中药复方开心散联用氟西汀对慢性压力应激抑郁模型小鼠海马神经干细胞的影响评价研究

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作者 黄灵欣 李鑫 +7 位作者 袁磊 朱韵 黄小宁 李璇 詹华强 段金廒 李乐军 朱悦 《世界科学技术-中医药现代化》 北大核心 2025年第4期1035-1046,共12页

目的 评估开心散联合氟西汀对慢性压力应激抑郁小鼠海马神经干细胞的影响。方法 运用慢性不可预知压力应激的方法构建抑郁小鼠模型,给予开心散水提取物和氟西汀临床应用的最高剂量,持续28天,并开展行为学测试。利用Nissl染色法检测小鼠... 目的 评估开心散联合氟西汀对慢性压力应激抑郁小鼠海马神经干细胞的影响。方法 运用慢性不可预知压力应激的方法构建抑郁小鼠模型,给予开心散水提取物和氟西汀临床应用的最高剂量,持续28天,并开展行为学测试。利用Nissl染色法检测小鼠海马组织的病理状况;通过免疫荧光法测定小鼠海马TUNEL和巢蛋白(Nestin)的表达;采用蛋白免疫印迹法检测小鼠海马组织中凋亡蛋白cleaved Caspase-3与Caspase-3、焦亡蛋白GSDMD与cleaved Caspase-1的表达,以及海马区神经干细胞标志物Nestin的表达,同时检测小鼠海马组织Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。结果 开心散水提取物与氟西汀联合使用,能够显著改善模型小鼠的抑郁样行为,效果优于氟西汀单独用药。联合用药可抑制高剂量氟西汀单独使用时对海马区细胞凋亡和焦亡信号通路的激活,显著上调Nestin的表达,并调节Wnt/β-catenin信号通路蛋白的表达。结论 开心散与高剂量氟西汀联用,可改善压力应激抑郁模型小鼠海马区的细胞凋亡和焦亡情况,通过调控Wnt/β-catenin信号通路,上调神经干细胞标志物Nestin的表达,这可能是提升联合用药抗抑郁效果的关键环节。 展开更多

关键词 开心散 氟西汀 慢性压力应激抑郁模型 联合用药 海马神经干细胞

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体外模拟海马神经再生微环境下的NSCs增殖和向神经元分化

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作者 秦建兵 金国华 +3 位作者 朱培培 李浩明 田美玲 杨伟伟 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期573-577,共5页

目的:探讨用切割穹窿海马伞海马提取液在体外模拟体内海马神经再生微环境下,对海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖和向神经元分化的影响。方法:分别制备正常侧和切割穹窿海马伞侧海马提取液。实验分为对照组、正常组和切割组,... 目的:探讨用切割穹窿海马伞海马提取液在体外模拟体内海马神经再生微环境下,对海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖和向神经元分化的影响。方法:分别制备正常侧和切割穹窿海马伞侧海马提取液。实验分为对照组、正常组和切割组,分别在海马NSCs中加入DMEM/F12培养基、含正常侧海马提取液及切割侧海马提取液的DMEM/F12培养基。用WST-8和Ki67/Sox2免疫荧光检测NSCs的增殖,用DCX免疫荧光检测NSCs向神经元的分化情况。结果:切割组与正常组及对照组相比,WST-8检测OD450比值明显增高(P<0.05);Ki67阳性细胞和Sox2阳性细胞的比例均明显增高(P<0.001)。结论:用切割穹窿海马伞侧海马提取液在体外模拟海马神经再生微环境,可以促进海马NSCs的增殖和向神经元的分化。 展开更多

关键词 神经干细胞 切割海马伞 海马提取液 大鼠

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海马胆碱能神经元刺激肽促进海马胆碱能神经元再生的研究

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作者 杨伟伟 金国华 +2 位作者 秦建兵 李浩明 田美玲 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期877-882,共6页

目的:探讨海马胆碱能神经元刺激肽(HCNP)对切割穹窿海马伞后海马胆碱能神经元的促进作用。方法:36只SD大鼠随机分成两组,切割右侧穹窿海马伞后,术后连续5d腹腔注射BrdU,经侧脑室分别注射HCNP和人工脑脊液(ACSF),每3天1次,共6次。切割术... 目的:探讨海马胆碱能神经元刺激肽(HCNP)对切割穹窿海马伞后海马胆碱能神经元的促进作用。方法:36只SD大鼠随机分成两组,切割右侧穹窿海马伞后,术后连续5d腹腔注射BrdU,经侧脑室分别注射HCNP和人工脑脊液(ACSF),每3天1次,共6次。切割术前、术后及治疗术后行Morris水迷宫行为学测试;术后第35天,灌注取脑行溴脱氧尿苷(5-BrdU)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)免疫荧光检测;提取总RNA,RT-PCR检测ChAT mRNA表达量;提取总蛋白,Western blot检测ChAT蛋白表达。结果:切割穹窿海马伞后,两组大鼠平均逃避潜伏期(AEL)均明显增加,记忆力下降,经过治疗后,实验组大鼠AEL显著缩短,对照组无改善,两组AEL有显著性差异(P<0.05);HCNP组海马齿状回颗粒下层可见较多BrdU阳性细胞及海马ChAT阳性神经元,ACSF组仅见少量BrdU阳性细胞,未见ChAT阳性神经元;RT-PCR结果显示,HCNP组ChAT mRNA约为ACSF组2倍(P<0.01);Western blot结果表明,实验组ChAT蛋白相对表达量为0.412±0.018、对照组为0.218±0.017,实验组明显高于对照组,二者存在显著性差异(P<0.01)。结论:HCNP可促进海马齿状回颗粒下层神经干细胞的增殖及其向胆碱能神经元分化。 展开更多

关键词 海马胆碱能神经元刺激肽 海马 神经干细胞 神经元 胆碱能神经元

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次声激活小胶质细胞抑制成年大鼠海马神经干细胞增殖

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作者 董正 蔡婧 +1 位作者 林甜 史明 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期408-412,共5页

目的:探讨次声对成年大鼠海马齿状回颗粒细胞下层(subgranular zone,SGZ)神经干细胞增殖抑制作用的细胞学机制。方法:成年雄性Sprague-Dawley大鼠置于次声压力舱,连续暴露于16 Hz、130 dB次声7 d(2h/d)后,给与小胶质细胞抑制剂米诺环素(... 目的:探讨次声对成年大鼠海马齿状回颗粒细胞下层(subgranular zone,SGZ)神经干细胞增殖抑制作用的细胞学机制。方法:成年雄性Sprague-Dawley大鼠置于次声压力舱,连续暴露于16 Hz、130 dB次声7 d(2h/d)后,给与小胶质细胞抑制剂米诺环素(50 mg/kg,药物组,n=16)或等体积生理盐水(对照组,n=16),同时设立不经次声作用的正常对照组(n=16);分别于1、3、7和14 d处死大鼠,利用免疫组织化学法以Iba1、OX42标记小胶质细胞,BrdU标记增殖的神经干细胞。结果:小胶质细胞在SGZ区分布较为密集;与正常对照组相比,次声暴露后3 d时OX42免疫反应性明显增强、SGZ区BrdU阳性细胞数目减少最为明显(P<0.01);米诺环素可显著改善次声暴露后BrdU阳性细胞数目的减少(P<0.01)。结论:小胶质细胞活化参与次声抑制成年大鼠海马SGZ区神经干细胞的增殖。 展开更多

关键词 次声 海马齿状回 神经干细胞 小胶质细胞 细胞增殖 大鼠

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APP5肽模拟物P165对体外培养大鼠海马神经干细胞增殖和分化的影响

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作者 孟艳 张景艳 +3 位作者 王蓉 张淑文 陈兵 盛树力 《中国比较医学杂志》 CAS 2009年第4期6-9,F0002,共5页

目的研究一种小分子多肽─APP5肽的模拟物P165对体外培养的大鼠胚胎海马神经干细胞(neuralstem cells,NSCs)增殖和分化的影响,以期能找到一种可代替神经营养因子的小分子物质,能够促进NSCs的增殖或分化,为将来的临床应用提供理论依据。... 目的研究一种小分子多肽─APP5肽的模拟物P165对体外培养的大鼠胚胎海马神经干细胞(neuralstem cells,NSCs)增殖和分化的影响,以期能找到一种可代替神经营养因子的小分子物质,能够促进NSCs的增殖或分化,为将来的临床应用提供理论依据。方法(1)原代培养SD大鼠胚胎脑海马NSCs;(2)利用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)和神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞的特异性标记物微管相关蛋白2(MAP2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、2,3-环核苷酸-3磷酸二酯酶(CNPase)对培养的NSCs进行鉴定;(3)将培养的NSCs分为对照组、血清组、APP5肽反序列组和P165组,观察各组细胞形态的变化;(4)将培养的NSCs分为对照组、APP5肽反序列组和P165组,利用细胞计数,测定干细胞克隆形成率、干细胞克隆形成大小的方法分析P165对海马NSCs增殖的影响。结果(1)海马神经干细胞呈神经球聚集生长,BrdU染色阳性;加入血清后神经球周围有细胞呈放射状向四周生长,并带有突起。染色呈MAP2、GFAP或CNPase阳性;(2)海马NSCs加入P165及其反序列后细胞形态上与对照组相比没有明显改变;(3)与对照组相比,加P165后海马NSCs数量明显增加,克隆形成率和克隆形成的直径均有明显的增加,并有统计学差异。结论P165能够促进海马NSCs的增殖,但并不促进其分化。 展开更多

关键词 P165 海马NSCs 增殖 分化 原代细胞培养

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大鼠海马神经干细胞的扩增及与三维微小凹图式复合的研究 被引量：3

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作者 吕艳玲 吴泽志 +5 位作者 张利光 宋兆全 于婷 文灿 阴金波 陈景龙 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期520-524,共5页

目的比较2种培养基下海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的生长特性,进而实现海马NSCs扩增的优化及其与聚乳酸(poly-L-lactide,PLLA)三维微小凹图式的复合。方法分离大鼠胚胎海马细胞并采用Neurobasal为基础的培养基和DMEM/F12为... 目的比较2种培养基下海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的生长特性,进而实现海马NSCs扩增的优化及其与聚乳酸(poly-L-lactide,PLLA)三维微小凹图式的复合。方法分离大鼠胚胎海马细胞并采用Neurobasal为基础的培养基和DMEM/F12为基础的培养基进行扩增。以四甲基氮唑蓝(MTT)比色法及神经球数目统计法评价2种培养基下细胞增殖行为。采用紫外光光刻、硅蚀刻及软光刻技术制备PLLA三维微小凹图式并实现海马NSCs与微小凹图式的复合。结果原代分离的海马细胞呈神经干细胞标志物阳性并能向神经元系和胶质细胞系分化。在30d的扩增时间内,海马NSCs在以Neurobasal为基础的培养基中缓慢扩增聚集成神经球,少见细胞贴壁及分化;在以DMEM/F12为基础的培养基中海马NSCs扩增迅速,但易贴壁和分化。培养第25天时后者神经球数量为前者的4.7倍。微加工制备的微小凹图式结构清晰、稳定,具有高纵横结构比(≥1)。扩增的海马NSCs能在三维微小凹图式上成功复合生长。结论以DMEM/F12为基础的培养基有利于大鼠海马NSCs的扩增,以Neurobasal为基础的培养基利于海马NSCs的纯化。序贯应用2种培养基可有效扩增海马NSCs并实现其与三维微小凹图式的复合。 展开更多

关键词 海马神经干细胞 神经球 原代培养 扩增 聚乳酸 微加工

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肝X受体激活对全脑缺血/再灌注小鼠海马神经干细胞增殖及认知功能的影响 被引量：6

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作者 陈莉莉 杨雪梅 +1 位作者 谌贝贝 承欧梅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期185-190,共6页

目的研究肝X受体激活对全脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)小鼠的海马神经干细胞增殖及认知功能的影响,及其作用机制。方法将75只C57BL/6小鼠随机分为3组,即假手术组(Sham)、全脑缺血/再灌注组(I/R)、全脑缺血/再灌注+肝X受体... 目的研究肝X受体激活对全脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)小鼠的海马神经干细胞增殖及认知功能的影响,及其作用机制。方法将75只C57BL/6小鼠随机分为3组,即假手术组(Sham)、全脑缺血/再灌注组(I/R)、全脑缺血/再灌注+肝X受体激动剂TO901317干预组(I/R+TO90),每组25只。采用双侧颈总动脉夹闭方法建立全脑I/R小鼠模型;肝X受体激动剂TO901317(30 mg·kg^(-1))在缺血后24 h腹腔注射(i.p,1次/天,连续14 d)。Morris水迷宫实验测定小鼠学习与记忆等认知功能的改变;HE染色观察小鼠海马CA1区病理形态学的改变;免疫组化观察小鼠海马齿状回区DCX阳性细胞的表达;免疫荧光观察海马齿状回区Brd U阳性细胞的表达;Western blot检测海马LXRα、LXRβ、ABCA1、p-ERK1/2、t-ERK1/2、p-CREB、tCREB、BDNF等蛋白的表达情况。结果LXR激动剂TO901317处理后,I/R小鼠的海马齿状回DCX与Brd U阳性细胞的表达数目均增加(P<0.01),认知功能得到了改善(P<0.01),同时,海马ABCA1、p-ERK1/2、p-CREB、BDNF等蛋白表达水平也上调(P<0.01)。结论肝X受体的激活促进了I/R小鼠海马齿状回颗粒下层神经干细胞的增殖和认知功能的改善,其机制可能与激活ERK1/2-CREB-BDNF信号通路,促进I/R小鼠海马DG区内源性神经发生有关。 展开更多

关键词 肝X受体 全脑缺血 海马 神经干细胞 认知功能 脑源性神经营养因子

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中医药诱导缺血性脑损伤后海马神经干细胞增殖分化的研究进展 被引量：3

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作者 颜灿灿 祝美珍 罗刘军 《辽宁中医杂志》 CAS 2018年第7期1556-1559,共4页

海马神经组织的干细胞具有多分化的潜能,通过采取干预措施调控相关通路可促使其分化、增殖、迁移形成神经元和神经胶质细胞,并且新生成的神经元可替代受损的神经细胞,修复神经损伤。缺血性脑损伤后神经元、胶质细胞、血管内皮细胞等组... 海马神经组织的干细胞具有多分化的潜能,通过采取干预措施调控相关通路可促使其分化、增殖、迁移形成神经元和神经胶质细胞,并且新生成的神经元可替代受损的神经细胞,修复神经损伤。缺血性脑损伤后神经元、胶质细胞、血管内皮细胞等组织结构会遭受损伤与破坏,因此通过激活海马神经干细胞促进其增殖、分化修复受损的神经组织成为治疗缺血性脑损伤的重要手段和方法。目前在中医药对缺血损伤后神经组织特别是神经元的修复和再生等方面进行了大量的实验研究,并在中医药诱导海马神经干细胞增殖分化,修复缺血损伤神经元的研究中取得了一定的成果。 展开更多

关键词 中医药 海马神经干细胞 缺血性脑损伤 信号通路

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去甲氧基姜黄素通过促进海马神经发生对阿尔兹海默症认知损伤的改善作用 被引量：5

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作者 林凯莉 张世卿 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期2476-2482,共7页

目的 探讨去甲氧基姜黄素通过促进海马神经发生治疗阿尔兹海默症的作用及机制。方法 体外实验以1.25、2.5、5.0μmol/L去甲氧基姜黄素干预原代培养神经干细胞(NSCs),采用CCK-8法检测NSCs增殖,Western blot法检测NSCs分化标志物(Nestin、... 目的 探讨去甲氧基姜黄素通过促进海马神经发生治疗阿尔兹海默症的作用及机制。方法 体外实验以1.25、2.5、5.0μmol/L去甲氧基姜黄素干预原代培养神经干细胞(NSCs),采用CCK-8法检测NSCs增殖,Western blot法检测NSCs分化标志物(Nestin、MAP2)及GSK-3β/β-catenin通路蛋白表达。体内实验以2.5、5.0 mg/kg去甲氧基姜黄素干预APP/PS1转基因阿尔兹海默症小鼠模型,采用行为学实验检测小鼠认知能力,Nissl染色和免疫荧光染色评价海马神经发生水平,Western blot法检测海马组织中GSK3β/β-catenin通路蛋白表达。结果 体外实验显示,去甲氧基姜黄素促进NSCs增殖,促使其分化为神经元(P<0.05),并激活GSK-3β/β-catenin通路(P<0.05)。体内实验显示,去甲氧基姜黄素改善APP/PS1转基因小鼠的认知障碍(P<0.05),促进海马区神经发生(P<0.05),激活GSK-3β/β-catenin通路(P<0.05)。结论 去甲氧基姜黄素通过激活GSK-3β/β-catenin通路、促进海马神经发生来改善阿尔兹海默症的认知损伤。 展开更多

关键词 去甲氧基姜黄素 阿尔兹海默症 神经干细胞 认知障碍 海马神经发生

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NR1基因RNA干扰的海马神经干细胞体系的构建

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作者 贺育青 马全瑞 +2 位作者 邵钰 李晨 刘娟 《神经解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第5期555-559,共5页

目的:构建NR1基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)的海马神经干细胞体系,用于离体水平研究NR1对精神分裂症模型海马神经发生的调控作用。方法:利用293T细胞,将病毒原液稀释至不同病毒梯度,经过逐孔稀释法检测慢病毒滴度;体外培养海马神... 目的:构建NR1基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)的海马神经干细胞体系,用于离体水平研究NR1对精神分裂症模型海马神经发生的调控作用。方法:利用293T细胞,将病毒原液稀释至不同病毒梯度,经过逐孔稀释法检测慢病毒滴度;体外培养海马神经干细胞,分别加入MOI值为100、10、1的慢病毒,确定海马神经干细胞的最适MOI值;海马神经干细胞体系中加入浓度为200μmol/L的MK-801 24 h后,加入干扰NR1亚基的慢病毒12 h,通过荧光显微镜观察海马神经干细胞干扰效率,通过Western Blot检测转染后海马神经干细胞NR1的蛋白表达。结果:(1)重组的慢病毒滴度可达2×10~8~2×10~9TU/m L。MOI值为100时,海马神经干细胞转染率可达90%;(2)Western Blot结果显示:感染慢病毒的海马神经干细胞中NR1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:成功构建了NR1基因RNA干扰的海马神经干细胞体系,慢病毒介导的shRNA可有效的干扰海马神经干细胞中NR1亚基的表达,为进一步探讨NR1对精神分裂症海马神经发生调控机制的研究提供了依据。 展开更多

关键词 海马神经干细胞 NR1 干扰 慢病毒

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特异性shRNA对小鼠海马神经干细胞中Olig2基因表达的影响

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作者 李晨 贺育青 +4 位作者 吕昊文 邵钰 郭丽 马全瑞 刘娟 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期283-287,共5页

目的:构建RNA干扰(RNAi)少突胶质细胞转录因子2(Olig2)基因的小鼠海马神经干细胞(NSCs)体系,用于离体水平研究Olig2对精神分裂症模型海马神经发生的调控作用。方法:海马NSCs原代培养及鉴定;通过荧光显微镜分别观察24、48、72 h后NSCs感... 目的:构建RNA干扰(RNAi)少突胶质细胞转录因子2(Olig2)基因的小鼠海马神经干细胞(NSCs)体系,用于离体水平研究Olig2对精神分裂症模型海马神经发生的调控作用。方法:海马NSCs原代培养及鉴定;通过荧光显微镜分别观察24、48、72 h后NSCs感染情况,确定慢病毒感染的最佳时间;通过Western Blot筛选有效干扰Olig2的shRNA序列;在NSCs体系中加入浓度为200μmol/L的MK-801 24 h后,加入有效干扰Olig2的shRNA,通过Western Blot检测慢病毒感染后的Olig2蛋白表达。结果:慢病毒感染72 h后,海马神经干细胞球荧光表达最强,可达90%;Western Blot结果显示:与对照组比较,Olig2 shRNA3干扰组Olig2的蛋白表达明显降低(P <0. 05);干扰组可明显降低MK-801处理后的NSCs中Olig2蛋白表达(P <0. 05)。结论:成功构建RNA干扰Olig2基因的海马NSCs体系,为进一步研究Olig2对精神分裂症后海马神经发生的调控机制奠定了基础。 展开更多

关键词 海马神经干细胞 RNA干扰 少突胶质细胞转录因子2(Olig2) 小鼠

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小鼠下丘脑和海马组织神经干细胞的蛋白质组学分析

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作者 贾雪冰 孙孟菲 +7 位作者 姚莉 刘畅 董茵 黄日祥 柏亮 唐晨 申延琴 崔春 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1143-1149,I0002,I0003,共9页

目的:采用蛋白质组学法探讨C57BL/6J小鼠下丘脑和海马组织中神经干细胞(NSCs)中蛋白质表达差异,阐明不同来源(区域)NSCs中蛋白表达谱不同的原因,为下丘脑和海马组织NSCs的基础研究和移植治疗提供参考。方法:提取出生24 h内C57BL/6J小鼠... 目的:采用蛋白质组学法探讨C57BL/6J小鼠下丘脑和海马组织中神经干细胞(NSCs)中蛋白质表达差异,阐明不同来源(区域)NSCs中蛋白表达谱不同的原因,为下丘脑和海马组织NSCs的基础研究和移植治疗提供参考。方法:提取出生24 h内C57BL/6J小鼠原代下丘脑和海马组织NSCs,经传代进行扩增和纯化。观察细胞形态表现,免疫荧光法检测NSCs中Nestin和Sox2的表达,采用串联质谱标签(TMT)蛋白质组学法分析下丘脑和海马组织NSCs中的差异表达蛋白质,对得到的差异蛋白质进行生物信息学分析。结果:形态表现检测,下丘脑和海马组织NSCs均表现出不透明和折光率高的典型神经球形态。免疫荧光检测,下丘脑和海马组织NSCs中Nestin和Sox2阳性表达率随培养代数增加而升高,在第4代达到98%以上,但下丘脑和海马组织NSCs比较差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白质组学分析,与海马组织比较,下丘脑组织NSCs中有6种蛋白表达水平明显升高(P<0.05和P<0.01),4种蛋白表达水平明显降低(P<0.05和P<0.01)。基因本体(GO)分析,差异蛋白质主要参与包括突触传递中多巴胺摄取的负调控等8种生物过程、rRNA甲基转移酶活性等6类分子功能和高尔基体膜的组成部分等6种细胞组分。基因组百科全书(KEGG)通路分析,差异蛋白质主要参与包括囊泡运输中的SNARE相互作用等7条信号通路。结论:体外培养的原代C57BL/6J小鼠下丘脑和海马组织NSCs的形态表现和NSCs标志物表达无差异。某些特定蛋白质表达有差异,差异表达蛋白质主要在突触传递、囊泡转运和代谢等方面发挥作用,在不同区域NSCs的定分化倾向和功能特异性方面可能起重要作用。 展开更多

关键词 下丘脑神经干细胞 海马神经干细胞 蛋白质组学 差异表达蛋白质

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