期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到10篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK真核表达载体构建及在毕赤酵母中的表达 被引量：3
1
作者 何超军 邱杨玉 +2 位作者 毛芝娟 陈吉刚 吴志新 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期646-651,共6页
采用已构建的原核重组质粒pET30a-OmpK为模板,通过PCR扩增OmpK成熟肽基因片段,引入酶切位点后克隆至分泌表达载体pPIC9K,经SalⅠ线性化后,氯化锂法转化至毕赤酵母GS115中,并经G418遗传霉素筛选高拷贝酵母转化子,最后进行甲醇诱导表达,... 采用已构建的原核重组质粒pET30a-OmpK为模板,通过PCR扩增OmpK成熟肽基因片段,引入酶切位点后克隆至分泌表达载体pPIC9K,经SalⅠ线性化后,氯化锂法转化至毕赤酵母GS115中,并经G418遗传霉素筛选高拷贝酵母转化子,最后进行甲醇诱导表达,表达上清经SDS-PAGE电泳检测及Western-blot鉴定,表明重组蛋白已经表达。 展开更多
关键词 哈维氏弧菌(Vibrio harveyi) 外膜蛋白ompk 表达载体 毕赤酵母 表达
在线阅读 下载PDF
副溶血弧菌外膜蛋白ompK免疫磁珠检测方法的建立 被引量：3
2
作者 李雨辰 闻一鸣 +1 位作者 童吉宇 向军俭 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期209-214,共6页
构建重组基因克隆表达副溶血弧菌外膜蛋白ompK并制备多克隆抗体,建立副溶血弧菌的免疫磁珠富集,结合化学显色检测方法。利用生物软件Primer 5设计副溶血弧菌ompK基因的引物,通过PCR扩增出ompK基因,并将其克隆至pET28a(+)原核表达载体,... 构建重组基因克隆表达副溶血弧菌外膜蛋白ompK并制备多克隆抗体,建立副溶血弧菌的免疫磁珠富集,结合化学显色检测方法。利用生物软件Primer 5设计副溶血弧菌ompK基因的引物,通过PCR扩增出ompK基因,并将其克隆至pET28a(+)原核表达载体,转化至大肠杆菌BL21进行优化表达。镍柱纯化表达产物,免疫小鼠,制备其多克隆抗体。Western blot鉴定重组蛋白,ELISA分析其免疫原性。间接ELISA检测多抗效价及交叉性,并与protein G磁珠偶联结合显色平板检测副溶血弧菌。结果显示,成功表达ompK蛋白;免疫小鼠获得特异性抗血清,效价为1∶64 000;Western blotting证明抗血清能与副溶血弧菌28 kD处条带特异性结合。制备的免疫磁珠敏感度最高能达到104CFU/mL。成功克隆表达副溶血弧菌外膜蛋白ompK并制备副溶血弧菌特异性鼠多克隆抗体,建立的免疫磁珠检测方法与显色平板法结合较传统的二次增菌法能够节省72 h,整个过程只需要传统方法时间的1/3;相比于常用的免疫学检测方法检测灵敏度提高两个数量级。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 ompk 多克隆抗体 免疫磁珠
在线阅读 下载PDF
溶藻弧菌外膜蛋白OmpK的原核表达及多克隆抗体制备 被引量：4
3
作者 陈春琳 刘祥 俱雄 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2015年第7期7-14,共8页
【目的】构建溶藻弧菌外膜蛋白OmpK原核表达载体,优化OmpK蛋白的诱导表达条件,制备OmpK蛋白小鼠多克隆抗体。【方法】通过PCR扩增获得ompK基因,连接pET-32a质粒构建OmpK-pET32a载体,将其转化大肠杆菌BL21后进行诱导表达。利用切胶纯化获... 【目的】构建溶藻弧菌外膜蛋白OmpK原核表达载体,优化OmpK蛋白的诱导表达条件,制备OmpK蛋白小鼠多克隆抗体。【方法】通过PCR扩增获得ompK基因,连接pET-32a质粒构建OmpK-pET32a载体,将其转化大肠杆菌BL21后进行诱导表达。利用切胶纯化获得OmpK蛋白后,免疫小鼠制备OmpK蛋白多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体效价,Western-Blotting法检测抗血清特异性。通过正交试验,获得OmpK菌株的最佳诱导表达条件与培养条件。【结果】PCR扩增获得了长816bp的ompK基因;成功构建了OmpK-pET32a载体,其诱导表达产物分子质量为30ku,与预期结果一致。ELISA法获得OmpK抗血清效价达1∶1 600,Western-Blotting试验证实抗血清具有很好的特异性。OmpK菌株最佳诱导表达条件为:菌液OD600值0.8,IPTG终浓度0.3mmol/L,诱导时间8h,诱导温度32℃;最佳培养条件为:不添加葡萄糖,转速230r/min,装液量50mL。【结论】成功制备了OmpK蛋白多克隆抗体,确定了OmpK蛋白菌株的最佳诱导表达条件与培养条件。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 ompk蛋白 原核表达 多克隆抗体
在线阅读 下载PDF
拟态弧菌OmpK基因的克隆及原核表达 被引量：1
4
作者 李研东 李菲 +5 位作者 卢士英 任洪林 周玉 朱元银 宫彬彬 柳增善 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第6期52-55,共4页
克隆拟态弧菌(Vibrio mimicus)OmpK(outer membrane protein K)基因并进行相关序列的分析。根据已发表的拟态弧菌OmpK基因序列设计合成引物,以拟态弧菌CGMCC 1.1969标准株的基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得801bp片段并测序,序列已提交... 克隆拟态弧菌(Vibrio mimicus)OmpK(outer membrane protein K)基因并进行相关序列的分析。根据已发表的拟态弧菌OmpK基因序列设计合成引物,以拟态弧菌CGMCC 1.1969标准株的基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得801bp片段并测序,序列已提交至GenBank(GenBank登录号为FJ462707)。拟态弧菌OmpK序列比对结果显示,溶藻弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、河弧菌OmpK基因序列的同源性均大于78%。该基因编码1个含267个氨基酸残基的蛋白质,预测分子质量为29.6 ku。利用基因工程方法将该基因片段定向克隆至表达载体中,并在大肠杆菌中获得高效表达,表达后的OmpK蛋白分子质量约为28 ku。 展开更多
关键词 拟态弧菌 ompk基因 克隆 表达
在线阅读 下载PDF
弧菌外膜蛋白Ompk基因序列分析及其多克隆抗体的制备 被引量：4
5
作者 丁承超 谢曼曼 +1 位作者 曾海娟 刘箐 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第23期141-146,共6页
弧菌外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)OmpK不仅可激发机体的体液免疫和细胞免疫,而且可在不同血清型菌株之间产生免疫交叉反应。本研究利用克隆测序和查找Gen Bank获得20株弧菌的Ompk基因序列并构建Ompk系统进化树,对比分析20株弧... 弧菌外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)OmpK不仅可激发机体的体液免疫和细胞免疫,而且可在不同血清型菌株之间产生免疫交叉反应。本研究利用克隆测序和查找Gen Bank获得20株弧菌的Ompk基因序列并构建Ompk系统进化树,对比分析20株弧菌Ompk基因序列;利用原核表达系统表达野生株Vibrio parahaemolyticus B的OmpK,纯化OmpK后制备兔多克隆抗体;采用酶联免疫吸附分析法和蛋白质印迹法(Western-blotting)分别检测抗体效价和特异性。系统进化树和基因序列比对结果显示Ompk基因在弧菌中高度保守,核苷酸序列相似性在77%以上;原核表达系统成功表达了弧菌OmpK,蛋白经纯化后成功制备的兔多抗效价达1∶16 000;Western-blotting实验证实抗体具有很好的特异性;OmpK多克隆抗体在弧菌中普遍存在免疫交叉性。因此,弧菌Ompk基因序列分析及其抗体研制,不仅为弧菌快速免疫学检测提供可能性,也为以OmpK为靶点的水产疫苗研制奠定了基础。 展开更多
关键词 弧菌 ompk 原核表达 纯化 多克隆抗体 免疫学检测
在线阅读 下载PDF
肺炎克雷伯菌榆中分离株OmpK17基因的克隆、生物信息学分析及免疫原性研究 被引量：4
6
作者 程家海 殷娟斌 +3 位作者 白珊泽 田泽暘 庞红红 包世俊 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第5期1456-1465,共10页
试验旨在研究肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)外膜蛋白OmpK17基因序列特征及其免疫原性。参照GenBank中肺炎克雷伯菌外膜蛋白OmpK17基因序列(登录号:U52843.1)设计1对特异性引物,应用PCR技术扩增获得了肺炎克雷伯菌榆中分离株(YZ株... 试验旨在研究肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)外膜蛋白OmpK17基因序列特征及其免疫原性。参照GenBank中肺炎克雷伯菌外膜蛋白OmpK17基因序列(登录号:U52843.1)设计1对特异性引物,应用PCR技术扩增获得了肺炎克雷伯菌榆中分离株(YZ株)OmpK17基因CDS序列,应用相关软件及程序对OmpK17基因核苷酸序列及其推导的氨基酸序列进行生物信息学分析,构建其原核表达载体pET-OmpK17,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了表达。表达产物纯化后免疫新西兰兔制备多抗血清,应用ELISA和Western blotting分析了重组蛋白的免疫原性。结果显示,肺炎克雷伯菌YZ株外膜蛋白OmpK17基因高度保守,其CDS序列全长513 bp,编码170个氨基酸,与GenBank中其他肺炎克雷伯菌OmpK17基因序列同源性均高于99.6%;OmpK17蛋白分子质量约为18.5 ku,具有较强的亲水性,含有1个信号肽、1个跨膜区和6个抗原决定簇区域,是一种具有桶状三维结构的跨膜蛋白。SDS-PAGE结果显示,OmpK17基因在大肠杆菌中获得表达且表达产物主要以包涵体形式存在。ELISA及Western blotting结果表明,肺炎克雷伯菌OmpK17蛋白具有良好的免疫原性。本研究克隆和表达了肺炎克雷伯菌OmpK17基因及其编码蛋白,并证实该蛋白具有良好的免疫原性,为OmpK17基因的生物学特性研究和肺炎克雷伯菌检测方法的建立奠定了基础,为肺炎克雷伯菌基因工程疫苗的研发提供了理论依据。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 ompk17基因 克隆 生物信息学 原核表达 免疫原性
在线阅读 下载PDF
嗜水气单胞菌外膜蛋白OmpK的原核表达、抗原性分析及抗血浆杀菌作用研究 被引量：3
7
作者 荣娜 康超 +3 位作者 孙薇 简思杰 伍娜娜 刘祥 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第6期1359-1366,共8页
【目的】本文研究了淡水养殖主要病原菌嗜水气单胞菌外膜蛋白OmpK的免疫学功能,为相关疫苗开发奠定理论基础。【方法】采用生物信息学分析OmpK蛋白的理化性质、结构与功能;利用分子克隆构建OmpK蛋白表达菌株,结合L_(9)^(3~4)正交实验确... 【目的】本文研究了淡水养殖主要病原菌嗜水气单胞菌外膜蛋白OmpK的免疫学功能,为相关疫苗开发奠定理论基础。【方法】采用生物信息学分析OmpK蛋白的理化性质、结构与功能;利用分子克隆构建OmpK蛋白表达菌株,结合L_(9)^(3~4)正交实验确定其最佳诱导表达条件,通过包涵体洗涤和SDS-PAGE电泳切胶纯化OmpK蛋白;Western blot检测抗血清特异性与效价,ELISA检测OmpK蛋白抗血清对嗜水气单胞菌的体外识别;Western blot分析OmpK蛋白抵抗鱼血浆的杀菌作用。【结果】OmpK为亲水性蛋白,二级结构以无规则卷曲为主,三级结构呈桶状,在气单胞菌属间同源性较高,进化相对保守;成功构建OmpK表达菌株,并获得较高纯度的OmpK蛋白,其最佳表达条件为:诱导时菌液浓度OD_(600)=1.0,IPTG浓度为0.5 mmol/L,28℃诱导8 h;Western blot验证OmpK蛋白抗血清特异性较好,且效价达到1∶1600,ELISA显示OmpK蛋白抗血清与嗜水气单胞菌存在体外相互作用;Western blot发现OmpK蛋白可通过表达下调实现抵抗鱼血浆的杀菌作用。【结论】原核表达的OmpK蛋白,可刺激机体产生特异性抗体,与嗜水气单胞菌存在体外相互作用。此外,OmpK蛋白可有效抵抗鱼血浆对嗜水气单胞菌的杀菌作用。本研究为嗜水气单胞菌OmpK蛋白的免疫作用研究与疫苗的开发奠定基础。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 外膜蛋白ompk 多克隆抗血清 抗原性 血浆杀菌作用
在线阅读 下载PDF
哈氏弧菌特异性检测方法的建立和应用 被引量：6
8
作者 梁利国 秦国民 +2 位作者 杨家新 张晓君 阎斌伦 《水产科技情报》 北大核心 2010年第5期214-217,共4页
针对哈氏弧菌外膜蛋白OmpK的基因序列设计了一对引物,从分离自患病长鳍真鲨体内的哈氏弧菌基因组中扩增获得一段约800bp大小的基因片段。进行了PCR方法的特异性和敏感性以及海产品检测试验,建立了一种检测致病性弧菌的PCR检测方法。结... 针对哈氏弧菌外膜蛋白OmpK的基因序列设计了一对引物,从分离自患病长鳍真鲨体内的哈氏弧菌基因组中扩增获得一段约800bp大小的基因片段。进行了PCR方法的特异性和敏感性以及海产品检测试验,建立了一种检测致病性弧菌的PCR检测方法。结果表明,该法只检测出致病性哈氏弧菌。同时对不同浓度的细菌悬液扩增,结果显示,此方法对哈氏弧菌菌体DNA的最低检测量为0.139ng/μL,可以为哈氏弧菌的检测提供参考依据。 展开更多
关键词 长鳍真鲨 哈氏弧菌 ompk PCR
在线阅读 下载PDF
利用线性指数PCR-焦磷酸测序技术快速检测3种海洋弧菌 被引量：3
9
作者 杨会勇 那广水 +3 位作者 朱术会 邹秉杰 奚涛 周国华 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期460-464,共5页
目的:建立一种基于线性指数聚合酶链式反应(linear-after-the-exponential PCR,LATE-PCR)焦磷酸测序技术快速检测致病性海洋弧菌的方法。方法:首先根据海洋弧菌的16S rRNA基因和外膜蛋白K(OmpK)基因的目的片段设计引物并优化反应条件进... 目的:建立一种基于线性指数聚合酶链式反应(linear-after-the-exponential PCR,LATE-PCR)焦磷酸测序技术快速检测致病性海洋弧菌的方法。方法:首先根据海洋弧菌的16S rRNA基因和外膜蛋白K(OmpK)基因的目的片段设计引物并优化反应条件进行LATE-PCR扩增,其次利用酶促反应处理PCR产物中干扰焦磷酸测序反应的副产物,最后加入退火引物后直接进行焦磷酸测序。结果:成功进行了LATE-PCR扩增,制备出足量单链DNA模板供焦磷酸测序反应;取1~2μL的PCR产物即可获得理想的焦磷酸测序信号。测序结果与Sanger法的结果一致,测得序列与GenBank所报道的相符合。通过对16S rRNA基因片段的检测,可以确认样品是否为海洋弧菌;通过对OmpK基因目的片段的检测可以初步区分弧菌种类,对3种常见弧菌:副溶血弧菌、哈维弧菌和溶藻弧菌成功地进行了检测。结论:本方法结果准确,灵敏度高,操作简便且成本低,可快速检测大量样品,在弧菌快速检测和诊断中具有很好的应用前景。 展开更多
关键词 海洋弧菌 LATE-PCR 焦磷酸测序 16S RRNA基因 外膜蛋白K基因
在线阅读 下载PDF
基于载体减毒单增李斯特菌的弧菌疫苗菌株构建
10
作者 丁承超 陈国薇 +4 位作者 谢曼曼 郭亮 李杰 孙静娟 刘箐 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1281-1285,1290,共6页
目的:利用减毒单增李斯特菌作为疫苗载体的优势,拟构建基于载体减毒单增李斯特菌的弧菌疫苗菌株。方法:使用单增李斯特菌表达载体p ERL3过表达弧菌中共同的靶标抗原Ompk;利用PCR和RT-PCR技术分别对过表达菌株鉴定和抗原基因的检测。结果... 目的:利用减毒单增李斯特菌作为疫苗载体的优势,拟构建基于载体减毒单增李斯特菌的弧菌疫苗菌株。方法:使用单增李斯特菌表达载体p ERL3过表达弧菌中共同的靶标抗原Ompk;利用PCR和RT-PCR技术分别对过表达菌株鉴定和抗原基因的检测。结果:PCR结果显示成功构建3株Ompk过表达菌株Lm-Ompk(L-O)、Lm-Lmo0576-Ompk(L-L-O)和Lm-P-Ompk(L-P-O);测序结果显示过表达菌株中外源基因的序列与NCBI结果相似性为100%;RT-PCR结果显示Ompk基因在3株过表达菌株中的转录水平均极为显著(P<0.001);在抗生素条件下,Ompk基因在各过表达菌株中的表达水平显著高于在非抗性条件下的转录水平(P<0.05)。结论:成功构建了3株基于载体减毒单增李斯特菌的弧菌疫苗菌株,弧菌中共同的靶标抗原Ompk在3株重组菌株中均可以稳定表达。 展开更多
关键词 减毒单增李斯特菌 疫苗载体 弧菌疫苗 ompk 抗原基因
在线阅读 下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 下一页 到第 页
关于我们 | 版权声明 | 联系我们 | 帮助中心| 意见反馈
主办单位：上海市教育委员会
技术支持：重庆维普资讯有限公司
渝公网安备 50019002500403号
使用帮助 返回顶部