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抗PEDV高免血清防控仔猪流行性腹泻的效果观察
1
作者 陈嘉壕 《现代畜牧兽医》 2025年第10期47-50,共4页
研究旨在建立仔猪流行性腹泻综合防控体系。通过优化返饲程序(两次免疫刺激,间隔72 h)制备抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)高效价免疫血清,对其质量进行检验后开展新生仔猪流行性腹泻预防、治疗试验。结果显示,抗PEDV高免血清特异性免疫球蛋白... 研究旨在建立仔猪流行性腹泻综合防控体系。通过优化返饲程序(两次免疫刺激,间隔72 h)制备抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)高效价免疫血清,对其质量进行检验后开展新生仔猪流行性腹泻预防、治疗试验。结果显示,抗PEDV高免血清特异性免疫球蛋白G(IgG)效价均值达1.82,且病原筛查符合生物制品安全标准(多重PCR检测限<103/μL)。血清干预组哺乳仔猪发病率为9.09%(2/22),明显低于对照组的38.46%(10/26),保护率为76.37%。血清干预组临床治愈率达82.61%(19/23),显著高于药物对照组的16.67%(4/24);血清干预组死亡率为17.39%(4/23),而对照组死亡率高达83.33%(20/24)。研究表明,制备抗PEDV高免血清操作简单、质量安全,具有较好的仔猪流行性腹泻防治效果。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻 pedv 抗pedv高免血清
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表达PEDV S蛋白优势抗原区域的重组PRRSV活载体疫苗株的鉴定
2
作者 劳梦琴 刘瑞琳 +13 位作者 陈鹏飞 黄世静 于家荣 朱钧锐 孙祁 虞凌雪 高飞 姜一峰 童武 刘长龙 李丽薇 于海 童光志 周艳君 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期155-163,共9页
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪流行性腹泻(PED)是当前对养猪业影响较大的两种重要传染病,为了开发可同时针对这两种疫病的疫苗,本研究以PRRSV HuN4-F112活疫苗株为载体,将PEDV S蛋白中可诱导产生中和抗体的抗原区域进行优化和组合,命名... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪流行性腹泻(PED)是当前对养猪业影响较大的两种重要传染病,为了开发可同时针对这两种疫病的疫苗,本研究以PRRSV HuN4-F112活疫苗株为载体,将PEDV S蛋白中可诱导产生中和抗体的抗原区域进行优化和组合,命名为SNE,利用反向遗传操作技术将其引入至HuN4-F112株基因组中,构建了含有SNE的PRRSV全长cDNA克隆pHuN4-F112-SNE,通过病毒拯救获得了重组病毒rHuN4-F112-SNE株,经过对重组病毒引入基因和表达蛋白的鉴定,证实获得的重组病毒rHuN4-F112-SNE能够正确表达PEDV S蛋白优势抗原区域,其生物学特性与亲本毒株相似。将该重组病毒连续传至30代,引入的SNE基因均能获得稳定表达,且不影响亲本毒复制和自身蛋白的表达,表明重组病毒rHuN4-F112-SNE中引入的SNE基因可稳定遗传,研究结果为后续评价rHuN4-F112-SNE作为二价基因工程活载体疫苗的有效性奠定了基础。 展开更多
关键词 pedv S蛋白 PRRSV 重组病毒
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稳定过表达NM-ⅡA Tail的IPEC-J2细胞系构建及其对PEDV感染的影响研究
3
作者 黄小久 雷磊 +7 位作者 彭小烨 王开心 陈英仪 王济贤 王玉格 段德勇 杨毅 王爱兵 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第5期2243-2252,共10页
【目的】本研究利用慢病毒载体系统构建稳定过表达非肌性肌球蛋白ⅡA尾部(NM-ⅡA Tail)的猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2),探讨其在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染细胞过程中的作用,为揭示PEDV的感染机制提供... 【目的】本研究利用慢病毒载体系统构建稳定过表达非肌性肌球蛋白ⅡA尾部(NM-ⅡA Tail)的猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2),探讨其在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染细胞过程中的作用,为揭示PEDV的感染机制提供理论依据。【方法】采用同源重组技术构建过表达pLV-CMV-NM-ⅡA Tail-3×Flag-CopGFP-Puro的重组质粒。将重组质粒与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染HEK-293FT细胞,制备慢病毒液。采用慢病毒液侵染IPEC-J2细胞,经药物筛选后观察EGFP荧光标签蛋白的表达情况;利用Western blotting和实时荧光定量PCR技术鉴定过表达NM-ⅡA Tail的细胞株构建情况。结合Western blotting和免疫荧光试验(IFA)分析PEDV内化阶段的变化,通过测定病毒粒子的拷贝量和病毒滴度,分析过表达NM-ⅡA Tail对PEDV复制和释放阶段的影响。【结果】在成功构建的过表达细胞株中,NM-ⅡA Tail mRNA转录水平较对照组提高了15倍(P<0.01),且Western blotting验证结果显示,NM-ⅡA Tail蛋白存在高效表达。在PEDV内化阶段,过表达NM-ⅡA Tail细胞中PEDV N蛋白表达量极显著高于对照组(P<0.01)。IFA结果显示,过表达NM-ⅡA Tail细胞中NM-ⅡA和PEDV的荧光信号强于对照组。在PEDV复制阶段,过表达NM-ⅡA Tail细胞中PEDV M基因拷贝数及病毒半数组织感染剂量(TCID 50)显著或极显著高于对照组(P<0.05;P<0.01)。在PEDV释放阶段,过表达NM-ⅡA Tail细胞释放的PEDV M基因的拷贝数较对照组提高了2.7倍,上清中的病毒TCID 50极显著高于对照组(P<0.01)。【结论】本研究成功构建了稳定过表达NM-ⅡA Tail的IPEC-J2细胞株,为深入研究NM-ⅡA在PEDV感染过程中的作用提供了试验材料。过表达NM-ⅡA Tail显著促进了PEDV的内化、复制和释放过程,为阐明PEDV的感染机制提供了新思路,并为疫病防控策略开发提供了参考依据。 展开更多
关键词 非肌性肌球蛋白ⅡA 猪流行性腹泻病毒(pedv) 慢病毒载体 过表达细胞系
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PEDV、PoRV、PDCoV多重荧光定量RT-PCR方法的建立和应用 被引量：1
4
作者 陈登金 李鹏宇 +5 位作者 董楠 常昊天 胡渤 肖进 张蕾 马良 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第9期71-78,共8页
为实现对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)的同时鉴别检测,本试验根据PEDV核衣壳蛋白(N)基因、PoRV结构蛋白6(VP6)基因和PDCoV基质蛋白(M)基因筛选设计3对特异性引物和荧光标记探针,通过矩阵法优化... 为实现对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)的同时鉴别检测,本试验根据PEDV核衣壳蛋白(N)基因、PoRV结构蛋白6(VP6)基因和PDCoV基质蛋白(M)基因筛选设计3对特异性引物和荧光标记探针,通过矩阵法优化反应条件,建立多重荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,绘制标准曲线,验证该方法的特异性、敏感性和重复性,并进行临床样本检测。标准曲线拟合试验结果显示,PEDV、PoRV和PDCoV多重荧光定量RT-PCR方法针对各病毒扩增均具有良好的相关系数和扩增效率;特异性试验结果显示,该方法仅对PEDV、PoRV和PDCoV呈现特异性扩增,不与其他猪源病毒发生交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法对PEDV、PoRV和PDCoV的最低检测限均为1×10^(0)copies/μL;组内和组间重复性试验的Ct值变异系数均小于2%,具有良好的重复性。对367份临床样本进行PEDV、PoRV和PDCoV检测,多重荧光定量RT-PCR检测的阳性率为92.37%(339/367),而地方标准多重RT-PCR检测的阳性率为83.38%(306/367),2种方法临床样本检测符合率为91.01%(334/367)。结果表明,本试验建立了一种可快速、准确、灵敏检测PEDV、PoRV和PDCoV的多重荧光定量RT-PCR方法,可用于实验室病原和临床样本检测,为临床猪病毒性腹泻的研究和防控提供了有效技术方法。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(pedv) 猪轮状病毒(PoRV) 猪德尔塔冠状病毒(PDCoV) 逆转录聚合酶链式反应
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天祝县某规模蕨麻猪场仔猪腹泻情况及PEDV感染情况调查
5
作者 杨彩虹 张啸 +1 位作者 黄福岚 孙有奎 《现代畜牧兽医》 2025年第8期73-77,共5页
试验旨在掌握2023年9月—2024年8月天祝县某规模蕨麻猪场仔猪腹泻流行特点及猪流行性腹泻病毒(PEDV)的感染情况。采用现场调查法调查了解不同季节、日龄、胎次的仔猪腹泻分布情况,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测112份腹泻仔... 试验旨在掌握2023年9月—2024年8月天祝县某规模蕨麻猪场仔猪腹泻流行特点及猪流行性腹泻病毒(PEDV)的感染情况。采用现场调查法调查了解不同季节、日龄、胎次的仔猪腹泻分布情况,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测112份腹泻仔猪粪便样品中是否存在PEDV。结果显示,2023年11月以及2024年1、2、3月仔猪腹泻率较高;其中,2024年2月最高,腹泻率为62.13%(146/235);2024年7月最低,腹泻率为0.92%(10/1068)。冬季和春季仔猪发生腹泻占比较高,分别为41.34%(253/612)、38.07%(233/612);夏季仔猪发生腹泻占比相对较低,为3.59%(22/612)。1~7日龄仔猪发生腹泻的占比最高,可达80.22%(491/612);15~24日龄仔猪占比最低,为7.52%(46/612)。母猪所产第1胎仔猪腹泻占比最高,为82.19%(503/612),其次为第2胎(10.36%)和第3胎(6.24%),母猪所产第4胎仔猪腹泻占比最低为1.31%(8/612)。112份腹泻仔猪粪便样品中PEDV阳性率为47.32%(53/112)。研究表明,该场存在PEDV感染,仔猪发生腹泻与月份、季节、仔猪日龄和母猪胎次等因素相关。 展开更多
关键词 蕨麻猪 仔猪腹泻 猪流行性腹泻病毒(pedv)
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壳聚糖-苯二酚修饰灭活PEDV的口服免疫效果评价 被引量：1
6
作者 杨云涵 邓锴 +2 位作者 涂志文 赵兴洪 万红平 《华中农业大学学报》 北大核心 2025年第1期217-224,共8页
为评估壳聚糖-苯二酚(chitosan-catechol,Chic)修饰的灭活猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)疫苗的口服免疫效果,通过控制Chic的量制备出由不同质量浓度Chic(0.2、0.4 mg/mL)包裹的灭活PEDV(0.5 mg/mL),命名为C1+... 为评估壳聚糖-苯二酚(chitosan-catechol,Chic)修饰的灭活猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)疫苗的口服免疫效果,通过控制Chic的量制备出由不同质量浓度Chic(0.2、0.4 mg/mL)包裹的灭活PEDV(0.5 mg/mL),命名为C1+P和C2+P,建立小鼠模型进行免疫试验。采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测小鼠黏膜sIgA和血清IgG、IgG1、IgG2a抗体水平,并通过流式细胞术和CCK-8试验检测脾细胞的分型和增殖活化情况。结果显示,经2次口服免疫后,C2+P组诱导的免疫效果与昂贵的霍乱毒素B亚单位(CTB)佐剂组效果相当;与未经Chic修饰的PEDV组相比,C1+P、C2+P组诱导的鼻黏膜、肺泡、小肠黏膜特异性sIgA的抗体效价分别提高了6.09、6.37倍,5.35、5.65倍和5.64、5.89倍,血清特异性IgG、IgG1、IgG2a分别提高了8.83、9.65倍,13.54、15.07倍和4.27、5.07倍;CD4^(+)T淋巴细胞、CD8^(+)T淋巴细胞比例分别提升了1.15、1.17倍和1.11、1.11倍;脾细胞的增殖活化情况也显著增加(P<0.05)。结果表明,口服免疫C1+P和C2+P成功诱导了小鼠体内黏膜免疫和系统性免疫应答效应,显示出Chic作为黏膜免疫佐剂的潜力,表明Chic修饰的灭活PEDV疫苗在有效诱导免疫应答方面具有可行性。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 灭活疫苗 黏膜免疫 口服免疫 佐剂 壳聚糖-苯二酚
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PEDV和TGEV双重荧光重组酶介导等温扩增检测方法的建立及初步应用
7
作者 刘明妮 牟豪 +3 位作者 吕林丹 李绍梅 高婕琪 杨柳 《动物医学进展》 北大核心 2025年第11期24-30,共7页
根据猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因的特异性保守序列分别设计引物和探针,建立了PEDV和TGEV双重荧光重组酶介导等温扩增(RAA)检测方法。该方法能在41℃恒温条件下20 min即可完成检测,与猪德尔塔冠状病毒(P... 根据猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因的特异性保守序列分别设计引物和探针,建立了PEDV和TGEV双重荧光重组酶介导等温扩增(RAA)检测方法。该方法能在41℃恒温条件下20 min即可完成检测,与猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)不发生交叉反应;对PEDV和TGEV质粒标准品最低检测限分别为101拷贝/μL和103拷贝/μL。用RT-qPCR检测方法与建立的荧光RAA检测方法对50份临床样品进行检测,二者的阳性符合率为93.10%。结果表明,建立的PEDV和TGEV双重荧光RAA检测方法,有望为兽医临床检测提供一种高效诊断技术。 展开更多
关键词 荧光重组酶介导等温扩增 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒
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PEDV乳酸菌工程菌株对小鼠的免疫效果研究 被引量：1
8
作者 安琦 牛彦波 +3 位作者 吴皓琼 樊川 曹亚彬 原韬 《农学学报》 2024年第6期67-71,共5页
本研究以引起猪流行性腹泻的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)为研究目标,利用含有PEDV S基因的植物乳杆菌活载体菌株LP1522-PEDS口服免疫小鼠,应用ELISA试验检测免疫小鼠粪便中SIgA含量、血清中IgG、IL-4、IL-2... 本研究以引起猪流行性腹泻的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)为研究目标,利用含有PEDV S基因的植物乳杆菌活载体菌株LP1522-PEDS口服免疫小鼠,应用ELISA试验检测免疫小鼠粪便中SIgA含量、血清中IgG、IL-4、IL-2和IFN-γ含量,评价乳酸菌重组菌株LP1522-PEDS对小鼠的免疫效果。结果表明,首次免疫后,商品灭活疫苗组和工程菌株免疫组粪便中的SIgA、血清中的IgG、IL-4、IL-2和IFN-γ含量较对照组显著升高(P<0.05)。在免疫42~56 d,灭活疫苗组和重组菌株组抗体水平均达到最大值,抗体和免疫因子水平依次为:商品灭活疫苗组>LP1522-PEDS组>空载组≈对照组。随后商品灭活疫苗组、LP1522-PEDS组抗体和免疫因子水平逐渐下降。免疫70 d,商品灭活疫苗组抗体水平降幅度相对较小,工程菌株免疫组降幅较大。结果表明,小鼠口服携带PEDV S基因的基因工程植物乳杆菌LP1522-PEDS后能够诱导机体产生PEDV免疫应答。 展开更多
关键词 pedv 乳酸菌 活载体疫苗 小鼠免疫
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丁壮素酸乳对PEDV和PRRSV体外增殖的影响
9
作者 林秀娇 陈伟晨 +2 位作者 黄艺珠 郑新添 黄翠琴 《上海畜牧兽医通讯》 2024年第3期14-18,共5页
为探究丁壮素酸乳对猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)体外增殖影响,本研究使用CCK-8法分别检测丁壮素酸乳对Vero细胞和Marc... 为探究丁壮素酸乳对猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)体外增殖影响,本研究使用CCK-8法分别检测丁壮素酸乳对Vero细胞和Marc-145细胞的毒性,采用实时荧光定量PCR分别检测PEDV、PRRSV在不同质量浓度丁壮素酸乳作用下的基因组拷贝数。实验结果显示:100~500μg/mL丁壮素酸乳对Vero细胞和Marc-145细胞活性没有显著影响;200~300μg/mL丁壮素酸乳显著抑制PEDV增殖,100~300μg/mL丁壮素酸乳显著抑制PRRSV增殖。实验结果表明,200~300μg/mL丁壮素酸乳对PEDV和PRRSV的体外增殖具有显著的抑制作用,且无细胞毒性。 展开更多
关键词 中短链甘油脂肪酸 丁壮素 pedv PRRSV 抗病毒 月桂酸甘油酯
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单月桂酸甘油酯对PEDV感染3D4/21巨噬细胞基因表达的影响 被引量：1
10
作者 徐欢欢 王倩 +5 位作者 王宇杰 刘佳乐 王蕾 赵迪 张倩 侯永清 《饲料工业》 CAS 北大核心 2024年第15期120-127,共8页
试验旨在研究单月桂酸甘油酯(ML)对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染3D4/21巨噬细胞基因表达的影响。通过ML对3D4/21细胞活力试验和PEDV在3D4/21细胞中的生长曲线确定最适浓度和最佳时间后,将3D4/21细胞随机分为3组(control组、PEDV组、PEDV... 试验旨在研究单月桂酸甘油酯(ML)对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染3D4/21巨噬细胞基因表达的影响。通过ML对3D4/21细胞活力试验和PEDV在3D4/21细胞中的生长曲线确定最适浓度和最佳时间后,将3D4/21细胞随机分为3组(control组、PEDV组、PEDV+ML组),各组分别以全时添加10µmol/L ML和PEDV感染细胞后添加10µmol/L ML两种方式进行处理,并检测相关基因相对表达量。结果表明:添加10µmol/L的ML对3D4/21细胞生长具有显著的促进作用(P<0.05),病毒感染3D4/21细胞的48 h内PEDV-S、M、N基因相对表达量呈现先增加再降低的趋势,12 h时处于最高;与PEDV组相比,PEDV+ML组全时添加ML处理12 h使PEDV-S、M、N、IL-8、IFN-β、IFITM3基因相对表达量显著下调(P<0.05),处理24 h使PEDV-S、M、N、IL-8、IFN-β、MX1、ISG15、IFIT1和IFITM1基因相对表达量显著下调(P<0.05),KCNJ13基因相对表达量显著上调(P<0.05)。与PEDV组相比,PEDV+ML组在感染后添加ML处理12 h使MMP13基因相对表达量显著下调(P<0.05),PEDV-M基因相对表达量显著上调(P<0.05),处理24 h使IL-6、IL-8、IFN-β、MX1、ISG15、IFIT1、IFITM1、IFITM3基因相对表达量显著下调(P<0.05),PEDV-S、M、N、KCNJ13基因相对表达量显著上调(P<0.05)。综上所述,PEDV感染前ML预处理具有一定的抗病毒效果;PEDV感染使细胞处于免疫应激状态,ML有一定的缓解作用。 展开更多
关键词 单月桂酸甘油酯(ML) 猪流行性腹泻病毒(pedv) 3D4/21细胞 生长曲线 免疫功能
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基于网络药理学和分子对接探究白杨素和柚皮素抗PEDV的作用机制及试验验证 被引量：3
11
作者 植玉鹏 刘雨桐 +3 位作者 陈弟诗 宫萌菲 夏学妹 任玉鹏 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1757-1772,共16页
【目的】探讨白杨素和柚皮素抗猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的作用靶点和机制,为进一步以白杨素和柚皮素开发新型抗PEDV的治疗药物提供理论依据。【方法】利用PharmMapper、TCMSP、SEA Search Server和STITC... 【目的】探讨白杨素和柚皮素抗猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的作用靶点和机制,为进一步以白杨素和柚皮素开发新型抗PEDV的治疗药物提供理论依据。【方法】利用PharmMapper、TCMSP、SEA Search Server和STITCH在线数据库获得白杨素和柚皮素的潜在作用靶点,同时检索GeneCards数据库获得PEDV对宿主的作用靶点,利用在线程序Draw Venny Diagram获取白杨素、柚皮素与疾病的交集靶点。通过STRING数据库和Cytoscape 3.9.1软件构建靶蛋白互作(PPI)网络并筛选关键靶点,对靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析。通过AutoDock Vina v 1.2.0软件对核心靶点及小分子进行分子对接,并分析白杨素和柚皮素与靶蛋白的结合能和结合模式,利用PyMOL v 2.5实现对接结果的可视化。采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测白杨素和柚皮素对核心靶蛋白表达的影响。【结果】白杨素潜在抗PEDV的靶点有12个,其中白蛋白(ALB)、雌激素受体1(ESR1)、转化生长因子β-1蛋白(TGF-β1)可能是白杨素抗PEDV的核心靶点;柚皮素潜在抗PEDV的靶点有18个,其中ALB、胱天蛋白酶3(Caspase-3,CASP3)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARG)可能是柚皮素抗PEDV的核心靶点。白杨素抗PEDV靶点涉及21种生物过程、5种细胞组分和6种分子功能,共获得11条信号通路;柚皮素抗PEDV靶点涉及31种生物过程、8种细胞组分和19种分子功能,共获得13条信号通路。核心靶点与两种天然化合物之间以氢键和疏水作用力为主,有较强的相互作用。白杨素和柚皮素能极显著降低Caspase-3表达量(P<0.01),可能通过影响Caspase-3的表达和活化来颉颃PEDV诱导的细胞凋亡;极显著升高TGF-β1蛋白表达量(P<0.01),可能通过影响TGF-β1的表达抗PEDV诱导的炎症反应而治疗PEDV的感染。【结论】本研究揭示了白杨素和柚皮素分别通过潜在核心靶点ALB、ESR1、TGF-β1和ALB、Caspase-3、PPARG,以及IL17、PI3K-Akt和AMPK信号通路发挥抗PEDV作用的机制,为新型抗PEDV药物的研发提供新的思路。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(pedv) 网络药理学 分子对接 白杨素 柚皮素
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猪肉及制品中HEV、PEDV和PDCoV三重qPCR方法的建立与应用 被引量：2
12
作者 余姓鸿 张婧 +7 位作者 安微 杨苗 谢礼 舒佳新 薛昌华 郑巧 林华 韩国全 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2024年第2期210-219,共10页
人兽共患病引发的动物源性食品安全事件频发,为从食品原料源头上控制和保障其食用安全,控制猪肉及其制品消费成本,本研究构建了可同时检测猪肉及制品中戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhe... 人兽共患病引发的动物源性食品安全事件频发,为从食品原料源头上控制和保障其食用安全,控制猪肉及其制品消费成本,本研究构建了可同时检测猪肉及制品中戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪δ冠状病毒(Porcine delta corona virus,PDCoV)三重实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR,qPCR)方法。结果表明,三重qPCR方法只能扩增出3种目的病毒的特异性基因片段,特异性好;对HEV、PEDV和PDCoV三种病毒的最低检测限分别为6.02、6.98、6.92 copies/μL;组内和组间变异系数(CV%)在0.10%~3.00%之间,重复性好。将所建立方法应用于248份出口猪肉及制品和282份生猪粪拭子的检测,同时以相应病毒标准检测方法进行平行检测,结果显示猪肉及制品中三种病毒的检出率均为0%,与标准方法检测结果一致。生猪粪拭子中,该方法对PEDV、PDCoV和HEV三种病毒的检出率分别为1.06%、3.19%、0.35%,标准方法检出率分别为1.06%、3.19%、0%。研究表明,建立的三重qPCR检测方法能准确快速地检测猪肉及制品或生猪样品中三种病毒,为保障生鲜猪肉及其制品市场流通和阻断病毒食源性传播提供技术支持。 展开更多
关键词 猪肉 戊型肝炎病毒(HEV) 猪流行性腹泻病毒(pedv) 猪δ冠状病毒(PDCoV) 三重qPCR
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PEDV、TGEV与PDCoV S蛋白表位基因三联疫苗的构建及其鉴定
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作者 刘青 顾天越 +9 位作者 包利霞 朱凡杰 王鑫源 刘婷婷 朱晓琛 鄢明华 董志民 王利丽 张东超 金天明 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3495-3505,共11页
[目的]构建一种同时预防猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)的三联表位疫苗,以预防上述病原导致的猪的相关疾病。[方法]本研究运用免疫信息学在线软件对3种猪肠道冠状病毒(SeCoVs)的S蛋白B、T... [目的]构建一种同时预防猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)的三联表位疫苗,以预防上述病原导致的猪的相关疾病。[方法]本研究运用免疫信息学在线软件对3种猪肠道冠状病毒(SeCoVs)的S蛋白B、T细胞表位进行预测分析,构建新的表位肽段,命名为PPT,通过ExPASy、VaxiJen、TMHMM、SOPMA、SOLpro和AlphaFlod2等在线软件对PPT进行生物信息学分析,并利用C-IMMSIM在线软件对其免疫反应进行模拟。通过T2A将PPT与PEDV的COE序列、TGEV的SAD序列及PDCoV的CTD序列连接并构建至真核表达载体pEGFP-N1,经PCR和双酶切鉴定正确后,将获得的重组质粒转染HEK293A细胞,经DAPI染色、CCK8、RT-PCR及Western blotting试验验证重组质粒在体外表达情况。[结果]构建的表位蛋白PPT由17条表位肽段组成,经生物信息学软件分析,该蛋白为非跨膜蛋白,结构稳定,具有抗原性和可溶性,亲水性高,无过敏性。C-IMMSIM结果显示,PPT能引起机体树突状细胞(DC)增加,B、T细胞免疫反应,刺激免疫球蛋白IgG、IgM和细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)水平升高。重组质粒经PCR和双酶切鉴定结果显示,分别在3359、2375、1064、944、764和467 bp出现特异性目的条带,与预期相符;重组质粒转染HEK293A细胞后,可见绿色荧光;RT-PCR扩增分别在3359、2375、1064、944、764和467 bp处获得与目的基因大小相符的条带;CCK-8检测结果表明,重组质粒对细胞均无明显毒性作用;Western blotting检测结果显示,分别在31.7、16.1、37.9和27.5 ku处出现与目的蛋白分子质量大小一致的条带,重组质粒成功在HEK293A细胞中表达。[结论]本研究基于计算机软件分析设计的PPT表位蛋白成功构建三联疫苗,且在体外表达,为评价PEDV-TGEV-PDCoV三联表位疫苗的免疫效果提供依据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(pedv) 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) 猪德尔塔冠状病毒(PDCoV) S蛋白 表位疫苗
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G1期纤毛细胞器对宿主细胞PEDV敏感性的调控
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作者 庄腾寒 杨鹏 +5 位作者 马心宇 徐悦 陈丽 鲍熹 杨丹晨 冯磊 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期2302-2309,共8页
本研究旨在分析宿主细胞周期对猪流行性腹泻病毒(PEDV)增殖能力的调控效果。使用PEDV[感染复数(MOI)=1]分别感染猪睾丸(ST)细胞、猪小肠上皮(IPEC-J2)细胞,用流式细胞术(FACS)和免疫印迹(WB)技术鉴定细胞周期,用免疫荧光法观察纤毛组装... 本研究旨在分析宿主细胞周期对猪流行性腹泻病毒(PEDV)增殖能力的调控效果。使用PEDV[感染复数(MOI)=1]分别感染猪睾丸(ST)细胞、猪小肠上皮(IPEC-J2)细胞,用流式细胞术(FACS)和免疫印迹(WB)技术鉴定细胞周期,用免疫荧光法观察纤毛组装效果,通过测定半数组织培养感染剂量(TCID_(50))鉴定病毒的增殖能力。结果表明,PEDV感染ST细胞、IPEC-J2细胞7 h后,会导致宿主细胞阻滞于合成期(S期),感染31 h后则会导致宿主细胞阻滞于合成前期(G1期);FACS、WB检测结果证实,通过双胸苷(Thy)释放协同诺考达唑(Noc)能够将细胞周期分别阻滞于G1-S转换期、S期和细胞分裂期(M期);PEDV(MOI=1)感染处于各细胞周期的ST、IPEC-J2细胞,同步化于G1-S转换期的细胞感染PEDV后的TCID_(50)最高,诱导纤毛去组装的细胞对PEDV的敏感性下降。由研究结果可知,PEDV感染导致宿主细胞阻滞于G1-S转换期,G1期细胞因具有纤毛细胞器而最有利于PEDV增殖。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(pedv) 细胞周期 细胞同步化 ST细胞 IPEC-J2细胞 纤毛
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金银花源miR2911靶向PEDV基因区域分析
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作者 张秦川 李云辉 +11 位作者 张满义 薛嘉熹 孙雪梅 张自瑞 乔亚萱 刘伟楠 蒋松 肖非 高宏伟 孙延鸣 盛金良 张彦兵 《中国猪业》 2024年第1期53-56,共4页
金银花源miR2911是一种丰度较高、性质稳定的抗病毒分子,在抗流感病毒感染和SARS-CoV-2感染中发挥着关键作用。然而,有关miR2911靶向PEDV基因区域的研究却鲜有报道。因此,本研究旨在分析miR2911靶向PEDV的基因区域,进一步分析miR2911靶... 金银花源miR2911是一种丰度较高、性质稳定的抗病毒分子,在抗流感病毒感染和SARS-CoV-2感染中发挥着关键作用。然而,有关miR2911靶向PEDV基因区域的研究却鲜有报道。因此,本研究旨在分析miR2911靶向PEDV的基因区域,进一步分析miR2911靶点在不同流行毒株中的保守性。利用miRanda软件成功预测miR2911在PEDV基因组中存在多个靶点,靶向PEDV基因区域保守性很高。为后续深入研究miR2911在抗猪源病毒感染的机理提供了数据支撑。 展开更多
关键词 生猪 pedv miR2911 病毒基因 靶向区域 金银花 抗病毒
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贵州省2017年~2023年PEDV和PoRVA流行病学调查及PoRVA VP7、VP4基因的遗传演化分析 被引量：4
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作者 田红利 柳佳佳 +6 位作者 梁海英 曾智勇 汤德元 王彬 边孟婷 黄书 潘向英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期791-798,共8页
为了解贵州省猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪A群轮状病毒(PoRVA)的流行情况,本研究对2017年~2023年来自贵州省9个地区139个猪场的165份仔猪粪便样品进行Taq Man RT-qPCR检测,并对PoRVA阳性样品VP7、VP4基因进行RT-PCR扩增、测序,遗传进化... 为了解贵州省猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪A群轮状病毒(PoRVA)的流行情况,本研究对2017年~2023年来自贵州省9个地区139个猪场的165份仔猪粪便样品进行Taq Man RT-qPCR检测,并对PoRVA阳性样品VP7、VP4基因进行RT-PCR扩增、测序,遗传进化分析及其编码氨基酸序列的变异分析。结果显示,PEDV、PoRVA和PEDV+PoRVA的感染率分别为67.88%(112/165)、38.79%(64/165)和21.21%(35/165),且在不同年份、不同地区和不同季节均检出三者的感染。PCR结果显示,本实验扩增出27株PoRVA VP7基因和22株VP4基因;遗传进化分析结果显示共鉴定出6种G型和3种P型,其中G9(29.63%)和P[13](68.18%)为优势基因型,G3、G4、G5、G11、G26、P[6]和P[23]分别占7.41%、22.22%、22.22%、3.70%、14.81%、13.64%、18.18%。21份PoRVA样品鉴定出10种G/P组合基因型,G9P[13](19.05%)为优势组合基因型,G4P[13]、G5P[13]、G3P[13]、G4P[6]、G5P[23]、G9P[23]、G11P[13]、G26P[6]、G26P[13]分别占14.29%、14.29%、9.52%、9.52%、9.52%、9.52%、4.76%、4.76%及4.76%。同源性分析结果显示,27株VP7基因和22株VP4基因序列与NX疫苗株相应基因序列之间的同源性分别为75.5%~94.0%和68.5%~75.6%,氨基酸序列的同源性分别为78.3%~96.6%和72.0%~82.5%,部分PoRVA上述基因序列与国外、人源RVA的同源性最高。氨基酸位点变异分析结果显示,与NX疫苗株相比,所测PoRVA VP7和VP4氨基酸序列均存在特征性位点的变异,其中G型PoRVA VP7无氨基酸位点的缺失和插入,G9型PoRVA VP7存在3处(I^(208)T、K^(212)A/V/T、V^(271)I)变异,G3、G4、G5、G11和G26型PoRVA VP7存在17处(S^(28)R/K、A^(29)I/T/M/V、L^(40)I/V、V^(44)L、S^(71)T、Q^(73)G/N/S/E、S^(90)A/Q/K/R、G^(94)N/S/A/K、N^(100)D/E、T^(122)A/S、T^(147)A/G/N/D、Q^(189)S/T、I^(208)L/Q/T、K^(212)T/I/P/N、A^(213)N/T/D、E^(267)D/N、V^(271)I)变异;3株P[6]型PoRVA VP4在aa136缺失T,13株P[13]型PoRVA VP4在aa188~aa189插入E/D~Y/F,P[6]、P[13]和P[23]型PoRVA VP4存在26处(I^(92)V、Q^(94)E、Q^(113)T/P/N、T^(114)N/Q/S/R、T^(115)Q/E、N^(116)S/L/T、P^(148)A/Q/V/S/I、T^(180)E/N/D、P^(162)T、I^(174)V/L、C^(269)Y、R^(281)N、A^(286)L/S、T^(302)N、A^(340)S/V、T^(379)S、T^(403)A、S^(438)P、R^(553)K、A^(569)A、M^(570)L、A^(608)S、E^(660)D、I^(726)F、K^(733)N、S^(739)T)变异。上述结果表明,2017年~2023年贵州省PEDV和PoRVA感染率高且基因型复杂,其中PoRVA存在以G9型、P[13]型为主的流行,优势组合基因型为G9P[13]。本研究丰富了贵州省PEDV和PoRVA的流行病学资料,尤其为PoRVA感染的防控和候选疫苗株的筛选提供了参考数据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪A群轮状病毒 分子流行病学 VP7和VP4基因 遗传演化分析
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不同全自动核酸提取仪对ASFV、PEDV提取效果的比较
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作者 黄丽娜 陈秀萍 +2 位作者 甘跃灵 谢璐娜 王雪妹 《今日养猪业》 2024年第3期1-3,共3页
【目的】以倍比稀释的ASFV(非洲猪瘟病毒)阳性对照样品以及PEDV(猪流行性腹泻病毒)阳性对照样品为检测对象,对比3款全自动核酸提取仪对DNA和RNA的提取效果,旨在帮助猪场配备的实验室筛选合适、可靠的全自动核酸提取仪。【方法】倍比稀... 【目的】以倍比稀释的ASFV(非洲猪瘟病毒)阳性对照样品以及PEDV(猪流行性腹泻病毒)阳性对照样品为检测对象,对比3款全自动核酸提取仪对DNA和RNA的提取效果,旨在帮助猪场配备的实验室筛选合适、可靠的全自动核酸提取仪。【方法】倍比稀释好的ASFV、PEDV阳性对照样品,每个梯度设置3个平行重复,诺维赞核酸提取仪(VNP-32P)为处理1,西安天隆核酸提取仪(NP968-C)为处理2,博日核酸提取仪(NPA-32P)为处理3,根据3款全自动核酸提取仪及提取试剂盒的说明书将对应阳性样品进行核酸提取,再根据英迪康的virotype?非洲猪瘟病毒2.0 PCR检测试剂盒以及世纪元亨的流行性腹泻病毒实时荧光RT-PCR检测试剂盒的说明书进行体系配制、上样、程序设置,进行核酸扩增。【结果】同一浓度梯度的ASFV、PEDV阳性对照样品,处理3所提核酸的扩增结果 CT值较处理1和处理2的低,而处理1和处理2提取效果不相上下。【结论】3款核酸提取仪的稳定性都满足需求;博日核酸提取仪(NPA-32P)的提取效果优于另外2款,诺维赞核酸提取仪(VNP-32P)和西安天隆核酸提取仪(NP968-C)的提取效果接近。 展开更多
关键词 全自动核酸提取仪 ASFV pedv 稳定性效果
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PEDV、TGEV、PoRV 3种猪病毒性腹泻病毒的流行现状及控制策略 被引量：26
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作者 王艳丰 张丁华 +2 位作者 李爱心 程征 刘守铉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第2期518-527,共10页
引起猪病毒性腹泻的病原主要有猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)及猪轮状病毒(porcine rotarvirus,PoRV),临床均以呕吐、严重腹泻和脱水为特征... 引起猪病毒性腹泻的病原主要有猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)及猪轮状病毒(porcine rotarvirus,PoRV),临床均以呕吐、严重腹泻和脱水为特征,哺乳仔猪发病率和病死率较高,后备猪、母猪或育肥猪呈一过性腹泻,发病率较低。特别是自2010年以来,PEDV变异毒株的流行已对全球的生猪产业造成严重影响,而已有的防控措施已经不能应对新的流行态势。近年来,针对PEDV、TGEV、PoRV的毒株流行变化及防控措施研究的较多,许多新技术、新方法已应用于3种病原的控制。作者基于当前3种病毒的遗传变异分析和流行现状,从饲养管理、免疫预防、中药疗法、干扰疗法、特异疗法及返饲疗法等方面对防控措施进行综述,以期为猪病毒性腹泻的防控提供科学依据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(pedv) 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) 猪轮状病毒(PoRV) 流行现状 防控措施
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猪流行性腹泻病毒PEDV-GD12株的分离与鉴定 被引量：3
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作者 古洪浪 邓胜朝 +5 位作者 崔进 刘晓露 刘超 袁航 马岚 张桂红 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第11期22-25,共4页
采集广东省某猪场腹泻仔猪的小肠病料,通过在Vero细胞上培养,RT-PCR及间接免疫荧光检测,电镜观察等方法鉴定,确定分离到一株PEDV毒株,并命名为PEDV-GD12。通过对PEDV M基因的克隆测序以及进化分析,显示所分离到的毒株近年来流行的毒株... 采集广东省某猪场腹泻仔猪的小肠病料,通过在Vero细胞上培养,RT-PCR及间接免疫荧光检测,电镜观察等方法鉴定,确定分离到一株PEDV毒株,并命名为PEDV-GD12。通过对PEDV M基因的克隆测序以及进化分析,显示所分离到的毒株近年来流行的毒株同源性很高,处在同一分支上。 展开更多
关键词 pedv 分离鉴定 M基因 进化分析
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PEDV分离株S1基因的重组杆状病毒真核表达 被引量：11
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作者 何海健 吴瑗 +7 位作者 王鲁彦 李群景 巴少波 石林 邵春艳 孙静 姜胜 王晓杜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第3期832-839,共8页
为了研究猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)分离株(PEDV/LA/2014/02)纤突蛋白(S1)的真核表达及其反应原性,本研究利用杆状病毒真核表达系统表达出重组His-PEDV-S1蛋白。利用在线软件分析PEDV S1基因在sf9细胞内... 为了研究猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)分离株(PEDV/LA/2014/02)纤突蛋白(S1)的真核表达及其反应原性,本研究利用杆状病毒真核表达系统表达出重组His-PEDV-S1蛋白。利用在线软件分析PEDV S1基因在sf9细胞内的稀有密码子,经优化密码子后的基因进行人工合成,合成后的PEDV S1基因被克隆至杆状病毒的穿梭载体(pFastBac HT A)中,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞进行重组,PCR方法验证后将重组成功的杆状病毒基因组转染sf9细胞,获得包装成功的杆状病毒,该病毒进一步接种sf9细胞,显微镜观察重组病毒引起的细胞病变,RT-PCR方法验证PEDV S1基因的mRNA表达水平,SDS-PAGE、Western blotting方法验证重组PEDV S1蛋白的表达及其反应原性。结果显示,试验成功构建了重组穿梭质粒pFastBac HT A-PEDV-S1(pSL598),成功包装表达了PEDV S1的重组杆状病毒,重组杆状病毒能使sf9细胞出现细胞变大、胞内有空泡等典型病变,PEDV S1基因的mRNA获得表达,重组蛋白His-PEDV-S1在sf9细胞中得到表达,蛋白质大小为83 ku左右,主要存在于细胞沉淀中,表达的重组蛋白能与小鼠抗His抗体和猪抗PEDV阳性血清反应,说明该蛋白具有较好的反应原性。本研究为研制PEDV新流行毒株新型亚单位疫苗和防控该毒株的流行提供了材料。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(pedv) 纤突蛋白(S1) 杆状病毒表达系统 真核表达
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