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MALDI-TOF MS技术在动物疫病检测中的应用研究进展
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作者 蔡成杰 孟鸽 +10 位作者 封莹杰 单玉平 王莹 尚佳静 王阳 王宏艳 于晓慧 蒋文明 刘华雷 范春艳 李阳 《中国动物检疫》 2025年第1期58-66,共9页
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)是一种基于特征蛋白(如微生物核糖体)指纹的高丰度和稳定表达的快速鉴定技术,作为一种病原微生物检测鉴别的新兴方法,具有简单、快速、低成本、高通量等优势,已被广泛应用于临床医学检... 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)是一种基于特征蛋白(如微生物核糖体)指纹的高丰度和稳定表达的快速鉴定技术,作为一种病原微生物检测鉴别的新兴方法,具有简单、快速、低成本、高通量等优势,已被广泛应用于临床医学检测、遗传分型、耐药性检测、食品微生物检测中,但其在动物疫病检测领域仍处于发展阶段。本文主要对MALDI-TOF MS的原理及其在病毒性、细菌性、真菌性和寄生虫性动物疫病检测方面的应用进行综述,旨在为MALDI-TOF MS技术在该领域的深入应用提供参考。 展开更多
关键词 maldi-tof ms 动物疫病检测 应用研究
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MALDI-TOF-MS在耐碳青霉烯肠杆菌多黏菌素B快速药敏试验中的应用
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作者 王林 刘赛 王维 《山西医科大学学报》 CAS 2024年第8期1050-1054,共5页
目的构建一种耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)多黏菌素B的快速药敏试验方法,为临床抗生素的选择和精准调整提供依据。方法采用WHONET 5.6软件对分离自西安市第一医院2023年3月至2024年3月的108株CRE菌株信息进行筛选,以肉汤稀释法为参比... 目的构建一种耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)多黏菌素B的快速药敏试验方法,为临床抗生素的选择和精准调整提供依据。方法采用WHONET 5.6软件对分离自西安市第一医院2023年3月至2024年3月的108株CRE菌株信息进行筛选,以肉汤稀释法为参比方法,采用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)进行多黏菌素B快速药敏测定。结果108株CRE分离株以肺炎克雷伯菌为主(48.14%),其次是产气肠杆菌和奇异变形杆菌(各占13.89%)。标本来源以痰液为主(65.74%),其次尿液(18.52%)和血液(8.33%)。临床科室分布以神经外科为主(48.15%),其次为重症医学科(18.52%)和呼吸内科(14.81%)。CRE分离株对大部分药物呈现高度耐药,对常见β内酰胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类、β内酰胺复合药物耐药率分别超过70%,80%,50%和75%。与肉汤稀释法相比,MALDI-TOF-MS法测定CRE对多黏菌素B药敏结果的分类一致率(CA)为98.1%,重大误差(ME)为1.85%,未出现非常重大误差(VME),均在可允许范围之内。结论本院分离的CRE对多种抗菌药物广泛耐药,基于MALDI-TOF-MS的快速药敏试验方法准确可靠,可用来评价CRE对多黏菌素B的敏感性,便于临床及时调整泛耐药细菌治疗方案。 展开更多
关键词 maldi-tof-ms 耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌 细菌感染 多黏菌素B 药敏试验 肉汤稀释法
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MALDI-TOF MS法快速鉴定散装即食食品中3种食源性致病菌 被引量:4
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作者 崔洁 林吉恒 +3 位作者 孙瑛 严卓彦 夏瑛瑛 黄朱梁 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2024年第5期253-270,共18页
本研究旨在利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS)快速检测并鉴定散装即食食品中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌3种食源性... 本研究旨在利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS)快速检测并鉴定散装即食食品中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌3种食源性致病菌。通过对点样方式、前处理方式、不同培养基及培养时间等各项实验条件的优化筛选确定最佳方法,并考察其检测限和稳定性,同时用所建立的方法与多重PCR法、VITEK 2等生化鉴定法进行结果比对,比较三者鉴定结果的一致性,最后进行批量食品样本检测来探寻MALDI-TOF MS鉴定法在散装即食食品中的适用性。结果表明,三种目标菌同一批次及不同传代次数的鉴定得分均大于95%,变异系数均小于2%,所建立的方法重复性和稳定性良好,且检测限为10^(5)CFU/mL,MALDI-TOF MS菌株鉴定结果与多重PCR法、生化鉴定法结果高度一致,且比二者检测用时更短,更加特异高效;在点样方式上,相较于夹心法与混合干滴法,三种覆盖法点样平均鉴定得分更高,均为99.9%,其中1μL+1μL覆盖法点样可获得的平均峰数目更多,特征峰更复杂且强度更高;而在前处理方式上,甲酸乙腈法与其他两种菌体处理方法相比可获得更多的出峰量和更高的峰强度,平均鉴定得分均在98%以上,且与数据库中图谱匹配度更高。综上所述,MALDI-TOF MS法在致病菌鉴定方面不仅灵敏特异、准确快速,且操作简便、结果直观,作为国标法的有力补充,为食源性致病菌的分析鉴定与分型溯源提供了新思路。 展开更多
关键词 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(maldi-tof ms) 散装即食食品 沙门氏菌 黄色葡萄球菌 蜡样芽孢杆菌
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MALDI-TOF MS分析大肠菌群不合格餐(饮)具中的微生物污染情况 被引量:2
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作者 刘腊兰 彭纳 +3 位作者 吴后吕 向义 卓一鸣 刘子音 《食品与发酵科技》 CAS 2024年第3期129-133,149,共6页
为了解餐(饮)具中大肠菌群污染情况及被污染的餐(饮)具是否有致病风险,对大肠菌群项目不合格餐(饮)具中的微生物进行菌种鉴定。将餐(饮)具复发酵阳性的培养物转接伊红美蓝琼脂平板进行分离,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-... 为了解餐(饮)具中大肠菌群污染情况及被污染的餐(饮)具是否有致病风险,对大肠菌群项目不合格餐(饮)具中的微生物进行菌种鉴定。将餐(饮)具复发酵阳性的培养物转接伊红美蓝琼脂平板进行分离,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术对28批不合格餐具中分离到的62株野生菌株的单个菌落进行精确鉴定,鉴定率为93.55%,鉴定结果均与自动微生物生化鉴定仪鉴定结果一致。主要鉴定出阪崎克罗诺杆菌、丙二酸盐克罗诺杆菌、大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、弗氏柠檬酸杆菌、阴沟肠杆菌等10种微生物。其中存在致病风险的微生物比例达68.97%,而28批次不合格餐(饮)具中存在致病风险的达26批次,占比92.86%。MALDI-TOF MS技术能同时且快速准确地鉴定出餐(饮)具中存在的不同微生物,而大肠菌群不合格餐(饮)具存在较高的致病风险,需加强餐(饮)具卫生管理与监测。 展开更多
关键词 餐(饮)具 大肠菌群 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱
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关于在MALDI-TOF MS技术背景下提高临床微生物检验实习教学能力的探讨
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作者 林慧珍 李泰阶 +4 位作者 黄师 林青 王柏莲 蒋诚传 石姗以 《中国卫生产业》 2024年第2期238-241,共4页
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS)技术是临床微生物诊断中的一项革命性创新技术,给临床微生物诊断带来了极大的便利,同时也给临床微生... 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS)技术是临床微生物诊断中的一项革命性创新技术,给临床微生物诊断带来了极大的便利,同时也给临床微生物实习带教带来了新的挑战。本文阐述了MALDI-TOF MS技术在临床微生物检验实习带教中的应用探讨,旨在充分运用MALDI-TOF MS技术结合传统鉴定技术,提高临床微生物检验实习的教学能力。 展开更多
关键词 临床微生物检验 maldi-tof ms技术 实习带教 应用效果 教学能力
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克罗诺杆菌MALDI-TOF-MS数据库的建立及应用 被引量:14
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作者 赵贵明 刘洋 +3 位作者 陈颖 杨海荣 赵勇胜 王娉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第8期105-110,共6页
应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionisation time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术建立了克罗诺杆菌MALDI-TOF-MS数据库,用于该菌属内种和亚种的高通量鉴定及菌株分型。在优化... 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionisation time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术建立了克罗诺杆菌MALDI-TOF-MS数据库,用于该菌属内种和亚种的高通量鉴定及菌株分型。在优化培养条件、样品处理方法及确定MALDI-TOF-MS蛋白质指纹图谱采集参数的基础上,将采集的8种参考菌株蛋白质质谱数据通过Biotyper软件构建克罗诺杆菌的MALDI-TOF-MS数据库,再用相近肠杆菌及该属分离株验证数据库的准确性。结果表明:应用建立的克罗诺杆菌的MALDI-TOF-MS数据库对135株克罗诺杆菌分离株进行分析,鉴定分值均不小于2.0,达到了种水平鉴定要求,通过聚类分析,可进一步分型。构建的MALDI-TOF-MS数据库为克罗诺杆菌高通量鉴定与分型提供了一种新的手段。 展开更多
关键词 克罗诺杆菌 maldi-tof-ms 数据库 鉴定 分型
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MALDI-TOFMS测定高聚合度葡聚糖及不同基体在测定中的作用比较 被引量:9
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作者 邓慧敏 张珍英 +2 位作者 查庆民 邓芹英 赵善楷 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2003年第6期996-999,共4页
应用基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI-TOFMS)直接对未经分级的高聚合度 (n>1 0 0 )葡聚糖样品进行了测定 ,检测到的葡聚糖最大分子量达 1 80 0 0以上 .对 2 ,5 -二羟基苯甲酸 (DHB)、 1 -羟基异喹啉 (1 -HIQ)及 3,4 -二羟... 应用基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI-TOFMS)直接对未经分级的高聚合度 (n>1 0 0 )葡聚糖样品进行了测定 ,检测到的葡聚糖最大分子量达 1 80 0 0以上 .对 2 ,5 -二羟基苯甲酸 (DHB)、 1 -羟基异喹啉 (1 -HIQ)及 3,4 -二羟基肉桂酸 (咖啡酸 ,CA) 3种一元基体以及 DHB与 1 -HIQ,DHB与 CA两种二元基体在测定中的作用进行了比较 .结果表明 ,DHB基体测定的质量范围较大 ;DHB+ 1 -HIQ和 DHB+ CA二元混合基体对样品的解吸电离效果及谱图重现性好 ;DHB+ 1 -HIQ基体获得的谱图分辨率高 . 展开更多
关键词 maldi-tofms 测定 葡聚糖 基体 基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱 多糖
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沙门氏菌MALDI-TOF-MS蛋白质指纹图谱分析方法的研究 被引量:22
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作者 陈秀金 尹红红 +1 位作者 匡华 胥传来 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1189-1197,共9页
以沙门氏菌标准菌株(Salmonella enterica DSM 17058 T)为研究对象,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对其进行蛋白质指纹图谱分析,进而得到正确的鉴定结果。为了获得重现性良好的质谱图,对沙门氏菌的最佳培养基、最适... 以沙门氏菌标准菌株(Salmonella enterica DSM 17058 T)为研究对象,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对其进行蛋白质指纹图谱分析,进而得到正确的鉴定结果。为了获得重现性良好的质谱图,对沙门氏菌的最佳培养基、最适培养时间以及样品前处理方法进行了优化,从而确立沙门氏菌MALDI-TOF-MS蛋白质指纹图谱标准分析方法。结果表明:乙醇/甲酸处理法所得图谱中的特征峰多,包含更多的蛋白标志物,所得图谱基线平滑,噪音少,信噪比高,是最佳的样品处理方法。以营养丰富的哥伦比亚琼脂为培养基,在24 h时即可达到强峰值信号,质谱图重现性良好,鉴定结果准确,并且相比于其它3种培养基所需培养时间短。 展开更多
关键词 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 沙门氏菌 鉴定 影响因素
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金黄色葡萄球菌及其甲氧苯青霉素耐药性的MALDI-TOF MS鉴定 被引量:11
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作者 杜宗敏 杨瑞馥 +2 位作者 郭兆彪 宋亚军 王津 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期62-67,共6页
用MALDI_TOFMS细菌指纹图谱鉴定细菌 ,建立区分金黄色葡萄球菌甲氧苯青霉素耐药株和敏感株的MALDI_TOFMS分析方法,检测了76株从临床标本中分离得到的金黄色葡萄球菌 ,用软件进行聚类分析,以nuc(耐热核酸酶)基因和mecA(耐药)基因聚合酶... 用MALDI_TOFMS细菌指纹图谱鉴定细菌 ,建立区分金黄色葡萄球菌甲氧苯青霉素耐药株和敏感株的MALDI_TOFMS分析方法,检测了76株从临床标本中分离得到的金黄色葡萄球菌 ,用软件进行聚类分析,以nuc(耐热核酸酶)基因和mecA(耐药)基因聚合酶链反应(PCR)检测结果为参照 ,74 %的菌株经MALDI_TOFMS给出了正确的鉴定结果;金黄色葡萄球菌甲氧苯青霉素耐药株和敏感株的质谱图有很大差别 ,各自有其特征峰;经过软件聚类分析 ,76株实验菌株划分为敏感群和耐药群;与PCR检测结果对照 ,有7株菌PCR检测mecA基因为阴性 ,而经MALDI_TOFMS鉴定为耐药株 ,表型鉴定表明其中有5株为敏感株;利用细菌指纹图谱和数据库检索对大多数菌株实现了正确鉴定;MALDI_TOFMS分辨率高 ,甚至可以区分株间的差异 ,实现了区分金黄色葡萄球菌甲氧苯青霉素耐药株和敏感株; 展开更多
关键词 maldi-tofms 鉴定 基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱 金黄色葡萄球菌 甲氧苯青霉素 耐药性
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单增李斯特氏菌MALDI-TOF-MS鉴定与分型研究 被引量:20
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作者 王耀 曹际娟 +5 位作者 赵昕 郑秋月 王刚 田卓 史媛媛 曹远银 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第3期194-198,共5页
为建立单增李斯特氏菌的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)快速鉴定与分型方法,实验收集37株单增李斯特氏菌分离株,应用MALDI-TOF-MS采集图谱,获取独特的蛋白质指纹图谱,汇总成标准图谱,建立单增李斯特氏菌鉴定数据库。... 为建立单增李斯特氏菌的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)快速鉴定与分型方法,实验收集37株单增李斯特氏菌分离株,应用MALDI-TOF-MS采集图谱,获取独特的蛋白质指纹图谱,汇总成标准图谱,建立单增李斯特氏菌鉴定数据库。采用单增李斯特氏菌标准菌株进行验证,表明鉴定结果的可信度很高。在数据库信息的基础上,对37株单增李斯特氏菌分离株进行聚类分型。分型结果表明,在蛋白质水平上,MALDI-TOF-MS可把37株单增李斯特氏菌分成9个型别。 展开更多
关键词 单增李斯特氏菌 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(maldi-tof-ms) 鉴定 分型
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兔肝金属硫蛋白亚型异构体的高效液相色谱分离与ESI-MS,MALDI-TOF-MS鉴定 被引量:8
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作者 赵锐 纪建国 +2 位作者 袁洪生 管华诗 茹炳根 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2002年第6期1086-1090,共5页
由于金属硫蛋白 (MT)基因的多态性 ,决定不同亚型的 MT异构体的存在 ,MT亚型异构体的结构是MT功能研究的基础 .通过离子交换柱可将 MT分成 MT-1和 MT-2两个异构体 ,用不同条件的反相高效液相色谱 (RP-HPLC)可将 MT-1和 MT-2分成不同的... 由于金属硫蛋白 (MT)基因的多态性 ,决定不同亚型的 MT异构体的存在 ,MT亚型异构体的结构是MT功能研究的基础 .通过离子交换柱可将 MT分成 MT-1和 MT-2两个异构体 ,用不同条件的反相高效液相色谱 (RP-HPLC)可将 MT-1和 MT-2分成不同的亚型异构体 ,并利用 MALDI-TOF MS和 LC-ESI-MS对比确定了它们的分子量 .结果表明 ,兔肝 MT在不同的 p H条件下分离得到不同分子量的亚型异构体 .在酸性条件下 ,MT-1可分为 2个主要亚型异构体 ,分子量分别为 61 49.0和 62 44.5 ,而 MT-2主要分为 3个亚型异构体 ,分子量分别为 61 49.0 ,62 44.0和 61 2 7.0 . MT-1和 MT-2有 2个亚型异构体分子量相同的异构体存在 .在酸性条件下 ,MT-1的 2个异构体及 MT-2分子量为 61 2 7的亚型异构体可稳定存在 . 展开更多
关键词 高效液相色谱 分离 鉴定 金属硫蛋白 亚型异构体 电喷雾离子化质谱 基质辅助激光解析飞行时间质谱
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基于MALDI-TOF-MS的脂质组学研究——鲫鱼受镉暴露的潜在生物标志物 被引量:7
12
作者 李国琛 王颜红 +1 位作者 吴仁安 王世成 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第2期269-273,共5页
以含镉(Cd)500μg/L水体中养殖0,10,20 d的3组鲫鱼为研究对象,测定鱼肉中Cd含量,借助HPLC与MALDI-TOF-MS离线联用技术得到鱼肉磷脂图谱,并采用偏最小二乘判别分析法(PLS-DA)针对图谱数据开展模式识别分析.结果表明,在20 d暴露期内,鱼肉... 以含镉(Cd)500μg/L水体中养殖0,10,20 d的3组鲫鱼为研究对象,测定鱼肉中Cd含量,借助HPLC与MALDI-TOF-MS离线联用技术得到鱼肉磷脂图谱,并采用偏最小二乘判别分析法(PLS-DA)针对图谱数据开展模式识别分析.结果表明,在20 d暴露期内,鱼肉中Cd含量呈持续上升趋势,而磷脂酰胆碱(PC)含量在暴露10 d后显著低于正常水平(未受镉暴露)(p<0.05),暴露20 d后基本恢复到正常水平.PLS-DA分析实现了3组样本的组间判别,说明磷脂指纹图谱能更好的反映外源Cd对鲫鱼的代谢影响.PC可以作为指示水体Cd对鲫鱼毒害作用的生物标志物.HPLC与MALDI-TOF-MS离线联用技术不仅能定量分析鱼肉中PC总量,也分离纯化了PC组分,从而使MALDI-TOF-MS成功用于复杂鱼肉样品的磷脂分析,适用于脂质组学研究. 展开更多
关键词 磷脂 生物标志物 脂质组学 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱
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MALDI-TOF-MS方法检测、鉴定副溶血性弧菌 被引量:11
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作者 龚艳清 陈信忠 +2 位作者 郭书林 杨俊萍 叶妍妍 《食品安全质量检测学报》 CAS 2013年第2期521-527,共7页
目的建立快速检测和鉴定副溶血性弧菌的基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析方法。方法采用副溶血性弧菌标准菌株,在不同的培养基或不同的培养时间下进行MALDI-TOF-MS检测,同时对长时间冷冻保存的菌株进行检测,以验证... 目的建立快速检测和鉴定副溶血性弧菌的基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析方法。方法采用副溶血性弧菌标准菌株,在不同的培养基或不同的培养时间下进行MALDI-TOF-MS检测,同时对长时间冷冻保存的菌株进行检测,以验证该方法的稳定性和重复性。对不同来源的菌株进行检测,以确认方法的准确性。结果用PW、TCBS琼脂和弧菌显色培养基等3种培养基,分别培养18、42、72h时,对该菌的蛋白质谱图影响很小;保存2年的菌株,其MALDI-TOF-MS鉴定分值保持稳定;对来自不同国家和地区的菌株都可以得到同样准确的结果。结论 MALDI-TOF-MS方法可以快速、准确地鉴定副溶血性弧菌。因其具有很好的稳定性和重复性,可用于副溶血性弧菌的日常检测。 展开更多
关键词 maldi-tof-ms 副溶血性弧菌 检测 鉴定
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基质中加入少量盐类改善MALDI-TOF MS的谱图信噪比 被引量:6
14
作者 方彩云 翟建军 +1 位作者 刘锋 杨芃原 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2005年第4期660-662,共3页
CHCA as a matrix facilitates the ionization of proteins and peptides in a matrix-assisted laser desorption/ionization(MALDI) time-of-flight(TOF) mass spectrometer. The matrix itself also ionizes and so do its adducts.... CHCA as a matrix facilitates the ionization of proteins and peptides in a matrix-assisted laser desorption/ionization(MALDI) time-of-flight(TOF) mass spectrometer. The matrix itself also ionizes and so do its adducts. Matrix clusters and adducts interfere with peptide ionization and peptide mass spectrum interpretation, especially at low sample concentrations and within m/z 500-1 000 range. These matrix adducts, especially within m/z 500-1 000, are significantly reduced with addition of ammonium citrate, ammonium sulfate, ammonium benzoate, ammonium bicarbonate, ammonium citrate and potassium dihydrogen phosphate to the matrix and the samples were deposited onto the MALDI target. The reduction of matrix adducts improves peptide ionization and signal-to-noise ratio, which enhances the reliability of database searching. 展开更多
关键词 基质加合物 信噪比 maldi-tof ms
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不同培养基与前处理方法对副溶血弧菌MALDI-TOF MS鉴定结果的影响评估 被引量:8
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作者 陈峰 张丹丽 +1 位作者 宛宝山 陈晋 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2017年第4期264-267,共4页
目的评估不同培养基及前处理方法在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对副溶血弧菌鉴定中的影响,并寻求最优化条件组合。方法收集副溶血弧菌40株,分别用血琼脂平板、TCBS琼脂平板和双洗琼脂平板进行培养;用直涂法、扩展法... 目的评估不同培养基及前处理方法在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对副溶血弧菌鉴定中的影响,并寻求最优化条件组合。方法收集副溶血弧菌40株,分别用血琼脂平板、TCBS琼脂平板和双洗琼脂平板进行培养;用直涂法、扩展法(直涂后裂解)和萃取(裂解、萃取后涂靶)法进行质谱前处理。用SAS软件建立不同培养基及前处理方法对该菌质谱检出率影响的logistic回归分析模型,并进行卡方检验统计分析。结果 "血琼脂平板+萃取法"条件组合检出率最高(100%鉴定到属,67.5%鉴定到种);在不使用血琼脂平板的前提下,"双洗琼脂平板+萃取法"条件组合检出率最高(70%鉴定到属,37.5%鉴定到种)。在"属"鉴定水平,前处理方法相同时,不同培养基的检出率差异有统计学意义(P<0.01);而培养基相同时,不同前处理方法的检出率差异无统计学意义(P>0.05);直涂法和扩展法相对萃取法的相对危险度(OR)分别为0.66和0.95,检出率差异无统计学意义(P>0.05);TCBS琼脂平板和双洗琼脂平板相对血琼脂平板的OR分别为0.06和0.10,对检出率差异有统计学意义(P<0.05),logistic回归方程Y=2.95-0.41a-0.05b-2.83c-2.35d(a:直涂法;b:扩展法;c:TCBS琼脂平板;d:双洗琼脂平板)。在"种"鉴定水平,采用扩展法或萃取法,不同培养基的检出率差异有统计学意义(P<0.05);采用血琼脂平板,不同前处理方法的检出率差异有统计学意义(P<0.01);直涂法和扩展法相对萃取法的OR分别为0.32和0.55,检出率差异有统计学意义(P<0.05);TCBS琼脂平板和双洗琼脂平板相对血琼脂平板的OR分别为0.18和0.49,检出率差异有统计学意义(P<0.05),logistic回归方程Y=0.20-1.15a-0.61b-1.72c-0.72d(a:直涂法;b:扩展法;c:TCBS琼脂平板;d:双洗琼脂平板)。结论欲提升副溶血弧菌MALDI-TOF MS鉴定效果,合适培养基的选择优于改善蛋白质提取的前处理操作。推荐萃取法作为常规前处理方法,培养基的选择建议依次为血琼脂平板、双洗琼脂平板和TCBS琼脂平板。 展开更多
关键词 培养基 前处理方法 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 副溶血弧菌
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基于2D-DIGE/MALDI-TOF-MS技术筛选奶牛低血钙症生物标志物 被引量:3
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作者 舒适 夏成 +5 位作者 张洪友 许楚楚 李昌盛 肖鑫焕 王刚 白云龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1238-1245,共8页
奶牛乳热(MF)是一种严重的营养代谢性疾病,通常被分为临床型及亚临床型低血钙症(SH)。奶牛乳热的诊断通常是应用奶牛血浆中的钙浓度进行判定的,但是在奶牛乳热整个发生发展的过程中,发病的具体机制仍是研究的盲点。在本试验中通过筛选... 奶牛乳热(MF)是一种严重的营养代谢性疾病,通常被分为临床型及亚临床型低血钙症(SH)。奶牛乳热的诊断通常是应用奶牛血浆中的钙浓度进行判定的,但是在奶牛乳热整个发生发展的过程中,发病的具体机制仍是研究的盲点。在本试验中通过筛选奶牛乳热、亚临床低血钙症及健康奶牛间生物标志物进而解释可能的发生机制。选取27头奶牛作为实验动物,并根据其血浆钙浓度及有无临床症状分为乳热组(MF组)、亚临床低血钙组(SH组)和正常组(C组)。在组内每3个样品混合成为1个混合样本应用于2D-DIGE试验。结果得到110个差异蛋白质点,选取其中80个点进行MALDI-TOF-MS质谱分析,得到66个阳性结果并整合成为16种蛋白质。根据试验结果,选取A2M、HP和PON1进行Western blotting验证试验。本试验首次证实A2M、HP和PON1是奶牛乳热症3种新的生物标志物,并分析了其在乳热症发生过程中的可能作用机制。 展开更多
关键词 奶牛 乳热 亚临床低血钙症 2D-DIGE/maldi-tof-ms WESTERN blottin
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大豆巯基肽的共价色谱法制备及其MALDI-TOF-MS分析 被引量:2
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作者 丁秀臻 孔祥珍 +2 位作者 陈业明 张彩猛 华欲飞 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期31-36,共6页
建立了一种从复杂的大豆球蛋白酶解物中提取巯基肽的高选择性方法。首先,对大豆球蛋白酶解物中的二硫键用1,4-二硫苏糖醇进行还原,对还原剂的用量进行了考察和优化,提高了酶解物中的巯基肽含量。然后用Thiopropyl-Sephrose 6B共价色谱... 建立了一种从复杂的大豆球蛋白酶解物中提取巯基肽的高选择性方法。首先,对大豆球蛋白酶解物中的二硫键用1,4-二硫苏糖醇进行还原,对还原剂的用量进行了考察和优化,提高了酶解物中的巯基肽含量。然后用Thiopropyl-Sephrose 6B共价色谱制备还原酶解物中的巯基肽,对共价色谱的吸附、解吸条件进行了考察和优化。研究表明:二硫键还原最佳1,4-二硫苏糖醇用量为20 mmol/L,还原之后酶解物中的巯基含量从1.8μmol/g提高到了113.8μmol/g。共价色谱的最佳条件为还原酶解物的上样量为酶解物中巯基含量占凝胶活性位点的80%,键合时间30 min;解吸时1,4-二硫苏糖醇浓度20 mmol/L,解吸时间20 min。此外,C18柱可以有效地将巯基肽中的1,4-二硫苏糖醇和2-巯基吡啶去除。MALDI-TOF-MS分析表明制备的巯基肽中可检测到45个肽段,其中36个肽段含有巯基,表明Thiolpropyl-Sepharose 6B共价色谱对巯基肽有很高的选择性。 展开更多
关键词 大豆球蛋白酶解物 巯基肽 还原 Thiolpropyl—Sepharose 6B malditofms
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基于MALDI-TOF-MS质谱技术对蜂蜜中芽孢杆菌的鉴定与分型 被引量:8
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作者 宗凯 周莉质 +4 位作者 李云飞 陈雪娇 孙娟娟 郑海松 余晓峰 《安徽农业科学》 CAS 2016年第8期107-109,共3页
[目的]对分离自不同产地和品种的蜂蜜中的芽孢杆菌属进行鉴定分型,探索利用蜂蜜中芽孢杆菌特征指纹图谱对蜂蜜产地和品种进行溯源的可行性。[方法]从44种不同产地和品种蜂蜜中分离出44株芽孢杆菌,3株铜绿假单胞菌。采用基质辅助激光解析... [目的]对分离自不同产地和品种的蜂蜜中的芽孢杆菌属进行鉴定分型,探索利用蜂蜜中芽孢杆菌特征指纹图谱对蜂蜜产地和品种进行溯源的可行性。[方法]从44种不同产地和品种蜂蜜中分离出44株芽孢杆菌,3株铜绿假单胞菌。采用基质辅助激光解析-电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)条件对分离的芽孢杆菌进行鉴定分型和聚类分析。[结果]44株芽孢杆菌中鉴定出蜡样芽孢杆菌(B.cereus)31株,短小芽孢杆菌(B.pumilus)5株,枯草芽孢杆菌(B.subtilis)3株,地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)2株,炭疽芽孢杆菌(B.anthracis)1株,土壤短芽孢杆菌(Brevibacillus agri.)2株。通过多次重复试验,表明从同一份样品或同一品牌蜂蜜样品中能稳定分离到芽孢杆菌,获得的蛋白指纹图谱具有极好的稳定性。[结论]MALDI-TOF-MS可根据获得的芽孢杆菌蛋白指纹图谱将芽孢杆菌划分为不同类型,可作为一种新的根据蜂蜜中芽孢杆菌的特征指纹图谱进行溯源的方法。 展开更多
关键词 基质辅助激光解析-电脑飞行时间质谱 芽孢杆菌 鉴定分析
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MALDI-TOF MS对草莓中铜绿假单胞菌和黏质沙雷氏菌的检测 被引量:3
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作者 魏超 代晓航 +1 位作者 郭灵安 刘炜 《食品科学技术学报》 CAS 北大核心 2018年第4期105-110,共6页
为了评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF MS)在草莓微生物风险监测的应用价值,确定草莓的危害识别微生物及其特征,采用选择性培养方法对50份草莓样品中铜绿假单胞菌和黏质沙雷氏菌进行分离,MALDI-TOF MS对分离微生物进... 为了评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF MS)在草莓微生物风险监测的应用价值,确定草莓的危害识别微生物及其特征,采用选择性培养方法对50份草莓样品中铜绿假单胞菌和黏质沙雷氏菌进行分离,MALDI-TOF MS对分离微生物进行鉴定,应用SARAMIS Premium软件对这2种食物感梁性病原微生物的蛋白质图谱进行分析和加权修正。结果表明,铜绿假单胞菌在草莓中的检出率为18%,黏质沙雷氏菌检出率为20%,实验获得草莓中分离铜绿假单胞菌完全拟合特征峰12组,标识峰聚类分析结果表明,分离铜绿假单胞菌差异较大;获得草莓分离黏质沙雷氏菌完全拟合特征峰有8组,标识峰加权聚类分析结果可认定分离的2株黏质沙雷氏菌同源。MALDI-TOF MS方法可标识草莓分离微生物的蛋白质特异性特征,且对微生物的溯源及特异性分析有一定优势,表明其在农产品复杂微生物环境中具有应用潜力。 展开更多
关键词 maldi-tof ms 草莓 铜绿假单胞菌 黏质沙雷氏菌 标识峰
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MALDI-TOF MS表征均聚芳香硫酚环状低聚物 被引量:3
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作者 张珍英 邓慧敏 +1 位作者 邓芹英 赵善楷 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期58-60,63,共4页
采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI-TOFMS)对4种合成的均聚芳香硫酚环状低聚物进行了质谱表征 ;并且对4种合成产物的组成、结构进行了分析及确认 ;得到了均聚芳香硫酚环状低聚物的相对分子质量及其分布信息 ;研究结果显示 :M... 采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI-TOFMS)对4种合成的均聚芳香硫酚环状低聚物进行了质谱表征 ;并且对4种合成产物的组成、结构进行了分析及确认 ;得到了均聚芳香硫酚环状低聚物的相对分子质量及其分布信息 ;研究结果显示 :MALDI-TOFMS是分析均聚芳香硫酚环状低聚物的有效工具。 展开更多
关键词 均聚芳香硫酚环状低聚物 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 表征 组成 结构 MALDl-tof ms
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