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杨树皮储藏蛋白基因启动子的克隆和功能研究 被引量:22
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作者 蒋浩 秦红敏 +1 位作者 田颖川 DeanW.Gabriel 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 1999年第5期46-50,共5页
杨树树皮储藏蛋白BSP是类似种子储藏蛋白的氮素储藏物 ,冬季在韧皮部薄壁细胞中大量积累 ,是落叶树氮代谢中的重要成分。为了研究BSP基因启动子在转基因植物中的表达特性 ,探索其在植物基因工程研究中潜在的应用价值 ,我们用PCR方法从... 杨树树皮储藏蛋白BSP是类似种子储藏蛋白的氮素储藏物 ,冬季在韧皮部薄壁细胞中大量积累 ,是落叶树氮代谢中的重要成分。为了研究BSP基因启动子在转基因植物中的表达特性 ,探索其在植物基因工程研究中潜在的应用价值 ,我们用PCR方法从美洲黑杨基因组中DNA扩增得到了BSA启动子片段。与GUS基因融合构建中间载体后 ,转化烟草 ,获得了一批PCR检测为阳性的转化再生植株。经GUS组织化学检测 ,发现若干转基因烟草的茎和叶柄韧皮部以及叶脉都呈GUS染色阳性 ,初步证明杨树BSP基因启动子确有韧皮部表达特性 ,可介导GUS基因在转基因烟草韧皮部特异表达。 展开更多
关键词 杨树 启动子 GUS基因 树皮 储藏蛋白
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韧皮部特异启动子驱动密码子优化的抗菌肽D基因的植物表达载体构建 被引量:7
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作者 胡桂兵 张上隆 +1 位作者 徐昌杰 林顺权 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期639-643,共5页
根据177个GenBank中登录的柑橘编码蛋白密码子用法的分析结果,优化并重新设计和合成了含柑橘偏爱密码子、对柑橘黄龙病有杀灭作用的柞蚕抗菌肽D基因(命名为CAPD),克隆入pUC19克隆载体并经测序验证后,获得了含新抗病基因的重组质粒pUC19-... 根据177个GenBank中登录的柑橘编码蛋白密码子用法的分析结果,优化并重新设计和合成了含柑橘偏爱密码子、对柑橘黄龙病有杀灭作用的柞蚕抗菌肽D基因(命名为CAPD),克隆入pUC19克隆载体并经测序验证后,获得了含新抗病基因的重组质粒pUC19-CAPD。用限制性内切酶BamHI和SacI双酶切pUC19-CAPD克隆载体和pBI121植物表达载体的质粒DNA,回收pUC19-CAPD克隆载体中的CAPD基因小片段和pBI121植物表达载体中去掉GUS报告基因的大片段,经连接、转化和鉴定后,构建了由CaMV35S组成型启动子(35SP)驱动CAPD目的基因的新植物表达载体(命名为pHZ05);用限制性内切酶BamHI和HindIII双酶切含笋瓜韧皮部特异启动子(PSP)的pUCm-PSP克隆载体和pHZ05植物表达载体的质粒DNA,分别回收pUCm-PSP克隆载体中的PSP小片段和pHZ05植物表达载体中去掉CAPD目的基因上游35SP的大片段,经连接、转化和鉴定后,构建了由PSP驱动CAPD目的基因的新植物表达载体(命名为pHZ06)。利用细胞感受态法直接将2个由不同启动子驱动的含CAPD目的基因的新重组植物表达载体分别导入根癌农杆菌LBA4404、GV3101、EHA105和发根农杆菌Ri15834等4个农杆菌菌株中,为利用农杆菌介导的遗传转化技术培育抵抗由韧皮部传导的毁灭性和检疫性病害柑橘黄龙病的新种质奠定了基础。 展开更多
关键词 柑橘 密码子优化 抗菌肽D基因 韧皮部特异启动子 植物表达载体
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韧皮部特异性启动子的克隆及含绿色荧光蛋白报告基因新植物表达载体的构建 被引量:5
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作者 胡桂兵 张上隆 +1 位作者 徐昌杰 林顺权 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期118-120,共3页
用PCR方法扩增得到了长度为966 bp的笋瓜韧皮部蛋白2基因启动子片段,克隆入pUCm-T载体后,获得了新的重组质粒pUCm-PSP.分别用限制性内切酶酶切重组质粒和pCAMB IA1302植物表达载体,经回收、连接、转化和鉴定后,构建了由PSP驱动绿色荧光... 用PCR方法扩增得到了长度为966 bp的笋瓜韧皮部蛋白2基因启动子片段,克隆入pUCm-T载体后,获得了新的重组质粒pUCm-PSP.分别用限制性内切酶酶切重组质粒和pCAMB IA1302植物表达载体,经回收、连接、转化和鉴定后,构建了由PSP驱动绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的新型植物表达载体pHZ03.利用细胞感受态法将新植物表达载体分别导入根癌农杆菌EHA105、GV3101、LBA4404和发根农杆菌R i15834中. 展开更多
关键词 笋瓜 韧皮部特异性启动子(psp) 植物表达载体 绿色荧光蛋白(GFP)
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笋瓜韧皮部特异性启动子的克隆分析及新型植物表达载体构建 被引量:3
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作者 胡桂兵 张上隆 +1 位作者 徐昌杰 林顺权 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期481-485,共5页
根据已报道具韧皮部组织特异性的笋瓜韧皮部蛋白2(PP2)基因序列设计引物,以山西本地种笋瓜叶片基因组DNA为模板,用PCR法扩增得到了长度为966bp的PP2基因启动子片段,克隆入pUCm-T载体后,经鉴定获得了新的重组质粒pUCm-PSP,测序和序列分... 根据已报道具韧皮部组织特异性的笋瓜韧皮部蛋白2(PP2)基因序列设计引物,以山西本地种笋瓜叶片基因组DNA为模板,用PCR法扩增得到了长度为966bp的PP2基因启动子片段,克隆入pUCm-T载体后,经鉴定获得了新的重组质粒pUCm-PSP,测序和序列分析表明与两个已报道的片段分别有95%和99%的同源性,推测具有相似的启动子功能。分别用限制性内切酶PstI和BglII双酶切重组质粒pUCm-PSP和由CaMV35S组成型启动子驱动GFP报告基因的双元植物表达载体pCAMBIA1302,分别回收pUCm-PSP重组质粒中的PSP小片段和pCAMBIA1302植物表达载体中去掉GFP报告基因上游CaMV35S组成型启动子的大片段,经连接、转化和鉴定后,构建了由PSP驱动报告基因GFP的新型植物表达载体pHZ03。利用细胞感受态法将新植物表达载体分别导入根癌农杆菌EHA105、GV3101、LBA4404和发根农杆菌Ri15834中,为进一步研究其表达功能奠定了基础。 展开更多
关键词 笋瓜 韧皮部特异性启动子(psp) 植物表达载体 绿色荧光蛋白(CVV)
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南瓜韧皮部特异性启动子在转基因棉花中的表达 被引量:4
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作者 罗晓丽 陈晓英 +4 位作者 肖娟丽 张安红 王志安 田颖川 吴家和 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2007年第6期431-435,共5页
以自行构建的重组南瓜韧皮部特异启动子dENP构建了植物表达载体pBII2。利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA44O4介导转化棉花(Gossypium hirsutum L.)品种珂字312,共获得转pBII2和对照pBI121的抗卡那霉素棉花再生植株243株,... 以自行构建的重组南瓜韧皮部特异启动子dENP构建了植物表达载体pBII2。利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA44O4介导转化棉花(Gossypium hirsutum L.)品种珂字312,共获得转pBII2和对照pBI121的抗卡那霉素棉花再生植株243株,筛选出172株为转基因阳性植株。Southern blot分析确证外源Gus基因插入拷贝数在1个或2个以上。对这些转基因棉花植株进行Gus染色结果表明dENP和CaMV35S启动子一样均能驱动Gus基因的表达,前者仅在棉花的韧皮部内特异表达,而CaMV35S启动子驱动的Gus基因为组成性表达。Gus酶活力测定结果进一步表明dENP和CaMV35S启动子驱动Gus基因表达水平相当,但是转pBII2棉花植株的Gus富集在韧皮部组织。证明了dENP启动子驱动的外源基因在棉花中具有韧皮部特异而高效表达的特征,从而可用于棉花抗病、抗蚜虫转基因研究。 展开更多
关键词 特异启动子 棉花 Gus酶活力
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韧皮部特异性启动子研究概况 被引量:6
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作者 于文静 王玉富 +2 位作者 邱财生 郝冬梅 薛召东 《中国麻业科学》 2010年第2期116-122,共7页
启动子是基因表达调控的一个重要顺式元件,也是基因工程中表达载体的一个重要组成部分。启动子的克隆对于构建基因工程载体,表达目的蛋白有着很重要的意义。韧皮部特异启动子分离对于鉴定研究和调控亚麻纤维中的木质素合成有很重要的意... 启动子是基因表达调控的一个重要顺式元件,也是基因工程中表达载体的一个重要组成部分。启动子的克隆对于构建基因工程载体,表达目的蛋白有着很重要的意义。韧皮部特异启动子分离对于鉴定研究和调控亚麻纤维中的木质素合成有很重要的意义。本文简单的介绍了有关启动子的结构和分类,对几种常用的克隆启动子的方法及目前克隆分离到得植物韧皮部特异启动子做了介绍。 展开更多
关键词 启动子 克隆方法 韧皮部特异性
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组织特异表达启动子RSS1P在转TiERF1基因小麦中的应用 被引量:2
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作者 李钊 庄洪涛 +5 位作者 杜丽璞 周淼平 蔡士宾 徐惠君 李斯深 张增艳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1897-1903,共7页
从水稻叶片中克隆了一个韧皮部组织特异表达的水稻蔗糖合酶启动子(RSS1P),将RSS1P与中间偃麦草乙烯反应因子基因TiERF1相融合构成组织特异表达的TiERF1基因表达盒,取代pAHC20中Ubi::bar基因表达盒,构建成无选择标记的韧皮部组织特异表达... 从水稻叶片中克隆了一个韧皮部组织特异表达的水稻蔗糖合酶启动子(RSS1P),将RSS1P与中间偃麦草乙烯反应因子基因TiERF1相融合构成组织特异表达的TiERF1基因表达盒,取代pAHC20中Ubi::bar基因表达盒,构建成无选择标记的韧皮部组织特异表达的pA20-RSS1P::TiERF1载体。利用基因枪将pA20-RSS1P::TiERF1与pAHC20载体混合、共轰击小麦品种扬麦12的幼胚愈伤组织,获得转RSS1P::TiERF1基因小麦。对该转基因小麦T0和T1代植株进行PCR、PCR-Southern、半定量RT-PCR和荧光定量PCR分析,证实外源RSS1P::TiERF1基因已转入受体,并且具有可遗传性;转入的RSS1P::TiERF1基因仅在根、茎、叶中表达,以根部表达量最高,在种子内不表达。纹枯病抗性鉴定和主要农艺性状考察结果表明,与受体扬麦12相比,转RSS1P::TiERF1基因小麦对纹枯病的抗性有明显提高,与转Ubi::TiERF1基因小麦的抗病性相当,而且转RSS1P::TiERF1基因小麦的农艺性状没有明显改变,说明可以利用RSS1P启动子创造更实用的转基因小麦新种质。 展开更多
关键词 水稻蔗糖合酶启动子 组织特异型表达 转基因小麦 中间偃麦草乙烯反应因子
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