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猪圆环病毒2型ORF2基因片段的克隆与原核表达 被引量:7
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作者 祁艳华 王爱萍 +4 位作者 李学伍 游雷鸣 史平玲 胡峰 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第3期112-115,共4页
为在原核表达系统中表达猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因片段,提取感染PCV2的细胞基因组DNA,PCR扩增ORF2基因片段并克隆至pMD-18T载体上,经PCR、酶切及测序鉴定后,将该基因重组至pET-28a原核表达载体,构建了表达载体pET-28a-ORF2。该重组... 为在原核表达系统中表达猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因片段,提取感染PCV2的细胞基因组DNA,PCR扩增ORF2基因片段并克隆至pMD-18T载体上,经PCR、酶切及测序鉴定后,将该基因重组至pET-28a原核表达载体,构建了表达载体pET-28a-ORF2。该重组质粒在大肠杆菌BL21中经1mmol/LIPTG于37℃诱导5h得到最佳表达。表达重组蛋白的分子量为26.0kD,以包涵体形式存在。Western-Blot分析表明,该重组蛋白与PCV2阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 orf2基因 克隆 原核表达
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猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达 被引量:9
2
作者 郭春艳 葛俊伟 李一经 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期79-84,共6页
猪圆环病毒是引起猪多系统衰竭综合征的重要病原,全病毒培养十分困难,避开培养病毒,得到大量的检测抗原,对诊断本病有着重要的意义。本研究对疑似猪圆环病毒2型感染猪脾脏提取病毒DNA,进行套式PCR扩增获得了猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基... 猪圆环病毒是引起猪多系统衰竭综合征的重要病原,全病毒培养十分困难,避开培养病毒,得到大量的检测抗原,对诊断本病有着重要的意义。本研究对疑似猪圆环病毒2型感染猪脾脏提取病毒DNA,进行套式PCR扩增获得了猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列,并将扩增片段定向插入质粒载体pPRO-HTb,转化BL21大肠杆菌后,构建了表达猪圆环病毒2型ORF2蛋白的重组原核表达系统。经IPTG诱导,对表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析,表明ORF2基因在大肠杆菌中得到了表达,表达产物以包涵体形式存在于菌体中,通过提取包涵体,获得了初步纯化的ORF2蛋白,为进一步利用PCV2ORF2蛋白抗原进行PCV血清学检测提供了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 orf2基因 克隆 表达
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1型鹅星状病毒ORF2蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定 被引量:10
3
作者 刘莉 顾玲玲 +3 位作者 张硕 谢军 朱善元 王安平 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第1期368-374,共7页
【目的】利用原核表达系统表达1型鹅星状病毒(Goose astrovirus 1,GAstV-1)结构蛋白ORF2,并制备其多克隆抗体。【方法】根据GAstV-1 TZ03株基因序列,对ORF2基因序列进行大肠杆菌密码子偏爱性优化和合成,将其克隆至原核表达载体pET-30a(... 【目的】利用原核表达系统表达1型鹅星状病毒(Goose astrovirus 1,GAstV-1)结构蛋白ORF2,并制备其多克隆抗体。【方法】根据GAstV-1 TZ03株基因序列,对ORF2基因序列进行大肠杆菌密码子偏爱性优化和合成,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-ORF2,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达重组蛋白,通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白;将鉴定正确的重组蛋白纯化后免疫家兔制备多克隆抗体,以间接免疫荧光试验鉴定多克隆抗体的特异性。【结果】酶切和测序结果显示,成功获得重组质粒pET-ORF2;SDS-PAGE结果显示,表达的重组蛋白分子质量约为70 ku,主要以包涵体形式存在;Western blotting结果表明,该蛋白能与抗His标签鼠单克隆抗体发生特异性反应。间接ELISA检测制备的兔抗ORF2蛋白多克隆抗体效价达1∶128000;间接免疫荧光试验结果显示,制备的多克隆抗体能与GAstV-1发生特异性反应。【结论】原核表达的GAstV-1 ORF2重组蛋白具有良好的免疫原性,制备的兔源多克隆抗体具有较高的效价和特异性,为研制GAstV-1相关诊断试剂奠定了基础。 展开更多
关键词 1型鹅星状病毒(GAstV-1) orf2基因 原核表达 多克隆抗体
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猪星状病毒ORF2基因的克隆及序列分析 被引量:5
4
作者 兰家暖 刘磊 +5 位作者 郭旋 刘欢 卢冰霞 张民秀 廖承球 黄伟坚 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2012年第12期27-31,I0001,共6页
参考GenBank上发表的猪星状病毒亚基因组序列,设计1对引物,对猪星状病毒广西流行株衣壳蛋白ORF2基因进行扩增,最终克隆得到PAstV/NNJG7株的衣壳蛋白完整序列。序列分析发现,其ORF2全长2 358bp,编码786个氨基酸;与猪星状病毒Ⅰ型参考株... 参考GenBank上发表的猪星状病毒亚基因组序列,设计1对引物,对猪星状病毒广西流行株衣壳蛋白ORF2基因进行扩增,最终克隆得到PAstV/NNJG7株的衣壳蛋白完整序列。序列分析发现,其ORF2全长2 358bp,编码786个氨基酸;与猪星状病毒Ⅰ型参考株核苷酸同源性最高,为77.3%~79.4%;在ORF1b和ORF2连接处有一段高度保守的序列,在ORF2 3′端有一段长83bp非翻译序列及一个含43bp高度保守的茎环样基序。本试验不仅丰富了猪星状病毒衣壳蛋白基因序列,也为基因疫苗和诊断试剂盒的研制提供材料及理论依据。 展开更多
关键词 猪星状病毒 orf2基因 基因克隆 序列分析
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猪圆环病毒2型GD株ORF2基因的序列分析 被引量:3
5
作者 宋长绪 赵亚华 +2 位作者 蒋智勇 王贵平 高向阳 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2005年第8期6-9,共4页
根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列,设计一对引物,应用PCR从本室鉴定分离的PCV2GD株的细胞培养物中扩增出ORF2基因(702bp)。将此基因片段克隆入pMD18-T载体,筛选获得重组质粒pMD-ORF2并对其测序,结果表明所克隆的ORF2基因... 根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列,设计一对引物,应用PCR从本室鉴定分离的PCV2GD株的细胞培养物中扩增出ORF2基因(702bp)。将此基因片段克隆入pMD18-T载体,筛选获得重组质粒pMD-ORF2并对其测序,结果表明所克隆的ORF2基因与其他PCV2的ORF2基因核苷酸序列同源性在92.1%~99.9%之间,推导的氨基酸序列同源性在90.2%~99.5%之间。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型(PCV2) orf2基因 序列分析 猪圆环病毒2型 GD GENBANK 序列同源性 基区 基因序列 PCV2
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河北地区猪圆环病毒二型ORF2基因片段的克隆与原核表达 被引量:4
6
作者 张秀珊 曹洪战 +3 位作者 张丽青 刘涛 陈赛娟 孙继国 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第4期51-54,共4页
以PCV2 PK-15细胞毒提取的DNA为模板,用PCR扩增PCV2ORF2基因的后部约600 bp片段;对PCR产物回收纯化后与载体pMD19-T进行连接、转化,经酶切和序列分析后亚克隆到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-32a-ORF2,转入大肠埃希氏菌BL2... 以PCV2 PK-15细胞毒提取的DNA为模板,用PCR扩增PCV2ORF2基因的后部约600 bp片段;对PCR产物回收纯化后与载体pMD19-T进行连接、转化,经酶切和序列分析后亚克隆到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-32a-ORF2,转入大肠埃希氏菌BL21(DE3)中,以IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE电泳和Western-Blotting分析。结果表明,重组表达质粒在大肠中所表达的融合蛋白相对分子量为40 kDa,Western-blotting分析表明该蛋白具有PCV2抗原性。 展开更多
关键词 猪圆环病毒二型 orf2基因片段 克隆 原核表达
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猪戊型肝炎病毒swCH-GS189株ORF2基因的克隆及序列分析 被引量:4
7
作者 郝宝成 兰喜 +1 位作者 柳纪省 胡永浩 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期122-126,共5页
为进行猪戊型肝炎病毒(HEV)ORF2基因特征研究,参照GenBank中已发表的戊型肝炎病毒(HEV)核酸序列,设计了一对扩增HEVORF2基因的引物,利用RT-PCR等方法克隆出了一株猪戊型肝炎病毒甘肃分离株GS189的ORF2基因cDNA片段。序列测定结果表明,sw... 为进行猪戊型肝炎病毒(HEV)ORF2基因特征研究,参照GenBank中已发表的戊型肝炎病毒(HEV)核酸序列,设计了一对扩增HEVORF2基因的引物,利用RT-PCR等方法克隆出了一株猪戊型肝炎病毒甘肃分离株GS189的ORF2基因cDNA片段。序列测定结果表明,swCH-GS189株的ORF2基因长2 025 bp,编码674个氨基酸,与GenBank中公布的其它毒株间的核苷酸序列同源性为79.1%~91.8%,推导的氨基酸序列同源性为89.5%~98.8%。系统发育进化树结果表明,该分离株为基因Ⅳ型。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 orf2基因 克隆 序列分析
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白介素2基因与猪圆环病毒2型ORF2基因真核双表达质粒的构建 被引量:3
8
作者 潘群兴 何孔旺 +2 位作者 温立斌 郭容利 黄克和 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期100-104,共5页
应用基因重组技术,构建猪圆环病毒2型ORF2基因与白介素2基因(IL-2)的真核双表达载体并将其转染CHO细胞,通过RT-PCR、间接ELISA、Western-blot、间接免疫荧光检测(IFA)等方法验证基因的表达情况。结果表明:成功构建了猪圆环病毒2型ORF2... 应用基因重组技术,构建猪圆环病毒2型ORF2基因与白介素2基因(IL-2)的真核双表达载体并将其转染CHO细胞,通过RT-PCR、间接ELISA、Western-blot、间接免疫荧光检测(IFA)等方法验证基因的表达情况。结果表明:成功构建了猪圆环病毒2型ORF2基因和IL-2基因的真核双表达质粒pIRES-ORF2-IL-2,该质粒可在体外同时表达ORF2和IL-2。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 orf2基因 IL-2基因 DNA疫苗
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猪圆环病毒II型ORF2基因的克隆及序列分析 被引量:6
9
作者 王忠田 杨汉春 吕艳丽 《动物医学进展》 CSCD 2003年第1期84-87,共4页
参照已发表的猪圆环病毒II型(Porcinecircovirustype2,PCV2)基因序列,设计合成了一对引物,对PCV2北京株(Shy)ORF2基因进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳分析,呈现一条约720bp的特异条带,将其回收后克隆入pGEM-TEasy载体中,并进行序列测... 参照已发表的猪圆环病毒II型(Porcinecircovirustype2,PCV2)基因序列,设计合成了一对引物,对PCV2北京株(Shy)ORF2基因进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳分析,呈现一条约720bp的特异条带,将其回收后克隆入pGEM-TEasy载体中,并进行序列测定,与加拿大PCV2株(基因序列号AF027217)ORF2基因比较发现,核苷酸的同源性达99.3%,氨基酸的同源性为98.3%,证实为PCV2-ORF2基因。 展开更多
关键词 猪圆环病毒 Ⅱ型orf2基因 基因克隆 序列分析
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猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒福州株ORF2-7基因结构分析 被引量:7
10
作者 魏宏 林锋强 +2 位作者 周伦江 王隆柏 庄向生 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第1期82-85,共4页
用RT-PCR方法分段扩增出猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒(PRRSV)FZ株的5条cDNA片段,分别克隆到pMD-18T载体并进行测序,按顺序将这些序列进行拼接得到FZ株ORF2-7编码框序列,测序结果表明该序列长度为3272bp,与BJ-4株、VR-2332株、CH-1a株和... 用RT-PCR方法分段扩增出猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒(PRRSV)FZ株的5条cDNA片段,分别克隆到pMD-18T载体并进行测序,按顺序将这些序列进行拼接得到FZ株ORF2-7编码框序列,测序结果表明该序列长度为3272bp,与BJ-4株、VR-2332株、CH-1a株和HB-1株核苷酸同源性分别为99.1%、98.9%、93.2%和93.2%。 展开更多
关键词 PRRSV orf2—7基因 克隆 序列分析
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两株猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆和序列分析 被引量:4
11
作者 何逸民 罗玉均 +5 位作者 潘全会 吴翠花 曹宗喜 孔留五 李少方 张桂红 《动物医学进展》 CSCD 2007年第11期4-7,共4页
根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计一对引物,从分离的PCV-2GZ株、HN株的细胞培养物中扩增出ORF2基因(702bp)。将此基因片段克隆入pMD18-T载体,筛选获得重组质粒pMD-ORF2,并对其测序。结果表明,所克隆的ORF2基因与其他... 根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计一对引物,从分离的PCV-2GZ株、HN株的细胞培养物中扩增出ORF2基因(702bp)。将此基因片段克隆入pMD18-T载体,筛选获得重组质粒pMD-ORF2,并对其测序。结果表明,所克隆的ORF2基因与其他PCV-2的ORF2基因核苷酸序列同源性在90.6%~99.6%之间,推导的氨基酸序列同源性在88.9%~98.7%之间。 展开更多
关键词 圆环病毒2型 orf2 序列分析
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共表达猪IFN-γ基因对PPV VP2-PCV ORF2真核质粒的分子免疫佐剂效应研究 被引量:2
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作者 陈燕凌 徐志文 +3 位作者 郭万柱 朱玲 徐凯 唐玉香 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1274-1280,共7页
将干扰素-γ、猪圆环病毒Ⅱ型ORF2主要抗原表位(47-85位AA)和猪细小病毒VP2基因克隆至pCI-neo真核载体中,构建重组质粒pCI-IFN-γ.ORF2.VP2。用脂质体介导法将其转染到MDBK细胞中,利用RT-PCR和间接免疫荧光法检测产物的表达情况。将重... 将干扰素-γ、猪圆环病毒Ⅱ型ORF2主要抗原表位(47-85位AA)和猪细小病毒VP2基因克隆至pCI-neo真核载体中,构建重组质粒pCI-IFN-γ.ORF2.VP2。用脂质体介导法将其转染到MDBK细胞中,利用RT-PCR和间接免疫荧光法检测产物的表达情况。将重组质粒pCI-IFN-γ.ORF2.VP2、pCI-ORF2.VP2、对照质粒pCI-neo、PBS、猪细小病毒灭活苗和猪圆环病毒亚单位疫苗通过肌肉注射免疫小鼠,检测小鼠不同时期的淋巴细胞转化功能、T淋巴细胞亚群动态变化情况以及PPV、PCV2抗体水平。试验结果显示,在转染重组质粒的MDBK细胞中能扩增到ORF2-VP2和IFN-γ基因;转染后48h用间接免疫荧光法能在荧光显微镜下观察到绿色荧光,检测到特异性蛋白的表达。pCI-IFN-γ.ORF2.VP2免疫组从第7天开始脾淋巴细胞对ConA有明显反应,显著高于对照组和PCI-ORF2.VP2免疫组;CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞的数量高于或显著高于对照组和pCI-ORF2.VP2免疫组;在免疫后第14天检测到PPV PCV抗体。结果表明,pCI-IFN-γ.ORF2.VP2能够有效诱导机体产生细胞免疫和体液免疫。 展开更多
关键词 猪细小病毒 VP2基因 猪圆环病毒 orf2基因 IFN-Γ基因
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猪Ⅱ型圆环病毒ORF1、ORF2基因串联重组腺病毒的构建及其免疫效果 被引量:2
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作者 祝卫国 王旭荣 +4 位作者 宋长绪 杨增岐 王建华 张春红 黄忠 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2008年第3期75-79,84,共6页
【目的】构建含PCV2ORF1和ORF2基因的串联重组腺病毒,并对其免疫效果进行评价。【方法】扩增PCV2的ORF1和ORF2基因,串联克隆入pMD18-T载体后亚克隆入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,阳性穿梭质粒经PmeⅠ酶线性化后与骨架载体pAdeasy-1在... 【目的】构建含PCV2ORF1和ORF2基因的串联重组腺病毒,并对其免疫效果进行评价。【方法】扩增PCV2的ORF1和ORF2基因,串联克隆入pMD18-T载体后亚克隆入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,阳性穿梭质粒经PmeⅠ酶线性化后与骨架载体pAdeasy-1在细菌BJ5183内完成重组,获得重组腺病毒质粒。将重组腺病毒质粒用PacⅠ酶线性化后转染293细胞,包装成重组腺病毒,然后从致细胞病变、荧光检测及PCR检测等方面对该重组腺病毒进行了鉴定。以该重组腺病毒免疫小鼠,对免疫鼠血清中PCV2的特异性抗体进行检测。【结果】得到了PCV2的ORF1和ORF2基因,pMD18-ORF1-ORF2和pAdCMV-ORF1-ORF2载体构建成功,获得了含有PCV2ORF1和ORF2基因的重组腺病毒。该重组腺病毒免疫小鼠后,在小鼠血清中可检测到PCV2的特异性抗体。【结论】成功构建了含PCV2ORF1和ORF2基因的重组腺病毒,此腺病毒可诱导机体产生针对PCV2的特异性抗体。 展开更多
关键词 猪Ⅱ型圆环病毒 ORF1 orf2基因 重组腺病毒 免疫效果
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猪圆环病毒2型广东分离株ORF2基因的克隆和序列分析 被引量:3
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作者 沈海燕 刘志成 +3 位作者 郭慧霞 周恒 朱余军 张春红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第10期12-16,共5页
为了解广东部分地区猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)流行毒株的基因型和遗传变异情况,本研究根据GenBank中PCV2的核苷酸序列设计针对ORF2基因的1对特异性引物,从分离于广东省的8株PCV2分离株BL、HD、Li、GD01、GD02、H... 为了解广东部分地区猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)流行毒株的基因型和遗传变异情况,本研究根据GenBank中PCV2的核苷酸序列设计针对ORF2基因的1对特异性引物,从分离于广东省的8株PCV2分离株BL、HD、Li、GD01、GD02、HD01、HD02和HD03株的细胞培养物中扩增ORF2基因,扩增片段克隆到pMD18-T上,获得重组质粒,并对其进行测序。序列分析结果表明,8株PCV2分离株ORF2基因与其他PCV2 ORF2基因核苷酸序列同源性为89.7%~100%,氨基酸序列同源性为87.2%~99.6%,进化分析结果表明,其中7株分离株处于同一分支,属于PCV2b-1A/1B,HD01株属于PCV2b-1C。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 orf2基因 序列分析
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猪源戊型肝炎病毒ORF2部分基因的原核表达及其鉴定 被引量:2
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作者 欧阳昀 张亮权 +5 位作者 刘志刚 齐海涛 徐廷川 张民泽 张超逸 张桂红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第6期86-89,共4页
本试验旨在表达猪源戊型肝炎病毒(sHEV)ORF2部分基因片段,纯化表达产物并进行抗原性分析。以sHEV的cDNA为模板,PCR扩增ORF2基因片段,构建重组质粒pET32a-dORF2,转化表达菌BL21,IPTG诱导,SDS-PAGE凝胶电泳和Western blotting进行检测。... 本试验旨在表达猪源戊型肝炎病毒(sHEV)ORF2部分基因片段,纯化表达产物并进行抗原性分析。以sHEV的cDNA为模板,PCR扩增ORF2基因片段,构建重组质粒pET32a-dORF2,转化表达菌BL21,IPTG诱导,SDS-PAGE凝胶电泳和Western blotting进行检测。试验结果表明,获得60ku的目的蛋白,该蛋白具有良好的抗原性,主要以可溶性形式存在。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 orf2基因 重组质粒 原核表达
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我国鸡群禽戊型肝炎病毒RT-PCR检测及部分ORF2基因序列分析 被引量:2
16
作者 赵钦 周恩民 +4 位作者 孙培明 董施伟 张璐 孙亚妮 姜世金 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期721-723,共3页
为从核酸水平证实我国鸡群中禽戊型肝炎病毒(HEV)的存在,本实验从山东省某鸡场患有肝脾肿大综合征的病鸡中采集10份粪便和8份胆汁样品,利用RT-PCR方法检测其中禽HEV ORF2基因片段,并将阳性PCR产物克隆测序。结果显示:18份粪便和胆汁样品... 为从核酸水平证实我国鸡群中禽戊型肝炎病毒(HEV)的存在,本实验从山东省某鸡场患有肝脾肿大综合征的病鸡中采集10份粪便和8份胆汁样品,利用RT-PCR方法检测其中禽HEV ORF2基因片段,并将阳性PCR产物克隆测序。结果显示:18份粪便和胆汁样品中,13份为禽HEV RNA阳性;其序列间的同源性为97%~99%,与GenBank中登录的参考序列同源性为76.6%~98.1%;进化树显示与欧洲地区的禽HEV在同一分支,属于禽HEV基因3型。禽HEV ORF2基因的检出为进一步了解禽HEV对我国家禽养殖业的危害以及在我国的流行情况奠定了基础。 展开更多
关键词 禽戊型肝炎病毒 orf2基因
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PCV2·ORF2基因片段在大肠杆菌中的表达与纯化 被引量:2
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作者 王宪文 谢青梅 +2 位作者 曹永长 于康震 毕英佐 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第23期7117-7118,7121,共3页
[目的]为了研究PCV2-ORF2基因片段在大肠杆菌中的表达与纯化。[方法]用PCR方法扩增PCV2 ORF2基因3′端片段,PCR产物经酶切后与经同样处理过的pET32a质粒连接,构建重组质粒。重组质粒经PCR和酶切鉴定并测序后,转化BL21感受态细胞;重组菌... [目的]为了研究PCV2-ORF2基因片段在大肠杆菌中的表达与纯化。[方法]用PCR方法扩增PCV2 ORF2基因3′端片段,PCR产物经酶切后与经同样处理过的pET32a质粒连接,构建重组质粒。重组质粒经PCR和酶切鉴定并测序后,转化BL21感受态细胞;重组菌液用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。[结果]ORF2基因在大肠杆菌中正确表达,表达的融合蛋白的分子量约为33 ku;在37℃、1 mmol/L浓度下,诱导时间为6 h时表达量最大,占细菌总蛋白的23.62%。表达产物主要以包涵体的形式存在,将包涵体溶解后过Ni-NTA柱纯化可得到较为纯净的目的蛋白。[结论]该研究为猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)和猪皮炎和肾病综合征(PDNS)等疾病的防治奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒Ⅱ型 orf2 表达
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猪戊型肝炎病毒ORF2基因的分段原核表达及抗原表位的初步鉴定 被引量:2
18
作者 古洪浪 梁焕斌 +5 位作者 纪方晓 周沛 邓胜朝 曹振鹏 王衡 张桂红 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第9期25-27,共3页
为了初步鉴定猪戊型肝炎病毒(sw HEV)ORF2蛋白的抗原表位,通过设计两对引物,PCR扩增ORF2-1和ORF2-2两段基因片段,使用p MD18-T载体克隆,双酶切后构建重组质粒p ET32a-0RF2-(1,2),转化大肠杆菌BL21后进行IPTG诱导和SDS-PAGE凝胶电泳... 为了初步鉴定猪戊型肝炎病毒(sw HEV)ORF2蛋白的抗原表位,通过设计两对引物,PCR扩增ORF2-1和ORF2-2两段基因片段,使用p MD18-T载体克隆,双酶切后构建重组质粒p ET32a-0RF2-(1,2),转化大肠杆菌BL21后进行IPTG诱导和SDS-PAGE凝胶电泳,最后用4株ORF2单抗对其进行Western Blot来初步鉴定其抗原表位。结果表明,分别获得约为36 ku和35 ku的两个目的蛋白,均以不可溶形式存在,抗原表位初步定位于ORF2-1这段蛋白中的414~523 aa。 展开更多
关键词 猪戊型肝炎病毒 orf2基因 原核表达 抗原表位
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猪圆环病毒2型GD株ORF2基因重组腺病毒的构建及其表达 被引量:1
19
作者 宋长绪 蒋智勇 +2 位作者 王贵平 高向阳 赵亚华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期348-351,共4页
根据PCV2 ORF2基因的序列设计两条引物从PCV2的PK15细胞培养物中扩增出ORF2基因(702 bp)。将此基因片段克隆入pMD 18_T载体,经酶切、测序鉴定筛选出重组质粒pMD_ORF2。将PCV2 ORF2基因克隆入pAdeasy腺病毒载体系统的穿梭质粒pAdTrack_CM... 根据PCV2 ORF2基因的序列设计两条引物从PCV2的PK15细胞培养物中扩增出ORF2基因(702 bp)。将此基因片段克隆入pMD 18_T载体,经酶切、测序鉴定筛选出重组质粒pMD_ORF2。将PCV2 ORF2基因克隆入pAdeasy腺病毒载体系统的穿梭质粒pAdTrack_CMV中,获得重组穿梭质粒pAdTrack_CMV_ORF2,将重组质粒与腺病毒骨架载体共转化大肠杆菌BJ5183,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒质粒pAdCMV_ORF2,然后用PacⅠ线性化后转染293细胞,在293细胞内包装出重组腺病毒。通过荧光显微镜观察、PCR检测和Western blot检测证明PCV2 ORF2基因在293细胞内获得表达,ORF2多肽具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 orf2基因 重组腺病毒
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PCV-2陕西株ORF2基因的克隆、分析及原核表达 被引量:1
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作者 邢福珊 许信刚 +4 位作者 童德文 王志昇 刘文静 宁蓬勃 张彦明 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2010年第3期1-6,共6页
【目的】克隆猪圆环病毒2型陕西分离株(PCV-2SX株)ORF2基因,并进行序列分析及原核表达。【方法】根据GenBank公布的PCV-2ORF2基因的核苷酸序列,设计并合成1对特异性引物,应用PCR方法扩增PCV-2SX株ORF2全长基因,将其克隆入pGEM-T载体中,... 【目的】克隆猪圆环病毒2型陕西分离株(PCV-2SX株)ORF2基因,并进行序列分析及原核表达。【方法】根据GenBank公布的PCV-2ORF2基因的核苷酸序列,设计并合成1对特异性引物,应用PCR方法扩增PCV-2SX株ORF2全长基因,将其克隆入pGEM-T载体中,进行测序及序列分析。然后,将ORF2基因亚克隆入原核表达载体pET-32a中,在大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blotting鉴定。【结果】扩增到了702bp的PCV-2ORF2全长基因。序列分析结果表明,PCV-2SX株ORF2基因与广西分离株(EF675237,ChinaGX)和巴西分离株(DQ861802,am21)的核苷酸序列同源性均达98.0%,氨基酸序列同源性均达98.3%,与其他毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在89.9%~97.9%和88.5%~98.0%。SDS-PAGE可检测到分子质量约为48ku的融合蛋白,主要以可溶性蛋白形式存在。Western-blotting分析表明,重组蛋白可被PCV-2阳性血清所识别。【结论】成功克隆了PCV-2SX株ORF2基因,并进行了原核表达。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 陕西分离株 orf2基因 序列分析 原核表达
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