唐古特白刺液泡膜Na^+/H^+逆向运输蛋白基因NtNHX1的克隆与表达分析 被引量：11

1

作者 唐欣 王瑞辉 +4 位作者 杨秀艳 朱建峰 刘正祥 倪建伟 张华新 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第3期38-44,共7页

植物液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白具有将胞质中过多的Na+区隔化在液泡内,从而减轻过量Na+对细胞质的伤害,同时维持细胞的渗透势,利于植物抵御盐胁迫。以2年生唐古特白刺嫩叶为试材,采用RT-PCR和RACE方法从叶片中获得1个NHX基因cDNA全长,命... 植物液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白具有将胞质中过多的Na+区隔化在液泡内,从而减轻过量Na+对细胞质的伤害,同时维持细胞的渗透势,利于植物抵御盐胁迫。以2年生唐古特白刺嫩叶为试材,采用RT-PCR和RACE方法从叶片中获得1个NHX基因cDNA全长,命名为NtNHX1,GenBank登录号为KF751928。序列分析结果表明:NtNHX1全长2 134 bp,包含281 bp的5’非编码区、218 bp的3’非编码区和29 bp的poly(A)尾巴。该cDNA编码1个544个氨基酸的多肽,等电点为8.14,推测分子质量为59.9 kDa。通过与其他物种的NHX1氨基酸序列比对,NtNHX1基因与柑橘同源性最高达81%。NtNHX1基因存在12个跨膜结构域,其中TM3跨膜结构域上具有高度保守的氨氯吡嗪脒结合位点(LFFIYLLPPI)。该位点与Na+有竞争作用。相对荧光定量PCR分析表明,NtNHX1在根、茎、叶中均有表达,叶中的表达量明显高于茎和根;在高浓度盐(200 mmol·L-1NaCl)处理下,NtNHX1在叶中的转录水平显著增强,在处理12 h后表达量达到最大值。由此推断,NtNHX1基因的表达与盐胁迫的诱导和调节有关。 展开更多

关键词 唐古特白刺 液泡膜Na^+ H^+逆向转运蛋白 NtNHX1基因 基因克隆 表达分析

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常压氧对缺血再灌注大鼠大脑皮层1型Na^+/H^+交换蛋白的影响 被引量：1

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作者 李萌萌 王鹏 +5 位作者 张振香 张留超 何雄文 牛美兰 焦佳伟 李玲 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期435-441,共7页

目的:研究常压氧(NBO)对缺血再灌注大鼠脑组织1型Na^+/H^+交换蛋白(NHE1)水平的影响。方法:采用线栓法构建大脑中动脉缺血(MCAO)大鼠模型,术后2 h进行神经功能评分。MCAO模型构建成功者进行再灌注,随机分为MCAO组和NBO组,NBO组于再灌注... 目的:研究常压氧(NBO)对缺血再灌注大鼠脑组织1型Na^+/H^+交换蛋白(NHE1)水平的影响。方法:采用线栓法构建大脑中动脉缺血(MCAO)大鼠模型,术后2 h进行神经功能评分。MCAO模型构建成功者进行再灌注,随机分为MCAO组和NBO组,NBO组于再灌注后给予常压氧治疗。各组大鼠分别在NBO治疗后0、2、4、6、12、24 h处死,取脑皮层组织进行HE染色后观察脑组织形态结构的改变,并采用免疫荧光法及Western Blot法检测脑组织NHE1蛋白和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的蛋白表达水平。结果:与假手术组相比,模型组神经功能评分显著增高(P<0.05);HE染色结果显示MCAO组和NBO组大鼠缺血2 h时大脑皮层组织均无明显病理结构改变,随着再灌注时间的延长,MCAO组大鼠大脑皮层组织病理改变逐渐增加,NBO组大鼠的脑组织病理改变明显减轻;免疫荧光检查和Western Blot检测结果显示MCAO组和NBO组在起始2 h内,大脑皮层组织NHE1和HIF-1α蛋白表达水平没有明显变化,随着再灌注时间的延长,MCAO组NHE1蛋白和HIF-1α蛋白表达水平逐渐增加,NBO组NHE1蛋白和HIF-1α蛋白表达水平稍有增加,但是其表达水平明显低于MCAO组(P<0.05)。结论:常压氧疗法可以下调缺血再灌注后大脑皮层组织NHE1蛋白和HIF-1α蛋白的表达,减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,促进大鼠神经功能恢复,具有脑损伤保护作用。 展开更多

关键词 常压氧 脑缺血再灌注损伤 1型Na^+/H^+交换蛋白 大鼠

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腺病毒载体介导编辑chNHE1基因对J亚群禽白血病病毒抗性研究

3

作者 王震 陈运通 +5 位作者 魏天悦 陈洪岩 王旭光 高玉龙 夏长友 孟庆文 《中国家禽》 北大核心 2025年第2期27-33,共7页

鸡Na^(+)/H^(+)离子交换蛋白-1(chNHE1)是J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的细胞受体,是ALV-J感染的细胞靶点。为了探索鸡抗禽白血病的育种目标,试验构建了定点编辑chNHE1基因的CRISPR/Cas9腺病毒系统,并对编辑后细胞抗ALV-J感染能力进行评价... 鸡Na^(+)/H^(+)离子交换蛋白-1(chNHE1)是J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的细胞受体,是ALV-J感染的细胞靶点。为了探索鸡抗禽白血病的育种目标,试验构建了定点编辑chNHE1基因的CRISPR/Cas9腺病毒系统,并对编辑后细胞抗ALV-J感染能力进行评价。结果显示:使用CRISPR/Cas9腺病毒载体介导的ssODNs同源重组方案可以在chNHE1中引入突变,其中36%单克隆细胞株存在W38缺失;T37缺失的细胞对ALV-J感染具备极显著的抗性;W38缺失的细胞对ALV-J感染具有完全抗性,同时具有E35A替换、P36缺失、T37缺失的细胞对ALV-J感染也具有完全抗性。研究表明,CRISPR/Cas9腺病毒载体可以有效地编辑鸡DF-1细胞,W38缺失或E35A替换P36、T37缺失都可以使DF-1对ALV-J感染具有抗性,该方案为培育抗ALV-J感染的基因编辑鸡提供技术储备。 展开更多

关键词 J亚群禽白血病病毒 鸡Na^(+)/H^(+)交换蛋白-1 腺病毒载体 CRISPR/Cas9

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羊草液泡膜Na^+/H^+逆向转运蛋白基因LcNHX1的克隆及功能分析 被引量：8

4

作者 李晓薇 郭嘉 +2 位作者 王鑫 王法微 李海燕 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期1-9,共9页

植物Na^+/H^+逆向转运蛋白具有调节pH值和维持细胞内Na^+平衡、减少盐胁迫对植物伤害的功能。本研究从羊草中克隆Na^+/H^+逆向转运蛋白基因LcNHX1,并对它的功能进行了初步分析。该基因全长2022bp,其中ORF区1614bp,编码537个氨基酸。LcN... 植物Na^+/H^+逆向转运蛋白具有调节pH值和维持细胞内Na^+平衡、减少盐胁迫对植物伤害的功能。本研究从羊草中克隆Na^+/H^+逆向转运蛋白基因LcNHX1,并对它的功能进行了初步分析。该基因全长2022bp,其中ORF区1614bp,编码537个氨基酸。LcNHX1蛋白具有10个跨膜区,且具有NHX蛋白的多个典型结构特征。半定量RT-PCR结果表明,盐(NaCl 400mM)、碱(NaHCO_3150mM)、盐碱(NaCl 200mM+NaHCO_3100mM)、干旱(10%PEG8000)、低温(4℃)和ABA(100μM)均能够不同程度的诱导LcNHX1基因的表达。利用Δnhx1盐敏感酵母突变体进行功能互补试验,结果发现在60mM、100mM NaCl胁迫条件下,转基因酵母Δnhx1+LcNHX1不仅回补了酵母突变株Δnhx1的盐敏感特性,并且具有更高的耐盐能力。通过比较转LcNHX1基因株系与野生型拟南芥幼苗在含有50mM NaCl和8mM NaHCO_3的MS培养基中的生长情况,发现转基因拟南芥株系具有更好的抗盐碱能力。 展开更多

关键词 羊草 NA^+/H^+逆向转运蛋白 LcNHX1基因 抗盐性

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NHE1抑制剂EIPA在肝癌细胞中的作用及机制

5

作者 金海 刘倩 +2 位作者 李婧 赵思宇 朱加兴 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第3期427-432,共6页

目的:研究Na^(+)/H^(+)交换体1(Na^(+)/H^(+)exchanger 1, NHE1)抑制剂乙基异丙基阿米洛利(ethylisopropylamiloride, EIPA)对肝细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭、细胞周期和凋亡的影响,初步探讨其作用机制。方法:体外培养人肝癌Huh7细胞,... 目的:研究Na^(+)/H^(+)交换体1(Na^(+)/H^(+)exchanger 1, NHE1)抑制剂乙基异丙基阿米洛利(ethylisopropylamiloride, EIPA)对肝细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭、细胞周期和凋亡的影响,初步探讨其作用机制。方法:体外培养人肝癌Huh7细胞,用不同浓度的EIPA作用于细胞。RT-qPCR及Western blot法检测Huh7细胞NHE1的mRNA及蛋白表达;kFluor488-EdU法检测Huh7细胞增殖能力;Transwell法检测Huh7细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术检测Huh7细胞周期和凋亡的变化;PTI高速离子成像系统检测Huh7细胞内pH的改变。结果:EIPA显著抑制NHE1的mRNA及蛋白表达(P<0.01);显著抑制Huh7细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.05或P<0.01),促进Huh7细胞凋亡(P<0.01),使细胞发生明显的S期阻滞(P<0.01);显著降低Huh7细胞内pH(P<0.01)。结论:NHE1抑制剂EIPA通过抑制NHE1表达及功能调控细胞内pH,进而影响肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭、细胞周期及凋亡。NHE1可以作为肝癌治疗的潜在靶点。 展开更多

关键词 Na^(+)/H^(+)交换体1 乙基异丙基阿米洛利 肝细胞癌 肿瘤酸性微环境

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Na^+/H^+交换、Na^+/K^+/2Cl^-转运体抑制剂对缺血大鼠心脏保护作用的研究

6

作者 谭松涛 杨双强 杨朝坤 《中国心血管杂志》 2003年第5期320-323,共4页

目的　研究 Na+ /H+ 交换抑制剂阿米洛利 (Am iloride)、Na+ /K+ /2 Cl- 协同转运抑制剂呋塞米 (Furosemide)对长时间低温保存下离体大鼠心脏的保护作用。方法　建立 L angendorff及工作心脏灌注模型。实验组用 St.Thomas- 2 (STH- 2 )... 目的　研究 Na+ /H+ 交换抑制剂阿米洛利 (Am iloride)、Na+ /K+ /2 Cl- 协同转运抑制剂呋塞米 (Furosemide)对长时间低温保存下离体大鼠心脏的保护作用。方法　建立 L angendorff及工作心脏灌注模型。实验组用 St.Thomas- 2 (STH- 2 )液 +阿米洛利 +呋塞米停搏并保存其中 ,对照组只用 STH - 2停搏、保存。置 7℃环境 5 h后恢复灌流。观察血流动力学、心肌酶学及超微结构的变化。结果　实验组冠状动脉流量 (CAF)、左心室收缩压 (L VSP)、左心室压力变化速率 (± dp/dt)的恢复率均优于对照组 (P<0 .0 1) ;肌酸磷酸激酶 (CPK)、乳酸脱氢酶 (L DH)漏出量明显少于对照组 (P<0 .0 5 ) ;心肌组织中 Na+ - K+ - ATP酶、Ca2 + - ATP酶和 Ca2 + - Mg2 + - ATP酶活力均显著高于对照组 (P<0 .0 1) ;实验组的心肌细胞超微结构得到较好的保护。结论　 Na+ /H+ 交换、Na+ /K+ /2 Cl- 展开更多

关键词 阿米洛利 呋塞米 NA^+/H^+交换 Na^+/K^+/2C1^-协同转运 心肌缺血 再灌注损伤

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植物Na^+/H^+逆向转运蛋白功能及调控的研究进展 被引量：8

7

作者 石乐义 李美茹 +1 位作者 李洪清 陈贻竹 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期602-607,共6页

Na+/H+逆向转运蛋白是一种调控Na+、H+跨膜转运的膜蛋白,对细胞内Na+的平衡和pH值的调控等活动具有重要作用。该文主要对近年来Na+/H+逆向转运蛋白功能及其调控的研究进展进行概述,着重讨论其在调控离子稳态平衡,液泡pH值大小与花色显现... Na+/H+逆向转运蛋白是一种调控Na+、H+跨膜转运的膜蛋白,对细胞内Na+的平衡和pH值的调控等活动具有重要作用。该文主要对近年来Na+/H+逆向转运蛋白功能及其调控的研究进展进行概述,着重讨论其在调控离子稳态平衡,液泡pH值大小与花色显现,以及在影响细胞,器官(叶片)发育,盐胁迫信号转导等方面的可能作用。 展开更多

关键词 NA^+/H^+逆向转运蛋白 AtNHX SOS1

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硅促进盐胁迫下黄瓜NHX1基因表达及Na^+在液泡中的区隔化效应 被引量：10

8

作者 缑天韵 苏艳 +2 位作者 陈馨航 朱永兴 宫海军 《植物营养与肥料学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1923-1934,共12页

【目的】硅可提高植物的耐盐性,但不同植物中硅提高耐盐性的机理并不相同。探究硅对盐胁迫下黄瓜幼苗的氧化损伤、Na^+积累和激素水平的影响,以阐明硅提高黄瓜耐盐性的机制。【方法】以基因型为Mch-4的黄瓜幼苗为试材,进行水培试验。营... 【目的】硅可提高植物的耐盐性,但不同植物中硅提高耐盐性的机理并不相同。探究硅对盐胁迫下黄瓜幼苗的氧化损伤、Na^+积累和激素水平的影响,以阐明硅提高黄瓜耐盐性的机制。【方法】以基因型为Mch-4的黄瓜幼苗为试材,进行水培试验。营养液中NaCl的胁迫浓度为65 mmol/L,施硅水平为Na2SiO3·9H2O0.3 mmol/L。在处理10天后,测定黄瓜幼苗生物量、Na^+含量与分配、Na^+转运相关基因表达水平及激素含量。【结果】施硅可改善盐胁迫下黄瓜幼苗的生长,减轻植株的氧化损伤。硅对盐胁迫下黄瓜根系和叶片Na^+含量无明显影响,可显著降低根和叶中质膜Na^+/H^+反向转运蛋白基因SOS1的表达量,对高亲和力钾转运蛋白基因HKT1的表达均影响不大,但促进了液泡膜Na^+/H^+反向转运蛋白基因NHX1的表达。对盐胁迫下黄瓜叶片Na^+的亚细胞定位发现,硅处理使叶绿体中Na^+含量下降,而液泡中Na^+含量升高。硅处理提高了盐胁迫植株根和叶片中赤霉素、生长素和细胞分裂素的水平。【结论】施硅可提高液泡膜Na^+/H^+反向转运蛋白基因NHX1的表达,将Na^+区隔化于液泡中,进而降低叶绿体中的Na^+含量,缓解盐胁迫下黄瓜幼苗的氧化损伤;硅还诱导产生了较多的赤霉素、生长素和细胞分裂素,其调控Na^+积累和黄瓜幼苗的氧化损伤的机理还需进一步研究。 展开更多

关键词 盐胁迫 硅 Na^+/H^+反向转运蛋白基因NHX1 Na^+区隔化 激素

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利用RNAi技术抑制拟南芥NHX1基因家族的表达 被引量：3

9

作者 原江锋 杨建雄 +2 位作者 俞嘉宁 王丽娟 张志琪 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1735-1741,共7页

采用RNAi抑制NHX1基因家族的表达,并观察其对拟南芥耐盐性和耐旱性的影响.根据从拟南芥(Ara-bidopsis thaliana)cDNA中扩增出编码Na+/H+反向转运蛋白基因AtNHX1长度为210 bp高度保守序列作为RNAi的靶标区,并正反2个方向插入载体pHANNIBA... 采用RNAi抑制NHX1基因家族的表达,并观察其对拟南芥耐盐性和耐旱性的影响.根据从拟南芥(Ara-bidopsis thaliana)cDNA中扩增出编码Na+/H+反向转运蛋白基因AtNHX1长度为210 bp高度保守序列作为RNAi的靶标区,并正反2个方向插入载体pHANNIBAL中,2个片段用intron连接;将RNAi表达框连入具有NPTⅡ筛选标记基因的表达载体pART27中,构建以拟南芥NHX1基因家族为靶标的RNAi载体.采用农杆菌介导的真空渗透法转化拟南芥,得到T0代转基因拟南芥种子.对转基因阳性植株进行RT-PCR检测以及耐盐性和耐旱性分析.结果表明,利用本实验构建的NHX1基因家族RNAi载体,拟南芥NHX1基因家族表达被成功地抑制;耐盐和耐旱分析表明RNAi技术对基因表达沉默是有效的. 展开更多

关键词 Na^+/H^+反向转运蛋白 NHX1基因家族 RNAI 拟南芥

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生姜对大鼠脑缺血再灌注脑组织NHE1和HIF-1α蛋白水平的影响 被引量：4

10

作者 张留超 牛美兰 +4 位作者 王鹏 张振香 李萌萌 焦佳伟 何雄文 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2020年第5期41-44,I0017,I0018,共6页

目的研究生姜压榨汁对脑缺血再灌注大鼠脑组织缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF1α)蛋白和Na^+/H^+交换蛋白1型(Na^+/H^+exchanger protein 1,NHE1)表达水平的影响。方法通过线栓法构建大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,... 目的研究生姜压榨汁对脑缺血再灌注大鼠脑组织缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF1α)蛋白和Na^+/H^+交换蛋白1型(Na^+/H^+exchanger protein 1,NHE1)表达水平的影响。方法通过线栓法构建大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,造模成功的大鼠随机分为模型组(MCAO)、生姜压榨汁高(H)、中(M)和低(L)剂量组,另设假手术组(CLT)为对照,各组大鼠经灌胃给药5 d,神经功能评分后,病理组织检查大脑病变情况,干湿重法测大脑含水量,免疫荧光法检测NHE1蛋白在脑组织中的表达,Western Blot法研究HIF-1α蛋白和NHE1蛋白水平。结果与CTL组比较,MCAO组大鼠出现明显的神经功能障碍,病理检测结果显示脑组织出现明显的梗死灶,脑组织含水量明显升高,NHE1蛋白和HIF-1α蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与MCAO组相比,生姜H、M剂量组能明显改善MCAO大鼠神经病学症状,显著缩小脑梗死面积,降低脑组织含水量,并降低NHE1蛋白和HIF-1α蛋白表达水平(P<0.05)。结论生姜对脑缺血再灌注大鼠脑组织可能发挥保护作用。 展开更多

关键词 缺血性脑卒中 生姜 Na^+/H^+交换蛋白1型 缺氧诱导因子1Α

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小麦液泡膜反转运蛋白基因TaNHX1的生物信息学分析 被引量：2

11

作者 许海霞 李阳 +3 位作者 程西永 董中东 李伟 崔党群 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第13期5354-5356,5365,共4页

[目的]利用生物信息学方法分析基因的功能,[方法]通过生物信息学数据库和因特网上的软件进行分析,对小麦液泡膜Na+/H+反转运蛋白基因TaNHX1的理化性质、结构与功能进行了预测。[结果]TaNHX1基因编码的蛋白是一种相对分子质量为59.7 kD... [目的]利用生物信息学方法分析基因的功能,[方法]通过生物信息学数据库和因特网上的软件进行分析,对小麦液泡膜Na+/H+反转运蛋白基因TaNHX1的理化性质、结构与功能进行了预测。[结果]TaNHX1基因编码的蛋白是一种相对分子质量为59.7 kD、等电点pI为8.13的疏水性稳定蛋白,富含Leu、Phe、Lle、Gly、Ser、Val、Ala等氨基酸。TaNHX1基因编码的氨基酸序列内含有一段氨氯吡嗪咪的结合域的高度保守序列FF-YLLPI。同源性比较发现TaNHX1与AeNHX1、TiNHX1的亲缘关系很近,分别是99%和97%,推测他们可能为同源基因,具有相似的生物学功能。[结论]该研究为进一步探讨TaNHX1的生物学功能奠定了基础。 展开更多

关键词 小麦 Na^+/H^+反转运蛋白 TaNHX1基因 生物信息学

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生物信息学对番茄LeNHX1基因的研究 被引量：1

12

作者 范晶 代娟 +2 位作者 胡建平 梁梓 黄明远 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期87-91,共5页

应用生物信息学的方法和工具对番茄LeNHX1蛋白质的理化性质、跨膜区域、疏水性/亲水性、二级结构、结构功能域、功能分类和同源性进行分析。结果表明此蛋白为疏水性稳定蛋白,包含一个保守的氨氯吡嗪咪结合位点LFFIYVLPPI区域,相对分子量... 应用生物信息学的方法和工具对番茄LeNHX1蛋白质的理化性质、跨膜区域、疏水性/亲水性、二级结构、结构功能域、功能分类和同源性进行分析。结果表明此蛋白为疏水性稳定蛋白,包含一个保守的氨氯吡嗪咪结合位点LFFIYVLPPI区域,相对分子量为59.0kD,等电点为6.60,存在10个跨膜区域,蛋白质二级结构中的主要构成元件是α-螺旋和不规则卷曲,功能分类和蛋白质同源性分析表明番茄LeNHX1属于液泡膜Na+/H+反向转运蛋白。 展开更多

关键词 生物信息学 番茄 LeNHX1基因 Na^+/H^+反转运蛋白

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人肺癌细胞转录因子——C/EBP和HMG样蛋白的EMSA检测

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作者 吴国明 钱桂生 +3 位作者 周玉国 黄桂君 姚伟 陆俊羽 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1173-1175,共3页

目的　检测人肺癌细胞中是否存在与Na+ H+ 交换蛋白 1(NHE 1)基因转录相关的重要转录因子———C EBP和HMG样蛋白。方法　采用电泳迁移率改变分析法 (EMSA)检测人肺癌细胞株核蛋白中C EBP和HMG样蛋白的表达及其水平。结果　EMSA检测到... 目的　检测人肺癌细胞中是否存在与Na+ H+ 交换蛋白 1(NHE 1)基因转录相关的重要转录因子———C EBP和HMG样蛋白。方法　采用电泳迁移率改变分析法 (EMSA)检测人肺癌细胞株核蛋白中C EBP和HMG样蛋白的表达及其水平。结果　EMSA检测到A5 49细胞和转染NHE 1反义载体的A5 49细胞均有转录因子C EBP和HMG样蛋白的表达 ,且后者表达水平高于前者 ;采用 5 0倍未标记的片段能完全抑制相应转录因子与32 P标记的相同片段的结合。结论　A5 49细胞核蛋白中存在能与C EBP结合序列和Poly(dA∶dT)区结合的转录因子 ,即C EBP和HMG样蛋白 ,后者的表达水平高于前者。特异性竞争抑制试验表明外源性特异DNA片段能抑制相同片段与转录因子的结合。 展开更多

关键词 肺癌 转录因子 HMG样蛋白 Na^+/H^+交换蛋白-1 转录调控 电泳迁移率改变分析 C/EBP样蛋白

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