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鲤Myf-6基因的克隆及其表达分析 被引量：4
1
作者 林亚秋 吉红 +3 位作者 郑玉才 邱翔 王树香 刘茂琪 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期16-20,共5页
根据斑马鱼（Danio rerio）Myf-6基因序列设计引物,用鲤（Cyprinus carpio）肌肉组织总RNA,经RT-PCR扩增获得Myf-6基因开放阅读框（ORF序列）720 bp,GenBank登陆号为GU339054。编码239个氨基酸,与斑马鱼、大西洋鲑、刀鱼、河豚等同源性... 根据斑马鱼（Danio rerio）Myf-6基因序列设计引物,用鲤（Cyprinus carpio）肌肉组织总RNA,经RT-PCR扩增获得Myf-6基因开放阅读框（ORF序列）720 bp,GenBank登陆号为GU339054。编码239个氨基酸,与斑马鱼、大西洋鲑、刀鱼、河豚等同源性分别为90%、76%、76%和72%,但与哺乳动物如人、牛、兔、小鼠和绵羊的同源性较低,为59%~60%。利用半定量RT-PCR分析鲤Myf-6基因的mRNA表达特性,结果在心脏、肾脏、脂肪、肝胰脏、肌肉和脾脏中均检测到Myf-6基因的表达,并且在肌肉组织中表达量显著高于其他组织（P〈0.05）。Myf-6基因表达随着生长发育变化呈下降趋势,在较大规格试验鱼（500 g）的表达极显著低于其他两种规格（50~60 g1、20~130 g）试验鱼的表达（P〈0.01）。 展开更多
关键词 鲤 myf-6基因 克隆 表达
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Myf-6基因在不同猪种中的PCR-RFLP遗传多态性及其遗传效应分析 被引量：9
2
作者 朱砺 李学伟 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期887-892,共6页
作为生肌调节因子家族的一个成员,Myf-6基因在肌形成的过程中发挥着重要的作用。采用PCR-RFLP技术分析了Myf-6基因在12个中外猪种及部分杂交群体中的分布情况,并分析了Myf-6基因对肌纤维、胴体品质、胴体等级性状和肉质性状的遗传效应... 作为生肌调节因子家族的一个成员,Myf-6基因在肌形成的过程中发挥着重要的作用。采用PCR-RFLP技术分析了Myf-6基因在12个中外猪种及部分杂交群体中的分布情况,并分析了Myf-6基因对肌纤维、胴体品质、胴体等级性状和肉质性状的遗传效应。结果表明:Myf-6基因内含子1内的AvaI酶切位点多态性不丰富,多数中国地方猪种群体中A等位基因已经完全固定,B等位基因仅以较低的频率存在于外种猪或含外种猪血缘的杂交群体中。尽管没有检测到BB纯合个体,但AB杂合子的平均瘦肉率为50.344%,极显著地高于AA纯合子的45.875%(P<0.01)。AB杂合子的眼肌面积为27.097 cm2,极显著地大于AA纯合子的22.572 cm2(P<0.01)。AB杂合子的皮脂率(39.889%)极显著地低于AA纯合子(44.503%)(P<0.01)。上述结果说明本次实验群体中的B等位基因具有增加胴体瘦肉率和眼肌面积,降低胴体脂肪含量从而改善胴体品质的遗传效应。此外,Myf-6基因对肌纤维生长性状、FOM肉脂仪测定的胴体等级性状以及肉质性状等都没有显著影响(P>0.05)。 展开更多
关键词 猪 MRFs Myt-6基因 遗传多态性 遗传效应
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来源于Alcaligenes A-6的D-氨基酰化酶基因的合成与融合表达
3
作者 侯欣彤 董媛 +5 位作者 林瑞东 于梁 任媛媛 李剑光 高朝辉 滕利荣 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1670-1674,共5页
将来源于Alcaligenes A-6的D-氨基酰化酶基因用大肠杆菌中的丰沛密码子替换,利用化学和基于聚合酶链反应(PCR)技术的酶促方法进行基因全合成,利用pET-32a构建重组表达载体pET-dan,转化进E.coil BL21(DE3)中进行融合表达.经SDS-PAGE电泳... 将来源于Alcaligenes A-6的D-氨基酰化酶基因用大肠杆菌中的丰沛密码子替换,利用化学和基于聚合酶链反应(PCR)技术的酶促方法进行基因全合成,利用pET-32a构建重组表达载体pET-dan,转化进E.coil BL21(DE3)中进行融合表达.经SDS-PAGE电泳、Western-blot检测和活性测定发现,D-ANase可在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白可达到菌体总蛋白的69.2%,密码子优化后基因构建的工程菌发酵活性为96 U/mL,重组蛋白经超声细胞破碎及Ni2+柱亲和层析纯化,比活可达1692.3 U/mg,纯度可达95%以上. 展开更多
关键词 D-氨基酰化酶 产碱杆菌 基因合成 融合表达
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血清miR-210、TSG-6、CTRP3水平与扩张型心肌病患者心肌纤维化及预后的关系
4
作者 王叶宝 林永萍 +1 位作者 刘玲 李建民 《实用医学杂志》 北大核心 2025年第23期3690-3696,共7页
目的探讨血清微小RNA-210(miR-210)、肿瘤坏死因子α刺激基因6(TSG-6)、补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白3(CTRP3)与扩张型心肌病(DCM)患者心肌纤维化及预后的相关性。方法选取2024年3—8月泰州市人民医院收治的117例DCM患者(DCM组)。根据DC... 目的探讨血清微小RNA-210(miR-210)、肿瘤坏死因子α刺激基因6(TSG-6)、补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白3(CTRP3)与扩张型心肌病(DCM)患者心肌纤维化及预后的相关性。方法选取2024年3—8月泰州市人民医院收治的117例DCM患者(DCM组)。根据DCM患者心脏磁共振检查,分为纤维化组(n=96)和非纤维化组(n=21)。根据DCM患者1年内预后随访是否发生急性心力衰竭,分为心衰组(n=47)和非心衰组(n=70)。同期选取58例健康志愿者(健康对照组)。比较各组血清miR-210、TSG-6、CTRP3、Ⅲ型前胶原N端肽(PⅢNP)、左室射血分数(LVEF)、N末端B型利钠肽(NT-proBNP)。结果DCM组血清miR-210、TSG-6、PⅢNP、NT-proBNP水平高于健康对照组,CTRP3、LVEF低于健康对照组(P<0.05)。纤维化组血清miR-210、TSG-6、PⅢNP、NT-proBNP水平高于非纤维化组,CTRP3、LVEF低于非纤维化组(P<0.05)。心衰组血清miR-210、TSG-6、PⅢNP、NT-proBNP水平高于非心衰组,CTRP3、LVEF低于非心衰组(P<0.05)。血清miR-210、TSG-6水平与血清PⅢNP、NT-proBNP水平呈正相关(P<0.05),与LVEF呈负相关(P<0.05)。血清miR-210高水平(OR=2.065,95%CI=1.116~3.821)、TSG-6高水平(OR=1.047,95%CI=1.013~1.083)是DCM患者发生心衰的危险因素(P<0.05),而血清CTRP3高水平(OR=0.911,95%CI=0.849~0.978)是保护性因素(P<0.05)。血清miR-210、TSG-6、CTRP3预测DCM患者发生心衰的灵敏度分别为72.34%、74.47%、74.47%,特异度分别为62.86%、62.86%、68.57%(AUC=0.669,AUC=0.712,AUC=0.759)。结论DCM患者血清miR-210、TSG-6上调,CTRP3下调,并且与心肌纤维化和心功能密切相关。miR-210、TSG-6、CTRP3对DCM预后有较好的预测价值。 展开更多
关键词 扩张型心肌病 心肌纤维化 预后 微小RNA-210 肿瘤坏死因子α刺激基因6 补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白3
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鸡蛔虫凤阳株线粒体ATP 6、NAD 1和NAD 2基因遗传变异分析
5
作者 缪欣怡 陈玉晴 +6 位作者 石家鑫 潘言迪 方林克 黄阳 李文超 顾有方 刘欣超 《动物医学进展》 北大核心 2025年第11期87-94,共8页
为了探究鸡蛔虫的遗传变异情况,对分离自安徽省凤阳县的2株鸡蛔虫线粒体ATP合成酶F0亚单位6(ATP 6)基因、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位Ⅰ(NAD 1)基因和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位Ⅱ(NAD 2)基因序列进行PCR扩增和测序,用DNAS... 为了探究鸡蛔虫的遗传变异情况,对分离自安徽省凤阳县的2株鸡蛔虫线粒体ATP合成酶F0亚单位6(ATP 6)基因、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位Ⅰ(NAD 1)基因和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位Ⅱ(NAD 2)基因序列进行PCR扩增和测序,用DNAStar和Dnasp6.0等软件分析3个基因的核酸序列,并用MEGA11.0构建系统进化树。结果显示,鸡蛔虫凤阳分离株ATP 6、NAD 1和NAD 2基因的开放阅读框片段大小分别为597 bp、876 bp和843 bp,2株鸡蛔虫3个基因的核苷酸同源性分别为99.0%、98.1%和97.8%。遗传距离分析显示,鸡蛔虫凤阳分离株的ATP 6、NAD 1和NAD 2基因与其他鸡蛔虫同源基因的遗传距离均小于或者等于0.024,3个基因分别检测到13、7和4个单倍型,总的单倍型多样性分别为0.971、0.819和0.900,核苷酸多样性分别为0.01141、0.00665和0.01096。以ATP 6、NAD 1和NAD 23个基因序列构建的种系进化树均显示,鸡蛔虫凤阳分离株与其他已知鸡蛔虫分离株聚类在一个分支,其次与鸽蛔虫聚类成禽蛔科支系,与其他蛔虫所属的分支均相距较远,能够鉴别不同种的蛔虫。研究表明,鸡蛔虫凤阳分离株存在遗传变异,但程度较低,且NAD 2基因比ATP 6、NAD 1基因更适合作为鸡蛔虫遗传变异研究的分子标记。 展开更多
关键词 鸡蛔虫 ATP 6基因 NAD 1基因 NAD 2基因 遗传变异
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水稻干尖线虫海藻糖6-磷酸合成酶基因双链RNA细菌表达体系构建
6
作者 崔苗苗 杨行洲 +5 位作者 宋海艳 魏利辉 顾爱国 乐秀虎 李东霞 冯辉 《江苏农业学报》 北大核心 2025年第5期867-874,共8页
外源双链RNA(dsRNA)可通过RNA干扰(RNAi)影响植物线虫的基因表达,达到杀虫防病的目的。利用细菌表达系统进行dsRNA制备,生产效率高、成本低,是dsRNA规模化制备的优选策略。为探索基于RNAi技术的细菌表达dsRNA在水稻干尖线虫(Aphelechoid... 外源双链RNA(dsRNA)可通过RNA干扰(RNAi)影响植物线虫的基因表达,达到杀虫防病的目的。利用细菌表达系统进行dsRNA制备,生产效率高、成本低,是dsRNA规模化制备的优选策略。为探索基于RNAi技术的细菌表达dsRNA在水稻干尖线虫(Aphelechoides besseyi)防治中的作用,本研究以水稻干尖线虫海藻糖6-磷酸合成酶基因AbTPS1和AbTPS2为靶标基因,设计构建细菌表达双链RNA(dsAbTPS1、dsAbTPS2)载体并转化大肠杆菌HT115(DE3),优化dsRNA诱导表达条件和提取方法,并利用荧光定量PCR测定细菌表达的dsRNA对靶标基因的沉默效率,评估其对水稻干尖线虫的防治效果。结果表明,当异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度为0.5 mmol/L、诱导时间为6 h,本研究构建的携带AbTPS-L4440表达载体HT115菌株的dsRNA产量达到最大。利用Trizol法和甲酰胺法从表达菌株中提取的dsRNA产量显著高于乙醇-氯化钠法。用dsAbTPS1和dsAbTPS2处理水稻干尖线虫后,靶基因AbTPS1和AbTPS2表达水平下调,在4℃低温、40℃高温及脱水干燥环境中水稻干尖线虫存活率均显著低于M9缓冲液处理和dsGFP处理。本研究成功构建了水稻干尖线虫AbTPS1、AbTPS2基因的dsRNA细菌表达体系,获得的dsRNA具有明显的RNAi效应,为利用RNA农药防治水稻干尖线虫提供了技术支撑。 展开更多
关键词 水稻干尖线虫 海藻糖-6磷酸合成酶基因 双链RNA RNA干扰
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淇河鲫bmp6基因的克隆及表达特性分析
7
作者 马峻 连凯琪 +5 位作者 闪金研 刘玉玲 李晓龙 赵黎明 李学军 彭仁海 《华北农学报》 北大核心 2025年第2期218-229,共12页
骨形态发生蛋白6(bmp6)基因对鱼类肌间刺的形成发育具有重要的调控作用。为探究淇河鲫bmp6基因的序列特征和表达特性,通过克隆获得淇河鲫bmp6基因的编码序列(CDS),并进行生物信息学分析;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测,分析bmp6基因... 骨形态发生蛋白6(bmp6)基因对鱼类肌间刺的形成发育具有重要的调控作用。为探究淇河鲫bmp6基因的序列特征和表达特性,通过克隆获得淇河鲫bmp6基因的编码序列(CDS),并进行生物信息学分析;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测,分析bmp6基因在淇河鲫不同组织和发育时期的表达差异。结果显示,淇河鲫bmp6基因由两部分同源基因各3个等位基因组成,分别是bmp6a-1、bmp6a-2、bmp6a-3和bmp6b-1、bmp6b-2、bmp6b-3,其CDS序列全长分别为1245,1257 bp,编码414,418个氨基酸。bmp6a和bmp6b均是含有一个信号肽序列且无跨膜结构的不稳定疏水性分泌蛋白,bmp6a主要分布在线粒体、细胞核和细胞质中,而bmp6b主要分布在细胞核与线粒体上。bmp6a和bmp6b二级结构都以无规则卷曲为主,与三级结构预测的结果一致,且都具有1个TGF-β-rel家族保守结构域。氨基酸序列同源性分析表明,淇河鲫bmp6a氨基酸序列与团头鲂bmp6具有较高的相似性,与哺乳动物的相似性较低,而淇河鲫bmp6b氨基酸序列与鲫鱼和银鲫的bmp6b具有较高的相似性。系统发育树分析显示,淇河鲫bmp6a与鲤鱼bmp6a聚于同一进化支,而淇河鲫bmp6b与鲫鱼和银鲫bmp6b聚于同一进化支。qRT-PCR检测结果表明,bmp6a和bmp6b基因在淇河鲫的脑、肌肉、鳃、脾脏、肠、性腺、肝脏和肾脏组织中均有表达,但在肝脏、鳃组织和肾脏中表达量较高;二者在淇河鲫幼鱼不同发育时期具有相似的表达模式,在肌间刺骨化前,bmp6a和bmp6b的表达量最高,之后随着肌间刺的发育形成,bmp6a和bmp6b的表达量降低。综上,通过克隆获得淇河鲫bmp6基因CDS序列,并进行生物信息学分析和qRT-PCR检测,为进一步创制淇河鲫无肌间刺新品系提供了参考依据。 展开更多
关键词 淇河鲫 骨形态发生蛋白6(bmp6) 基因克隆 序列分析 基因表达
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外源性肿瘤坏死因子刺激基因6对炎症环境下人牙髓干细胞成牙/成骨分化的影响
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作者 董稳航 张雪 +2 位作者 何巍 李锐 王颖 《郑州大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第2期167-172,共6页
目的:观察外源性肿瘤坏死因子刺激基因6(TSG-6)对炎症环境下人牙髓干细胞(hDPSC)成牙/成骨分化的影响及可能机制。方法:取拔除的健康、阻生智齿,从牙髓中分离培养hDPSC,鉴定后分组。正常对照组用含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养96 h,... 目的:观察外源性肿瘤坏死因子刺激基因6(TSG-6)对炎症环境下人牙髓干细胞(hDPSC)成牙/成骨分化的影响及可能机制。方法:取拔除的健康、阻生智齿,从牙髓中分离培养hDPSC,鉴定后分组。正常对照组用含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养96 h,矿化诱导组用矿化诱导液培养96 h,炎症因子组用含50μg/L TNF-α的矿化诱导液培养96 h,炎症因子+TSG-6组先用含20μg/L TSG-6的DMEM培养48 h,再用含TNF-α的矿化诱导液培养48 h,中和抗体组先与TSG-6、CD44中和抗体共培养48 h后再用含TNF-α的矿化诱导液培养48 h。采用Western blot法分别检测成牙/成骨标志物[牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白1(DMP-1)、RUNX家族转录因子2(RUNX2)]及P65、p-IκB、IκB蛋白的表达水平。采用免疫荧光染色观察炎症因子+TSG-6组和中和抗体组细胞核因子κB(NF-κB)的核转运水平。12只2日龄SD大鼠分4组,每组3只。麻醉后处死,取下颌骨,分别置于含二甲基亚砜的培养液、矿化诱导液、含TNF-α的矿化诱导液、含TNF-α和TSG-6的矿化诱导液中培养10 d,用HE和Masson三色染色法评价各组牙组织的矿化能力。结果:与正常对照组比较,矿化诱导组DSPP、DMP-1和RUNX2蛋白的表达水平升高(P<0.05);与矿化诱导组比较,炎症因子组上述蛋白的表达水平降低(P<0.05);与炎症因子组比较,炎症因子+TSG-6组上述蛋白的表达水平升高(P<0.05)。与正常对照组比较,炎症因子组P65、p-IκB蛋白的表达水平升高(P<0.05);与炎症因子组比较,炎症因子+TSG-6组P65、p-IκB蛋白的表达水平降低(P<0.05)。与炎症因子+TSG-6组比较,中和抗体组DSPP、DMP-1和RUNX2蛋白的表达水平降低,P65、p-IκB蛋白的表达水平升高,发生NF-κB核转运的细胞增多。动物实验表明TSG-6处理可促进炎症环境下大鼠下颌骨中前期牙本质的形成。结论:外源性TSG-6可增强炎症环境下hDPSC的成牙/成骨分化能力,其机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 TNF-α 肿瘤坏死因子刺激基因6 NF-ΚB信号通路 成牙/成骨分化
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烟草品种遵烟6号和K326的多酚氧化酶基因编辑研究
9
作者 王军 孙小琼 +3 位作者 潘登华 杨安华 徐得泽 殷得所 《湖北农业科学》 2025年第1期181-185,226,共6页
采用CRISPR/Cas9基因编辑技术,分别对烟草(Nicotiana tabacum L.)品种遵烟6号和K326的多酚氧化酶(PPO)家族基因成员LOC107810501进行靶向敲除。结果表明,LOC107810501基因被敲除后,在烟草的阳性编辑单株中未检测到该基因的表达,同时LOC1... 采用CRISPR/Cas9基因编辑技术,分别对烟草(Nicotiana tabacum L.)品种遵烟6号和K326的多酚氧化酶(PPO)家族基因成员LOC107810501进行靶向敲除。结果表明,LOC107810501基因被敲除后,在烟草的阳性编辑单株中未检测到该基因的表达,同时LOC107821546、LOC107786520、LOC107773093、LOC107787563、LOC107805360基因的相对表达量均明显下降。研究获得了低PPO活性的烟草T0突变单株,T1世代测序检测证明突变性状可以稳定遗传。 展开更多
关键词 烟草(Nicotiana tabacum L.)品种 多酚氧化酶 基因编辑 遵烟6号 K326
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六妹羊肚菌Zn(Ⅱ)_(2)Cys_(6)转录因子家族鉴定与热胁迫表达分析
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作者 徐瑞平 王青 +2 位作者 李闯 唐利华 汪国莲 《食药用菌》 2025年第6期417-426,共10页
以六妹羊肚菌(Morchella sextelata)为实验材料,采用同源比对等生物信息学手段筛选其Zn(Ⅱ)_(2)Cys_(6)基因家族成员,系统分析该家族保守基序、理化性质、系统进化、基因定位、共线性关系及启动子顺式作用元件,并基于转录组测序数据,分... 以六妹羊肚菌(Morchella sextelata)为实验材料,采用同源比对等生物信息学手段筛选其Zn(Ⅱ)_(2)Cys_(6)基因家族成员,系统分析该家族保守基序、理化性质、系统进化、基因定位、共线性关系及启动子顺式作用元件,并基于转录组测序数据,分析其在热胁迫条件下的表达差异情况。结果表明,在六妹羊肚菌基因组中共鉴定出71个Zn(Ⅱ)_(2)Cys_(6)家族基因,分布于22条scaffold上,成员间未发现共线性关系。系统发育分析表明,该家族可分为3个亚家族。六妹羊肚菌Zn(Ⅱ)_(2)Cys_(6)家族基因启动子区域含有光响应、低温响应、防御应激、黄酮物质合成等顺式作用元件。热胁迫条件下,有42个Zn(Ⅱ)_(2)Cys_(6)家族基因差异表达,其中MsZCP2、MsZCP19、MsZCP33、MsZCP57等基因显著上调,MsZCP1、MsZCP6、MsZCP53、MsZCP61等基因显著下调,提示其可能参与六妹羊肚菌菌丝对热胁迫的响应过程。 展开更多
关键词 六妹羊肚菌 Zn(Ⅱ)2Cys6基因家族 热胁迫响应 同源比对 基因功能
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小麦m^(6)A结合蛋白编码基因TaECT3的克隆与功能分析
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作者 王嘉宽 石婷瑞 +3 位作者 马宇航 马羽彤 周芮西 李增林 《麦类作物学报》 北大核心 2025年第10期1316-1323,共8页
N^(6)-甲基腺苷(m^(6)A)作为真核生物RNA中最丰富的表观转录修饰类型,通过动态的“写入-擦除-阅读”机制调控植物生长发育及逆境响应。ECT家族蛋白作为m^(6)A阅读结合蛋白,通过识别m^(6)A修饰位点参与RNA代谢调控。为明晰小麦TaECT3作为... N^(6)-甲基腺苷(m^(6)A)作为真核生物RNA中最丰富的表观转录修饰类型,通过动态的“写入-擦除-阅读”机制调控植物生长发育及逆境响应。ECT家族蛋白作为m^(6)A阅读结合蛋白,通过识别m^(6)A修饰位点参与RNA代谢调控。为明晰小麦TaECT3作为m^(6)A结合蛋白响应逆境胁迫的机理,从小麦材料Fielder中克隆到TaECT3基因CDS全长,对其进行生物信息学分析。结果表明,TaECT3基因的编码区(CDS)长度为1854 bp,编码617个氨基酸,其编码蛋白含有一个ECT家族蛋白典型的YTH保守结构域。TaECT3蛋白分子量为66.93 kDa,等电点为6.48,是亲水性稳定蛋白。其二级结构以无规则卷曲(79.74%)和α-螺旋(13.45%)为主,三级结构模拟显示该蛋白具有m^(6)A结合口袋。经系统进化分析,小麦TaECT3与大麦HvECT3、高粱SbECT3和短柄草BdDF3A之间有较近的亲缘关系,暗示它们之间可能功能保守。EMSA试验显示TaECT3重组蛋白特异性结合m^(6)A修饰RNA;亚细胞定位其可能位于细胞膜;qRT-PCR分析表明,高温(37℃,6 h)和PEG8000模拟干旱(15%,6 h)处理后,小麦Fielder中TaECT3的表达显著上调和下调。以上结果说明小麦TaECT3作为m^(6)A结合蛋白可能参与高温与干旱胁迫响应。 展开更多
关键词 小麦 TaECT3 m^(6)A结合蛋白 基因克隆 亚细胞定位 EMSA
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脂肪和肥胖相关基因调节谷胱甘肽过氧化物酶4 m^(6)A修饰抑制3T3-L1前脂肪细胞分化
12
作者 黄麟媛 高静 +1 位作者 孙一锦 冀厚静 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第11期1687-1699,共13页
脂肪和肥胖相关基因(fat mass and obesity associated gene,FTO)作为一种重要的RNA N 6-甲基腺苷(N 6-methyladenosine,m^(6)A)去甲基化酶,被报道可通过调节m^(6)A修饰水平影响谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathion peroxidase 4,GPX4)的表... 脂肪和肥胖相关基因(fat mass and obesity associated gene,FTO)作为一种重要的RNA N 6-甲基腺苷(N 6-methyladenosine,m^(6)A)去甲基化酶,被报道可通过调节m^(6)A修饰水平影响谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathion peroxidase 4,GPX4)的表达。GPX4是抑制铁死亡(ferroptosis)的关键分子,而铁死亡信号的激活已被证实可显著减少小鼠原代脂肪细胞和高脂饮食喂养小鼠的脂质累积。然而,Gpx 4 mRNA中具体的m^(6)A修饰位点尚未明确,且Gpx 4在小鼠脂肪细胞分化过程中的调控作用亦不清楚。为此,本研究旨在明确小鼠Gpx 4 mRNA中的m^(6)A修饰位点,并深入探讨Gpx 4对3T3-L1脂肪细胞分化的调控作用。通过生物信息学分析结合MeRIP-qPCR和SELECT实验验证,本研究确定Gpx 4 mRNA的一个关键m^(6)A修饰位点位于距其转录起始位点303 bp处。利用CRISPR-Cas9技术在3T3-L1细胞中敲低GPX 4并进行成脂诱导分化,油红O结果显示,GPX 4敲低显著减少了胞内脂滴累积(P<0.001);RT-PCR和Western印迹分析进一步表明,关键成脂分化基因(C/ebpα、Pparγ、Lpl、Fabp 4)表达情况显著下降(P<0.001)。为探究Gpx 4调控作用的时间特异性,在成脂分化不同阶段给予GPX4抑制剂RSL3(100 nmol/L)。结果显示,在有丝分裂扩增期给予RSL3处理,能显著抑制成脂相关基因(Fabp4、Pparγ和Adipoq)表达并阻碍脂肪分化进程。综上所述,本研究不仅明确了小鼠Gpx 4 mRNA中一个关键的m^(6)A修饰位点(位于转录起始位点303 bp),更重要的是揭示了Gpx 4在3T3-L1脂肪细胞分化中扮演的关键调控角色。这些发现不仅将FTO-m^(6)A-GPX4-铁死亡调控轴与脂肪细胞分化联系起来,也为深入理解肥胖的病理机制提供了新的理论依据和潜在干预靶点。 展开更多
关键词 脂肪和肥胖相关基因 m^(6)A甲基化修饰 谷胱甘肽过氧化物酶4 有丝分裂扩增期 脂肪细胞分化
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高血压肾损害患者IL-6-572、IL-6-174基因多态性及其与贝那普利治疗反应的相关性 被引量：10
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作者 于欣 张德凯 +4 位作者 楚元奎 张怡清 白静 邢译文 杨震 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第17期2713-2716,2721,共5页
目的探讨白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)-572、IL-6-174基因多态性与高血压肾损害及贝那普利治疗反应的相关性。方法入选284例初次诊断高血压病的患者,根据24h尿蛋白排泄率(urinary albumin excretion,UAER)水平分为高血压组(UAER<... 目的探讨白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)-572、IL-6-174基因多态性与高血压肾损害及贝那普利治疗反应的相关性。方法入选284例初次诊断高血压病的患者,根据24h尿蛋白排泄率(urinary albumin excretion,UAER)水平分为高血压组(UAER<20μg/min)和高血压肾损害组(UAER≥20μg/min)。检测IL-6水平及IL-6-572、IL-6-174基因多态性。然后用贝那普利干预,观察具备IL-6-572、IL-6-174的不同基因型的患者的治疗反应。结果高血压肾损害组中,IL-6-572的CG基因型、IL-6-174的GG基因型比例最高。贝那普利治疗对具有IL-6-572GG基因型、IL-6-174CC基因型的高血压肾损害患者治疗效果最佳。结论IL-6-572、IL-6-174基因多态性与高血压肾损害及其对贝那普利治疗的反应相关。 展开更多
关键词 高血压肾损害 白细胞介素6 IL-6-572基因 IL-6-174基因 基因多态性 贝那普利
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鸡白介素-6(ChIL-6)基因的克隆与序列分析 被引量：11
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作者 孙建和 陆苹 蒋静 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期1-3,共3页
分别用鸡传染性法氏囊病病毒感染和用ConA免疫刺激健康鸡 ,无菌取处理鸡的脾脏 ,匀浆后用Tr izol抽提细胞总RNA ,应用随机引物反转录获得cDNA ,设计引物 ,经PCR扩增获得鸡白介素 - 6 (ChIL - 6 )基因 ,应用pGEM -T载体克隆该基因 ,经测... 分别用鸡传染性法氏囊病病毒感染和用ConA免疫刺激健康鸡 ,无菌取处理鸡的脾脏 ,匀浆后用Tr izol抽提细胞总RNA ,应用随机引物反转录获得cDNA ,设计引物 ,经PCR扩增获得鸡白介素 - 6 (ChIL - 6 )基因 ,应用pGEM -T载体克隆该基因 ,经测序 ,表明其与GeneBank中公布的唯一的一个ChIL - 6基因为同源基因。 展开更多
关键词 鸡 ChIL-6基因 基因克隆 鸡细胞因子基因 白介素-6 序列分析
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6-BA对葡萄果实中有机酸积累及相关基因表达的影响 被引量：18
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作者 王西成 钱亚明 +4 位作者 吴伟民 赵密珍 周蓓蓓 王壮伟 巫建华 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期149-153,共5页
为探究6-BA对葡萄果实中有机酸积累的影响,及其调控果实有机酸合成的分子机制,以里扎马特葡萄为试材,花前5 d、花后3 d和花后10 d连续3次对花序与果穗进行6-BA处理,研究6-BA对葡萄果实中有机酸积累及其代谢相关基因表达的影响。结果表明... 为探究6-BA对葡萄果实中有机酸积累的影响,及其调控果实有机酸合成的分子机制,以里扎马特葡萄为试材,花前5 d、花后3 d和花后10 d连续3次对花序与果穗进行6-BA处理,研究6-BA对葡萄果实中有机酸积累及其代谢相关基因表达的影响。结果表明,成熟果实中有机酸含量与6-BA处理浓度密切相关,30 mg/L处理后,成熟果实中的酒石酸和总酸含量均显著低于对照,但对苹果酸、柠檬酸和草酸含量并未产生较大影响;对于10,20 mg/L 6-BA处理而言,处理与对照成熟果实中的各种有机酸含量均不存在显著差异。基因表达结果表明,6-BA处理对IDH、MDH和PEPC基因的表达总体表现为抑制,但对于ME基因的表达则主要表现为促进。据此分析,6-BA处理抑制果实中有机酸合成的原因可能与其影响部分有机酸代谢相关基因的表达有关。 展开更多
关键词 葡萄 6-BA 有机酸 基因表达
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失血性休克肠上皮细胞线粒体DNA ATPase6,8亚基基因的改变 被引量：8
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作者 李伟文 陆松敏 +3 位作者 刘建仓 武凡 柏干荣 李萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期961-964,共4页
目的　观察失血性休克大鼠肠上皮细胞mtDNAATPase 6,8亚基基因的改变。方法　将 6只Wistar大鼠分成单纯手术组、休克组。分别提取mtDNA ,采用PCR技术扩增后测序 ,检测突变点。结果　Wistar大鼠mtDNAATPase 6,8亚基基因存在多态性 ,休克... 目的　观察失血性休克大鼠肠上皮细胞mtDNAATPase 6,8亚基基因的改变。方法　将 6只Wistar大鼠分成单纯手术组、休克组。分别提取mtDNA ,采用PCR技术扩增后测序 ,检测突变点。结果　Wistar大鼠mtDNAATPase 6,8亚基基因存在多态性 ,休克组存在A 7797缺失和一定数量点突变 :A7863G ,G795 0T ,C82 94G ,T85 0 5G。结论　失血性休克 5h ,肠上皮细胞mtDNAATPase 6,8亚基基因会发生突变 ,由此可导致所编码的氨基酸的改变 。 展开更多
关键词 失血性休克 线粒体DNA ATPASE 6基因 ATPase8基因 多态性 突变
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白细胞介素-6基因多态性及血清水平与原发性高血压的关系 被引量：7
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作者 付海霞 张嘉莹 +1 位作者 赵子牛 李庚山 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第18期1797-1800,共4页
目的探讨中国汉族人群中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)基因多态性及血清水平与原发性高血压(essential hypertension,EH)的关系,并初步观察IL-6基因多态性对血清IL-6水平的影响。方法对191例EH患者及197例健康对照人群进行IL-6基因-... 目的探讨中国汉族人群中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)基因多态性及血清水平与原发性高血压(essential hypertension,EH)的关系,并初步观察IL-6基因多态性对血清IL-6水平的影响。方法对191例EH患者及197例健康对照人群进行IL-6基因-597G/A、-572C/G及-174G/C多态性及血清水平检测,PCR-RFLP法检测基因多态性,ELISA法测定血清IL-6水平。结果两组人群-597与-174位点均仅发现GG基因型。-572基因型及等位基因频率分布在两组间存在显著差异,EH组CG+GG基因型及G等位基因频率均显著高于对照组(P<0.05,P<0.01);G等位基因携带者患EH的风险是CC基因型的1.68倍(95%CI:1.12～2.53,P<0.05)。EH组血清IL-6水平显著高于对照组[(15.41±8.09)pg/ml与(4.68±2.90)pg/ml,P<0.01],-572CG+GG基因型患者血清IL-6及收缩压水平均显著高于-572CC基因型患者(P<0.05)。结论中国汉族人群中可能不存在IL-6基因-174G/C与-597G/A多态性,他们与EH发病无关;-572C/G多态性可能是中国汉族人群EH发病的遗传危险因素之一,其可能通过对血清IL-6水平表达的影响增加个体EH的发病风险。 展开更多
关键词 高血压 白细胞介素-6 基因 多态现象(遗传学)
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肺癌患者血清p16、FHIT、APC基因甲基化检测 被引量：15
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作者 刘莹 王圆圆 +4 位作者 贾文青 倪然 张辉 王静 周舫 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2017年第1期51-54,共4页
目的:检测肺癌患者血清中抑癌基因p16、FHIT、APC的甲基化,探讨它们在肺癌发生和诊断中的临床价值。方法:收集120例原发性肺癌患者(肺癌组)、46例肺良性疾病患者(对照组)的血液标本,采用甲基化PCR方法检测2组患者血清p16、FHIT、APC基... 目的:检测肺癌患者血清中抑癌基因p16、FHIT、APC的甲基化,探讨它们在肺癌发生和诊断中的临床价值。方法:收集120例原发性肺癌患者(肺癌组)、46例肺良性疾病患者(对照组)的血液标本,采用甲基化PCR方法检测2组患者血清p16、FHIT、APC基因甲基化。采用logistic回归分析肺癌发生的危险因素,计算上述基因甲基化诊断肺癌的准确率。结果:肺癌组血清中p16、FHIT、APC的甲基化率分别为37.5%、34.2%、31.7%,对照组中分别为6.5%、13.0%、10.9%,差异有统计学意义(P均<0.05)。Logistic回归分析提示p16、FHIT基因甲基化均为肺癌发生的独立危险因素,OR(95%CI)分别为7.509(2.160~26.099)、2.927(1.096~7.814)(P均<0.05)。p16、FHIT、APC基因甲基化单项诊断肺癌的准确率分别为53%、49%、47%,3种基因甲基化联合诊断肺癌的准确率为87%,优于单项指标。结论:p16、FHIT基因甲基化均为肺癌发生的独立危险因素;联合检测p16、FHIT、APC甲基化可提高肺癌诊断的准确性。 展开更多
关键词 肺肿瘤 P16 FHIT APC 甲基化
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中国部分地区肿瘤患者UGT1A1*28和UGT1A1*6位点基因多态性分布的差异研究 被引量：9
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作者 来向阳 衡雪源 +6 位作者 车峰远 王守峰 石建华 蔡利娟 张金岭 黄伟 李峥嵘 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第30期3705-3710,共6页
目的调查我国部分地区肿瘤患者UGT1A1^＊28和UGT1A1^＊6位点基因多态性分布情况,明确二者在肿瘤患者中分布的差异。方法收集2011年8月—2014年4月山东大学附属临沂市人民医院、临沂市肿瘤医院、兰州大学第一附属医院、西安交通大学第一... 目的调查我国部分地区肿瘤患者UGT1A1^＊28和UGT1A1^＊6位点基因多态性分布情况,明确二者在肿瘤患者中分布的差异。方法收集2011年8月—2014年4月山东大学附属临沂市人民医院、临沂市肿瘤医院、兰州大学第一附属医院、西安交通大学第一附属医院、西京医院应用伊立替康治疗的住院肿瘤患者241例,均进行了UGT1A1^＊28位点基因多态性检测,其中177例同时进行了UGT1A1^＊6位点基因多态性检测,提取基因组DNA,PCR扩增UGT1A1基因片段,检测UGT1A1^＊28和UGT1A1^＊6位点基因型分布。结果 241例检测UGT1A1^＊28位点基因多态性的患者中,UGT1A1^＊28位点基因启动子区TA序列呈6次重复的野生型（TA6/6）即野生型纯合子180例（74.7%）,TA序列6次和7次重复的杂合突变型（TA6/7）即突变型杂合子56例（23.2%）,TA序列7次重复的纯合突变型（TA7/7）即突变型纯合子5例（2.1%）;177例检测UGT1A1^＊6位点基因多态性的患者中,UGT1A1^＊6位点基因型为野生型（G/G）即野生型纯合子106例（59.9%）,杂合突变型（G/A）即突变型杂合子62例（35.0%）,纯合突变型（A/A）即突变型纯合子9例（5.1%）。UGT1A1^＊28和UGT1A1^＊6位点基因型分布比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。不同性别、年龄、肿瘤部位、地区来源肿瘤患者UGT1A1^＊28位点基因型分布比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。不同性别、年龄、地区来源肿瘤患者UGT1A1^＊6位点基因型分布比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）;不同肿瘤部位患者UGT1A1^＊6位点基因型分布比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。男性、〈40岁、肠道、山东地区、甘肃地区肿瘤患者UGT1A1^＊28与UGT1A1^＊6位点基因型分布比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;女性、40~60岁、〉60岁、肺部、胃部、其他部位、陕西地区、其他地区肿瘤患者UGT1A1^＊28与UGT1A1^＊6位点基因型分布比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论国内肿瘤患者中UGT1A1^＊28和UGT1A1^＊6位点基因野生型纯合子频率均较高,但两位点基因型分布有差异,所以研究UGT1A1基因与伊立替康毒副作用时应联合检测UGT1A1^＊28和UGT1A1^＊6两个突变位点,并且应同时注意患者的性别、年龄、肿瘤部位及地区来源。 展开更多
关键词 肿瘤 基因 突变 UGT1A1^＊28 UGT1A1^＊6
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成纤维细胞介导的人白细胞介素6基因疗法的建立及其体内白细胞介素6分泌水平的实验研究 被引量：9
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作者 曹雪涛 章卫平 +4 位作者 顾申 于益芝 徐志工 杨嗣坤 叶天星 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1993年第6期323-327,共5页
细胞因子基因治疗是近年来生物治疗的重要进展。本文以人IL-6基因为治疗目的基因,以成纤维细胞为载体细胞,建立了人IL-6基因疗法的实验模型,并动态观察了其体内IL-6分泌水平.将650bp的人IL-6 cDNA 插入到携有Neo^R 基因的表达载体BCMGN... 细胞因子基因治疗是近年来生物治疗的重要进展。本文以人IL-6基因为治疗目的基因,以成纤维细胞为载体细胞,建立了人IL-6基因疗法的实验模型,并动态观察了其体内IL-6分泌水平.将650bp的人IL-6 cDNA 插入到携有Neo^R 基因的表达载体BCMGNeo 的Xho I 位点上,对此重组表达载体进行限制性酶切鉴定。用磷酸钙共沉淀法将BCMGNeo-IL-6转入NIH3T3成纤维细胞中,通过G418抗性筛选、有限稀释和上清中IL-6活性的测定,从多株阳性克隆中筛选到一株高分泌IL-6(184.6U/ml)的克隆株。对此阳性克隆进行了Southern 杂交分析。将此阳性克隆体外扩增、包裹入胶原中,然后移植入小鼠腹腔内,可从小鼠血清中(直至移植后15天)检测出IL-6,明成纤维细胞能成功地将IL-6基因导入体内并有效表达,证明该基因疗法是可行的。 展开更多
关键词 白细胞介素6 基因疗法 成纤维细胞
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