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肝星状细胞条件培养基对肝癌细胞PLC/PRF/5耐药性的影响及其机制
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作者 喻国锋 井莹莹 +3 位作者 寇兴瑞 李蓉 吴孟超 卫立辛 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期187-191,共5页
目的:探讨肝星状细胞条件培养基(hepatic stellate cell conditioned medium,HSC-CM)对人肝癌PLC/PRF/5细胞耐药性的影响及其可能的机制。方法:用无血清RPMI 1640培养肝星状细胞LX-2,使其在缺营养的环境下活化,收集其条件培养上清即为HS... 目的:探讨肝星状细胞条件培养基(hepatic stellate cell conditioned medium,HSC-CM)对人肝癌PLC/PRF/5细胞耐药性的影响及其可能的机制。方法:用无血清RPMI 1640培养肝星状细胞LX-2,使其在缺营养的环境下活化,收集其条件培养上清即为HSC-CM。PLC/PRF/5细胞在HSC-CM条件下培养24 h后,顺铂处理12 h或24 h,采用流式细胞术检测PLC/PRF/5细胞的凋亡情况,MTT法检测PLC/PRF/5细胞的增殖,real-time PCR检测PLC/PRF/5细胞上皮间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)相关基因的表达水平。结果:顺铂组12和24 h两个时间点PLC/PRF/5细胞的凋亡率为(22.34±1.12)%和(26.78±1.56)%;HSC-CM+顺铂组细胞的凋亡率为(17.22±1.42)%和(21.52±1.76)%,顺铂组细胞凋亡率显著高于HSC-CM+顺铂组(P<0.05)。同在这两个时间点,顺铂组和HSC-CM+顺铂组PLC/PRF/5细胞的增殖活性分别为(68.65±2.56)%和(79.47±1.43)%,(46.54±3.65)%和(62.77±2.89)%,HSC-CM+顺铂组细胞增殖活性均高于顺铂组(P<0.05)。Real-time PCR结果显示,与顺铂组相比较,HSC-CM+顺铂组PLC/PRF/5细胞中上皮标记物钙黏蛋白(E-cadherin)的表达下降(P<0.05),而间质细胞标记物神经黏附素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)以及EMT相关转录因子Snail和ZEB1的表达显著上调(P<0.01)。结论:HSC-CM可能通过诱导PLC/PRF/5细胞发生EMT,从而增强PLC/PRF/5细胞对顺铂的抵抗作用。 展开更多
关键词 肝星状细胞条件培养基 肝癌 plc prf 5细胞 化疗抵抗 上皮间质转化
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CKLF1 induces SH-SY5Y cell migration via PLCγ/FAK signaling pathway
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《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第B11期12-12,共1页
Abstract: Aim To investigate the role of CKLF1 in SH-SYSY cell migration and its molecular regulatory mecha- nism. Methods SH-SYSY cells were stimulated with CKLF1 for 0.5, 2, 8 and 24 h, respectively. The migration ... Abstract: Aim To investigate the role of CKLF1 in SH-SYSY cell migration and its molecular regulatory mecha- nism. Methods SH-SYSY cells were stimulated with CKLF1 for 0.5, 2, 8 and 24 h, respectively. The migration distance and the percentage of migration cells were recorded by CELLocate analysis. The phosphorylation of focal adhesion kinase (FAK) at Tyr-397 site was detected by Western blot analysis. By chemotaxis assays, we confirmed the chemotaxis of CKLF1. Furthermore, FAK inhibitor PF-573228 and PLCγ inhibitor U73122 were used for the research of molecular regulatory mechanisms involved. Results CKLF1 promoted cell migration and induced a strong increase in the phosphorylation level of FAK - pY397, which were significantly attenuated by the presence of U73122 (a specific inhibitor for PLCγ). In addition, the chemotaxis of CKLF1 was obviously blocked by the FAK inhibitor PF-573228. Conclusions CKLF1 induces SH-SYSY cell migration via PLCT/FAK signaling path- way. 展开更多
关键词 CKLF1 cell MIGRATION FAK plcγ/ cellocate SH-SY5Y
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淋巴细胞-肿瘤细胞形成cell-in-cell胞内嵌合结构的特征及意义
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作者 于晓敏 杨忠 +1 位作者 王颖 王小宁 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期621-627,共7页
目的:探究淋巴细胞和肿瘤细胞形成cell-in-cell胞内嵌合结构的特征及意义。方法:以人肝癌细胞株PLC/PRF/5与人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)形成cell-in-cell胞内嵌合结构为研究模型,采用流式细胞术分析淋... 目的:探究淋巴细胞和肿瘤细胞形成cell-in-cell胞内嵌合结构的特征及意义。方法:以人肝癌细胞株PLC/PRF/5与人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)形成cell-in-cell胞内嵌合结构为研究模型,采用流式细胞术分析淋巴细胞钻入肿瘤细胞形成cell-in-cell胞内嵌合结构的特征。利用流式分选技术分选出小鼠脾淋巴细胞与PLC/PRF/5细胞形成的cell-in-cell胞内嵌合结构,利用平板克隆形成实验检测cell-in-cell胞内嵌合结构对PLC/PRF/5细胞生物学行为的影响。结果:4 h和8 h时,以CD3/CD28抗体活化的PBMC对PLC/PRF/5细胞的伸入率分别为(15.75±1.28)%、(13.49±1.23)%,明显高于未活化PBMC的伸入率[(10.56±0.57)%,(11.38±0.97)%;P<0.05];且活化的PBMC在4 h时的伸入率明显高于未活化PBMC在8 h时的伸入率(P<0.05)。小鼠脾淋巴细胞伸入PLC/PRF/5细胞形成cell-in-cell胞内嵌合结构后,PLC/PRF/5细胞的克隆形成率明显高于未形成cell-in-cell胞内嵌合结构的PLC/PRF/5细胞[(32.25±2.32)%vs(21.92±2.02)%,P<0.05]。结论:活化后PBMC伸入PLC/PRF/5细胞形成cell-in-cell胞内嵌合结构的比率升高、时间提前,同时形成胞内嵌合结构的肿瘤细胞在体外克隆形成能力增强。 展开更多
关键词 cell—in—cell胞内嵌合结构 plc prf 5细胞 PBMC 流式分选 克隆形成
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肝原位移植瘤裸鼠模型的建立及活体荧光成像检测 被引量:4
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作者 贾小飞 闫博 +3 位作者 张熠杰 蒋帅 赵晶 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期426-429,共4页
目的建立能够通过活体荧光成像系统实时监测肿瘤进展的肝原位移植瘤裸鼠模型。方法重组质粒pcDNA3.1-Luc转染细胞构建稳定表达荧光素酶的PLC/PRF/5肝癌细胞株,将该细胞注入裸鼠肝脏实质内,应用活体成像技术动态监测肿瘤进展情况,解剖荧... 目的建立能够通过活体荧光成像系统实时监测肿瘤进展的肝原位移植瘤裸鼠模型。方法重组质粒pcDNA3.1-Luc转染细胞构建稳定表达荧光素酶的PLC/PRF/5肝癌细胞株,将该细胞注入裸鼠肝脏实质内,应用活体成像技术动态监测肿瘤进展情况,解剖荧光信号阳性裸鼠观察肿瘤组织生长情况。免疫荧光检测肿瘤组织中HBsAg表达。结果对裸鼠肝原位移植瘤应用活体荧光系统成像,在肿瘤细胞注射部位检测到荧光信号,解剖动物后可在肝脏组织中观察到异质细胞团块。免疫荧光证实移植瘤中有HBsAg表达。结论肝脏原位移植瘤裸鼠模型建立成功,为抗肝癌药物的研发提供了工具。 展开更多
关键词 肝原位移植瘤裸鼠模型 活体荧光成像 荧光素酶 plc prf 5细胞株
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