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抗感合剂对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织中STING/IRF3/IFN-β轴和NLRP3表达的影响
1
作者 黄赫 赵文嘉 +6 位作者 王若冰 赵磊 张世良 王沈峰 邢晓晨 朱竟赫 王德成 《郑州大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第4期503-509,共7页
目的:探讨抗感合剂对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织中STING、IRF3、IFN-β和NLRP3表达的影响。方法:40只大鼠随机均分为空白对照组、模型组、地塞米松(1.08 mg/kg灌胃3 d)组和抗感合剂(20 mL/kg灌胃3 d)组,第4天除空白对照组外其他3组气... 目的:探讨抗感合剂对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织中STING、IRF3、IFN-β和NLRP3表达的影响。方法:40只大鼠随机均分为空白对照组、模型组、地塞米松(1.08 mg/kg灌胃3 d)组和抗感合剂(20 mL/kg灌胃3 d)组,第4天除空白对照组外其他3组气管内注射LPS建立脓毒症急性肺损伤大鼠模型。第7天通过HE染色评估肺组织损伤程度;运用荧光免疫双染技术检测肺组织STING、IRF3、IFN-β与NLRP3的相对荧光强度;采用ELISA法测定血清和肺组织匀浆中STING、IRF3、IFN-β、NLRP3和炎症因子的含量;采用qRT-PCR和全自动蛋白表达分析系统检测大鼠肺组织中STING、IRF3、IFN-β、NLRP3和TBK1 mRNA及蛋白表达水平。结果:空白对照组大鼠肺泡整齐且完整,未见明显炎性细胞浸润;模型组肺间质变厚且肺泡水肿,可见中性粒细胞浸润;与模型组比较,抗感合剂组和地塞米松组肺组织病理改变减轻。与空白对照组比较,模型组肺组织STING、IRF3、IFN-β和NLRP3蛋白的荧光强度升高,血清及肺组织匀浆中STING、IRF3、IFN-β、NLRP3和炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α、IFN-α含量升高,肺组织中STING、IRF3、IFN-β、NLRP3和TBK1 mRNA及蛋白表达升高,p-IRF3和TBK1蛋白表达升高;抗感合剂组上述指标均降低(P<0.05)。结论:抗感合剂可能通过抑制STING、IRF3、IFN-β和NLRP3的表达减少炎症因子的释放,减轻脓毒症急性肺损伤大鼠肺损伤。 展开更多
关键词 抗感合剂 脓毒症 STING IRF3 ifn-β 急性肺损伤 大鼠
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KLF9调控巨噬细胞体内IFN-β表达的机制
2
作者 严秀蕊 关兆清 +1 位作者 宋建莉 张耀林 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第10期882-887,共6页
目的明确锌指蛋白Krüppel样转录因子9(KLF9)在Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)诱导巨噬细胞Ⅰ型干扰素表达中的作用及机制。方法通过琼脂糖凝胶电泳、实时荧光定量PCR及Western blot法检测KLF9在Klf9^(-/-)(gKO)小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BM... 目的明确锌指蛋白Krüppel样转录因子9(KLF9)在Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)诱导巨噬细胞Ⅰ型干扰素表达中的作用及机制。方法通过琼脂糖凝胶电泳、实时荧光定量PCR及Western blot法检测KLF9在Klf9^(-/-)(gKO)小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDM)中的敲除效果;RNA-seq筛选gKO小鼠及对照小鼠Klf9^(+/+)(WT)BMDM中HSV-1刺激后Klf9下游关键差异基因;实时荧光定量PCR验证HSV-1刺激后干扰素β1(Ifnb1)及下游干扰素刺激基因(ISG)如干扰素诱导蛋白与四肽重复1(Ifit1)、干扰素刺激的核酸外切酶基因20(Isg20)、胆固醇25-羟化酶(Ch25h)及2′-5′-寡聚腺苷酸合成酶1(Oasl1)的表达情况;ELISA检测HSV-1刺激后gKO及WT小鼠BMDM上清中β干扰素(IFN-β)的含量;Western blot法检测HSV-1刺激后gKO及WT小鼠BMDM中磷酸化干扰素调节因子3(p-IRF3)、干扰素调节因子3(IRF3),p-IRF7、IRF7,磷酸化的核因子κB p65(p-NF-κB p65)、核因子κB p65(NF-κB p65)的表达;CUT-Tag及ChIP-qPCR技术检测KLF9在Ifnb1上的结合。结果KLF9在gKO小鼠的BMDM中表达明显减少;RNA-seq结果显示BMDM中Klf9缺失导致Ⅰ型干扰素信号通路受损;实时荧光定量PCR结果表明Klf9敲除后BMDM中除了Isg20以外,Ifit1、Ch25h及Oasl1表达均明显降低;ELISA结果显示Klf9敲除导致BMDM分泌的IFN-β明显减少。在机制研究方面,Western blot法检测结果显示Klf9的缺失不影响p-IRF3、p-IRF7及p-NF-κB p65的表达;CUT-Tag及ChIP-qPCR结果显示KLF9能直接结合至Ifnb1的启动子区。结论KLF9对巨噬细胞抵抗HSV-1感染至关重要。 展开更多
关键词 骨髓来源的巨噬细胞(BMDM) 锌指蛋白Krüppel样转录因子9(KLF9) Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1) ifn-β
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单疱病毒性脑炎小鼠中TLR4和IFN-β表达的研究 被引量：5
3
作者 刘强 赵春梅 +1 位作者 惠晶 王振海 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期791-795,共5页
目的:通过检测TLR4和IFN-β在单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)小鼠脑组织中的表达,为探讨TLR4在HSE发病中可能的免疫学作用奠定基础。方法:采用颅内接种法建立HSE小鼠模型并设置盐水组、正常组对照,分别应用RT-qPCR、RT-PCR方法检测小鼠脑组织... 目的:通过检测TLR4和IFN-β在单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)小鼠脑组织中的表达,为探讨TLR4在HSE发病中可能的免疫学作用奠定基础。方法:采用颅内接种法建立HSE小鼠模型并设置盐水组、正常组对照,分别应用RT-qPCR、RT-PCR方法检测小鼠脑组织中TLR4、IFN-β的相对表达并采用Pearson相关分析两者相关性。结果:HSE小鼠脑组织中TLR4、IFN-β的相对表达较对照组明显上调(P<0.01),TLR4和IFN-β表达呈正相关(r=0.851,P<0.01)。结论:TLR4可能会通过启动下游细胞因子IFN-β等介导宿主在HSE中的免疫应答作用。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒性脑炎 TOLL样受体4 小鼠 免疫 ifn-β
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从江香猪IFN-β基因的序列分析及原核表达 被引量：6
4
作者 温贵兰 张升波 +6 位作者 李昌红 徐丽 田浪 文明 王开功 程振涛 赵德刚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第1期10-19,共10页
试验旨在探明从江香猪β-干扰素(interferon-beta,IFN-β)基因编码区分子序列及原核表达产物特征。以从江香猪为研究对象,提取肝脏总RNA并反转录为cDNA,设计特异性引物扩增IFN-β基因编码区,将目的基因片段克隆至原核表达质粒pET-28a上... 试验旨在探明从江香猪β-干扰素(interferon-beta,IFN-β)基因编码区分子序列及原核表达产物特征。以从江香猪为研究对象,提取肝脏总RNA并反转录为cDNA,设计特异性引物扩增IFN-β基因编码区,将目的基因片段克隆至原核表达质粒pET-28a上,获得重组质粒pET28a-CJpoIFN-β,并利用生物学软件对江香猪IFN-β基因编码区进行序列分析;将鉴定正确的重组质粒pET28a-CJpoIFN-β转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达、SDS-PAGE与Western blotting分析原核表达蛋白。结果表明,从江香猪IFN-β基因编码区长为561bp,编码186个氨基酸;该蛋白为分泌性蛋白,前21个氨基酸为信号肽序列;二级结构主要以α-螺旋(77.42%)和无规则卷曲(17.74%)为主。从江香猪与其他猪源IFN-β基因核苷酸序列同源性为99.5%～100.0%,与禽的同源性最低(35.2%);从江香猪与巴马猪、梅山猪IFN-β氨基酸同源性均为100.0%,但与贵州白香猪IFN-β同源性为99.5%,存在E43Q、K73R和C161R3处氨基酸的差异。Western blotting结果显示,带His标签的重组表达蛋白能被His单抗识别,条带大小约为24ku。本试验结果为进一步研究IFN-β基因生物学活性及加快从江香猪这一品种资源的有效利用提供参考依据。 展开更多
关键词 从江香猪 ifn-β基因 序列分析 原核表达
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梅花鹿IFN-β1的原核表达及活性鉴定 被引量：4
5
作者 苏凤艳 李哲 +3 位作者 刘存发 宗颖 曾范利 王全凯 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期136-139,共4页
为表达具有抗病毒活性的梅花鹿干扰素β1(IFN-β1),本研究通过PCR扩增梅花鹿IFN-β1基因,将其克隆至原核表达载体p ET-28a中,构建重组质粒p ET-IFNβ1,并将其转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后,得到高效表达。SDS-P... 为表达具有抗病毒活性的梅花鹿干扰素β1(IFN-β1),本研究通过PCR扩增梅花鹿IFN-β1基因,将其克隆至原核表达载体p ET-28a中,构建重组质粒p ET-IFNβ1,并将其转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后,得到高效表达。SDS-PAGE与western blot分析结果表明,梅花鹿IFN-β1重组蛋白的分子量大小约为24 ku,表达产物主要为不溶性的包涵体,表达量占菌体总蛋白的59.02%。将Ni柱纯化的p ET-IFNβ1诱导表达产物复性后,细胞病变抑制法检测表明表达产物具有抗病毒活性,其抗病毒活性可以达到10×53.81U/0.1 m L。梅花鹿INF-β1的表达为梅花鹿INF-β1的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 梅花鹿 ifn-β1基因 原核表达 活性鉴定
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猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：2
6
作者 王蕊 张改平 +5 位作者 乔松林 刘永晖 蒋志政 万博 鲍登克 王爱萍 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第5期137-140,144,共5页
为建立猪IFN-β及IRF-3基因实时荧光定量PCR检测方法,依据GenBank中IFN-β和IRF-3基因的保守序列,设计并合成各自特异性引物,并以β-actin为内参基因,采用SYBR Green-Ⅰ为染料,建立实时荧光定量检测方法。提取猪肺泡巨噬细胞总RNA,经反... 为建立猪IFN-β及IRF-3基因实时荧光定量PCR检测方法,依据GenBank中IFN-β和IRF-3基因的保守序列,设计并合成各自特异性引物,并以β-actin为内参基因,采用SYBR Green-Ⅰ为染料,建立实时荧光定量检测方法。提取猪肺泡巨噬细胞总RNA,经反转录得cDNA,用特异性引物经PCR扩增得到IFN-β和IRF-3基因,将其克隆至pMD-19T载体,经测序鉴定后得重组质粒,依次10倍稀释做为标准品,建立标准曲线及溶解曲线。结果表明,β-actin基因、IFN-β基因和IRF-3基因标准曲线线性关系较好,R2≥0.997;溶解曲线为特异性单峰,无非特异性扩增,检测下限可达100个拷贝/μL。建立的猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法,特异性强、重复性好,为从分子水平上研究猪的免疫应答奠定了基础。 展开更多
关键词 猪 实时荧光定量PCR ifn-β基因 IRF-3基因
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IFN-β通过STAT1诱导SARI表达抑制AML细胞增殖并促进凋亡 被引量：2
7
作者 林艳凤 洪小颖 +4 位作者 黄莹莹 王小花 吴玮 林东红 薛龑 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1137-1141,共5页
目的:探讨IFN-β诱导SARI表达对急性粒细胞性白血病(AML)细胞增殖、凋亡的作用,并筛选其潜在的调控分子。方法:qPCR、Western blot筛选SARI低表达的AML细胞作为实验细胞株;不同浓度IFN-β干预AML细胞,于不同时间采用qPCR、Western blot... 目的:探讨IFN-β诱导SARI表达对急性粒细胞性白血病(AML)细胞增殖、凋亡的作用,并筛选其潜在的调控分子。方法:qPCR、Western blot筛选SARI低表达的AML细胞作为实验细胞株;不同浓度IFN-β干预AML细胞,于不同时间采用qPCR、Western blot检测SARI表达,选取IFN-β作用的适当浓度和时间;采用RNA-Seq转录组测序及KEGG富集分析初步筛选IFN-β诱导AML细胞SARI表达的潜在调控分子;通过相应分子抑制剂联合IFN-β处理AML细胞,MTS法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡;明确该分子参与IFN-β诱导SARI表达对AML细胞增殖及凋亡的作用。结果:HL60和NB4细胞SARI表达相对较低,选为实验细胞株;1 ng/ml IFN-β作用12 h后AML细胞SARI表达升高且细胞增殖被抑制,凋亡增多;筛选STAT1为IFN-β诱导SARI表达的潜在调控分子;抑制STAT1后,IFN-β对AML细胞SARI表达、增殖抑制、凋亡促进的作用被明显逆转。结论:IFN-β可通过STAT1诱导AML细胞SARI表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 ifn-β SARI STAT1 AML 增殖 凋亡
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IFN-β基因启动子调控区域的分析及IRF-3报告基因的构建 被引量：1
8
作者 蒋静 胡福泉 +3 位作者 蹇锐 张伟 邓少丽 程小星 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期896-899,共4页
目的对IRF-3的主要靶基因———小鼠IFN-β基因启动子区域进行分析并构建IRF-3报告基因载体。方法将小鼠IFN-β基因启动子全序列以及不同截短片段克隆到无启动子的pGF3basic/enhancer质粒中,以EGFP为报告基因,转染小鼠Raw264.7巨噬细胞... 目的对IRF-3的主要靶基因———小鼠IFN-β基因启动子区域进行分析并构建IRF-3报告基因载体。方法将小鼠IFN-β基因启动子全序列以及不同截短片段克隆到无启动子的pGF3basic/enhancer质粒中,以EGFP为报告基因,转染小鼠Raw264.7巨噬细胞系后观察细胞对LPS刺激的反应。结果IFN-β启动子PRD调控区域上游序列、PRD I区,PRD II区和PRD IV区缺失后,LPS同样能诱导EGFP报告基因的表达。只保留PRD区及IFN-β启动子核心区的载体转染Raw264.7细胞后,可以在LPS刺激下诱导EGFP报告基因的高表达。结论构建了能检测IRF-3活性的报告基因载体,为进一步研究LPS激活IRF-3的信号转导通路奠定了基础。 展开更多
关键词 IRF-3 ifn-β 启动子 调控元件 报告基因
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惠阳胡须鸡IFN-α、IFN-β基因在大肠杆菌中的表达及其抗病毒活性比较 被引量：1
9
作者 韩春来 张灿 +5 位作者 柏亚铎 陈通 吴艳花 韩雪 王雅楠 汪明 《家禽科学》 2006年第1期17-19,共3页
构建了惠阳胡须鸡IFN-α/pGEX-6P-1I、FN-β/pGEX-6P-1的重组质粒,并在BL21中表达,对重组蛋白进行了抗病毒活性测定,结果表明IFN-αI、FN-β重组蛋白的抗病毒活性分别为7.9×105U/mg和6.4×104U/mg,IFN-α的抗病毒活性是IFN-β... 构建了惠阳胡须鸡IFN-α/pGEX-6P-1I、FN-β/pGEX-6P-1的重组质粒,并在BL21中表达,对重组蛋白进行了抗病毒活性测定,结果表明IFN-αI、FN-β重组蛋白的抗病毒活性分别为7.9×105U/mg和6.4×104U/mg,IFN-α的抗病毒活性是IFN-β的12倍。IFN-αI、FN-β与干扰素受体具有不同的结合位点和结合途径可能是使IFN-α和IFN-β的生物学活性存在较大差异的原因。 展开更多
关键词 鸡 ifn-Α ifn-β表达 抗病毒活性
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人IFN-β基因启动子荧光表达载体的构建及鉴定
10
作者 徐永妮 曹梦远 +4 位作者 惠倩倩 叶伟 于澜 张亮 张芳琳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期588-591,共4页
目的构建人IFN-β基因启动子萤火虫荧光素酶报告基因载体(pGL3-IFNB1)及增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体(pGE3-IFNB1),并在A549细胞中进行表达验证。方法采用PCR方法扩增出IFN-β启动子区片段,克隆入荧光表达载体pGL3 basic和pGE3 bas... 目的构建人IFN-β基因启动子萤火虫荧光素酶报告基因载体(pGL3-IFNB1)及增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体(pGE3-IFNB1),并在A549细胞中进行表达验证。方法采用PCR方法扩增出IFN-β启动子区片段,克隆入荧光表达载体pGL3 basic和pGE3 basic,并用脂质体瞬时转染A549细胞,6 h后用汉滩病毒(HTNV)感染转染后的细胞,24 h后检测重组载体在细胞内的表达情况。结果重组载体pGL3-IFNB1和pGE3-IFNB1分别经双酶切鉴定及序列测定证实载体构建正确;且在A549细胞内成功表达。经HTNV刺激后表达明显增加。结论成功构建了人IFN-β启动子荧光素酶报告基因载体(pGL3-IFNB1)及增强型绿色荧光蛋白表达载体(pGE3-IFNB1),为进一步研究病毒诱导产生IFN-β机制提供了有用的工具。 展开更多
关键词 ifn-β 启动子 表达载体 汉滩病毒 病毒感染
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牦牛IFN-β基因在毕赤酵母中的分泌表达
11
作者 王生富 孙晓林 +3 位作者 段风云 何延华 闫鸿斌 景志忠 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期6-10,共5页
用真核表达引物从pGEM-yakIFN-β重组质粒中扩增出牦牛IFN-β基因,将目的基因和真核表达载体pPIC9K连接转入E.coli的JM109中,得到pPIC9K-yakIFN-β重组表达质粒.通过电击法将经SalⅠ线性化的pPIC9K-yakIFN-β质粒转化到巴斯德毕赤酵母GS... 用真核表达引物从pGEM-yakIFN-β重组质粒中扩增出牦牛IFN-β基因,将目的基因和真核表达载体pPIC9K连接转入E.coli的JM109中,得到pPIC9K-yakIFN-β重组表达质粒.通过电击法将经SalⅠ线性化的pPIC9K-yakIFN-β质粒转化到巴斯德毕赤酵母GS115感受态细胞中,采用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,利用甲醇诱导表达,分泌表达产物用MTT法检测其生物学活性.经SDS-PAGE电泳分析表明:表达出约22ku大小分泌于胞外的牦牛IFN-β蛋白分子量,比理论值稍大;MTT结果表明:纯化的重组yak-IFN-β蛋白具有促进淋巴细胞增殖的活性. 展开更多
关键词 牦牛 ifn-β基因 巴斯德毕赤酵母 分泌表达
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猪瘟病毒E0蛋白对IFN-β启动子的抑制作用研究
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作者 夏燕华 赵天生 +1 位作者 陈柳 张楚瑜 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期541-545,共5页
以新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)为IFN-β诱导剂,将猪瘟病毒(Classical swine fever vires,CSFV)E0基因的C末端与增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protem,EGFP)基因相连,瞬时表达于猪。肾细胞PK15中,利用荧... 以新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)为IFN-β诱导剂,将猪瘟病毒(Classical swine fever vires,CSFV)E0基因的C末端与增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protem,EGFP)基因相连,瞬时表达于猪。肾细胞PK15中,利用荧光素酶报告基因系统检测IFN-β启动子的活化状态,结果显示CSFV E0蛋白可抑制NDV对IFN-β启动子的诱导作用,抑制效应随E0蛋白量增加而增强;半定量RT-PCR结果显示,E0蛋白可明显降低IFN-βmRNA的生成量。结果表明,E0蛋白具有干扰素拮抗功能。该研究为阐明CSFV的致病及持续感染机制提供了理论支持。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E0蛋白 ifn-β
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鸭坦布苏病毒非结构蛋白亚细胞定位及其在IFN-β信号通路中的作用
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作者 张蓉蓉 潘爱銮 +6 位作者 吴娟 方兵兵 汪最 卢琴 张腾飞 温国元 罗青平 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期5470-5478,共9页
【目的】探究鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白的亚细胞定位及其在β-干扰素(IFN-β)信号通路中的作用。【方法】通过RT-PCR法扩增DTMUV的7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)基因,将其克隆至真核... 【目的】探究鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白的亚细胞定位及其在β-干扰素(IFN-β)信号通路中的作用。【方法】通过RT-PCR法扩增DTMUV的7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS-HA,构建重组真核表达质粒,并分别转染至HEK-293T细胞,通过Western blotting检测蛋白表达;利用间接免疫荧光试验检测非结构蛋白的亚细胞定位情况,通过双荧光素酶报告试验研究DTMUV的非结构蛋白对鸭源IFN-β启动子活性的影响。【结果】试验成功构建DTMUV的7个非结构蛋白带HA标签的真核表达质粒。Western blotting结果显示,真核表达非结构蛋白均正常表达,NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5蛋白分子质量大小分别为38、25、14.4、68、13.9、28和100 ku。间接免疫荧光试验结果显示,7个非结构蛋白在细胞内的表达形态不一,主要定位在细胞浆中。双荧光素酶报告试验结果表明,与对照组相比,过表达NS2B和NS4B蛋白后,鸭源IFN-β启动子活性极显著降低(P<0.01)。【结论】本研究成功构建了DTMUV的7个非结构蛋白的真核表达质粒,非结构蛋白主要表达于细胞浆中,其中NS2B和NS4B蛋白具有颉颃IFN-β活性的功能。试验结果为DTMUV的免疫逃逸研究提供了一定的理论依据,并为深入探究DTMUV在宿主天然免疫信号通路中的作用机制提供了试验材料。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 非结构蛋白 亚细胞定位 ifn-β信号通路
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MS患者CD94/NKG2A-bright和CD94/NKG2A-dim NK细胞亚群对IFN-β的差异性反应
14
作者 李力 邓艳春 赵钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期533-535,共3页
目的:分析多发性硬化(MS)进展型患者不同表型NK细胞亚群对临床主要治疗方法的反应性差异。方法:分离患者外周血中的NK细胞,以流式细胞术根据表面抑制性受体CD94/NKG2A表达情况分为两个亚群CD94/NKG2A-bright和CD94/NKG2A-dim。分别加入I... 目的:分析多发性硬化(MS)进展型患者不同表型NK细胞亚群对临床主要治疗方法的反应性差异。方法:分离患者外周血中的NK细胞,以流式细胞术根据表面抑制性受体CD94/NKG2A表达情况分为两个亚群CD94/NKG2A-bright和CD94/NKG2A-dim。分别加入IFN-β,测定两个亚群表面CD94/NKG2A变化及细胞增殖,同时检测两种亚群分泌IL-10和TGF-β情况。结果:CD94/NKG2A阳性表达的NK细胞占25.5%,其中CD94/NKG2A-bright和CD94/NKG2A-dim分别占其中的23.6%和76.4%。加入IFN-β,CD94/NKG2A-bright组增殖率明显低于CD94/NKG2A-dim组,CD94/NKG2A表达峰度变化不大。CD94/NKG2A-dim组中CD94/NKG2A表达显著增加。两个亚群分泌的IL-10和TGF-β与未刺激组相比,均有明显差异。CD94/NKG2A-bright和CD94/NKG2A-dim组间亦有明显差异。结论:IFN-β通过诱导NK细胞CD94/NKG2A表达在非特异免疫系统中抑制NK细胞;同时刺激IL-10和TGF-β分泌进一步发挥对免疫系统的抑制。CD94/NKG2A-bright和CD94/NKG2A-dim对IFN-β反应有差异性。 展开更多
关键词 多发性硬化 NK细胞 抑制性受体 CD94/NKG2A ifn-β
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牧羊犬IFN-β基因的克隆和序列分析
15
作者 夏润玺 张曼夫 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期449-453,共5页
为对犬干扰素-β(IFN-β)进行研究,用PCR技术从犬血细胞基因组DNA中扩增了牧羊犬IFN-β基因,并克隆到pGEM-T载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,阳性克隆经PCR和酶切鉴定后进行测序。结果表明:牧羊犬IFN-β基因含561bp,编码186个氨基酸,... 为对犬干扰素-β(IFN-β)进行研究,用PCR技术从犬血细胞基因组DNA中扩增了牧羊犬IFN-β基因,并克隆到pGEM-T载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,阳性克隆经PCR和酶切鉴定后进行测序。结果表明:牧羊犬IFN-β基因含561bp,编码186个氨基酸,前21个为信号肽。成熟蛋白理论分子量为20kD,等电点为5.737,有2个潜在磷酸化位点、5个N糖基化位点和4个半胱氨酸残基,大部分为亲水区。二、三级结构预测显示,蛋白主要由5段α螺旋组成。犬IFN-β基因与赤狐的完全相同,与貉、雪貂和猫的同源性很高(85%～98.4%),在进化树中处于同一分支,而与禽类和鱼类的同源性仅为2.9%～8.6%。 展开更多
关键词 犬 干扰素-β(ifn-β) 基因克隆 序列分析
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瑶山亚种树鼩IFN-β和IFN-γ原核表达及其多克隆抗体制备 被引量：2
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作者 曹颖颖 李宝莹 +4 位作者 王婷 梁亮 运晨霞 唐海波 冷静 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1713-1723,共11页
【目的】构建瑶山亚种树鼩IFN-β和IFN-γ基因原核表达载体,并制备IFN-β和IFN-γ多克隆抗体,为进一步研究树鼩病毒感染动物模型打下基础。【方法】以瑶山亚种树鼩外周淋巴细胞为原材料,提取总RNA后经RT-PCR扩增瑶山亚种树鼩IFN-β和IFN... 【目的】构建瑶山亚种树鼩IFN-β和IFN-γ基因原核表达载体,并制备IFN-β和IFN-γ多克隆抗体,为进一步研究树鼩病毒感染动物模型打下基础。【方法】以瑶山亚种树鼩外周淋巴细胞为原材料,提取总RNA后经RT-PCR扩增瑶山亚种树鼩IFN-β和IFN-γ基因,亚克隆至质粒pcDNA3.1(+)上构建真核表达载体,并瞬时转染仓鼠肾细胞(BHK 21);同时亚克隆到原核载体pET-28a(+)上构建原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后以IPTG诱导表达融合蛋白IFN-β和IFN-γ。融合蛋白纯化后免疫小鼠制备多克隆抗体,并利用Western blotting和间接免疫荧光(IFA)检测分析其反应性。【结果】扩增获得的瑶山亚种树鼩IFN-β和IFN-γ基因片段分别为564和501 bp,亚克隆至质粒pcDNA3.1(+)上成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-IFN-β和pcDNA3.1-IFN-γ,亚克隆到原核载体pET-28a(+)上成功构建获得原核表达载体pET-28a-IFN-β和pET-28a-IFN-γ。原核表达载体pET-28a-IFN-β和pET-28a-IFN-γ转化BL21(DE3)感受态细胞后在30℃下以0.5 mmol/L IPTG诱导6 h即获得融合蛋白IFN-β和IFN-γ,且融合蛋白主要以包涵体形式表达,以含2 mol/L尿素的洗涤液洗涤后可获得纯度相对较高的融合蛋白,且损失较少。纯化的融合蛋白IFN-β和IFN-γ经乳化后免疫小鼠,成功制备获得IFN-β和IFN-γ多克隆抗体,Western blotting和IFA检测结果均显示这2个多克隆抗体具有良好的反应性。【结论】通过原核表达系统可在大肠杆菌中成功诱导表达获得瑶山亚种树鼩IFN-β和IFN-γ,复性后的融合蛋白具有良好的反应性和免疫原性,免疫小鼠制备获得的多克隆抗体反应性良好且抗体效价高,可作为检测工具用于研究瑶山亚种树鼩病毒感染模型。 展开更多
关键词 瑶山亚种树鼩 干扰素(IFN) ifn-β ifn-Γ 原核表达 多克隆抗体
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鸭IFN-β启动子双荧光素酶报告基因系统的构建及活性检测 被引量：1
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作者 高全新 刘云霞 +2 位作者 程玉强 严亚贤 孙建和 《上海农业学报》 CSCD 2018年第3期66-71,共6页
通过PCR方法扩增获得6个不同长度的鸭IFN-β启动子DNA片段,并连接至萤火虫荧光素酶报告质粒p GL3.0,构建包含6个鸭IFN-β启动子的报告质粒。分别将构建的报告质粒与内参报告质粒p RL-TK转染至DEF细胞,检测报告质粒在不同刺激下的荧光素... 通过PCR方法扩增获得6个不同长度的鸭IFN-β启动子DNA片段,并连接至萤火虫荧光素酶报告质粒p GL3.0,构建包含6个鸭IFN-β启动子的报告质粒。分别将构建的报告质粒与内参报告质粒p RL-TK转染至DEF细胞,检测报告质粒在不同刺激下的荧光素酶活性。结果表明:包含鸭IFN-β启动子全长的报告质粒p GL-IFN-β-1593能够有效地被相应刺激物激活;截短研究表明,包含390 bp鸭IFN-β启动子的报告质粒p GL-IFN-β-453的荧光素酶活性与全长基本一致,且一定程度上可降低冗余碱基的不良影响,因此选取该质粒用于鸭IFN-β启动子活性检测。本研究建立的基于荧光素酶双报告基因系统的鸭IFN-β启动子活性检测方法,为后续鸭IFN-β通路研究提供了检测工具。 展开更多
关键词 鸭 ifn-β启动子 双荧光素酶报告基因
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犬瘟热病毒N和H蛋白拮抗IFN-β信号通路的研究 被引量：3
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作者 龚成燕 李连峰 +2 位作者 陈杰 胡博 赵建军 《特产研究》 2021年第2期1-7,共7页
为研究犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)不同毒株N、H蛋白调控宿主β-干扰素(IFN-β)表达的作用,将CDV野毒株LN(10)1、SD(14)7和疫苗株CDV3感染提前转染了pGL3-IFN-β报告基因质粒和pRL-TK内参质粒的MDCK细胞,分别在感染0 h、8 ... 为研究犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)不同毒株N、H蛋白调控宿主β-干扰素(IFN-β)表达的作用,将CDV野毒株LN(10)1、SD(14)7和疫苗株CDV3感染提前转染了pGL3-IFN-β报告基因质粒和pRL-TK内参质粒的MDCK细胞,分别在感染0 h、8 h、12 h和24 h后通过双荧光素酶报告系统检测试剂盒测定IFN-β启动子的活性。将CDV野毒株LN(10)1、SD(14)7和疫苗株CDV3 N和H基因克隆到pCI真核表达载体。重组表达质粒分别转染HEK293T细胞,应用Western blot检测蛋白能否正确表达。将N和H蛋白重组表达质粒连同pGL3-IFN-β报告基因质粒和pRL-TK内参质粒共转染至HEK293T细胞后,经Poly(I:C)刺激细胞,利用双荧光素酶报告系统检测系统测定IFN-β启动子活性。结果显示3种不同毒力的CDV在感染MDCK细胞后,只有CDV 3疫苗株感染后能观察到IFN-β启动子短暂激活。Western blot实验证实,3种毒株N和H蛋白在HEK293T细胞中均能正确表达。双荧光素酶报告系统对IFN-β启动子检测活性结果显示,Poly(I:C)成功激活了IFN-β信号通路,而这种激活作用在表达CDV不同毒株的N或H蛋白时均受到显著抑制(P <0.01),但不同毒株N或H蛋白对IFN-β信号通路的调控与CDV毒力无关。本研究证实了CDV野毒株和疫苗株N、H蛋白可抑制宿主IFN-β信号通路,为进一步研究CDV与宿主分子互作奠定基础。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 N蛋白 H蛋白 ifn-β 双荧光素酶报告系统
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射干乙醇提取物抗IBV活性及调控IFN-β表达量作用 被引量：5
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作者 向谈婷 刘卫容 方守国 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第6期99-102,共4页
为研究射干乙醇提取物对禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的体外抑制作用,本研究采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)对IBV-N和IFN-β(Interferon-β,IFN-β)mRNA的表达量进行检测,以及采用West... 为研究射干乙醇提取物对禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的体外抑制作用,本研究采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)对IBV-N和IFN-β(Interferon-β,IFN-β)mRNA的表达量进行检测,以及采用Western blot对IBV-N蛋白的表达量进行检测。RT-qPCR结果显示,病毒加药组IBV-N和IFN-βmRNA的表达量均低于病毒对照组;Western blot结果显示,病毒加药组IBV-N蛋白的表达量低于病毒对照组。本研究结果表明,射干乙醇提取物具有抗IBV活性并且影响IFN-βmRNA的表达量。 展开更多
关键词 射干乙醇提取物 抗IBV ifn-β
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基于CRISPR/Cas9系统的MDCK细胞IFN-β1编码序列的敲除 被引量：1
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作者 曹兴林 恽君雯 +4 位作者 陈丽 宋伟 侯继波 冯磊 徐业芬 《江苏农业科学》 2020年第7期59-65,共7页
为了建立高品质的犬肾(MDCK)单克隆细胞系,使用CRISPR/Cas9技术实现MDCK细胞IFN-β1基因的敲除,构建细胞培养禽流感病毒(AIV)增殖体系。首先,根据CRISPR/Cas9系统的技术要求构建了Cas9表达载体和sgRNA载体;然后,用3种载体共转染MDCK细胞... 为了建立高品质的犬肾(MDCK)单克隆细胞系,使用CRISPR/Cas9技术实现MDCK细胞IFN-β1基因的敲除,构建细胞培养禽流感病毒(AIV)增殖体系。首先,根据CRISPR/Cas9系统的技术要求构建了Cas9表达载体和sgRNA载体;然后,用3种载体共转染MDCK细胞,通过GFP阳性特征分选单细胞克隆,单细胞克隆培养在96孔板中。通过PCR扩增和对IFN-β1靶序列进行测序,确定了阳性MDCK单细胞克隆中IFN-β1的敲除。结果成功构建了具有IFN-β1敲除的MDCK单细胞克隆细胞系,与原始细胞相比,该细胞系的病毒增殖能力提高。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 犬肾(MDCK)细胞 ifn-β1 禽流感病毒(AIV) 增毒能力
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