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谷胱甘肽对镉致猪肾PK-15细胞氧化损伤及凋亡的修复作用
1
作者 董志芳 张丽 朱向博 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第5期2403-2412,共10页
本研究探索了谷胱甘肽(glutathione,GSH)对镉(cadmium,Cd)所引起的PK-15细胞损伤的修复功能及其背后的作用机制。本研究主要针对猪肾PK-15细胞,利用MTT检测、光学显微镜观察、透射电镜观察、JC-1染色、彗星试验和流式细胞术等多种研究方... 本研究探索了谷胱甘肽(glutathione,GSH)对镉(cadmium,Cd)所引起的PK-15细胞损伤的修复功能及其背后的作用机制。本研究主要针对猪肾PK-15细胞,利用MTT检测、光学显微镜观察、透射电镜观察、JC-1染色、彗星试验和流式细胞术等多种研究方法,检测GSH对Cd所造成的细胞氧化损伤及细胞凋亡的修复作用。结果显示,GSH显著缓解了Cd引起的PK-15细胞活性下降,维持ROS的稳态,从而缓解DNA和线粒体损伤及细胞凋亡等现象。Western blot结果表明,GSH可能通过上调抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达、下调促凋亡蛋白Bax的表达,进而对Cd诱导的PK-15细胞凋亡产生抑制作用。综上所述,GSH可以通过抑制氧化应激反应和减少细胞凋亡来缓解Cd诱导的PK-15细胞损伤。 展开更多
关键词 谷胱甘肽 镉 pk-15细胞 氧化损伤 细胞凋亡
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猪细小病毒感染PK-15细胞抗病毒相关因子转录变化的分析 被引量：11
2
作者 李厚伟 魏战勇 +4 位作者 尹海燕 陈红英 李金磊 韩志涛 崔保安 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期48-55,共8页
为了解猪细小病毒(PPV)感染后引起干扰素及其相关细胞因子的反应,探讨宿主—病毒之间的作用关系,作者运用荧光定量PCR技术,测定和分析PPV感染PK-15细胞引起的病毒DNA量的变化和细胞因子IFN-β、IFN-γ、IFNAR-1、IFNAR-2、MHC-Ⅰ、MHC-... 为了解猪细小病毒(PPV)感染后引起干扰素及其相关细胞因子的反应,探讨宿主—病毒之间的作用关系,作者运用荧光定量PCR技术,测定和分析PPV感染PK-15细胞引起的病毒DNA量的变化和细胞因子IFN-β、IFN-γ、IFNAR-1、IFNAR-2、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、MX1、iNOS、2-5AS、RNase L和IRF-3的转录水平。结果显示,PPV感染PK-15细胞12h病毒开始大量迅速增殖,48h达到最高峰;PPV感染后可引起PK-15细胞中IFN-β、IFN-γ、IFNAR-1、IFNAR-2、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、Mx1、iNOS、2-5AS、RNase L和IRF-3的转录量显著增加,其中Mx1基因在24h转录量达到8 423倍。猪细小病毒感染可引起PK-15细胞抗病毒相关因子转录增加。 展开更多
关键词 猪细小病毒 细胞因子 pk-15细胞 转录时相
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PK-15细胞酵母双杂交三框cDNA文库构建及鉴定 被引量：8
3
作者 李珣 陈思宇 +1 位作者 胡传活 王晓晔 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期726-730,共5页
【目的】构建PK-15细胞酵母双杂交三框eDNA文库，为深入研究猪伪狂犬病病毒（PRV）与宿主细胞间的相互作用机制打下基础。【方法】提取PK-15细胞总RNA，采用SMART和LD-PCR合成全长的双链cDNA（dscDNA），并对其进行均一化和SfiI酶切处... 【目的】构建PK-15细胞酵母双杂交三框eDNA文库，为深入研究猪伪狂犬病病毒（PRV）与宿主细胞间的相互作用机制打下基础。【方法】提取PK-15细胞总RNA，采用SMART和LD-PCR合成全长的双链cDNA（dscDNA），并对其进行均一化和SfiI酶切处理。，处理后的dscDNA分别连接3种阅读框pGADT7-SfiI载体，将连接产物转化至大肠杆菌BH5α构建三框cDNA初级文库，取三框cDNA初级文库进行混合扩增，通过滴度测定和PCR鉴定其库容量和基因重组率，最后收集文库细菌提取文库质粒。【结果】3种读码框cDNA文库的库容量分别为3．0×10^6,2．0×10^6和2．0×10^6CFU，文库实际扩增基数〉150万CFU；一号和三号读码框的基因重组率均为100％，二号读码框的基因重组率大于93％。cDNA文库外源基因插入片段长度在500～3000bp。cDNA文库质粒浓度约1．0mg/mL，质粒收获量约3．0mg。【结论】构建的PK-15细胞酵母双杂交三框cDNA文库具有较高的重组率和库容量，符合酵母双杂交筛选要求，可用于研究PRV与PK-15细胞间的相互作用机制。 展开更多
关键词 pk-15细胞 酵母双杂交 三框cDNA文库 均一化 猪伪狂犬病病毒(PRV)
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PK-15细胞在微载体悬浮放大培养及PCV2增殖工艺研究 被引量：5
4
作者 华涛 冯磊 +7 位作者 张雪花 唐波 常晨 刘国阳 吴培培 陈丽 张道华 侯继波 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期474-480,共7页
为建立在生物反应器内微载体逐级放大培养PK-15细胞和增殖PCV2技术。采用分批式培养方法,研究了PK-15细胞在微载体胰酶消化放大悬浮培养及猪圆环病毒2型(PCV2)增殖工艺。结果表明,5 g/L的微载体和高糖DMEM下,采用4.0×105cells/m L... 为建立在生物反应器内微载体逐级放大培养PK-15细胞和增殖PCV2技术。采用分批式培养方法,研究了PK-15细胞在微载体胰酶消化放大悬浮培养及猪圆环病毒2型(PCV2)增殖工艺。结果表明,5 g/L的微载体和高糖DMEM下,采用4.0×105cells/m L的初始接种密度及培养至第2天进行换液操作工艺可以获得最佳的PK-15细胞生长效能。胰酶消化转移将PK-15细胞从1 L反应器放大至3 L反应器,微载体上细胞贴附均匀、生长旺盛,培养3 d细胞密度可达34.3×105cells/m L。采用感染复数为0.1的接毒比例,细胞接毒后在微载体上传至第3代收获毒液可获得最高的PCV2增殖效价107.25TCID50/m L。为PCV2疫苗的生物反应器规模化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 pk-15细胞 微载体 消化放大 猪圆环病毒2型 悬浮培养
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稳定表达猪Viperin的PK-15细胞系的构建与鉴定 被引量：5
5
作者 李文良 毛立 +3 位作者 杨蕾蕾 郝飞 张纹纹 江杰元 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第1期128-132,共5页
为了探讨先天免疫效应因子Viperin的抗病毒作用,从猪外周血单核细胞中成功扩增了猪Viperin基因完整阅读框,克隆到真核表达载体p EGFP-C1中构建重组表达质粒p EGFP-Vi。阳性质粒经PCR、酶切和测序鉴定后通过脂质体Lipofectamine 2000介... 为了探讨先天免疫效应因子Viperin的抗病毒作用,从猪外周血单核细胞中成功扩增了猪Viperin基因完整阅读框,克隆到真核表达载体p EGFP-C1中构建重组表达质粒p EGFP-Vi。阳性质粒经PCR、酶切和测序鉴定后通过脂质体Lipofectamine 2000介导转染PK-15细胞,荧光显微镜观察发现融合蛋白质EGFP-Viperin定位于细胞质中,不同于对照质粒EGFP在细胞中的均匀分布。共聚焦检测结果表明,重组蛋白质主要定位于细胞的内质网上。Western blot检测结果表明,猪Viperin蛋白质在PK-15细胞中以融合蛋白质的形式稳定表达,分子量约为7.0×104。 展开更多
关键词 猪 Viperin pk-15细胞系 表达
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载体介导的shRNA抑制猪瘟病毒在PK-15细胞中增殖特性的研究 被引量：5
6
作者 冶贵生 张彦明 徐浩 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期500-505,共6页
利用生物学软件分析猪瘟病毒NS3基因,设计针对NS3基因不同位置的干扰序列,化学合成这些序列,然后退火连接为双链干扰片段,再定向克隆到干扰载体中,将酶切和序列测定鉴定正确的重组载体命名为pGene-NS3-1、pGene-NS3-2、pGene-NS3-3、pGe... 利用生物学软件分析猪瘟病毒NS3基因,设计针对NS3基因不同位置的干扰序列,化学合成这些序列,然后退火连接为双链干扰片段,再定向克隆到干扰载体中,将酶切和序列测定鉴定正确的重组载体命名为pGene-NS3-1、pGene-NS3-2、pGene-NS3-3、pGene-NS3-Negative。重组干扰载体经纯化后转染PK-15细胞,并进行G418抗性筛选。克隆细胞扩大培养后,接种猪瘟病毒Shimen株,收集细胞分别进行实时定量PCR和ELISA光吸收度分析。Real-time PCR分析表明,与对照细胞比较,pGene-NS3-1、pGene-NS3-2、pGene-NS3-3转录产生的shRNA分子均在一定程度上沉默了病毒的基因,抑制率约为63%、46%、49%。ELISA检测结果表明,转染pGene-NS3-1、pGene-NS3-2、pGene-NS3-3重组载体的PK-15细胞均在不同程度上抑制了猪瘟病毒粒子的增殖。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 RNAI NS3基因 SHRNA pk-15细胞
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微载体培养PK-15细胞试验条件的优化 被引量：6
7
作者 何锡忠 李春华 +2 位作者 倪建平 蒋风英 邹勇 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第8期20-23,共4页
为了优化PK-15细胞在微载体上的生长条件,在微载体浓度5 mg/mL、低糖DMEM+100 mL/L NBS培养液条件下,观察4.5×104cells/mL和8.7×104cells/mL的细胞接种密度对细胞生长的影响;在低糖DMEM+100 mL/L NBS培养液、接种密度5×1... 为了优化PK-15细胞在微载体上的生长条件,在微载体浓度5 mg/mL、低糖DMEM+100 mL/L NBS培养液条件下,观察4.5×104cells/mL和8.7×104cells/mL的细胞接种密度对细胞生长的影响;在低糖DMEM+100 mL/L NBS培养液、接种密度5×104cells/mg条件下,观察3、5、10 mg/mL微载体浓度对细胞生长的影响;在3 mg/mL微载体浓度条件下、接种密度25×104cells/mL,观察MEM、高糖DMEM和低糖DMEM培养基对细胞生长的影响。结果表明,以微载体接种细胞密度4.5×104cells/mg、微载体浓度5 mg/mL在低糖DMEM培养基中培养方式效果最为理想。优化的培养工艺适用于PK-15细胞的生产。 展开更多
关键词 微载体培养 pk-15细胞 培养条件
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稳定表达猪水疱病病毒P1基因的PK-15细胞系的建立 被引量：2
8
作者 田宏 吴锦艳 +5 位作者 龚真莉 郑海学 孙世琪 尚佑军 刘湘涛 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期478-482,共5页
从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒... 从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,在Polybrene的介导下感染PK-15细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。免疫荧光连续检测阳性克隆传代细胞,发现在不同代次的细胞中均有SVDV P1蛋白表达,而且表达的蛋白可被SVD阳性血清所识别;同时应用PCR技术,可从体外反复传代阳性细胞基因组中扩增到SVD P1基因。表明本次所筛选的阳性细胞克隆不但能持续稳定地表达SVD P1蛋白,而且可携带外源基因进行传代,具有良好的遗传稳定性。 展开更多
关键词 猪水疱病病毒P1基因 重组逆转录病毒载体 pk-15细胞 基因表达
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PPV感染PK-15细胞后对4种抗病毒细胞因子mRNA转录时相的影响 被引量：2
9
作者 耿静微 李厚伟 +5 位作者 尹海燕 陈红英 李金磊 韩志涛 崔保安 魏战勇 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第2期17-22,共6页
【目的】了解猪细小病毒(PPV)感染对抗病毒相关细胞因子mRNA转录时相的影响,探讨宿主-病毒之间的作用关系。【方法】对PPV感染PK-15细胞的病变进行了显微观察,运用荧光定量PCR技术,测定和分析PPV感染PK-15细胞后,细胞病毒DNA含量及巨噬... 【目的】了解猪细小病毒(PPV)感染对抗病毒相关细胞因子mRNA转录时相的影响,探讨宿主-病毒之间的作用关系。【方法】对PPV感染PK-15细胞的病变进行了显微观察,运用荧光定量PCR技术,测定和分析PPV感染PK-15细胞后,细胞病毒DNA含量及巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)、转化生长因子β1(TGF-β1)、磷酸甘油酸激酶1(PGK1)和MURR1等细胞因子mRNA相对表达量的变化。【结果】PPV可以快速诱导PK-15细胞产生细胞病变。感染后1 h即可检测到PPV DNA,随着时间的延长,PPV DNA含量逐渐增加,并于48 h时达到峰值,相对含量为1 800左右。MIP-1α和PGK1 mRNA的相对表达量在感染后2 h显著增加,之后下降;TGF-β1 mRNA的相对表达量在72 h时显著增加;MURR1 mRNA的相对表达量在24 h时显著增加,48 h后下降。【结论】PPV感染可引起PK-15细胞抗病毒因子mRNA表达水平升高。 展开更多
关键词 猪细小病毒 细胞因子 pk-15细胞 转录时相
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PCV-2感染对PK-15细胞抗病毒相关因子转录时相的影响 被引量：2
10
作者 韩志涛 李金磊 +5 位作者 陈红英 王淑娟 耿静微 翟阿官 魏战勇 崔保安 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第6期15-19,24,共6页
【目的】了解猪圆环病毒2型(PCV-2)感染对PK-15细胞抗病毒相关因子转录时相的影响,探讨宿主-病毒之间的作用关系。【方法】运用荧光定量PCR技术,测定和分析PCV-2感染PK-15细胞后0(未接种病毒),1,6,12,24,48,72 h时病毒DNA含量及细胞因子... 【目的】了解猪圆环病毒2型(PCV-2)感染对PK-15细胞抗病毒相关因子转录时相的影响,探讨宿主-病毒之间的作用关系。【方法】运用荧光定量PCR技术,测定和分析PCV-2感染PK-15细胞后0(未接种病毒),1,6,12,24,48,72 h时病毒DNA含量及细胞因子IFN-βI、FN-γI、FNAR-1I、FNAR-2、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、MX1、NOS、RNaseL和IRF-3 mRNA转录水平的变化。【结果】PCV-2感染PK-15后1 h就可以检测到病毒DNA,在感染后24 h病毒开始大量迅速增殖,于感染72 h时达到最高峰。与0 h相比,PCV-2感染后IFN-βI、RF-3的表达量在感染12 h时显著增加,其他时间表达量下降;IFN-γ、MHC-Ⅱ的表达量在感染12 h时增加不明显,其他时间表达量下降;感染PCV-2后IFNAR-2、MHC-Ⅰ、MX1的表达量下降;RNaseL的表达量在感染12 h时显著减少,其他时间表达量增加,48 h时表达量增加显著;IFNAR-1的表达量在感染72 h时显著增加,其他时间表达量下降;未检测出NOS的表达。【结论】随着PCV-2病毒含量的增加,以上几种主要抗病毒因子的表达量不明显或有所下降,表明PCV-2感染PK-15细胞后可逃避机体的抗病毒作用机制。 展开更多
关键词 细胞因子 pk-15细胞 猪圆环病毒2型 转录时相
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猪细小病毒感染PK-15细胞后TLRs转录时相的变化 被引量：3
11
作者 周雍 靳晓慧 +4 位作者 李炳晓 景亚星 韩丽 张利卫 魏战勇 《河南农业大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期201-206,共6页
研究猪细小病毒(Porcine Parvovirus,PPV)感染猪肾传代细胞(PK-15 cells)后Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)表达水平变化情况,为探明PPV感染机制提供理论基础。试验利用荧光定量PCR方法检测PPV感染PK-15细胞后TLR1-10的转录时相... 研究猪细小病毒(Porcine Parvovirus,PPV)感染猪肾传代细胞(PK-15 cells)后Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)表达水平变化情况,为探明PPV感染机制提供理论基础。试验利用荧光定量PCR方法检测PPV感染PK-15细胞后TLR1-10的转录时相变化。结果显示,PPV感染PK-15细胞后,TLR1在PPV感染后3h表达上调,约为对照组细胞的3.1倍,其他时段均低于正常水平;TLR3和TLR7 mRNA表达水平在病毒感染早期均低于正常水平;TLR4和TLR8的mRNA含量均在感染后3、12、36 h表达上调,TLR10分别在在3h和36 h表达上调,其他时段均不同程度的降低;而TLR2和TLR9 mRNA表达水平在感染后24 h开始升高,并于48 h达到峰值,分别为对照水平的10.1倍和26.7倍。研究表明,PPV感染PK-15细胞后能够诱导细胞上TLR2和TLR9在mRNA水平显著上调,PPV感染可能通过TLR2和TLR9受体介导感染。 展开更多
关键词 猪细小病毒 TOLL样受体 pk-15细胞 转录时相
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猪链球菌2型对PK-15细胞的黏附动力学 被引量：5
12
作者 姜成刚 刘荻萩 蔡雪辉 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第9期27-29,共3页
为研究携带不同毒力因子的猪链球菌2型对细胞侵袭作用的差异,本实验室从全国各地分离100多株猪链球菌,PCR鉴定出10株链球菌2型,其中携带毒力因子菌株为7-4[MRP+EF+]、8-3[MRP+EF-]、ZH-1[MRP-EF+],另外选择1株LN-2[MRP-EF-]与PK-15细胞... 为研究携带不同毒力因子的猪链球菌2型对细胞侵袭作用的差异,本实验室从全国各地分离100多株猪链球菌,PCR鉴定出10株链球菌2型,其中携带毒力因子菌株为7-4[MRP+EF+]、8-3[MRP+EF-]、ZH-1[MRP-EF+],另外选择1株LN-2[MRP-EF-]与PK-15细胞进行黏附动力学试验,结果表明MPR毒力因子与菌株对PK-15细胞黏附具有密切相关性。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 PK 15细胞 黏附动力学
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PCV-2感染对PK-15细胞IL mRNA转录水平的影响 被引量：1
13
作者 商艳红 刘欣辛 +5 位作者 李金磊 王淑娟 魏静 赵岩 崔保安 魏战勇 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2012年第1期8-14,共7页
【目的】观察猪圆环病毒2型(PCV-2)感染对猪肾传代细胞(PK-15细胞)炎性细胞因子白细胞介素(IL)mRNA转录水平的影响,探讨宿主与病毒之间的作用关系及细胞炎性反应机制。【方法】以未感染PCV-2的PK-15细胞为对照组,运用相对定量PCR技术,... 【目的】观察猪圆环病毒2型(PCV-2)感染对猪肾传代细胞(PK-15细胞)炎性细胞因子白细胞介素(IL)mRNA转录水平的影响,探讨宿主与病毒之间的作用关系及细胞炎性反应机制。【方法】以未感染PCV-2的PK-15细胞为对照组,运用相对定量PCR技术,测定和分析PCV-2感染PK-15细胞后,PCV-2DNA相对含量的变化,以及炎性细胞因子IL-6、IL-8、IL-12p35、IL-12p40、IL-13、IL-17、IL-18mRNA转录水平在1,6,12,24,48,和72h的变化。【结果】PCV-2感染后,PK-15细胞的IL-6、IL-13、IL-17、IL-18的mRNA转录水平在12h显著增加,24h后mRNA转录水平下降;IL-8的mRNA转录水平在48h时最高,为对照组的2.5倍,但72h时恢复至与对照组水平相当;随着感染时间的延长,IL-12p35、IL-12p40的mRNA转录水平显著下降。【结论】PCV-2感染后可引起PK-15细胞中IL-6、IL-8、IL-13、IL-17、IL-18等细胞因子mRNA转录水平增加,而IL-12mRNA转录水平下降,提示PCV-2感染后引起的PK-15细胞炎性反应与其分泌的炎性细胞因子的改变有关。 展开更多
关键词 pk-15细胞 炎性细胞因子 白细胞介素 mRNA转录水平 猪圆环病毒2型
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猪圆环病毒2型在转管微载体培养PK-15细胞中增殖动态 被引量：3
14
作者 杨霞 高金良 +7 位作者 陈陆 赵军 常洪涛 王新卫 刘红英 姚惠霞 王川庆 王永强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期146-148,共3页
为提高猪圆环病毒2型（PCV2）的增殖规模及单位体积内的病毒滴度,本研究利用转管微型反应器,采用荧光定量PCR检测方法,对PCV2在PK-15细胞中复制特性和增殖动态进行了系统研究。结果显示,转管（内置0.6 g纸片载体）中接种约2.98×10^... 为提高猪圆环病毒2型（PCV2）的增殖规模及单位体积内的病毒滴度,本研究利用转管微型反应器,采用荧光定量PCR检测方法,对PCV2在PK-15细胞中复制特性和增殖动态进行了系统研究。结果显示,转管（内置0.6 g纸片载体）中接种约2.98×10^7个DF-1细胞,培养7 d细胞增至1.93×10^8～2.0×10^8个,并确定培养7 d时为最佳接毒时间;病毒的最佳接种剂量为120.8 MOI,最佳收毒时间为接毒后的100 h,可达5.53E＋06以上。细胞数增长与糖耗间呈明显平行关系,在细胞生长期内（168 h）平均每个细胞耗糖量为3.09×10^-8g/24 h,可以根据糖耗量的多少推测细胞生长状态和数量。相同培养液中利用转管微型反应器培养PK-15细胞生产PCV2最终获得的病毒液毒价比转瓶培养毒价提高1.65倍。本实验为PCV2在生物反应器中大规模培养提供了参考依据。 展开更多
关键词 微载体 猪圆环病毒2型 pk-15细胞 转管微型反应器
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猪细小病毒致PK-15细胞病变的荧光显微镜和电镜观察 被引量：1
15
作者 方振华 沈振国 孙倩 《现代畜牧科技》 2017年第7期1-2,4,共3页
利用荧光显微镜、扫描和透射电镜对猪细小病毒病(PPV)感染的PK-15细胞进行形态结构观察。结果显示,PPV能诱导猪肾(PK-15)细胞发生典型病变,病变程度随感染时间而加剧。被感染的细胞皱缩、变圆,细胞核浓染、碎裂;超微结构表现为细胞微绒... 利用荧光显微镜、扫描和透射电镜对猪细小病毒病(PPV)感染的PK-15细胞进行形态结构观察。结果显示,PPV能诱导猪肾(PK-15)细胞发生典型病变,病变程度随感染时间而加剧。被感染的细胞皱缩、变圆,细胞核浓染、碎裂;超微结构表现为细胞微绒毛消失,有较多的球状突起;粗面内质网严重扩张,线粒体嵴肿胀、模糊不清,核染色质固缩并边集于核膜,在胞核和胞浆内有较多子代病毒聚集;感染的后期出现了细胞膜凹陷包裹胞质成分的凋亡小体,胞浆中细胞器空泡化严重,细胞核碎裂。本研究从细胞水平上了解PPV的致病过程,为其致病机理的研究奠定理论基础。 展开更多
关键词 猪细小病毒 pk-15细胞 细胞病变 超微结构
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猪肾上皮细胞（PK-15）酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定 被引量：1
16
作者 李晓月 王春来 倪宏波 《黑龙江八一农垦大学学报》 2019年第5期40-45,共6页
应用SMART技术构建猪肾上皮细胞(PK-15)酵母双杂交cDNA文库,为进一步筛选与副猪嗜血杆菌(HPS)细胞致死膨胀毒素(CDT)不同亚基蛋白相互作用蛋白奠定基础。提取PK-15的总RNA,经LD-PCR合成双链cDNA,运用SMART技术,再通过同源重组的方法,构... 应用SMART技术构建猪肾上皮细胞(PK-15)酵母双杂交cDNA文库,为进一步筛选与副猪嗜血杆菌(HPS)细胞致死膨胀毒素(CDT)不同亚基蛋白相互作用蛋白奠定基础。提取PK-15的总RNA,经LD-PCR合成双链cDNA,运用SMART技术,再通过同源重组的方法,构建了PK-15细胞的酵母cDNA文库。经检测,文库滴度达到了2.8×10^8CFU·mL^-1,插入的双链cDNA片段范围为300~1000bp,片段平均大小为500bp。此文库可用于筛选与HPSCDT不同亚基蛋白相互作用的蛋白,这将为治疗靶点的选择、基因缺失弱毒活疫苗的设计提供科学依据。 展开更多
关键词 pk-15 SMART技术 酵母双杂交cDNA文库
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猪瘟病毒E0蛋白在PK-15中的表达与鉴定
17
作者 周景明 刘芳冰 +3 位作者 祁艳华 张改平 栗宁 王爱萍 《安徽农业科学》 CAS 2016年第10期160-162,186,共4页
[目的]研究猪瘟病毒(CSFV)E0基因在PK-15细胞中的表达特性。[方法]通过PCR方法克隆了E0基因全长681 bp的片段,连接到真核表达载体p EGFP-C1上,构建出重组质粒并进行双酶切鉴定。[结果]成功构建出重组质粒p EGFP-E0。通过双酶切鉴定,PCR... [目的]研究猪瘟病毒(CSFV)E0基因在PK-15细胞中的表达特性。[方法]通过PCR方法克隆了E0基因全长681 bp的片段,连接到真核表达载体p EGFP-C1上,构建出重组质粒并进行双酶切鉴定。[结果]成功构建出重组质粒p EGFP-E0。通过双酶切鉴定,PCR鉴定和测序确定了目的基因大小一致,插入位置完全正确后,利用Lipofecta mine 2000转染试剂盒将重组质粒转染到猪肾细胞PK-15中,转染48 h后在荧光显微镜下观察,可以看到大多数细胞呈现出绿色荧光,说明转染成功。通过G418筛选后,在荧光显微镜下仍能观察到部分细胞能够呈现出绿色荧光,这表明重组融合蛋白p EGFP-E0在PK-15细胞中得到了表达。[结论]获得的能够表达重组融合蛋白的细胞克隆,为进一步大量表达与纯化E0糖蛋白、制备其单抗以及研究猪瘟病毒E0糖蛋白的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E0蛋白 增强型绿色荧光蛋白 pk-15细胞
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猪传染性胃肠炎病毒诱导PK-15细胞凋亡相关基因mRNA转录水平变化的研究
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作者 龚双燕 李小璟 +2 位作者 李幽幽 朱玲 徐志文 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期256-260,共5页
为探究PK-15细胞感染猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)后相关凋亡基因Bcl-XL、MCL-1及PUMA mRNA转录水平差异以及TGEV增殖与细胞凋亡之间的关联,本研究在TGEV感染PK-15细胞前后,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,结果显示TGEV具有诱导PK-15细胞发... 为探究PK-15细胞感染猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)后相关凋亡基因Bcl-XL、MCL-1及PUMA mRNA转录水平差异以及TGEV增殖与细胞凋亡之间的关联,本研究在TGEV感染PK-15细胞前后,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,结果显示TGEV具有诱导PK-15细胞发生凋亡的能力;并利用建立的q PCR方法对凋亡相关基因Bcl-XL、MCL-1和PUMA mRNA的转录水平进行测定,结果显示,感染TGEV (实验组)后Bcl-XL、MCL-1和PUMA mRNA转录水平与未感染病毒组(对照组)有明显差异,进一步表明TGEV感染PK-15细胞诱导了细胞凋亡的进程。本研究为了解TGEV诱导PK-15细胞凋亡的机制提供了实验依据。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 pk-15 细胞凋亡 BCL-XL MCL-1 PUMA
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猪圆环病毒1型阴性的PK-15细胞株的筛选
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作者 张春红 蒋智勇 +1 位作者 孙丽华 宋长绪 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2010年第5期32-33,共2页
关键词 猪圆环病毒1型 pk-15细胞 细胞株 猪伪狂犬病病毒 筛选 阴性 ATCC 传代细胞系
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塞内卡病毒A结构蛋白VP1诱导PK-15细胞凋亡 被引量：10
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作者 王咏 毛箬青 +2 位作者 张克山 郑海学 刘湘涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期811-820,共10页
塞内卡病毒A(SVA)作为一种新发病病原,致病机制仍不清楚。通过显微镜观察发现,SVA感染PK-15细胞后能使细胞产生明显的细胞病变(CPE),同时伴随着严重的细胞凋亡。为了深入研究SVA诱导凋亡的情况,在验证SVA各蛋白真核质粒正常表达后,通过A... 塞内卡病毒A(SVA)作为一种新发病病原,致病机制仍不清楚。通过显微镜观察发现,SVA感染PK-15细胞后能使细胞产生明显的细胞病变(CPE),同时伴随着严重的细胞凋亡。为了深入研究SVA诱导凋亡的情况,在验证SVA各蛋白真核质粒正常表达后,通过Annexin V-FITC/PI双染流式方法检测SVA各蛋白诱导凋亡的情况,Annexin V-FITC/PI和Hoechst染色后显微镜观察磷脂酰丝氨酸和核凝聚程度,通过Western blotting和RT-PCR技术分析SVA-VP1对凋亡通路中主要调控分子Caspase3、Caspase8和Bax蛋白质和mRNA水平的影响,发现SVA-VP1能够显著诱导细胞发生早期和晚期凋亡,并且能够促进凋亡蛋白Caspase3、Caspase8及Bax蛋白和mRNA水平的上调。本研究结果为深入研究SVA调控宿主细胞凋亡的分子机制和致病机制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 塞内卡病毒A pk-15细胞 细胞凋亡 流式细胞术
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