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固本活血壮骨颗粒对糖皮质激素性骨质疏松症大鼠的作用与机制 被引量:11
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作者 胡勇 张惜燕 吴雪 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期960-965,975,共7页
目的 观察固本活血壮骨颗粒对糖皮质激素性骨质疏松症(glucocorticoid-induced osteoporosis, GIOP)大鼠的作用与机制。方法 3月龄的Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、中药组及西药组。采用试剂盒分别检测大鼠血清骨代谢指标钙(calciu... 目的 观察固本活血壮骨颗粒对糖皮质激素性骨质疏松症(glucocorticoid-induced osteoporosis, GIOP)大鼠的作用与机制。方法 3月龄的Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、中药组及西药组。采用试剂盒分别检测大鼠血清骨代谢指标钙(calcium, Ca)、磷(phosphorus, P)及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)含量;采用Micro-CT检测大鼠股骨骨密度(bone mine density, BMD)并分析骨小梁结构系数如骨小梁相对体积(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨表面积组织体积比值(BS/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp);采用苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining, HE)观察各组大鼠股骨组织病理形态变化;采用蛋白印迹法(Western blot)检测股骨组织中磷酸化核转录因子κB-p65(phospho-nuclear transcription factor-κB p65,p-NF-κB p65)、活化T细胞核因子蛋白1(recombinant nuclear factor of activated T-cell, NFATc1)、β-连环蛋白(β-catenin)的表达,采用逆转录PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)检测股骨组织中NFATc1、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(TNF receptor associated factor 6,TRAF6)、β-catenin的mRNA表达。结果 固本活血壮骨颗粒提高GIOP大鼠血清Ca值、血清P值、BMD值、BV/TV值、Tb.Th值、BS/TV值和Tb.N值(P<0.05),降低血清ALP值与Tb.Sp值(P<0.05);改善骨组织中β-catenin、NFATc1、TRAF6、p-NF-κB p65蛋白与mRNA表达(P<0.05)。另外,固本活血壮骨颗粒对GIOP大鼠血清ALP、股骨NFATc1的调节作用比阿法迪三更具优势(P<0.05)。结论 固本活血壮骨颗粒可拮抗GIOP,减少骨质丢失,其作用机制与Wnt/β-catenin通路和TRAF6/NF-κB p65/NFATcl信号通路有关。 展开更多
关键词 骨质疏松症 糖皮质激素 固本活血壮骨颗粒 WNT/Β-CATENIN信号通路 TRAF6/NF-κB p65/nfatcl信号通路
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桂皮醛对激素诱导的破骨细胞分化过程的保护作用及分子机制 被引量:5
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作者 张洪海 郭钰琪 +5 位作者 李霞 王丽 周宪宾 郑晓丹 赖楠楠 姚成芳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期92-96,共5页
目的研究桂皮醛对激素诱导的体外破骨细胞增殖分化及骨吸收功能增强的保护作用及分子机制。方法RANKL联合M-CSF体外诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞,分为对照组、地塞米松处理组和不同浓度(11.6、23.2、46.4μg·L-1)桂皮醛(cinnami... 目的研究桂皮醛对激素诱导的体外破骨细胞增殖分化及骨吸收功能增强的保护作用及分子机制。方法RANKL联合M-CSF体外诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞,分为对照组、地塞米松处理组和不同浓度(11.6、23.2、46.4μg·L-1)桂皮醛(cinnamic alde byde,CA)干预组;TRAP染色试剂盒鉴定成熟破骨细胞;MTT法观察地塞米松和桂皮醛在不同时间点对破骨细胞增殖的抑制作用;ELISA法检测细胞培养液上清中TRACP5b的表达水平;RT-PCR分析破骨细胞相关转录因子(RANK、NFATc1)mRNA的表达状态。结果地塞米松处理后,破骨细胞的增殖分化及骨吸收功能明显增强(P<0.05);而经不同浓度桂皮醛干预后,与地塞米松组相比,细胞增殖活性、上清液中TRACP-5b的含量以及RANK、NFATc1mRNA的表达水平随药物浓度的增加呈剂量依赖性降低(P<0.05)。结论桂皮醛可有效抑制激素诱导的破骨细胞的增殖及骨吸收功能,其作用机制可能是通过下调RANK以及下游NFATc1基因的表达。 展开更多
关键词 桂皮醛 破骨细胞 细胞增殖 TRAP5b RANK NFATc1
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共培养体系中重组结核杆菌热休克蛋白10对破骨细胞相关基因表达的影响(R68) 被引量:1
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作者 张元豫 刘霞 +2 位作者 李坤 郭永荣 白靖平 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期755-760,788,共7页
目的观察重组结核杆菌热休克蛋白10(CPN10)对成骨细胞(OB)-外周血单个核细胞(PBMs)共培养体系中破骨细胞生成及相关基因表达的影响。方法建立培养上清相通但二者互相不接触的成骨细胞一单个核细胞共育模型。实验分对照组和CPN10(10μg/... 目的观察重组结核杆菌热休克蛋白10(CPN10)对成骨细胞(OB)-外周血单个核细胞(PBMs)共培养体系中破骨细胞生成及相关基因表达的影响。方法建立培养上清相通但二者互相不接触的成骨细胞一单个核细胞共育模型。实验分对照组和CPN10(10μg/ml)处理组。主要观察指标:①采用TRAP染色及扫描电镜检测破骨细胞生成及小牛骨磨片吸收陷窝,②应用Realtime PCR检测与破骨细胞生成相关基因NFATc1、c-Fos、RANKL、OPG的基因表达。结果两组细胞均有TRAP阳性多核破骨细胞生成,并在小牛骨磨片上形成吸收陷窝;但对照组所获TRAP阳性多核细胞数目、吸收陷窝数目及面积均显著小于CPN10组。Realtime PCR检测结果显示CPN10组与对照组相比NFATc1、c-Fos、RANKL、OPG相对浓度分别为7.410±1.738、8.844±1.981、22.4272±2.058、2.445±0.2517(P<0.05),对照组各基因表达均显著低于CPN10组。结论 CPN10在成骨细胞-单个核细胞(OB-PBMs)共培养体系中可促进OC的生成及骨吸收,CPN10通过对成骨细胞的作用,致其分泌的OPG/RANKL比例失调,并上调破骨细胞相关基因NFATc1、c-Fos、RANKL、OPG的基因表达。 展开更多
关键词 重组结核杆菌热休克蛋白10 破骨细胞生成 共培养 核因子KB受体活化因子配体 活化T细胞核因子1蛋白 护骨素 C-Fos
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蛇床子素对NFATc1基因表达及破骨细胞分化的影响 被引量:8
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作者 王礼宁 马勇 +5 位作者 郑苏阳 郭杨 潘娅岚 王磊 顾鸣 孙杰 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 CSCD 北大核心 2018年第5期475-483,共9页
目的研究蛇床子素(osthole,OST)对破骨细胞形成和骨吸收的影响,并初步分析其分子机制。方法体外构建破骨细胞诱导培养体系,通过抗酒石酸酸性磷酸酶染色(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)法、骨吸收陷窝扫描电镜观察鉴定成熟... 目的研究蛇床子素(osthole,OST)对破骨细胞形成和骨吸收的影响,并初步分析其分子机制。方法体外构建破骨细胞诱导培养体系,通过抗酒石酸酸性磷酸酶染色(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)法、骨吸收陷窝扫描电镜观察鉴定成熟破骨细胞,采用CCK-8 (cell counting kit-8)法筛选无细胞毒性的药物浓度组,使用细胞骨架荧光染色法观察OST对其形态的影响。使用骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色进行面积定量分析,并统计吖啶橙荧光染色后凋亡破骨细胞的比例,采用荧光定量PCR法测定OST对NFATc1等相关破骨基因表达的影响。结果体外成功构建破骨细胞培养体系,通过CCK-8法筛选出10-6、10-5mol/L两组药物浓度。OST可使破骨细胞肌动蛋白环变细,伪足和褶皱区消失。OST 0、10-6、10-5mol/L组TRAP染色阳性数目分别为104. 6±4. 5、80. 4±3. 7、58. 2±3. 1,融合指数分别为(44. 3±3. 3)%、(20. 3±0. 9)%、(12. 6±0. 6)%,各浓度组组间比较,差异均有统计学意义(P<0. 05);该3组诱导的破骨细胞产生的骨陷窝数目为41. 67±1. 16、34. 01±2. 65、26. 33±4. 16,骨陷窝面积(μm2/片)分别为1 445 942. 0±164 150. 0、904 080. 8±47 346. 0、641 049. 1±1 993. 0,各浓度组组间比较,差异均有统计学意义(P<0. 05);该三组破骨细胞凋亡率分别为:26. 3%、30. 1%、37. 2%,OST组凋亡率较对照组明显升高,且差异有统计学意义(P<0. 05),但两浓度组之间差异无统计学意义(P> 0. 05)。RANKL诱导后NFATc1、CTSK、MMP-9、TRAP、INTE-BETA3、C-SRC的mRNA表达量分别为空白组的2. 147±0. 246、30. 5±1. 643、43. 54±2. 908、9. 116±0. 392、6. 664±0. 395、4. 131±0. 408倍,与空白组相比表达量均明显升高,差异具有统计学意义(P<0. 01);OST干预后,各组表达量均受到明显抑制,OST组表达量与RANKL对照组相比差异也均具有统计学意义(P<0. 05)。除了NFATc1外,两浓度组组间比较,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论 OST可以通过调控NFATc1等破骨基因表达抑制破骨细胞的分化。 展开更多
关键词 蛇床子素 破骨细胞 NFATc1 骨质疏松
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体外冲击波对骨髓源巨噬细胞向破骨细胞分化及骨吸收活性的影响 被引量:3
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作者 耿欢 雷鸣 +2 位作者 刘水涛 张浩冲 邢更彦 《中国医学前沿杂志(电子版)》 2017年第2期20-24,共5页
目的探讨体外冲击波(extracorporeal shock wave,ESW)对破骨细胞形成及骨吸收作用的影响。方法骨髓源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMMs)经巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)与核因子κB... 目的探讨体外冲击波(extracorporeal shock wave,ESW)对破骨细胞形成及骨吸收作用的影响。方法骨髓源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMMs)经巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)与核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factorκB ligand,RANKL)诱导培养4天,同时给予不同能量的ESW干预,4天后进行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphates,TRAP)染色鉴定破骨细胞并进行破骨细胞计数,逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测破骨细胞分化相关基因NFATc1和c-Fos的表达,骨板吸收试验检测破骨细胞的骨吸收活性。结果 BMMs经诱导4天后出现大量的破骨细胞,ESW干预后破骨细胞的数量显著减少,且吸收面积缩小,破骨细胞分化相关基因NFATc1和c-Fos的表达均显著下降,高能量ESW干预组的抑制效果更明显(P<0.05)。结论适当能量的ESW能够通过抑制NFATc1和c-Fos基因表达而遏制体外培养的破骨细胞的分化;ESW能够明显抑制成熟破骨细胞的骨吸收作用。 展开更多
关键词 体外冲击波 破骨细胞 NFATc1 C-FOS
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姜黄素对类风湿关节炎破骨细胞分化中NF-κB p65和NFATc1表达的影响 被引量:13
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作者 商玮 徐子涵 +3 位作者 郭郡浩 董晓蕾 赵智明 蔡辉 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期467-472,共6页
目的研究姜黄素(curcumin,Cur)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)破骨细胞(osteoclast,OC)分化中核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)p65、活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells cytoplasmic 1,NFATc1... 目的研究姜黄素(curcumin,Cur)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)破骨细胞(osteoclast,OC)分化中核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)p65、活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells cytoplasmic 1,NFATc1)表达的影响。方法密度梯度离心法分离RA患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),经核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)诱导培养为OC,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色及骨吸收功能检测鉴定OC,分别用不同浓度(0、2.5、5及10μmol/L)的Cur进行干预。采用CCK-8法进行Cur细胞毒性检测;计数TRAP染色阳性细胞数;Western-blotting检测NF-κB p65、NFATc1蛋白的表达;免疫荧光染色检测NF-κB p65核易位。结果 CCK-8结果示,Cur2.5、5和10μmol/L的浓度对PBMC未产生细胞毒性;TRAP染色结果示,Cur抑制RANKL诱导的RA-OC分化;Westernblotting结果示,经不同浓度Cur干预后,NF-κB p65在细胞浆中的表达明显升高,在细胞核中的表达明显降低,NFATc1的蛋白表达明显降低;免疫荧光染色结果示Cur抑制NF-κB p65核易位。结论 Cur能明显抑制NF-κB的入核表达,降低NFATc1的表达,从而抑制RA-OC的分化。 展开更多
关键词 姜黄素 类风湿关节炎 破骨细胞 外周血单个核细胞 核因子-ΚB P65 活化T细胞核因子c1
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双膦酸盐对NFATc1及相关因子p-NF-κB、p-c-Jun在破骨细胞分化过程中的影响 被引量:2
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作者 董伟 彭宏峰 +3 位作者 梁永强 冯晓洁 廖囡囡 戚孟春 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期778-781,共4页
目的研究双膦酸盐(ALN)对破骨细胞(OC)分化过程中关键因子NFATc1及其信号分子p-NF-κB、p-c-Jun的影响。方法采用小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导培养OC,细胞培养于培养皿,分A组(对照组)、B组(ALN组)。培养第2d采用Western blotting检测NF... 目的研究双膦酸盐(ALN)对破骨细胞(OC)分化过程中关键因子NFATc1及其信号分子p-NF-κB、p-c-Jun的影响。方法采用小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导培养OC,细胞培养于培养皿,分A组(对照组)、B组(ALN组)。培养第2d采用Western blotting检测NFATc1、p-NF-κB、p-c-Jun基因表达变化情况,培养第4d采用免疫荧光方法检测NFATc1表达,培养第7d检测各组OC生成及数目。采用牙本质磨片接种RAW264.7细胞,分组及处理方法同上述培养皿培养过程,第9d检测骨吸收功能。结果两组细胞均有TRAP阳性多核OC生成,并在牙本质磨片上形成吸收陷窝;但A组TRAP阳性多核细胞数目、吸收陷窝数目及陷窝面积均大于B组。免疫荧光检测NFATc1表达A组高于B组;Western blotting检测NFATc1、p-NF-κB、p-c-Jun表达B组较A组低,两组有显著性差异(P<0.01)。结论双膦酸盐通过下调p-NF-κB、p-c-Jun的表达,最终抑制NFATc1的表达,从而抑制OC生成和骨吸收功能。 展开更多
关键词 阿仑膦酸盐 破骨细胞 NFATc1 NF-ΚB 基因 jun
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