目的构建环状RNA(circRNA)-微小RNA(miRNA)-信使RNA(mRNA)竞争性内源RNA(ceRNA)网络,探讨其在刀豆蛋白A诱导的自身免疫性肝炎(AIH)小鼠模型中的潜在调控机制,并验证关键基因的表达与肝损伤的关系。方法使用高通量数据筛选差异表达的circ...目的构建环状RNA(circRNA)-微小RNA(miRNA)-信使RNA(mRNA)竞争性内源RNA(ceRNA)网络,探讨其在刀豆蛋白A诱导的自身免疫性肝炎(AIH)小鼠模型中的潜在调控机制,并验证关键基因的表达与肝损伤的关系。方法使用高通量数据筛选差异表达的circRNA、miRNA和mRNA,基于Pearson相关分析和Miranda程序预测miRNA与mRNA及circRNA的配对关系,构建ceRNA网络。对网络中的差异表达基因进行GO和KEGG富集分析。选取SPF级雄性C57BL/6小鼠12只,采用随机数字表法分为对照组和模型组,每组6只,模型组通过尾静脉注射刀豆蛋白A构建AIH小鼠模型,对照组注射生理盐水。通过qRT-PCR和Western Blot方法验证circ_0001577、miR-7055-3p和Akt3的表达。测定血清转氨酶(ALT、AST)和肝组织中丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量,并分析其与基因表达的相关性。计量资料两组间比较采用成组t检验。使用Spearman相关分析法分析基因表达与肝损伤指标之间的相关性。结果构建了包含5795个circRNAmiRNA-mRNA配对的ceRNA网络,发现circ_0001577为中心基因。与对照组小鼠比较,模型组中的circ_0001577和Akt3表达上调,miR-7055-3p下调,差异均有统计学意义(P值均<0.05),且circ_0001577与Akt3呈正相关(r=0.861,P<0.001),miR-7055-3p与两者呈负相关(r值分别为−0.644、−0.855,P值均<0.05)。模型组小鼠肝脏Akt3蛋白表达显著高于对照组(1.04±0.10 vs 0.72±0.06,t=−6.49,P=0.001),并与circ_0001577呈正相关(r=0.579,P=0.048),与miR-7055-3p呈负相关(r=−0.891,P<0.001)。模型组小鼠血清ALT、AST和肝组织MDA、NO含量较对照组均显著增加(P值均<0.05),上述肝损伤指标与circ_0001577、Akt3呈正相关(r值分别为0.849、0.865、0.811、0.801;0.889、0.954、0.938、0.961,P值均<0.05),与miR-7055-3p呈负相关(r值分别为−0.687、−0.818、−0.833、−0.870,P值均<0.05),且与Akt蛋白表达呈正相关(r值分别为0.648、0.796、0.848、0.860,P值均<0.05)。结论circ_0001577通过竞争性吸附miR-7055-3p,导致Akt3抑制被解除,进而促进Akt3的表达,参与AIH的发生发展。circ_0001577及其相关通路可能成为AIH的潜在治疗靶点。展开更多
目的探究阿托伐他汀对高血糖诱导的小鼠脑缺血后出血转化(HT)的作用及机制。方法36只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、HT模型组和阿托伐他汀组,每组12只。比较各组小鼠神经功能评分、死亡率、HT发生率、HT分级评分,苏木精-伊红...目的探究阿托伐他汀对高血糖诱导的小鼠脑缺血后出血转化(HT)的作用及机制。方法36只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、HT模型组和阿托伐他汀组,每组12只。比较各组小鼠神经功能评分、死亡率、HT发生率、HT分级评分,苏木精-伊红染色观察脑组织出血情况,免疫荧光染色评估血脑屏障通透性,Western blot检测缺血半暗带脑组织免疫球蛋白G(IgG)、闭锁连接蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(occludin)、紧密连接蛋白5(claudin5)、基质金属蛋白酶(MMP)2和MMP-9的蛋白表达。结果与假手术组比较,HT模型组神经功能评分、死亡率、HT发生率、HT评分、IgG荧光强度、IgG、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著增高,ZO-1、occludin、claudin5蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与HT模型组比较,阿托伐他汀组神经功能评分、死亡率、HT发生率、HT评分、IgG荧光强度及IgG、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著降低[(2.73±1.19)分vs(3.91±0.94)分,16.7%vs 41.6%,58.3%vs 91.6%,(1.00±1.04)分vs(2.58±1.13)分,(504.30±105.52)a.u vs(859.91±153.28)a.u,4.55±1.40 vs 12.06±3.73,1.87±0.41 vs 2.95±0.68,1.47±0.24 vs 2.12±0.23,P<0.05,P<0.01],ZO-1、occludin、claduin5蛋白表达显著升高(1.55±0.20 vs 0.53±0.10,0.92±0.11 vs 0.35±0.07、0.58±0.04 vs 0.30±0.05,P<0.01)。结论阿托伐他汀可通过抑制MMP-2、MMP-9激活,上调ZO-1、occludin、claudin5表达,降低血脑屏障通透性,从而抑制高血糖诱导的脑缺血后HT。展开更多
文摘目的构建环状RNA(circRNA)-微小RNA(miRNA)-信使RNA(mRNA)竞争性内源RNA(ceRNA)网络,探讨其在刀豆蛋白A诱导的自身免疫性肝炎(AIH)小鼠模型中的潜在调控机制,并验证关键基因的表达与肝损伤的关系。方法使用高通量数据筛选差异表达的circRNA、miRNA和mRNA,基于Pearson相关分析和Miranda程序预测miRNA与mRNA及circRNA的配对关系,构建ceRNA网络。对网络中的差异表达基因进行GO和KEGG富集分析。选取SPF级雄性C57BL/6小鼠12只,采用随机数字表法分为对照组和模型组,每组6只,模型组通过尾静脉注射刀豆蛋白A构建AIH小鼠模型,对照组注射生理盐水。通过qRT-PCR和Western Blot方法验证circ_0001577、miR-7055-3p和Akt3的表达。测定血清转氨酶(ALT、AST)和肝组织中丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量,并分析其与基因表达的相关性。计量资料两组间比较采用成组t检验。使用Spearman相关分析法分析基因表达与肝损伤指标之间的相关性。结果构建了包含5795个circRNAmiRNA-mRNA配对的ceRNA网络,发现circ_0001577为中心基因。与对照组小鼠比较,模型组中的circ_0001577和Akt3表达上调,miR-7055-3p下调,差异均有统计学意义(P值均<0.05),且circ_0001577与Akt3呈正相关(r=0.861,P<0.001),miR-7055-3p与两者呈负相关(r值分别为−0.644、−0.855,P值均<0.05)。模型组小鼠肝脏Akt3蛋白表达显著高于对照组(1.04±0.10 vs 0.72±0.06,t=−6.49,P=0.001),并与circ_0001577呈正相关(r=0.579,P=0.048),与miR-7055-3p呈负相关(r=−0.891,P<0.001)。模型组小鼠血清ALT、AST和肝组织MDA、NO含量较对照组均显著增加(P值均<0.05),上述肝损伤指标与circ_0001577、Akt3呈正相关(r值分别为0.849、0.865、0.811、0.801;0.889、0.954、0.938、0.961,P值均<0.05),与miR-7055-3p呈负相关(r值分别为−0.687、−0.818、−0.833、−0.870,P值均<0.05),且与Akt蛋白表达呈正相关(r值分别为0.648、0.796、0.848、0.860,P值均<0.05)。结论circ_0001577通过竞争性吸附miR-7055-3p,导致Akt3抑制被解除,进而促进Akt3的表达,参与AIH的发生发展。circ_0001577及其相关通路可能成为AIH的潜在治疗靶点。
文摘目的探究阿托伐他汀对高血糖诱导的小鼠脑缺血后出血转化(HT)的作用及机制。方法36只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、HT模型组和阿托伐他汀组,每组12只。比较各组小鼠神经功能评分、死亡率、HT发生率、HT分级评分,苏木精-伊红染色观察脑组织出血情况,免疫荧光染色评估血脑屏障通透性,Western blot检测缺血半暗带脑组织免疫球蛋白G(IgG)、闭锁连接蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(occludin)、紧密连接蛋白5(claudin5)、基质金属蛋白酶(MMP)2和MMP-9的蛋白表达。结果与假手术组比较,HT模型组神经功能评分、死亡率、HT发生率、HT评分、IgG荧光强度、IgG、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著增高,ZO-1、occludin、claudin5蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与HT模型组比较,阿托伐他汀组神经功能评分、死亡率、HT发生率、HT评分、IgG荧光强度及IgG、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著降低[(2.73±1.19)分vs(3.91±0.94)分,16.7%vs 41.6%,58.3%vs 91.6%,(1.00±1.04)分vs(2.58±1.13)分,(504.30±105.52)a.u vs(859.91±153.28)a.u,4.55±1.40 vs 12.06±3.73,1.87±0.41 vs 2.95±0.68,1.47±0.24 vs 2.12±0.23,P<0.05,P<0.01],ZO-1、occludin、claduin5蛋白表达显著升高(1.55±0.20 vs 0.53±0.10,0.92±0.11 vs 0.35±0.07、0.58±0.04 vs 0.30±0.05,P<0.01)。结论阿托伐他汀可通过抑制MMP-2、MMP-9激活,上调ZO-1、occludin、claudin5表达,降低血脑屏障通透性,从而抑制高血糖诱导的脑缺血后HT。
