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新型二甲双胍碳点促进炎症微环境下人牙周膜干细胞成骨分化
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作者 王凯 李永凯 +2 位作者 黄姣 徐凌 危晶晶 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第15期1760-1770,共11页
目的拟制备一种新型二甲双胍碳点(metformin carbon dots,MCDs),以促进炎症微环境下人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)的成骨分化潜能。方法以二甲双胍(metformin,Met)为前体,分别联合柠檬酸(citric acid,... 目的拟制备一种新型二甲双胍碳点(metformin carbon dots,MCDs),以促进炎症微环境下人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)的成骨分化潜能。方法以二甲双胍(metformin,Met)为前体,分别联合柠檬酸(citric acid,CA)、抗坏血酸(ascorbic acid,AA)或羧甲基壳聚糖(carboxymethyl chitosan,CS)通过一步水热法合成3种不同类型的MCDs(分别记为MCDsCA、MCDsAA、MCDsCS),通过透射电镜、傅里叶变换红外光谱仪和紫外-可见分光光度计等表征其理化特性。使用CCK-8、激光共聚焦显微镜评估3种MCDs的生物相容性及其细胞摄取能力。采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和ALP活性测定筛选出在炎症微环境下促进hPDLSCs成骨分化效果最佳的MCDs类型。通过ALP和茜素红S(alizarin red S,ARS)染色、qRT-PCR、Western blot等实验评估最适浓度下MCDsCS及其原料(Met+CS)对炎症微环境下hPDLSCs成骨分化的影响。结果成功合成3种具备良好理化性质和生物相容性的纳米级MCDs,且其均能被hPDLSCs成功摄取。MCDsCA和MCDsAA在较低浓度(0~0.50 mg/mL)内均能显著促进hPDLSCs的增殖,MCDsCS在较宽浓度(0~2.00 mg/mL)内表现出优异的细胞相容性;在炎症微环境下,MCDsCA和MCDsAA对hPDLSCs的ALP表达无明显改善,而MCDsCS则以浓度依赖性方式显著促进hPDLSCs的ALP表达,以0.10 mg/mL效果最佳(P<0.05)。0.10 mg/mL的MCDsCS相较于Met+CS更能显著促进炎症微环境下hPDLSCs的ALP表达和钙结节形成,提高成骨相关基因(ALP、Runt相关转录因子2、Ⅰ型胶原、骨钙素)和蛋白质(ALP、Runt相关转录因子2、骨钙素)的表达(P<0.01),降低炎症因子白细胞介素-1β和白细胞介素-6的水平(P<0.01)。结论成功制备出一种生物相容性良好的新型MCDsCS,可有效促进炎症微环境下hPDLSCs的成骨分化,并发挥抗炎作用,有望成为牙周炎治疗的潜在纳米材料。 展开更多
关键词 二甲双胍 碳点 牙周膜干细胞 成骨分化 炎症微环境
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KCNQ1OT1靶向miR-218对脂多糖诱导的人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响
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作者 王思青 张茂奇 +1 位作者 胡婷婷 叶芳 《中国医科大学学报》 北大核心 2025年第6期559-564,共6页
目的探究KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)靶向miR-218对脂多糖(LPS)诱导的人牙周膜干细胞(hPDLSC)增殖和成骨分化的影响。方法体外培养hPDLSC,随机分为hPDLSC组、LPS组、pcDNA-KCNQ1OT1组、pcDNA组、miR-218组、miR-NC组。观察各组细胞增殖... 目的探究KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)靶向miR-218对脂多糖(LPS)诱导的人牙周膜干细胞(hPDLSC)增殖和成骨分化的影响。方法体外培养hPDLSC,随机分为hPDLSC组、LPS组、pcDNA-KCNQ1OT1组、pcDNA组、miR-218组、miR-NC组。观察各组细胞增殖和茜素红染色情况,分别检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,KCNQ1OT1和miR-218表达水平,白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,以及细胞中骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨形态发生蛋白2(BMP2)表达水平。双萤光素酶实验验证KCNQ1OT1和miR-218的关系。结果LPS组与hPDLSC组相比,miR-218组与pcDNA-KCNQ1OT1组相比,细胞增殖率、ALP活性、KCNQ1OT1以及OPN、OCN、RUNX2、BMP2表达水平降低,miR-218表达水平以及IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高(P<0.05);pcDNA-KCNQ1OT1组与LPS组相比,细胞增殖率、ALP活性、KCNQ1OT1以及OPN、OCN、RUNX2、BMP2表达水平升高,miR-218表达水平以及IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05)。hPDLSC组、pcDNA-KCNQ1OT1组、miR-NC组钙化结节较多,为暗红色,LPS组、pcDNA组、miR-218组暗红色钙化结节较少。KCNQ1OT1和miR-218间有靶向关系。KCNQ1OT1-WT+miR-218组萤光素酶活性低于KCNQ1OT1-WT+miR-NC组(P<0.05)。结论KCNQ1OT1能够下调miR-218,促进LPS诱导的hPDLSC的增殖和成骨分化。 展开更多
关键词 长链非编码RNA KCNQ1重叠转录物1 MIR-218 人牙周膜干细胞 成骨分化 脂多糖
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西格列汀激活基质细胞衍生因子-1/CXC趋化因子受体4信号通路对脂多糖诱导的人牙周膜干细胞增殖、凋亡、炎症和成骨分化的影响 被引量:2
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作者 唐小雪 周政 +1 位作者 李启期 姜丹丹 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期37-45,共9页
目的 探讨西格列汀对脂多糖(LPS)诱导的炎症微环境下人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖、凋亡、炎症和成骨分化的影响及分子机制。方法 体外培养hPDLSCs,用不同浓度的西格列汀处理后检测细胞活力,以确定后续西格列汀实验浓度。采用1μg/mL LP... 目的 探讨西格列汀对脂多糖(LPS)诱导的炎症微环境下人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖、凋亡、炎症和成骨分化的影响及分子机制。方法 体外培养hPDLSCs,用不同浓度的西格列汀处理后检测细胞活力,以确定后续西格列汀实验浓度。采用1μg/mL LPS刺激诱导24 h建立hPDLSCs炎症模型并分为空白组、对照组、西格列汀低浓度组(0.5μmol/L)、西格列汀中浓度组(1μmol/L)、西格列汀高浓度组(2μmol/L)、西格列汀高浓度+基质细胞衍生因子-1 (SDF-1)/CXC趋化因子受体4 (CXCR4)通路抑制剂(AMD3100)组(2μmol/L+10μg/mL)。细胞计数试剂盒-8检测培养24、48、72 h后的hPDLSCs增殖活性;流式细胞术检测培养72 h后hPDLSCs凋亡情况;诱导成骨分化21 d后茜素红染色检测hPDLSCs成骨分化能力,试剂盒测定hPDLSCs中碱性磷酸酶(ALP)活性;酶联免疫吸附检测hPDLSCs培养上清液中炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测hPDLSCs中成骨分化相关基因Runt相关转录因子2 (RUNX2)、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)及SDF-1和CXCR4 mRNA表达;Western blot检测hPDLSCs中SDF-1、CXCR4蛋白表达。结果 与空白组比较,对照组hPDLSCs增殖活性、矿化结节数量、染色强度、ALP活性和RUNX2、OCN、OPN mRNA及SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表达水平显著降低,凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著升高(P<0.05);与对照组比较,西格列汀低、中、高浓度组hPDLSCs增殖活性、矿化结节数量、染色强度、ALP活性和RUNX2、OCN、OPN mRNA及SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表达水平依次升高,凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平依次降低(P<0.05);AMD3100可部分逆转高浓度西格列汀对LPS诱导的hPDLSCs的作用效果(P<0.05)。结论 西格列汀可能通过激活SDF-1/CXCR4信号通路促进LPS诱导的炎症微环境下hPDLSCs的增殖和成骨分化,抑制hPDLSCs凋亡和炎症反应。 展开更多
关键词 西格列汀 脂多糖 人牙周膜干细胞 成骨分化 基质细胞衍生因子-1 CXC趋化因子受体4
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基于转录组测序探讨柚皮素对脂多糖作用下人牙周膜干细胞的抗炎作用及相关机制 被引量:1
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作者 李俊玉 徐晓梅 +3 位作者 刘兴玉 曾婷 张丽 郑茜 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期512-520,共9页
目的联合使用转录组测序(RNA-seq)和生信分析,探究柚皮素(Nar)对脂多糖(LPS)刺激下的人牙周膜干细胞(hPDLSCs)的抗炎作用及机制。方法采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检... 目的联合使用转录组测序(RNA-seq)和生信分析,探究柚皮素(Nar)对脂多糖(LPS)刺激下的人牙周膜干细胞(hPDLSCs)的抗炎作用及机制。方法采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Nar对LPS刺激下hPDLSCs增殖及炎性因子表达情况,筛选出Nar的最佳抗炎浓度。采用RNA-seq,以|log2FC|≥1且P≤0.05为标准筛选出显著差异基因(DEGs)。采用火山图分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析、String数据库及Cytoscape的MCODE模块筛选核心基因。ELISA、qRT-PCR和蛋白印迹实验(Western blot)检测对核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。结果适宜浓度的Nar可减轻LPS刺激下hPDLSCs的炎症因子表达,促进其增殖,20μmol/LNar抗炎效果最佳。RNA-seq提示炎症相关信号通路显著富集。Nar通过抑制NF-κB信号通路产生抗炎作用,Nar与NF-κB抑制剂BAY11-7802效果相似。结论Nar可以通过抑制NF-κB信号通路发挥抗炎作用。Nar可能是辅助治疗牙周炎的一种潜在的药效成分。 展开更多
关键词 柚皮素 人牙周膜干细胞 抗炎作用 核因子ΚB 转录组测序
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缓释地塞米松改性丝胶蛋白水凝胶支架促进大鼠下颌骨缺损修复:基于调节巨噬细胞M2极化
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作者 范毅平 罗梦琳 +5 位作者 黄东宗 刘琳 傅博 王潇宇 关淼升 李鸿波 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期533-540,共8页
目的 探究改性丝胶蛋白水凝胶(SMH-CD/DEX)调节巨噬细胞极化促进骨缺损修复的能力。方法 将地塞米松搭载于丝胶蛋白水凝胶构建SMH-CD/DEX水凝胶。通过扫描电镜、傅里叶红外光谱、细胞活性实验和释放曲线测定,对SMH-CD/DEX水凝胶的形貌... 目的 探究改性丝胶蛋白水凝胶(SMH-CD/DEX)调节巨噬细胞极化促进骨缺损修复的能力。方法 将地塞米松搭载于丝胶蛋白水凝胶构建SMH-CD/DEX水凝胶。通过扫描电镜、傅里叶红外光谱、细胞活性实验和释放曲线测定,对SMH-CD/DEX水凝胶的形貌、化学性质及生物活性进行表征分析。通过Western blot、RT-qPCR、流式细胞术检测THP-1巨噬细胞中iNOS和Arg-1蛋白表达量,IL-6、IL-10、Arg-1、iNOS基因表达水平及CD86、CD206的表达比例。在共培养条件下通过Western blot,RT-qPCR检测h PDLSCs人牙周膜干细胞COL1A1和Runx2蛋白的表达量,ALP、Runx2、OCN、BMP2基因表达量,并进行碱性磷酸酶染色和茜素红染色。在大鼠下颌骨骨缺损模型植入水凝胶,通过Micro-CT扫描和组织病理染色分析新骨形成情况。结果 通过主客体相互作用与化学偶联改性丝胶蛋白水凝胶,成功构建SMH-CD/DEX水凝胶。SMH-CD/DEX水凝胶能够有效提高巨噬细胞M2极化相关标志物的IL-10及Arg-1的表达量(P<0.001);并降低M1极化相关标志物IL-6及iNOS表达(P<0.001)。在共培养体系中,SMH-CD/DEX水凝胶可提高人牙周膜干细胞的成骨分化相关标志物ALP、BMP2(P<0.05)及COL1A1(P<0.001)、Runx2表达量(P<0.01)。碱性磷酸酶染色和茜素红染色结果显示,SMH-CD/DEX水凝胶能够有效促进人牙周膜干细胞成骨分化。Micro-CT及HE、Masson染色结果显示,SMH-CD/DEX水凝胶有效促进骨缺损再生修复(P<0.05)。结论 SMH-CD/DEX水凝胶能够调节巨噬细胞M2极化促进干细胞成骨分化并促进骨缺损愈合。 展开更多
关键词 巨噬细胞 人牙周膜干细胞 免疫调节 骨再生 药物递送
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淫羊藿苷促进人牙周膜干细胞增殖及骨向分化的作用 被引量:19
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作者 秦子顺 殷丽华 +6 位作者 王开娟 刘琪 程文晓 高鹏 孙可墨 钟梅 余占海 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期370-376,共7页
目的采用体外和体内方法研究淫羊藿苷(ICA)对人牙周膜干细胞(h PDLSCs)增殖及骨向分化的影响。方法采用体外酶消化组织块法培养h PDLSCs,有限稀释克隆法分离纯化,检测细胞表面标志物以进行鉴定。体外实验:h PDLSCs与1×10-7 mol... 目的采用体外和体内方法研究淫羊藿苷(ICA)对人牙周膜干细胞(h PDLSCs)增殖及骨向分化的影响。方法采用体外酶消化组织块法培养h PDLSCs,有限稀释克隆法分离纯化,检测细胞表面标志物以进行鉴定。体外实验:h PDLSCs与1×10-7 mol·L-1 ICA共同培养,用四甲基偶氮唑盐法检测其增殖情况,经碱性磷酸酶(ALP)染色后采用酶联免疫仪检测其骨向分化情况,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测其成骨基因的表达情况,茜素红染色检测其骨量表达。体内实验:将h PDLSCs和纳米羟磷灰石(n HAC)复合物经1×10-7 mol·L-1 ICA共同诱导培养后,将其植入免疫缺陷小鼠,术后30 d采用组织切片法观察成骨状况。结果体外实验:1×10-7 mol·L-1 ICA作用于h PDLSCs后,与不含ICA的对照组相比,实验组从培养的第2天开始,h PDLSCs增殖明显;培养3、5、7 d,实验组ALP活性明显升高;培养7 d,成骨基因的相对表达量明显增高;培养14、21、28 d,实验组钙化结节的面积明显大于对照组。体内实验:实验组骨量较对照组明显增加。结论 1×10-7 mol·L-1 ICA可以促进h PDLSCs的增殖及骨向分化,提示采用ICA代替常规生长因子应用于牙周组织工程具有一定可行性。 展开更多
关键词 人牙周膜干细胞 淫羊藿苷 增殖 分化 纳米羟磷灰石
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改良法分离培养人牙周膜干细胞 被引量:12
7
作者 申涛 常慧君 +2 位作者 简从相 杨彦春 周继祥 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期71-74,78,共5页
目的改良法体外分离培养人牙周膜干细胞(PDLSC),并进行鉴定。方法采用酶消化组织块法获得人牙周膜细胞,通过有限稀释法克隆化培养、分离得到PDLSC,用含10%FBS的α-MEM培养液培养并传代;测定克隆形成率;免疫组织化学检测角蛋白及波形蛋... 目的改良法体外分离培养人牙周膜干细胞(PDLSC),并进行鉴定。方法采用酶消化组织块法获得人牙周膜细胞,通过有限稀释法克隆化培养、分离得到PDLSC,用含10%FBS的α-MEM培养液培养并传代;测定克隆形成率;免疫组织化学检测角蛋白及波形蛋白表达;流式细胞术分析细胞周期及表面标志物STRO-1、CD146的表达;并进行成骨、成脂诱导实验。结果本研究所得细胞有较强的克隆形成能力,波形蛋白染色阳性,角蛋白阴性,细胞周期分析大多细胞处于G0/G1期,STRO-1及CD146高表达,成骨、成脂诱导实验证明所得细胞有多向分化能力。结论改良法克隆化培养可成功分离得到PDLSC,为进一步研究PDLSC奠定了基础。 展开更多
关键词 人牙周膜干细胞 鉴定 细胞克隆
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人牙龈间充质干细胞与牙周膜干细胞的性能比较 被引量:6
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作者 杨昊 高丽娜 +3 位作者 安莹 周峻 陈发明 金岩 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2013年第4期326-330,共5页
目的:比较人牙龈间充质干细胞(gingival mesenchymal stem cells,GMSCs)和牙周膜干细胞(periodontalligament stem cells,PDLSCs)的增殖及分化能力。方法:取同一个体的牙龈组织及牙周膜组织进行干细胞的分离培养和鉴定,并对其干细胞基... 目的:比较人牙龈间充质干细胞(gingival mesenchymal stem cells,GMSCs)和牙周膜干细胞(periodontalligament stem cells,PDLSCs)的增殖及分化能力。方法:取同一个体的牙龈组织及牙周膜组织进行干细胞的分离培养和鉴定,并对其干细胞基本性能与增殖、分化能力进行对比分析。结果:GMSCs和PDLSCs均具有良好的间充质干细胞的特性,但其增殖及分化能力存在一定的差异。GMSCs原代细胞培养的成功率较PDLSCs高,增殖能力强,差异具有统计学意义(P<0.05);而分化能力检测结果显示,GMSCs成骨能力明显弱于PDLSCs(P<0.05),成脂能力两组细胞无显著性差异。结论:GMSCs能否代替PDLSCs用于牙周组织再生治疗,尚需要进一步研究。 展开更多
关键词 人类 牙龈间充质干细胞 牙周膜干细胞 增殖 分化
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糖基化终末产物对人牙周膜干细胞骨向分化过程中的Wnt经典信号通路研究 被引量:12
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作者 伍燕 邓超 +3 位作者 杨琨 崔晓霞 刘琪 金岩 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期627-632,共6页
目的探讨Wnt经典通路相关因子Dickkopf蛋白1(DKK-1)、β-链蛋白(β-catenin)在糖基化终末产物(AGEs)介导的人牙周膜干细胞(h PDLSCs)骨分化过程中的变化。方法通过体外组织块法和有限稀释法克隆化培养获取h PDLSCs,实验分两组:正常h PDL... 目的探讨Wnt经典通路相关因子Dickkopf蛋白1(DKK-1)、β-链蛋白(β-catenin)在糖基化终末产物(AGEs)介导的人牙周膜干细胞(h PDLSCs)骨分化过程中的变化。方法通过体外组织块法和有限稀释法克隆化培养获取h PDLSCs,实验分两组:正常h PDLSCs组(N-h PDLSCs组)和AGEs刺激的正常h PDLSCs组(A-h PDLSCs组)。对2组细胞成骨矿化诱导后行碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色;实时聚合酶链反应(real time PCR)检测成骨基因,以及Wnt经典通路中相关因子DKK-1、β-catenin;Western blot检测相关成骨蛋白、细胞核蛋白β-catenin。结果成骨诱导后,A-h PDLSCs组ALP染色明显浅于N-h PDLSCs组;茜素红染色A-h PDLSCs组钙化结节少于N-h PDLSCs组;real time PCR与Western blot的结果显示A-h PDLSCs组BSP、ALP、Runx-2的表达都较低,差异有统计学意义(P<0.05)。Wnt经典信号通路中相关因子:A-h PDLSCs组β-catenin表达高于N-h PDLSCs组,A-h PDLSCs组DKK-1表达明显低于N-h PDLSCs组,并且Weston blot显示A-h PDLSCs组核蛋白β-catenin的表达高于N-h PDLSCs组。结论 AGEs可以使h PDLSCs骨向分化过程中Wnt经典通路的抑制因子DKK-1下调,细胞核中的β-catenin表达升高,激活了Wnt经典通路,并且抑制了骨分化。 展开更多
关键词 糖基化终末产物 人牙周膜干细胞 骨向分化 Wnt经典通路
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purmorphamine促进人牙周膜干细胞应力成骨 被引量:5
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作者 常慧君 申涛 +3 位作者 董世武 杨彦春 张洁 周继祥 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期839-842,共4页
目的研究purmorphamine在动态张应力促人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,PDLSCs)向成骨细胞分化过程中的作用。方法分离培养鉴定PDLSCs,在矿化诱导环境中加入purmorphamine,采用Flexcell FX-4000T应力加载系统对... 目的研究purmorphamine在动态张应力促人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,PDLSCs)向成骨细胞分化过程中的作用。方法分离培养鉴定PDLSCs,在矿化诱导环境中加入purmorphamine,采用Flexcell FX-4000T应力加载系统对细胞加力24 h,以Real-time PCR检测成骨相关指标Runx2、alkaline phosphatase(ALP)以及Hedgehog(Hh)通路的标志物GLI1、Pathed1(PTCH1)、Smoothend(SMO)。结果动态张应力作用24 h后,成骨相关指标Runx2、ALP,Hh通路的标志物GLI1、PTCH1、SMO的表达水平明显升高(P<0.05);加入purmorphamine后,成骨相关指标Runx2、ALP,Hh通路的标志物GLI1、PTCH1、SMO的表达水平较加力组均有增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 purmor-phamine可能通过激活Hh通路,进而增强人PDLSCs应力条件下向成骨细胞分化。 展开更多
关键词 purmorphamine 人牙周膜干细胞 HEDGEHOG 动态张应力 成骨分化
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牙周膜干细胞诱导骨髓间充质干细胞的牙向分化 被引量:3
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作者 王璇 刘奕杉 +6 位作者 马艳 毕晓娟 郑树涛 刘佳 李伯琦 孙大磊 赵今 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期818-822,共5页
目的探讨牙周膜干细胞(PDLSC)诱导骨髓间充质干细胞(BMMSC)牙向分化的机制,为联合应用PDLSC和BMMSC再生牙周复合体提供实验依据。方法应用Transwell小室法间接联合培养小型猪PDLSC和BMMSC,根据二者混合比例随机分为3组。A组:P∶M=10∶... 目的探讨牙周膜干细胞(PDLSC)诱导骨髓间充质干细胞(BMMSC)牙向分化的机制,为联合应用PDLSC和BMMSC再生牙周复合体提供实验依据。方法应用Transwell小室法间接联合培养小型猪PDLSC和BMMSC,根据二者混合比例随机分为3组。A组:P∶M=10∶1共培养组;B组:P∶M=1∶1共培养;C组:P∶M=1∶10共培养,单独PDLSC和BMMSC培养组分别为阳性和阴性对照组。培养14 d,应用免疫荧光染色和实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测scleraxis、osteocalcin(OCN)、osterix(OSX)、细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)蛋白和mRNA表达情况,以判定PDLSC诱导BMMSC成牙的最佳配比比例。结果免疫荧光染色和qRT-PCR结果均显示scleraxis、OCN和OSX相对mRNA表达水平在A、B、C组间没有统计学差异(P>0.05),但相对MEPE mRNA表达水平在A组却明显高于B组和C组(P<0.01)。结论联合培养可促进BMMSC获得不同程度的PDLSC特性,且少量的PDLSC同样可以促进BMMSC获得牙源性干细胞特性。 展开更多
关键词 牙周膜干细胞 骨髓间充质干细胞 联合培养
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人牙周膜间充质干细胞的分离培养及超微结构观察 被引量:2
12
作者 张凤秋 孟焕新 +1 位作者 韩劼 丁茜 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期274-277,共4页
目的:分离培养人牙周膜间充质干细胞并观察其超微结构。方法:组织块法原代培养人牙周膜细胞,克隆培养观察细胞克隆形成情况,采用STRO-1为标记物以免疫磁珠法分离筛选人牙周膜间充质干细胞,瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态,透射电镜观察分... 目的:分离培养人牙周膜间充质干细胞并观察其超微结构。方法:组织块法原代培养人牙周膜细胞,克隆培养观察细胞克隆形成情况,采用STRO-1为标记物以免疫磁珠法分离筛选人牙周膜间充质干细胞,瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态,透射电镜观察分离筛选细胞的超微结构。结果:人牙周膜干细胞具有克隆形成能力,胞浆内核糖体丰富,可见粗面内质网和线粒体,而其他胞浆细胞器较少,具有处于低分化细胞超微结构特点。结论:牙周膜干细胞具有克隆形成能力和一般干细胞的超微结构特点。 展开更多
关键词 牙周膜 间质干细胞 细胞培养技术 免疫磁化分离
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人牙周膜干细胞、脐带间充质干细胞对体外培养角膜缘干细胞的影响 被引量:3
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作者 王慧娴 高晓唯 +1 位作者 蔡岩 李文静 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2016年第11期1015-1020,共6页
目的比较人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,HPDLSCs)、人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)作为饲养层培养角膜缘干细胞(limbal stem cells,LSCs)的优越性,从而筛选出扩增L... 目的比较人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,HPDLSCs)、人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)作为饲养层培养角膜缘干细胞(limbal stem cells,LSCs)的优越性,从而筛选出扩增LSCs的最佳饲养层。方法体外分离培养HPDLSCs、HUCMSCs,诱导细胞成脂、成骨分化,并检测细胞表面标志物的表达;将兔LSCs与HPDLSCs、HUCMSCs、NIH-3T3共培养和无饲养层单独培养,比较各组克隆形成率,免疫荧光比较各组LSCs克隆团ABCB5、IPO13、CK3/12的表达情况。结果体外培养HPDLSCs、HUCMSCs均可向脂肪、成骨细胞分化,两种细胞均高表达间充质来源的表面标志CD90,不表达CD45;三组饲养层与兔LSCs共培养均可形成小克隆团,HPDLSCs组、HUCMSCs组、NIH-3T3组、无饲养层组克隆形成率分别为(4.90±0.96)%、(4.10±0.56)%、(4.67±0.76)%、(0.83±0.35)%,四组间总体比较差异有统计学意义(F=22.047,P=0.00);HPDLSCs组、HUCMSCs组与NIH-3T3组的克隆形成率差异均无统计学意义(均为P>0.05);HPDLSCs组、HUCMSCs组、NIH-3T3组与无饲养层组间差异均有统计学意义(均为P<0.01)。免疫荧光化学检测三种饲养层LSCs标志物ABCB5、IPO13呈高表达,CK3/12呈低表达。结论 HPDLSCs、HUCMSCs均可作为替代饲养层用以培养LSCs。 展开更多
关键词 人牙周膜干细胞 人脐带间充质干细胞 角膜缘干细胞 饲养层
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基质细胞衍生因子-1对炎症和正常来源的人牙周膜干细胞成骨分化能力的影响 被引量:7
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作者 林永盛 王丰芝 +1 位作者 雷晓静 何健民 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期469-475,共7页
目的通过体外培养炎症来源的人牙周膜干细胞(iPDLSCs)和正常来源的人牙周膜干细胞(hPDLSCs),比较基质细胞衍生因子-1(SDF-1)对于两种来源细胞的成骨分化作用。方法采用组织块酶消化法原代培养iPDLSCs和hPDLSCs,经有限稀释法纯化,通过流... 目的通过体外培养炎症来源的人牙周膜干细胞(iPDLSCs)和正常来源的人牙周膜干细胞(hPDLSCs),比较基质细胞衍生因子-1(SDF-1)对于两种来源细胞的成骨分化作用。方法采用组织块酶消化法原代培养iPDLSCs和hPDLSCs,经有限稀释法纯化,通过流式细胞仪对干细胞表面标记物检测鉴定后,对其进行成骨诱导;MTT法检测并比较SDF-1对两种来源的细胞增殖能力的影响;茜素红染色检测SDF-1作用于两种来源的细胞后钙化骨量的表达;碱性磷酸酶法比较SDF-1作用于两者的成骨分化能力;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测SDF-1作用于两种牙周膜干细胞前后成骨相关基因表达水平的变化。结果两种来源的牙周膜细胞经纯化后均阳性表达干细胞标记物。hPDLSCs较iPDLSCs增殖能力高;两种细胞经SDF-1成骨诱导培养后,成骨相关基因的表达水平均较诱导前明显上调(P<0.05),SDF-1在50、200ng·mL^-1时分别对iPDLSCs和hPDLSCs细胞成骨分化作用最明显(P<0.05)。结论正常来源和炎症来源的人牙周膜干细胞均具有成骨分化能力,SDF-1可增强两种来源的牙周膜干细胞的成骨分化能力。 展开更多
关键词 基质细胞衍生因子-1 炎症 人牙周膜干细胞 成骨分化
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人参皂苷Rg1促进人牙周膜干细胞增殖及骨向分化 被引量:2
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作者 高鹏 程文晓 +5 位作者 王开娟 孙可墨 钟梅 秦子顺 殷丽华 余占海 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期103-111,共9页
人参皂苷Rg1(GS Rg1)是人参的主要药理活性成分.GS Rg1有刺激造血干细胞的形成和促进骨髓间充质干细胞增殖和分化的作用.而人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,h PDLSCs)具有自我更新和多向分化的干细胞特性.但目前... 人参皂苷Rg1(GS Rg1)是人参的主要药理活性成分.GS Rg1有刺激造血干细胞的形成和促进骨髓间充质干细胞增殖和分化的作用.而人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,h PDLSCs)具有自我更新和多向分化的干细胞特性.但目前关于GS Rg1能否促进牙周膜干细胞增殖和分化的研究尚不多见.本研究证明,1×10-5mol/L GS Rg1作用于h PDLSCs后,能明显促进牙周膜干细胞的增殖与分化.MTT检测细胞增殖显示,培养液中加入了GS Rg1实验组在第2,3,4,5 d增殖情况明显高于对照组,提示GS Rg1成分促进了牙周膜干细胞的增殖.检测ALP表达量,RUNX2,Collagen I,OPN,OCN表达水平,加药实验组表达水平均高于未加药对照组,它们的表达量的增高提示成骨分化的增强.牙周膜干细胞与纳米羟基磷灰石支架结合的电镜图片及其支架植入小鼠体内后的免疫组化检测显示,含有GS Rg1成分的细胞支架能促进形成更多的骨样组织.因此,GS Rg1能促进h PDLSCs体内体外的增殖及骨向分化,并在替代传统生长因子应用于牙周组织工程方面有较好前景. 展开更多
关键词 人参皂苷RG1 人牙周膜干细胞 增殖 成骨分化 纳米羟基磷灰石材料
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糖基化终末产物对人牙周膜干细胞增殖及相关基因HSG、cyclinD1表达的影响 被引量:2
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作者 陶庭亮 邓超 +3 位作者 柳海 周嵩琳 徐清 王云 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期500-502,505,共4页
目的:探讨糖基化终末产物(AGEs)对人牙周膜干细胞(HPDLSC)增殖能力以及增殖相关基因HSG、cyclinD1的影响。方法:体外组织块法和有限稀释法克隆化培养牙周膜干细胞;成骨、成脂诱导牙周膜细胞,对其进行干细胞鉴定;将培养出的牙周膜干细胞... 目的:探讨糖基化终末产物(AGEs)对人牙周膜干细胞(HPDLSC)增殖能力以及增殖相关基因HSG、cyclinD1的影响。方法:体外组织块法和有限稀释法克隆化培养牙周膜干细胞;成骨、成脂诱导牙周膜细胞,对其进行干细胞鉴定;将培养出的牙周膜干细胞与不同浓度的AGEs共培养,MTT检测不同浓度下牙周膜干细胞增殖的改变;实时定量聚合酶链反应(real time PCR)检测AGEs刺激后HSG、cyclin D1表达的改变。结果:牙周膜细胞成骨诱导21d后茜素红染色出现钙化结节;成脂诱导21d后油红O染色出现脂滴;MTT显示不同浓度的AGEs对HPDLSCs增殖能力的影响有所差别,高浓度(100mg/L,200mg/L)明显抑制HPDLSCs的增殖,差异有统计学意义(P<0.05),低浓度(1mg/L,10mg/L)对HPDLSCs的增殖能力影响不大,差异无统计学意义;Real time PCR结果显示:AGEs(100mg/L)刺激3d后HSG mRNA表达水平较对照组升高、cyclinD1mRNA的表达水平较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:高浓度的AGEs能抑制人牙周膜干细胞的增殖并能改变HSG、cyclinD1mRNA的表达。 展开更多
关键词 糖基化终末产物 人牙周膜干细胞 增殖
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人骨髓间充质干细胞外泌体来源的miR-335-5p促进人牙周膜干细胞的成骨分化:基于下调DKK1表达 被引量:3
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作者 刘屿 曾莲 +6 位作者 王卫红 杨艳玲 王洲 刘建启 李卫 孙婧宇 余晓宏 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期420-427,共8页
目的探讨人骨髓间充质干细胞(hBMMSCs)外泌体来源的miR-335-5p调控DKK1对人牙周炎中牙周膜干细胞(PDLSCs)成骨分化的影响及其作用机制。方法提取hBMMSCs外泌体,通过透射电镜、Western blot以及PKH67标记鉴定外泌体,通过TNF-α诱导PDLSC... 目的探讨人骨髓间充质干细胞(hBMMSCs)外泌体来源的miR-335-5p调控DKK1对人牙周炎中牙周膜干细胞(PDLSCs)成骨分化的影响及其作用机制。方法提取hBMMSCs外泌体,通过透射电镜、Western blot以及PKH67标记鉴定外泌体,通过TNF-α诱导PDLSCs构建牙周炎细胞模型。提取的外泌体与TNF-α诱导的PDLSCs共同培养。qRT-PCR检测miR-335-5p,促炎因子IL-1β、IL-6、IL-8和成骨标志基因RunX2、OCN、BMP-2 mRNA表达。茜素红和ALP染色检测钙结节,Western blot检测DKK1蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证miR-335-5p与DKK1的靶向关系。结果提取的hBMMSCs外泌体中CD9和CD81显著表达(P<0.05)。hBMMSC外泌体降低TNF-α诱导的hPDLSCs中促炎细胞因子IL-1β(P<0.01)、IL-6(P<0.05)、IL-8(P<0.05)的mRNA表达并促进成骨标志基因RunX2(P<0.01)、OCN(P<0.05)、BMP-2(P<0.001)mRNA和钙结节生成。miR-335-5p在hBMMSCs外泌体中高表达,过表达miR-335-5p靶向下调DKK1(P<0.001),抑制促炎细胞因子IL-1β、IL-6、IL-8的表达(P<0.001),促进成骨标志物BMP-2、OCN、RunX2的mRNA表达以及钙结节生成(P<0.001)。结论hBMMSC外泌体来源的miR-335-5p靶向下调DKK1,促进hPDLSCs成骨分化,抑制牙周炎的发展进程。 展开更多
关键词 牙周炎 骨髓间充质干细胞 外泌体 miR-335-5p 牙周膜干细胞 成骨分化
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3种烤瓷基底合金对人牙周膜干细胞增殖和骨相分化的影响 被引量:1
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作者 夏冬景 华泽权 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2014年第1期44-47,共4页
目的:通过测定人牙周膜干细胞(hPDLSCs)在3种不同金属基底提取液培养过程中的增殖和骨相分化能力,比较3种金属基底冠对牙周组织的影响。方法:在人牙周膜干细胞体外培养系统中分别加入镍铬合金、钴铬合金、纯钛浸泡后提取液,常规进行培... 目的:通过测定人牙周膜干细胞(hPDLSCs)在3种不同金属基底提取液培养过程中的增殖和骨相分化能力,比较3种金属基底冠对牙周组织的影响。方法:在人牙周膜干细胞体外培养系统中分别加入镍铬合金、钴铬合金、纯钛浸泡后提取液,常规进行培养及成骨分化诱导,分别测定并比较各组干细胞增殖能力及成骨分化能力。结果:纯钛提取液组人牙周膜干细胞增殖能力和成骨分化能力明显高于镍铬合金组和钴铬合金组(P<0.05),差异有统计学意义,与空白对照组相比无明显差异。镍铬合金组与钴铬合金组相比无明显差别,差异无统计学意义。结论:镍铬合金和钴铬合金非贵金属组可降低人牙周膜干细胞增殖和成骨分化能力,而纯钛材料对其影响不大,提示纯钛合金的良好生物相容性。 展开更多
关键词 金属合金 人牙周膜干细胞 细胞增殖 成骨分化
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防御素3基因转染牙周膜及骨髓基质细胞的初步研究
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作者 朱建华 苗博 +1 位作者 刘娜 王海燕 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期794-798,共5页
目的探讨人牙周膜细胞(hPDLCs)和人骨髓间充质细胞(hBMCs)被包含防御素3(hBD3)基因的慢病毒转染后,其转染效率和成骨情况。方法通过助转染剂polybrene将包含目的基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒转染入hPDLCs和hBMCs,通过RT-PCR和We... 目的探讨人牙周膜细胞(hPDLCs)和人骨髓间充质细胞(hBMCs)被包含防御素3(hBD3)基因的慢病毒转染后,其转染效率和成骨情况。方法通过助转染剂polybrene将包含目的基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒转染入hPDLCs和hBMCs,通过RT-PCR和Western blotting检验是否能正常表达hBD3,通过绿色荧光显微镜计数并计算转染效率。同时使用碱性磷酸酶和茜素红染色检测细胞的成骨潜能。结果包含有hBD3基因和GFP基因的慢病毒对hBMCs和hPDLCs的转染效率分别达到44.44%和28.98%。仅包含有GFP基因的慢病毒对hBMCs和hPDLCs的转染效率分别达到79.94%和31.71%。结论 hPDLCs和hBMCs对hBD3基因的转染效率相近,可作为促使牙周组织再生的理想的种子细胞;被转染后的细胞仍具有成骨能力。 展开更多
关键词 防御素3 人牙周膜细胞 人骨髓间充质细胞 转染 慢病毒
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低氧对人牙周膜干细胞骨向分化的影响
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作者 刘衍钊 孙世林 +3 位作者 顾旷 刘雨 邹多宏 王元银 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第7期965-969,共5页
目的探讨低氧对人牙周膜干细胞(PDLSCs)骨向分化的影响。方法采用组织块法体外分离培养PDLSCs,分别在常氧和低氧条件下培养PDLSCs,低氧组在2%O2浓度下培养6、12、24、48 h后检测其碱性磷酸酶(ALP)活性,并通过荧光定量PCR检测低氧培养的P... 目的探讨低氧对人牙周膜干细胞(PDLSCs)骨向分化的影响。方法采用组织块法体外分离培养PDLSCs,分别在常氧和低氧条件下培养PDLSCs,低氧组在2%O2浓度下培养6、12、24、48 h后检测其碱性磷酸酶(ALP)活性,并通过荧光定量PCR检测低氧培养的PDLSCs中骨钙素(OCN)、低氧诱导因子1α(Hif-1α)、碱性磷酸酶(ALP)以及成骨相关基因核心结合因子(Runx-2)等基因的表达变化;通过Western blot法检测低氧培养的PDLSCs中Runx-2、Hif-1α等蛋白的表达变化。结果低氧组的PDLSCs的ALP水平高于常氧组,但低氧48 h开始抑制ALP水平,荧光定量PCR和Western blot结果显示低氧培养48 h内的PDLSCs的成骨能力高于常氧组,但低氧培养48 h则抑制其成骨能力。结论48 h内低氧可显著增强PDLSCs骨向分化作用,48 h则开始抑制其成骨能力。 展开更多
关键词 牙周膜干细胞 低氧 骨向分化
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