2023年黑龙江地区某鹅场鹅星状病毒分离鉴定及ORF2基因序列分析

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作者 徐烨 朱庆贺 +1 位作者 高旭 孙东波 《黑龙江八一农垦大学学报》 2024年第2期50-56,106,共8页

为调查2023年黑龙江地区某鹅场中鹅星状病毒(goose astrovirus,GoAstV)的感染及遗传进化情况,采集发病鹅的内脏组织样品进行RT-PCR检测,检测阳性样本通过鹅胚接种进行病毒分离,并利用RT-PCR以及电镜进行鉴定,利用二代测序技术进行分离... 为调查2023年黑龙江地区某鹅场中鹅星状病毒(goose astrovirus,GoAstV)的感染及遗传进化情况,采集发病鹅的内脏组织样品进行RT-PCR检测,检测阳性样本通过鹅胚接种进行病毒分离,并利用RT-PCR以及电镜进行鉴定,利用二代测序技术进行分离毒株的全基因组测序,运用MEGA6软件对ORF2基因进行遗传进化分析。结果显示,在15份样品中,GoAstV的阳性率为6.67%(1/15)。阳性样本处理后接种鹅胚进行病毒分离,盲传至第5代时,尿囊膜增厚,出现尿酸盐沉积,鹅胚在120 h内死亡率达到83.33%(20/24),死亡鹅胚尿囊液进行GoAstV RT-PCR检测,结果为阳性。电镜观察结果显示,可观察到30 nm左右的病毒粒子。提取第5代病毒尿囊液RNA进行全基因组测序,并对该毒株ORF2基因进行同源性分析和系统发育进化树分析,结果显示,鉴定的毒株与其他GoAstV的ORF2基因核苷酸同源性为54.7%到96.6%,与GoAstV LYG2株的核苷酸同源性最高,为96.6%,而其与GoAstV FLX株差异较大,为54.7%。系统发育进化树结果显示,试验鉴定的毒株属于GoAstV G2型,与火鸡星状病毒遗传关系较近。研究对黑龙江地区某鹅场GoAstV进行分离鉴定并对ORF2基因进行序列分析,为黑龙江省GoAstV遗传进化及其分子流行病学调查研究提供了基础数据。 展开更多

关键词 GoAstV RT-PCR orf2基因 分离鉴定 序列分析

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1型鹅星状病毒ORF2蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定 被引量：10

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作者 刘莉 顾玲玲 +3 位作者 张硕 谢军 朱善元 王安平 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第1期368-374,共7页

【目的】利用原核表达系统表达1型鹅星状病毒(Goose astrovirus 1,GAstV-1)结构蛋白ORF2,并制备其多克隆抗体。【方法】根据GAstV-1 TZ03株基因序列,对ORF2基因序列进行大肠杆菌密码子偏爱性优化和合成,将其克隆至原核表达载体pET-30a(... 【目的】利用原核表达系统表达1型鹅星状病毒(Goose astrovirus 1,GAstV-1)结构蛋白ORF2,并制备其多克隆抗体。【方法】根据GAstV-1 TZ03株基因序列,对ORF2基因序列进行大肠杆菌密码子偏爱性优化和合成,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-ORF2,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达重组蛋白,通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白;将鉴定正确的重组蛋白纯化后免疫家兔制备多克隆抗体,以间接免疫荧光试验鉴定多克隆抗体的特异性。【结果】酶切和测序结果显示,成功获得重组质粒pET-ORF2;SDS-PAGE结果显示,表达的重组蛋白分子质量约为70 ku,主要以包涵体形式存在;Western blotting结果表明,该蛋白能与抗His标签鼠单克隆抗体发生特异性反应。间接ELISA检测制备的兔抗ORF2蛋白多克隆抗体效价达1∶128000;间接免疫荧光试验结果显示,制备的多克隆抗体能与GAstV-1发生特异性反应。【结论】原核表达的GAstV-1 ORF2重组蛋白具有良好的免疫原性,制备的兔源多克隆抗体具有较高的效价和特异性,为研制GAstV-1相关诊断试剂奠定了基础。 展开更多

关键词 1型鹅星状病毒(GAstV-1) orf2基因 原核表达 多克隆抗体

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猪圆环病毒II型ORF2基因的克隆及序列分析 被引量：6

3

作者 王忠田 杨汉春 吕艳丽 《动物医学进展》 CSCD 2003年第1期84-87,共4页

参照已发表的猪圆环病毒II型(Porcinecircovirustype2,PCV2)基因序列,设计合成了一对引物,对PCV2北京株(Shy)ORF2基因进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳分析,呈现一条约720bp的特异条带,将其回收后克隆入pGEM-TEasy载体中,并进行序列测... 参照已发表的猪圆环病毒II型(Porcinecircovirustype2,PCV2)基因序列,设计合成了一对引物,对PCV2北京株(Shy)ORF2基因进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳分析,呈现一条约720bp的特异条带,将其回收后克隆入pGEM-TEasy载体中,并进行序列测定,与加拿大PCV2株(基因序列号AF027217)ORF2基因比较发现,核苷酸的同源性达99.3%,氨基酸的同源性为98.3%,证实为PCV2-ORF2基因。 展开更多

关键词 猪圆环病毒 Ⅱ型orf2基因 基因克隆 序列分析

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猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒福州株ORF2-7基因结构分析 被引量：7

4

作者 魏宏 林锋强 +2 位作者 周伦江 王隆柏 庄向生 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第1期82-85,共4页

用RT-PCR方法分段扩增出猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒(PRRSV)FZ株的5条cDNA片段,分别克隆到pMD-18T载体并进行测序,按顺序将这些序列进行拼接得到FZ株ORF2-7编码框序列,测序结果表明该序列长度为3272bp,与BJ-4株、VR-2332株、CH-1a株和... 用RT-PCR方法分段扩增出猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒(PRRSV)FZ株的5条cDNA片段,分别克隆到pMD-18T载体并进行测序,按顺序将这些序列进行拼接得到FZ株ORF2-7编码框序列,测序结果表明该序列长度为3272bp,与BJ-4株、VR-2332株、CH-1a株和HB-1株核苷酸同源性分别为99.1%、98.9%、93.2%和93.2%。 展开更多

关键词 PRRSV orf2—7基因 克隆 序列分析

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两株猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆和序列分析 被引量：4

5

作者 何逸民 罗玉均 +5 位作者 潘全会 吴翠花 曹宗喜 孔留五 李少方 张桂红 《动物医学进展》 CSCD 2007年第11期4-7,共4页

根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计一对引物,从分离的PCV-2GZ株、HN株的细胞培养物中扩增出ORF2基因(702bp)。将此基因片段克隆入pMD18-T载体,筛选获得重组质粒pMD-ORF2,并对其测序。结果表明,所克隆的ORF2基因与其他... 根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计一对引物,从分离的PCV-2GZ株、HN株的细胞培养物中扩增出ORF2基因(702bp)。将此基因片段克隆入pMD18-T载体,筛选获得重组质粒pMD-ORF2,并对其测序。结果表明,所克隆的ORF2基因与其他PCV-2的ORF2基因核苷酸序列同源性在90.6%～99.6%之间,推导的氨基酸序列同源性在88.9%～98.7%之间。 展开更多

关键词 圆环病毒2型 orf2 序列分析

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共表达猪IFN-γ基因对PPV VP2-PCV ORF2真核质粒的分子免疫佐剂效应研究 被引量：2

6

作者 陈燕凌 徐志文 +3 位作者 郭万柱 朱玲 徐凯 唐玉香 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1274-1280,共7页

将干扰素-γ、猪圆环病毒Ⅱ型ORF2主要抗原表位(47-85位AA)和猪细小病毒VP2基因克隆至pCI-neo真核载体中,构建重组质粒pCI-IFN-γ.ORF2.VP2。用脂质体介导法将其转染到MDBK细胞中,利用RT-PCR和间接免疫荧光法检测产物的表达情况。将重... 将干扰素-γ、猪圆环病毒Ⅱ型ORF2主要抗原表位(47-85位AA)和猪细小病毒VP2基因克隆至pCI-neo真核载体中,构建重组质粒pCI-IFN-γ.ORF2.VP2。用脂质体介导法将其转染到MDBK细胞中,利用RT-PCR和间接免疫荧光法检测产物的表达情况。将重组质粒pCI-IFN-γ.ORF2.VP2、pCI-ORF2.VP2、对照质粒pCI-neo、PBS、猪细小病毒灭活苗和猪圆环病毒亚单位疫苗通过肌肉注射免疫小鼠,检测小鼠不同时期的淋巴细胞转化功能、T淋巴细胞亚群动态变化情况以及PPV、PCV2抗体水平。试验结果显示,在转染重组质粒的MDBK细胞中能扩增到ORF2-VP2和IFN-γ基因;转染后48h用间接免疫荧光法能在荧光显微镜下观察到绿色荧光,检测到特异性蛋白的表达。pCI-IFN-γ.ORF2.VP2免疫组从第7天开始脾淋巴细胞对ConA有明显反应,显著高于对照组和PCI-ORF2.VP2免疫组;CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞的数量高于或显著高于对照组和pCI-ORF2.VP2免疫组;在免疫后第14天检测到PPV PCV抗体。结果表明,pCI-IFN-γ.ORF2.VP2能够有效诱导机体产生细胞免疫和体液免疫。 展开更多

关键词 猪细小病毒 VP2基因 猪圆环病毒 orf2基因 IFN-Γ基因

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猪圆环病毒2型广东分离株ORF2基因的克隆和序列分析 被引量：3

7

作者 沈海燕 刘志成 +3 位作者 郭慧霞 周恒 朱余军 张春红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第10期12-16,共5页

为了解广东部分地区猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2,PCV2）流行毒株的基因型和遗传变异情况,本研究根据GenBank中PCV2的核苷酸序列设计针对ORF2基因的1对特异性引物,从分离于广东省的8株PCV2分离株BL、HD、Li、GD01、GD02、H... 为了解广东部分地区猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2,PCV2）流行毒株的基因型和遗传变异情况,本研究根据GenBank中PCV2的核苷酸序列设计针对ORF2基因的1对特异性引物,从分离于广东省的8株PCV2分离株BL、HD、Li、GD01、GD02、HD01、HD02和HD03株的细胞培养物中扩增ORF2基因,扩增片段克隆到pMD18-T上,获得重组质粒,并对其进行测序。序列分析结果表明,8株PCV2分离株ORF2基因与其他PCV2 ORF2基因核苷酸序列同源性为89.7%~100%,氨基酸序列同源性为87.2%~99.6%,进化分析结果表明,其中7株分离株处于同一分支,属于PCV2b-1A/1B,HD01株属于PCV2b-1C。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 orf2基因 序列分析

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猪源戊型肝炎病毒ORF2部分基因的原核表达及其鉴定 被引量：2

8

作者 欧阳昀 张亮权 +5 位作者 刘志刚 齐海涛 徐廷川 张民泽 张超逸 张桂红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第6期86-89,共4页

本试验旨在表达猪源戊型肝炎病毒(sHEV)ORF2部分基因片段,纯化表达产物并进行抗原性分析。以sHEV的cDNA为模板,PCR扩增ORF2基因片段,构建重组质粒pET32a-dORF2,转化表达菌BL21,IPTG诱导,SDS-PAGE凝胶电泳和Western blotting进行检测。... 本试验旨在表达猪源戊型肝炎病毒(sHEV)ORF2部分基因片段,纯化表达产物并进行抗原性分析。以sHEV的cDNA为模板,PCR扩增ORF2基因片段,构建重组质粒pET32a-dORF2,转化表达菌BL21,IPTG诱导,SDS-PAGE凝胶电泳和Western blotting进行检测。试验结果表明,获得60ku的目的蛋白,该蛋白具有良好的抗原性,主要以可溶性形式存在。 展开更多

关键词 戊型肝炎病毒 orf2基因 重组质粒 原核表达

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PCV2·ORF2基因片段在大肠杆菌中的表达与纯化 被引量：2

9

作者 王宪文 谢青梅 +2 位作者 曹永长 于康震 毕英佐 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第23期7117-7118,7121,共3页

[目的]为了研究PCV2-ORF2基因片段在大肠杆菌中的表达与纯化。[方法]用PCR方法扩增PCV2 ORF2基因3′端片段,PCR产物经酶切后与经同样处理过的pET32a质粒连接,构建重组质粒。重组质粒经PCR和酶切鉴定并测序后,转化BL21感受态细胞;重组菌... [目的]为了研究PCV2-ORF2基因片段在大肠杆菌中的表达与纯化。[方法]用PCR方法扩增PCV2 ORF2基因3′端片段,PCR产物经酶切后与经同样处理过的pET32a质粒连接,构建重组质粒。重组质粒经PCR和酶切鉴定并测序后,转化BL21感受态细胞;重组菌液用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。[结果]ORF2基因在大肠杆菌中正确表达,表达的融合蛋白的分子量约为33 ku;在37℃、1 mmol/L浓度下,诱导时间为6 h时表达量最大,占细菌总蛋白的23.62%。表达产物主要以包涵体的形式存在,将包涵体溶解后过Ni-NTA柱纯化可得到较为纯净的目的蛋白。[结论]该研究为猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)和猪皮炎和肾病综合征(PDNS)等疾病的防治奠定了基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒Ⅱ型 orf2 表达

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猪圆环病毒2型ORF2基因的定点突变及其真核表达载体的构建 被引量：2

10

作者 张艳萍 苏丹萍 贺东生 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第2期99-103,共5页

根据GenBank发表的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列设计并合成引物,采用重叠延伸PCR(splice overlap extension PCR,SOE-PCR)定点诱变技术对ORF2基因进行定点突变。DNA测序结果表明,ORF2基因片段的372—378 bp处的碱基由TCTAGAT突变为A... 根据GenBank发表的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列设计并合成引物,采用重叠延伸PCR(splice overlap extension PCR,SOE-PCR)定点诱变技术对ORF2基因进行定点突变。DNA测序结果表明,ORF2基因片段的372—378 bp处的碱基由TCTAGAT突变为ATTGGAT,从而破坏酶切位点XbaⅠ,成功获得ORF2的突变基因片段。进而将其连接到腺病毒真核表达载体pAD5-Blue中,成功构建真核表达载体,并获得PCV2的Cap蛋白表达产物,为PCV2新型疫苗研究奠定了重要基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 orf2基因 重叠延伸PCR pAD5-Blue CAP蛋白

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猪圆环病毒2型DY株ORF2基因在Sf9昆虫细胞中的表达 被引量：1

11

作者 王文秀 沈志强 +3 位作者 王善辉 张松林 池贤凤 夏小静 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期53-57,共5页

本试验采用PCR方法扩增出完整的PCV2 ORF2基因,并将其克隆到Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的转移载体pFastBac1TM中,获得重组转移载体pFast-ORF2,再将其转化DH10Bac感受态细胞,发生转座反应,通过抗性及蓝白斑筛选获得含有ORF2基因的重组杆... 本试验采用PCR方法扩增出完整的PCV2 ORF2基因,并将其克隆到Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的转移载体pFastBac1TM中,获得重组转移载体pFast-ORF2,再将其转化DH10Bac感受态细胞,发生转座反应,通过抗性及蓝白斑筛选获得含有ORF2基因的重组杆粒,通过Cellfectin转染试剂介导将重组杆粒DNA转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。用该重组杆状病毒感染Sf9昆虫细胞,并通过间接免疫荧光法和Western blotting检测目的蛋白的表达。结果表明,ORF2基因在昆虫细胞中获得表达,表达的蛋白质可被PCV2阳性血清识别,这为进一步研究PCV2亚单位疫苗及诊断抗原奠定了基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 orf2基因 Sf9昆虫细胞 表达

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PCV-2 ORF2基因的真核表达及其体内分布和安全性检测 被引量：1

12

作者 谢丽基 谢芝勋 +4 位作者 唐小飞 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 《动物医学进展》 CSCD 2008年第4期18-21,共4页

根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计了1对引物,应用PCR从广西PCV-2的DNA扩增出ORF2基因,将ORF2基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)载体上,获得重组质粒,经PCR酶切以及序列分析鉴定,表明插入的片段为ORF2目的基因,插入... 根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计了1对引物,应用PCR从广西PCV-2的DNA扩增出ORF2基因,将ORF2基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)载体上,获得重组质粒,经PCR酶切以及序列分析鉴定,表明插入的片段为ORF2目的基因,插入的位置、大小和阅码框均正确,成功构建了真核表达载体重组质粒pcDNA-PCV-ORF2。对阳性真核表达质粒pcDNA-PCV-ORF2大量抽提后,以每只小鼠0.2 mg免疫5周龄左右的雌性小鼠,然后用ELISA检测免疫小鼠血清中抗体的产生情况,同时进行pcDNA-PCV-ORF2的体内分布和安全性检测。结果表明,pcDNA-PCV-ORF2在小鼠体内广泛存在,产生了抗猪圆环病毒的特异性抗体,从第7天开始产生抗体,第28天抗体水平达到最高,抗体可维持7周以上,并具有良好的安全性。本研究通过对小鼠的免疫试验,产生了猪圆环病毒的特异性抗体,表明成功构建了能够在活体细胞中高效表达的真核表达载体,为进一步研究猪圆环病毒DNA疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 orf2基因 PCDNA3.1(+) 免疫保护

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2株猪圆环病毒ORF2基因的克隆测序 被引量：1

13

作者 张晋川 《动物医学进展》 CSCD 2006年第6期81-83,共3页

对分离到的2株猪圆环病毒PCV-2型的ORF2基因进行了扩增,将获得的PCR产物分别与T载体连接,获得了2个毒株的ORF2基因阳性克隆。序列分析表明,这2个分离株与其他中国分离株同源性高达99%以上,同处于一个基因簇,但和中国BF分离株同源性却只... 对分离到的2株猪圆环病毒PCV-2型的ORF2基因进行了扩增,将获得的PCR产物分别与T载体连接,获得了2个毒株的ORF2基因阳性克隆。序列分析表明,这2个分离株与其他中国分离株同源性高达99%以上,同处于一个基因簇,但和中国BF分离株同源性却只有92.3%。而荷兰分离的NL-PMWS-2株与中国分离株的同源性却在99%以上,表明中国流行的PCV-2和国外分离株有密切关系。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 orf2基因 克隆 序列分析

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PCV-2新疆南疆株ORF2基因序列分析

14

作者 刘永宏 赵丽 +1 位作者 焦海宏 廖秋萍 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期172-179,177-179,共8页

【目的】明确新疆南疆地区养殖猪群中是否存在PCV-2感染及感染的PCV-2 ORF2基因特征。【方法】根据Gen Bank登录的PCV-2基因序列,设计合成1对引物,针对新疆南疆地区疑似PCV-2感染病例进行ORF2基因PCR扩增、电泳分析、胶回收、测序及序... 【目的】明确新疆南疆地区养殖猪群中是否存在PCV-2感染及感染的PCV-2 ORF2基因特征。【方法】根据Gen Bank登录的PCV-2基因序列,设计合成1对引物,针对新疆南疆地区疑似PCV-2感染病例进行ORF2基因PCR扩增、电泳分析、胶回收、测序及序列分析。【结果】PCV-2-XJ株ORF2基因长为702 bp,编码233个氨基酸,与国内外参考毒株核苷酸同源性为89.7%~96.6%,与国内外参考毒株氨基酸同源性为87.6%~95.7%,与中国大多数毒株在一个进化分支内,氨基酸序列一些区域或位点发生了变异。【结论】新疆南疆存在猪感染PCV-2,PCV-2-XJ株ORF2基因序列与中国目前存在的多数毒株相近。 展开更多

关键词 猪圆环病毒感染 orf2基因 序列分析

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HBV S/HEV ORF2融合基因对番茄的遗传转化 被引量：2

15

作者 果洪宇 于源华 张振民 《长春理工大学学报（自然科学版）》 2007年第4期76-79,共4页

应用重组PCR技术将乙肝病毒(HBV)S基因连接在戊肝病毒(HEV)ORF2部分序列的5′端,二者通过柔性肽(Gly4Ser)2序列相连,构建成融合基因BE。将融合基因BE克隆到植物双元表达载体pBin438上,获得pBin438BE,然后用冻融法将其转入根癌农杆菌EHA... 应用重组PCR技术将乙肝病毒(HBV)S基因连接在戊肝病毒(HEV)ORF2部分序列的5′端,二者通过柔性肽(Gly4Ser)2序列相连,构建成融合基因BE。将融合基因BE克隆到植物双元表达载体pBin438上,获得pBin438BE,然后用冻融法将其转入根癌农杆菌EHA105中,侵染丽春番茄子叶和下胚轴,经预培养、共培养、筛选培养、生根培养获得了5株抗卡那霉素的番茄植株。提取抗性植株基因组DNA,进行PCR及PCR-Southern检测,4株获得阳性信号。初步表明目的基因已整合到了番茄基因组中。 展开更多

关键词 乙肝病毒S基因 戊肝病毒orf2 融合基因 农杆菌 转基因番茄

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猪圆环病毒Ⅱ型ZZ株ORF2基因的扩增、测序与序列分析

16

作者 王岩 王新卫 +2 位作者 侯春彬 张春霞 李文刚 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第27期8444-8446,共3页

扩增PCV-2 ZZ毒株ORF2基因,并进行序列分析和同源比较。根据GenBank中PCV-2毒株基因序列设计1对特异性引物,对郑州分离株（ZZ）猪圆环病毒PCV-2型的ORF2基因进行了扩增。测序后,将所测序列与已公布的PCV-2 ORF2序列进行同源性比较,并绘... 扩增PCV-2 ZZ毒株ORF2基因,并进行序列分析和同源比较。根据GenBank中PCV-2毒株基因序列设计1对特异性引物,对郑州分离株（ZZ）猪圆环病毒PCV-2型的ORF2基因进行了扩增。测序后,将所测序列与已公布的PCV-2 ORF2序列进行同源性比较,并绘制系统发育进化树。通过扩增可获得702 bp的PCV-2 ORF2全基因,编码234个氨基酸,分子量27 995.93 D。所有毒株间的ORF2基因核苷酸同源性与氨基酸同源性均为89.2%-100%;ZZ株与HZ0201分离株的ORF2基因的核苷酸序列同源性较近（98.3%）,而与hk102同源性较远（92.0%）。进化树分析表明,各分离毒株在进化上地理位置的相关性不明显。该研究对圆环病毒的流行病学和疫苗研究及其抗原的变异都具有重要参考价值。 展开更多

关键词 猪Ⅱ型圆环病毒 orf2基因 序列分析

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应用农杆菌介导法获得转大麦黄矮病毒GPV株系复制酶基因ORF2小麦植株

17

作者 张文蔚 刘太国 +1 位作者 肖红 成卓敏 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期67-71,共5页

以生产用5种基因型小麦为材料,利用农杆菌介导法将大麦黄矮病毒GPV株系复制酶基因ORF2转化愈龄40d的幼胚愈伤组织,经过G418筛选后,共再生出9株抗性植株,拓宽了小麦农杆菌转化的受体基因型。PCR及Southern杂交分析证实大麦黄矮病毒复制... 以生产用5种基因型小麦为材料,利用农杆菌介导法将大麦黄矮病毒GPV株系复制酶基因ORF2转化愈龄40d的幼胚愈伤组织,经过G418筛选后,共再生出9株抗性植株,拓宽了小麦农杆菌转化的受体基因型。PCR及Southern杂交分析证实大麦黄矮病毒复制酶基因ORF2已经整合到小麦基因组中。初步抗病性检测结果显示转基因植株对GPV株系具有抗性。研究结果还表明,受体基因型、外植体的生理状态对农杆菌侵染起着至关重要的作用。 展开更多

关键词 小麦 农杆菌转化 BYDV GPV株系复制酶基因 OR砣

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猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及反应原性分析 被引量：5

18

作者 欧云文 马小元 +3 位作者 王俊 丁耀忠 张永光 张杰 《动物医学进展》 北大核心 2017年第4期1-6,共6页

研究猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的抗原性,为开发PCV2的检测方法奠定基础。以PCV2CAU0673毒株的DNA为模板,扩增获得702bp的目的片段,扩增产物克隆入pET30a(+)原核表达载体,构建pET30a-PCV2-ORF2重组质粒,转入大肠埃希菌BL21(DE3);在37℃... 研究猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的抗原性,为开发PCV2的检测方法奠定基础。以PCV2CAU0673毒株的DNA为模板,扩增获得702bp的目的片段,扩增产物克隆入pET30a(+)原核表达载体,构建pET30a-PCV2-ORF2重组质粒,转入大肠埃希菌BL21(DE3);在37℃以1mmol/L IPTG诱导表达6h;采用Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组蛋白,并用不同浓度的尿素对纯化蛋白进行复性。SDSPAGE分析表明,该ORF2编码基因在大肠埃希菌中得到表达,蛋白大小约为34ku;Western blot检测结果表明,该重组Cap蛋白与PCV2阳性血清发生特异性反应,与NA-PRRSV和PPV1血清不发生交叉反应。成功构建了PCV2-ORF2原核表达载体,实现了在大肠埃希菌中的表达,纯化后的复性蛋白具有较好的反应原性,为猪圆环病毒2型检测方法建立或试剂盒的开发奠定了基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 orf2基因 原核表达 反应原性

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我国部分地区新型鹅星状病毒ORF2基因序列及遗传变异分析 被引量：4

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作者 张思远 卢秀娴 +2 位作者 梁昭平 林举攀 黄芬 《中国动物检疫》 CAS 2021年第6期1-5,共5页

为掌握我国新型鹅星状病毒(goose astroviruses,GoAstV)的遗传变异方向,对2019年从我国不同地区发病鹅病料中分离到的10株新型GoAstV,采用PT-PCR技术扩增其ORF2基因,然后进行测序和遗传进化分析。结果显示:分离毒株ORF2基因全长2115 bp... 为掌握我国新型鹅星状病毒(goose astroviruses,GoAstV)的遗传变异方向,对2019年从我国不同地区发病鹅病料中分离到的10株新型GoAstV,采用PT-PCR技术扩增其ORF2基因,然后进行测序和遗传进化分析。结果显示:分离毒株ORF2基因全长2115 bp,编码705个氨基酸;毒株间核苷酸和氨基酸同源性分别为96.2%~99.9%和96.3%~99.9%;分离毒株与参考毒株Goose/SDPY/1116/17亲缘关系最近,处于同一分支。将分离毒株ORF2氨基酸序列与参考毒株进行比较后发现,该基因编码的衣壳蛋白氨基酸序列有多处位点存在差异,表明当前我国GoAstV流行毒株已发生变异。本研究为后续新型GoAstV的分子生物学特性研究及其疫苗研制提供了参考。 展开更多

关键词 新型鹅星状病毒 orf2基因 克隆 序列分析

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兰州地方分离PCV毒株ORF2阅读框的测序分析与原核表达鉴定 被引量：1

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作者 傅昱 郝晓芳 +3 位作者 卢曾军 孙普 胡永浩 刘在新 《湖南农业科学》 2010年第4期23-27,共5页

根据GenBank中发表的PCV1和PCV2的ORF2基因序列,设计合成了一对共用引物,用PCR的方法从兰州本地病料中分离出毒株,通过PK-15的增殖,扩增出ORF2序列,测序分析后发现分离毒株序列与PCV1的ORF2序列同源性达到99.1%～99.4%。根据GenBank中P... 根据GenBank中发表的PCV1和PCV2的ORF2基因序列,设计合成了一对共用引物,用PCR的方法从兰州本地病料中分离出毒株,通过PK-15的增殖,扩增出ORF2序列,测序分析后发现分离毒株序列与PCV1的ORF2序列同源性达到99.1%～99.4%。根据GenBank中PCV2的ORF2序列对目的序列进行了改造、优化和合成后,目的序列和pET-32a载体连接,转化BL21(DE3)细胞后,挑取阳性克隆。对鉴定后的融合质粒用IPTG诱导,裂解液经过SDS-PAGE分析、纯化操作和Western-Bloting分析,表明改造合成ORF2序列在大肠杆菌中得到了表达,并能被PCV2阳性血清所识别。 展开更多

关键词 PCV 分离鉴定 orf2基因优化 克隆 表达

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