L-N-(2-噻吩磺酰基)氨基酸乙酯衍生物的合成、结构及抗肿瘤活性 被引量：4

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作者 薛思佳 申杰峰 +1 位作者 王庆东 蔡志娟 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期152-156,共5页

将2-噻吩磺酰基引入α-L-氨基酸乙酯中,设计合成了9种未见文献报道的新化合物N-2-噻吩磺酰基-α-L-氨基酸乙酯和N-2-噻吩磺酰基甘氨酸乙酯。结构经IR、1H NMR、MS和元素分析测试技术得以确证。对化合物3a的单晶进行了X射线晶体结构测定... 将2-噻吩磺酰基引入α-L-氨基酸乙酯中,设计合成了9种未见文献报道的新化合物N-2-噻吩磺酰基-α-L-氨基酸乙酯和N-2-噻吩磺酰基甘氨酸乙酯。结构经IR、1H NMR、MS和元素分析测试技术得以确证。对化合物3a的单晶进行了X射线晶体结构测定,结果表明,其属于单斜晶系,Cc空间群,晶胞参数a=1.4538(2)nm,b=0.56902(9)nm,c=1.4337(2)nm,Z=4,V=1.0978(3)nm3,Dc=1.508mg/m3,α=90.00°,β=112.245(2)°,γ=90.00°,F(000)=520,R=0.0858,wR=0.2265。经MTT法多次平行实验观测,结果发现,部分目标化合物对白血病K562细胞的增殖有明显的抑制作用:在质量浓度为1.0×10-8g/mL时,化合物3f、3g、3i对白血病K562肿瘤细胞的增殖有较好的抑制作用,抑制率分别为40.22%、33.47%和31.86%,化合物3a～3i对白血病K562肿瘤细胞的增殖的半数抑制质量浓度(IC50,1×10-6g/mL)依次为:35.65、13.87、9.23、4.9、9.24、8.16、7.84、7.73、7.73、6.57。实验中还发现,部分化合物能够诱导肿瘤细胞自然凋亡。通过与5-氟尿嘧啶(5-FU)阳性对照结果表明,该类化合物具有很好的研究开发潜力和价值。 展开更多

关键词 合成 α-l-氨基酸乙酯 K562细胞 噻吩磺酰胺

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密码子优化α-L-鼠李糖苷酶基因在酿酒酵母细胞的表面展示表达及产物的酶学性质 被引量：6

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作者 王方芹 张凡 +3 位作者 何姝 李文静 罗姮 王俊 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期638-647,共10页

桑树富含黄酮苷类化合物,利用糖苷酶生物转化可有效提高其生物利用度,对挖掘桑树资源的药食用价值具有重要意义。天然来源的糖苷酶催化选择性强,但异源表达量低。以源自黑曲霉(Aspergillus niger)的α-L-鼠李糖苷酶基因rha为目的基因,... 桑树富含黄酮苷类化合物,利用糖苷酶生物转化可有效提高其生物利用度,对挖掘桑树资源的药食用价值具有重要意义。天然来源的糖苷酶催化选择性强,但异源表达量低。以源自黑曲霉(Aspergillus niger)的α-L-鼠李糖苷酶基因rha为目的基因,改善该基因的密码子偏爱性和适应性,将密码子优化后的corha基因展示表达到酿酒酵母细胞表面,以达到高效催化的实用目的。与转入原始rha基因的重组酿酒酵母菌株相比,转入密码子优化corha基因的重组酿酒酵母菌株表面展示coRHA蛋白的表达量提高了2.9倍,培养60 h后coRHA的酶活力提高了2.7倍。以对硝基苯-α-L-鼠李糖苷(p NPR)为底物检测含corha基因重组菌株生产coRHA的酶活力,其最适p H及温度分别为5.0和45℃;以芦丁为底物,在p H 5.0、60℃条件下,coRHA水解芦丁合成异槲皮苷的得率为79.81%±3.1%。采用系统密码子优化策略,为利用工程菌工业化生产coRHA,用于催化桑树黄酮苷类化合物定向水解提供了可行的方法。 展开更多

关键词 α-l-鼠李糖苷酶 基因密码子 酿酒酵母 表面展示 酶学性质 黄酮苷类化合物

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HL-60细胞内DNA甲基化作用与RNA聚合酶活力的关系 被引量：3

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作者 白坚石 何忠效 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第2期254-257,共4页

以 S-腺苷酰 - L-甲硫氨酸 ( SAM)为诱导物 ,在 1 0 μmol/L最佳浓度下可诱导 HL- 60细胞分化达 1 6%左右 .HPLC测定结果证明 ,诱导物处理后 HL- 60细胞 DNA甲基化水平升高 .通过 3 H-UTP同位素参入法 ,测定了不同处理时间和不同浓度 SA... 以 S-腺苷酰 - L-甲硫氨酸 ( SAM)为诱导物 ,在 1 0 μmol/L最佳浓度下可诱导 HL- 60细胞分化达 1 6%左右 .HPLC测定结果证明 ,诱导物处理后 HL- 60细胞 DNA甲基化水平升高 .通过 3 H-UTP同位素参入法 ,测定了不同处理时间和不同浓度 SAM对 HL- 60细胞 DNA模板体外转录活性的影响 ,发现体外活力下降 .比较了不同浓度α-鹅膏蕈碱存在下 RNA聚合酶活力的变化 ,结果表明 SAM处理后细胞中不同 展开更多

关键词 SAM DNA甲基化 RNA聚合酶 基因表达 细胞分化

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铁死亡在α-鹅膏毒肽诱导肝细胞损伤中的作用

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作者 王浩伟 张晓星 +2 位作者 杨根梦 王尚文 曾晓锋 《法医学杂志》 北大核心 2025年第2期152-159,共8页

目的通过检测α-鹅膏毒肽暴露后小鼠肝组织铁沉积,小鼠肝细胞和L-02细胞氧化应激指标及铁死亡相关蛋白的表达,探究铁死亡是否参与α-鹅膏毒肽诱导的肝细胞损伤。方法建立α-鹅膏毒肽C57BL/6J小鼠中毒模型和L-02细胞染毒模型,采用Lillie... 目的通过检测α-鹅膏毒肽暴露后小鼠肝组织铁沉积,小鼠肝细胞和L-02细胞氧化应激指标及铁死亡相关蛋白的表达,探究铁死亡是否参与α-鹅膏毒肽诱导的肝细胞损伤。方法建立α-鹅膏毒肽C57BL/6J小鼠中毒模型和L-02细胞染毒模型,采用Lillie二价铁染色、普鲁士蓝染色检测铁沉积情况,试剂盒检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平,蛋白质印迹法分析p53、溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)的表达。结果相较于对照组,α-鹅膏毒肽暴露后,小鼠肝组织中二价铁(Fe^(2+))和三价铁(Fe^(3+))阳性细胞率均升高(P<0.05),中(0.35 mg/kg)、高(0.45 mg/kg)剂量组肝组织及1μmol/Lα-鹅膏毒肽处理的L-02细胞中GSH水平降低、MDA水平升高,SOD和CAT活性下降(P<0.05)。此外,α-鹅膏毒肽呈浓度和时间依赖性上调p53表达,并抑制SLC7A11和GPX4的表达。结论铁死亡在α-鹅膏毒肽诱导的肝细胞损伤机制中发挥作用,铁死亡相关指标的异常可为α-鹅膏毒肽中毒的法医学鉴定提供参考。 展开更多

关键词 法医病理学 法医毒理学 α-鹅膏毒肽 铁死亡 氧化应激 肝损伤 l-02细胞 小鼠

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以L-亮氨酸为底物一步法生物合成α-酮异己酸 被引量：1

5

作者 AL-ADEEB Abdulqader 乔郅钠 +4 位作者 徐美娟 杨套伟 张显 邵明龙 饶志明 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第13期1-8,共8页

α-酮异己酸是重要的有机合成和药物合成中间体,在食品、医药和化工行业中应用广泛。目前,α-酮异己酸的合成以化学法为主,需要高成本的催化剂或特殊的起始结构,导致α-酮异己酸生产成本较高。首次在食品安全性菌株枯草芽孢杆菌(Bacillu... α-酮异己酸是重要的有机合成和药物合成中间体,在食品、医药和化工行业中应用广泛。目前,α-酮异己酸的合成以化学法为主,需要高成本的催化剂或特殊的起始结构,导致α-酮异己酸生产成本较高。首次在食品安全性菌株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168中异源表达了普通变形杆菌(Proteus vulgaris)来源的L-氨基酸脱氨酶,以重组枯草芽孢杆菌作为全细胞催化剂、L-亮氨酸为底物实现了α-酮异己酸的一步法生物合成。其次,针对全细胞催化条件进行优化,最优条件(全细胞催化剂20 g/L、L-亮氨酸浓度100 mmol/L、反应温度45℃、pH 10.0、MgCl 2浓度5 mmol/L)下,转化24 h,可获得3.66 g/L的α-酮异己酸,且重复转化3次后,固定化细胞比游离细胞的再利用率提高了37.3%。该研究成功实现了以食品安全菌株B.subtilis 168为宿主一步法生物合成α-酮异己酸,为α-酮异己酸以及其他重要α-酮酸的工业化安全合成提供了新策略。 展开更多

关键词 普通变形杆菌 l-氨基酸脱氨酶 枯草芽孢杆菌 l-亮氨酸 全细胞催化 固定化细胞 α-酮异己酸

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昆虫来源L-天冬氨酸-α-脱羧酶突变体的酶学性质表征 被引量：1

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作者 叶文琪 薛岚 +3 位作者 王超 崔文璟 周哲敏 刘中美 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第19期63-67,共5页

选取突变体K49R进行分离纯化、酶学性质表征,并进行全细胞催化合成β-丙氨酸,旨在研究红粉甲虫来源的L-天冬氨酸-α-脱羧酶(L-aspartate-α-decarboxylase,ADC)的酶学性质,并为生物法制备β-丙氨酸提供理论与技术支持。突变体K49R最适pH... 选取突变体K49R进行分离纯化、酶学性质表征,并进行全细胞催化合成β-丙氨酸,旨在研究红粉甲虫来源的L-天冬氨酸-α-脱羧酶(L-aspartate-α-decarboxylase,ADC)的酶学性质,并为生物法制备β-丙氨酸提供理论与技术支持。突变体K49R最适pH为6.5,在pH 6.0~7.0之间保持稳定;最适温度为42℃,热稳定性较野生型提高1.7倍;底物亲和力大幅提高,催化效率是野生型的1.8倍。在培养基中添加10 g/L葡萄糖可以有效提高重组菌的生物量,以及重组酶的可溶性表达量;在全细胞催化合成β-丙氨酸体系中,添加磷酸吡哆醛(pyridoxal-5-phosphate,PLP)可以缩短反应时间,提高催化效率。该研究开发了具有工业化潜力的工程菌,建立了绿色、高效的β-丙氨酸生物合成法,为β-丙氨酸生物合成的产业化奠定了重要基础。 展开更多

关键词 Β-丙氨酸 l -天冬氨酸-α-脱羧酶 红粉甲虫 热稳定性 全细胞催化

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易错PCR法提高L-氨基酸脱氨酶全细胞转化L-异亮氨酸生产α-酮-β-甲基正戊酸效率

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作者 郭濛檬 刘龙 +2 位作者 李江华 堵国成 陈坚 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1173-1180,共8页

对奇异变形杆菌Proteus mirabilis中的L-氨基酸脱氨酶进行定向进化,利用易错PCR技术向基因中引入随机突变,建立突变文库来筛选可获得较高α-酮-β-甲基正戊酸产量的突变株。突变株7/23-6最适全细胞转化反应条件是以pH 8.5 Tris-HCl为缓... 对奇异变形杆菌Proteus mirabilis中的L-氨基酸脱氨酶进行定向进化,利用易错PCR技术向基因中引入随机突变,建立突变文库来筛选可获得较高α-酮-β-甲基正戊酸产量的突变株。突变株7/23-6最适全细胞转化反应条件是以pH 8.5 Tris-HCl为缓冲液,用900 mmol/L L-异亮氨酸在30℃下进行催化反应21～24 h,其α-酮-β-甲基正戊酸产量可以达到102 g/L,底物转化率达到87%。与对照菌相比,α-酮-β-甲基正戊酸产量和底物转化率均提高了13%,热稳定性提高了36.7%。 展开更多

关键词 l-氨基酸脱氨酶 易错PCR 全细胞转化 α-酮-β-甲基正戊酸

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α-硫辛酸和乙酰左旋肉碱改善炎症细胞因子介导胰岛细胞功能障碍的作用 被引量：3

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作者 张召锋 顾娇娇 +2 位作者 鲍雷 蔡夏夏 李勇 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第15期232-237,共6页

目的:探讨α-硫辛酸(α-lipoic acid,LA)和乙酰左旋肉碱(acetyl-L-carnitine,ALC)改善炎症细胞因子介导胰岛细胞功能障碍的效果并探讨机制。方法:大鼠胰岛素瘤RIN-m5f细胞用肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介... 目的:探讨α-硫辛酸(α-lipoic acid,LA)和乙酰左旋肉碱(acetyl-L-carnitine,ALC)改善炎症细胞因子介导胰岛细胞功能障碍的效果并探讨机制。方法:大鼠胰岛素瘤RIN-m5f细胞用肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)联合作用(TII)48 h造成损伤模型。LA和ALC干预48 h后噻唑蓝法检测胰岛细胞的活力情况,荧光细胞技术法检测细胞的形态学,流式细胞仪检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)表达水平,放射免疫法检测胰岛素分泌情况,Western blotting检测细胞凋亡相关和胰岛素分泌相关蛋白表达情况。结果:TII作用48 h可使RIN-m5f细胞活力明显下降,凋亡增加;并降低基础状态下和高糖刺激状态下胰岛素分泌水平;增加ROS水平,增加一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性,增加一氧化氮(nitrogen monoxide,NO)水平,促进NF-κB向细胞核转位;TII还可增加RIN-m5f细胞内促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达,抑制抗凋亡蛋白I-κB、Bcl-2表达,增加线粒体细胞色素c释放。而LA、ALC可改善TII诱导的RIN-m5f细胞凋亡,提高基础状态和高糖刺激状态下胰岛素分泌水平;抑制NF-κB向细胞核转位、降低细胞NO水平;降低Bax、Caspase-3表达,增加抗凋亡蛋白I-κB、Bcl-2表达,抑制线粒体细胞色素c释放;LA与ALC联合作用效果强于单独作用。结论:炎症细胞因子作用48 h可通过ROS-cytochrome c-NF-κB-NOS-NO通路最终引起胰岛β细胞的凋亡,进而影响胰岛素分泌;LA和ALC联用可抑制炎症细胞因子诱导的胰岛细胞凋亡,促进胰岛素分泌。 展开更多

关键词 炎症细胞因子 胰岛细胞功能障碍 Α-硫辛酸 乙酰左旋肉碱

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NAA对胡萝卜(Daucus carota)悬浮细胞茄红素合成的影响 被引量：1

9

作者 梁燕 王鸣 +1 位作者 陈大明 陈杭 《西北植物学报》 CAS CSCD 2003年第5期788-791,共4页

通过对胡萝卜新透心红 DaucuscarotaCV.XinTouxinhong 细胞悬浮系单位鲜重细胞的茄红素含量、细胞总产量以及茄红素总产量的分析比较,研究了培养基中不同NAA浓度对胡萝卜细胞悬浮系茄红素代谢的影响.结果表明,NAA具有增强细胞茄红素代... 通过对胡萝卜新透心红 DaucuscarotaCV.XinTouxinhong 细胞悬浮系单位鲜重细胞的茄红素含量、细胞总产量以及茄红素总产量的分析比较,研究了培养基中不同NAA浓度对胡萝卜细胞悬浮系茄红素代谢的影响.结果表明,NAA具有增强细胞茄红素代谢水平、提高单位鲜重细胞中茄红素的含量的作用,但对细胞的生长具有抑制作用.从茄红素单产和总产量综合评价,培养基中加入3.0mg·L-1NAA效果最佳. 展开更多

关键词 NAA 胡萝卜 悬浮细胞 茄红素 合成

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二维数组的快速排序算法

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作者 彭月英 《广西科学》 CAS 1997年第2期93-96,共4页

在一维数组快速排序算法的基础上，给出了二维数组的快速排序算法。理论分析和大量的数值实验结果表明，其算法的平均计算时间仍然是Ｏ（ｎｌｏｇ２ｎ），一般所需的栈空间仍为Ｏ（ｌｏｇ２ｎ）。

关键词 二维数组 一维数组 快速排序 算法 排序问题

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小鼠诱导转基因传代细胞对AFP粪便标本中脊灰和其他肠道病毒的分离鉴别研究 被引量：1

11

作者 刘明团 王树声 +4 位作者 朱田风 谢振国 李秀芳 韦一知 杨春义 《广西科学》 CAS 1997年第2期147-149,共3页

报告４６份ＡＦＰ粪便标本用Ｌα、ＲＤ和Ｈｅｐ－２三种细胞作病毒分离，阳性率分别为２６．０９％、６０．８７％、４３．４８％。同步分离出脊灰病毒Ⅰ型３株，Ⅱ型２株，Ⅲ型４株，Ⅰ＋Ⅱ型１株，Ⅰ＋Ⅲ型１株，混合Ｐ２＋Ｅ１株。... 报告４６份ＡＦＰ粪便标本用Ｌα、ＲＤ和Ｈｅｐ－２三种细胞作病毒分离，阳性率分别为２６．０９％、６０．８７％、４３．４８％。同步分离出脊灰病毒Ⅰ型３株，Ⅱ型２株，Ⅲ型４株，Ⅰ＋Ⅱ型１株，Ⅰ＋Ⅲ型１株，混合Ｐ２＋Ｅ１株。脊灰病毒总分离阳性率为２８．９５％。非脊灰肠道病毒分离阳性率分别为０％、３６．９６％、２３．９１％。从６份第１次分离结果阴性的高危病例和高度临床病例粪便标本重新分离出１株Ⅲ型脊灰病毒和３株非脊灰肠道病毒。应用Ｌα细胞不仅能作型别鉴定。 展开更多

关键词 病毒分离鉴定 AFP粪便标本 脊灰病毒 肠道病毒

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赤拟谷盗来源天冬氨酸α-脱羧酶分子改造及催化合成β-丙氨酸工艺的建立 被引量：3

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作者 王超 叶文琪 +2 位作者 薛岚 刘中美 周哲敏 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期7-13,共7页

L-天冬氨酸α-脱羧酶活性较低,稳定性较差,使得其在工业应用中受到限制。该研究旨在提高L-天冬氨酸α-脱羧酶的催化性能,促进生物法生产β-丙氨酸的工业化进程。依据嗜热蛋白酶的氨基酸内在进化趋势,对赤拟谷盗来源L-天冬氨酸α-脱羧酶... L-天冬氨酸α-脱羧酶活性较低,稳定性较差,使得其在工业应用中受到限制。该研究旨在提高L-天冬氨酸α-脱羧酶的催化性能,促进生物法生产β-丙氨酸的工业化进程。依据嗜热蛋白酶的氨基酸内在进化趋势,对赤拟谷盗来源L-天冬氨酸α-脱羧酶进行分子改造,以期提高稳定性。实验共构建21个突变体,获得催化性能优良的突变体K221R,该突变体的比酶活较野生型提高20.3%;野生型经50℃处理30min,残余酶活接近0,而突变体K221R的残余酶活为43%。建立了基因工程菌全细胞催化天冬氨酸生成β-丙氨酸的工艺,K221R菌株的产量达到134.72g/L,摩尔转化率为94.52%,是迄今为止的最高产量。该研究构建的基因工程菌具有工业应用潜力,同时也为生物法制备β-丙氨酸提供理论与技术基础。 展开更多

关键词 l-天冬氨酸α-脱羧酶 热稳定性 定点突变 Β-丙氨酸 全细胞催化

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