共7页
伪狂犬病病毒(PRV)是危害养猪业的重要病原,但目前对其感染后诱导的细胞免疫尤其是T细胞抗原表位的鉴定方面研究较少。该研究以C57BL/6小鼠作为PRV感染的动物模型,利用生物信息学软件预测并合成了16条PRV gB、gC和gD蛋白上的H-2b限制性C... 伪狂犬病病毒(PRV)是危害养猪业的重要病原,但目前对其感染后诱导的细胞免疫尤其是T细胞抗原表位的鉴定方面研究较少。该研究以C57BL/6小鼠作为PRV感染的动物模型,利用生物信息学软件预测并合成了16条PRV gB、gC和gD蛋白上的H-2b限制性CD8^(+)T细胞表位,经ELISpot、胞内细胞因子染色和CFSE细胞增殖试验检测发现,位于gD蛋白上的多肽^(371)CVYIFFRL^(378)可显著激活CD8^(+)T细胞产生IFN-γ,并促进CD8^(+)T细胞明显增殖,说明该表位属于PRV特异性CD8^(+)T细胞表位。将该表位氨基酸序列与NCBI上16株参考毒株及作者实验室2株PRV毒株的gD蛋白氨基酸序列进行序列比对,发现研究鉴定的T细胞表位高度保守,提示该表位可刺激机体产生对不同亚型PRV感染的交叉保护力。研究结果将为PRV表位疫苗的研制及PRV感染与免疫机制研究奠定基础。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 CD8^(+)T细胞表位 表位疫苗
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源于亲本株PRV Fa的3个基因缺失病毒株PRV TK^-、PRV gE^-/gI^-和PRV TK^-/gE^-/gI^-抵抗强毒攻击的比较研究(英文) 被引量：5
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作者 颜其贵 阳爱国 +3 位作者 郭万柱 徐志文 石谦 殷华平 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期827-835,共9页
目的4周龄仔猪24头随机分成4个组(A、B、C和对照组),前3组中各5头分别对应接种对应的缺失毒力基因TK(A)、缺失毒力基因gE/gI(B)和缺失毒力基因TK/gE/gI(C)3个基因缺失株,接种剂量均为105PFU,留1头不接种作为同居猪。免疫14d后以107PFU P... 目的4周龄仔猪24头随机分成4个组(A、B、C和对照组),前3组中各5头分别对应接种对应的缺失毒力基因TK(A)、缺失毒力基因gE/gI(B)和缺失毒力基因TK/gE/gI(C)3个基因缺失株,接种剂量均为105PFU,留1头不接种作为同居猪。免疫14d后以107PFU PRV Fa株滴鼻攻毒所有试验猪,7d后屠宰猪只,采集大脑、小脑、心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、扁桃体、下颌淋巴结和三叉神经节,用光镜和电镜技术观察PRV攻毒后仔猪的器官损伤程度。收集免疫接种后3d内和强毒攻击后5d内的所有猪只鼻腔拭纸,以Southern blots方法测定PRV的组织分布情况。结果表明,收集的10种组织中出现病变的组织比例分别为:对照组为9/10,免疫A组为4/10、B组为3/10、C组为4/10。病理学和超微病例观察表明,对照组和A组中肺脏损伤严重,其他组轻微;对照组中大脑、小脑、三叉神经损伤严重,免疫组轻微;A、B和C疫苗株对潜伏感染的主要靶器官扁桃体损伤程度依次加重。Southern blots分析表明,所有接种缺失病毒的试验猪均可通过鼻腔分泌物散毒,但是排出的病毒不能成功感染同居猪;A、B和C疫苗株免疫后均不能有效阻止PRV Fa攻击后的散毒,但在仔猪大脑和小脑中不能检出病毒。结论接种3个不同基因缺失株A、B和C均能阻止强毒株Fa感染后向大脑和小脑的入侵,并减少强毒对多个器官的损害作用,其中C株的抗强毒感染能力和抗强毒所致损伤能力更佳。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 基因缺失疫苗株 免疫 病理
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太子参多糖经Let-7d-3p下调伪狂犬病病毒感染小鼠的炎症基因转录水平
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作者 罗诗师 陈蓓蕾 +9 位作者 张蕾 冯启贤 吴瑞森 陈佳祺 王媛 简子昕 许丽惠 陈秋勇 马玉芳 王全溪 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第5期2438-2450,共13页
本研究旨在探究太子参多糖(Radix pseudostellariae polysaccharide,RPP)调控微小核糖核酸(microRNA,miRNA)Let-7d-3p对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)感染引起炎症基因表达的影响及其机理。体外培养猪肾细胞(porcine kidney 15,... 本研究旨在探究太子参多糖(Radix pseudostellariae polysaccharide,RPP)调控微小核糖核酸(microRNA,miRNA)Let-7d-3p对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)感染引起炎症基因表达的影响及其机理。体外培养猪肾细胞(porcine kidney 15,PK-15),使用不同浓度RPP(0.5~32.0 mg·mL^(-1))处理PK-15细胞,通过细胞增殖与活性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)法检测细胞存活率。接着将PK-15细胞分为空白组、PRV组、0.5 mg·mL^(-1)RPP组、1.0 mg·mL^(-1)RPP组、2.0 mg·mL^(-1)RPP组,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测各组细胞中炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-17的mRNA转录水平。转染Let-7d-3p抑制物至PK-15细胞,经0或0.5 mg·mL^(-1)RPP干预后,采用qPCR检测Let-7d-3p和炎症因子mRNA转录水平。选择15只健康小鼠随机分为空白组、PRV组、RPP(10 mg·kg^(-1))组(每组5只),qPCR检测小鼠肾组织中Let-7d-3p和炎症因子mRNA转录水平。结果显示,在0~4.0 mg·mL^(-1)浓度RPP无细胞毒性。与空白组相比,PRV感染PK-15细胞会显著上调炎症因子IL-6、TNF-α、IL-17的mRNA转录水平(P<0.01),显著下调Let-7d-3p转录水平(P<0.01)。与PRV组相比,三个浓度的RPP作用细胞后均显著上调Let-7d-3p的转录水平(P<0.01),同时显著下调3个炎症因子的mRNA转录水平(P<0.01)。抑制Let-7d-3p后,与PRV组相比Let-7d-3p抑制组的IL-6、TNF-α、IL-17的mRNA转录水平呈现显著上调(P<0.01)。而与PRV+RPP组相比,抑制Let-7d-3p后加入RPP干预,细胞炎症因子的mRNA转录水平显著上调(P<0.01)。体内试验结果表明,与空白组相比,PRV感染组小鼠肾中Let-7d-3p的转录水平显著下降(P<0.01),且炎症因子IL-6、TNF-α、IL-17的mRNA转录水平显著上调(P<0.01)。与PRV组相比,RPP处理小鼠后肾脏中Let-7d-3p转录水平显著上升(P<0.01),炎症因子IL-6、TNF-α、IL-17的转录水平显著下降(P<0.01)。体内体外结果表明,RPP可通过Let-7d-3p下调PRV感染引起的炎症基因转录水平,在mRNA水平上发现RPP具有一定的抗炎效用,为后续研究太子参多糖缓解PRV引起的炎症提供思路。 展开更多
关键词 太子参多糖 伪狂犬病病毒 Let-7d-3p 炎症
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PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV复合PCR检测方法的建立 被引量：9
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作者 李维华 任慧英 +4 位作者 温建新 韩先杰 刘文华 邹玲 郭龙军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期379-383,共5页
根据GenBank上猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)的已发表序列,分别设计并合成了5对特异性扩增引物,建立PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV单项PCR检测方法,分别扩增... 根据GenBank上猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)的已发表序列,分别设计并合成了5对特异性扩增引物,建立PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV单项PCR检测方法,分别扩增出预期的466bp、759bp、349bp、202bp和706bp片段。在优化单项PCR反应条件基础上,建立了PCV2-PPV-PRV-PRRSV-CSFV复合PCR检测方法,为预防和控制上述几种病毒性传染病提供了一种快速、敏感、特异的检测方法。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪细小病毒 猪伪狂犬病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪瘟病毒 复合PCR
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