多形汉逊酵母作为细胞工厂的应用研究进展 被引量：5

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作者 钱卫东 施春阳 王婷 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第4期55-59,共5页

多形汉逊酵母以其独特的生物学和遗传学特征已成为一种重要的细胞工厂,被广泛运用于生产药物蛋白、酶制剂、生物能源及药用植物有效成分等。作者概述了多形汉逊酵母的一些基本特性,阐述了其作为微生物细胞工厂的应用研究进展,并对其未... 多形汉逊酵母以其独特的生物学和遗传学特征已成为一种重要的细胞工厂,被广泛运用于生产药物蛋白、酶制剂、生物能源及药用植物有效成分等。作者概述了多形汉逊酵母的一些基本特性,阐述了其作为微生物细胞工厂的应用研究进展,并对其未来工作的前景进行了展望。 展开更多

关键词 多形汉逊酵母 生物学特性 细胞工厂

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利用组合策略提高汉逊酵母发酵生产D-阿拉伯糖醇 被引量：2

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作者 钱卫东 宁肖肖 +4 位作者 赵德志 王兰 李梦媛 陈超 常凯 《安徽农业科学》 CAS 2014年第23期7726-7728,共3页

[目的]提高多形汉逊酵母发酵生产D-阿拉伯糖醇的产量。[方法]通过正交试验确定了用多形汉逊酵母DL-1发酵生产D-阿拉伯糖醇发酵培养基的最佳组分,进而结合培养温度对发酵过程的影响,获得运用变温策略提高多形汉逊酵母生产D-阿拉伯糖醇的... [目的]提高多形汉逊酵母发酵生产D-阿拉伯糖醇的产量。[方法]通过正交试验确定了用多形汉逊酵母DL-1发酵生产D-阿拉伯糖醇发酵培养基的最佳组分,进而结合培养温度对发酵过程的影响,获得运用变温策略提高多形汉逊酵母生产D-阿拉伯糖醇的方法。[结果]最优发酵培养基组分为:葡萄糖200 g/L,蛋白胨20 g/L,酵母浸粉12 g/L,Triton X-100 10 g/L,硫酸铵3.0 g/L,七水硫酸镁2.5g/L,磷酸二氢钾2.5 g/L;多形汉逊酵母DL-1的最适生长温度和D-阿拉伯糖醇最适合成温度分别为37℃和34℃;变温调控发酵方法为:将发酵培养基在37℃培养24 h后,升温到48℃继续培养24 h,再降温至34℃继续培养96 h得到发酵液。采用该方法发酵结束后D-阿拉伯糖醇产量为114.92 g/L,比恒温发酵(37℃、48℃、34℃)分别提高了30.25%、208.66%、20.93%。[结论]该方法可以提高多形汉逊酵母发酵生产D-阿拉伯糖醇。 展开更多

关键词 D-阿拉伯糖醇 多形汉逊酵母DL-1 正交试验 变温调控

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多形汉逊酵母破壁抽提的研究 被引量：1

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作者 谈曙明 张磊 +2 位作者 缪鑫昕 訾小利 胡南 《中国酿造》 CAS 2012年第1期23-25,共3页

实验以多形汉逊酵母为原料,采用自溶结合外加酶法制备酵母水解物。研究了自溶时间、氯化钠浓度、初始pH值、温度、木瓜蛋白酶添加量等因素对多形汉逊酵母水解的影响。结果表明:15%酵母悬浮液(以酵母干重计)在温度50℃,pH 5.5,氯化钠浓度... 实验以多形汉逊酵母为原料,采用自溶结合外加酶法制备酵母水解物。研究了自溶时间、氯化钠浓度、初始pH值、温度、木瓜蛋白酶添加量等因素对多形汉逊酵母水解的影响。结果表明:15%酵母悬浮液(以酵母干重计)在温度50℃,pH 5.5,氯化钠浓度为3%,木瓜蛋白酶添加量0.02%(w/w)的条件下水解32h,上清液中氨基酸态氮的含量最高,达到0.64g/100mL,其固形物得率为56.32%。 展开更多

关键词 单细胞蛋白 多形汉逊酵母 固形物得率 氨基酸态氮

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谷胱甘肽高产酵母融合子的制备及发酵工艺 被引量：4

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作者 钱卫东 吴启航 +2 位作者 刘昱辰 王婷 毛培宏 《陕西科技大学学报（自然科学版）》 2017年第2期126-130,共5页

为构建谷胱甘肽(glutathione,GSH)高产酵母菌株,本实验利用原生质体融合方法制备多形汉逊酵母和粟酒裂殖酵母融合子,结合自主设计的耐高温、钼酸钠和乙醇耐受性培养基方法高通量筛选酵母融合子,进而利用DTNB法定量测定GSH高产酵母融合子... 为构建谷胱甘肽(glutathione,GSH)高产酵母菌株,本实验利用原生质体融合方法制备多形汉逊酵母和粟酒裂殖酵母融合子,结合自主设计的耐高温、钼酸钠和乙醇耐受性培养基方法高通量筛选酵母融合子,进而利用DTNB法定量测定GSH高产酵母融合子,并分析GSH高产酵母融合子的遗传稳定性,最后对其发酵工艺进行研究.结果表明,本实验利用原生质融合方法成功构建一株GSH产量高、遗传稳定的GSH高产酵母融合子,为低成本、高效生产GSH提供了新途径. 展开更多

关键词 多形汉逊酵母菌 粟酒裂殖酵母菌 原生质体融合 融合子

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荧光定量PCR法检测重组汉逊酵母中HBsAg基因的拷贝数 被引量：2

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作者 邵强 冯真真 +2 位作者 张勇朝 潘若文 徐玉国 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期178-180,193,共4页

重组汉逊酵母基因中外源基因拷贝数是影响目的基因表达水平和检测传代稳定性的重要因素,因此外源基因拷贝数的检测成为研究和分析重组基因的重要内容。利用快速、灵敏的荧光定量PCR法检测外源基因HBsAg拷贝数,以Mox基因为内源参照基因,... 重组汉逊酵母基因中外源基因拷贝数是影响目的基因表达水平和检测传代稳定性的重要因素,因此外源基因拷贝数的检测成为研究和分析重组基因的重要内容。利用快速、灵敏的荧光定量PCR法检测外源基因HBsAg拷贝数,以Mox基因为内源参照基因,通过梯度稀释法,建立了Mox基因和HBsAg基因的循环数(Ct值)与起始模板数的相关标准曲线,其相关系数分别达到0.9996和0.9982。通过比较目的基因HBsAg和内源参照基因Mox在同一荧光强度下出峰的循环数,获得了目的基因HBsAg在重组汉逊酵母中的拷贝数为39。发酵前后HBsAg基因在重组汉逊酵母中稳定存在,发酵前后拷贝数相差均小于6.2%。本方法快速、简便、准确,可以满足基因拷贝数检测的需要。 展开更多

关键词 荧光定量PCR HBsAg基因 Mox基因 重组汉逊酵母 拷贝数

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双抗体夹心ELISA法测定残余汉逊酵母菌体蛋白含量的研究 被引量：2

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作者 邵强 王俊华 《四川动物》 CSCD 北大核心 2008年第5期945-946,共2页

目的通过免疫白兔和小鼠获得抗汉逊酵母菌体全蛋白血清,建立测定残余宿主汉逊酵母菌体蛋白含量的双抗体夹心ELISA的方法。方法由免疫动物得到抗血清,分别作为包被抗体和检测抗体,通过方阵滴定实验确定双抗体夹心ELISA最佳条件。结果获... 目的通过免疫白兔和小鼠获得抗汉逊酵母菌体全蛋白血清,建立测定残余宿主汉逊酵母菌体蛋白含量的双抗体夹心ELISA的方法。方法由免疫动物得到抗血清,分别作为包被抗体和检测抗体,通过方阵滴定实验确定双抗体夹心ELISA最佳条件。结果获得的兔、小鼠抗血清经间接ELISA检测效价均达到1:10000。作为包被抗体小鼠抗血清的最佳包被浓度为10μg/ml,在30～500ng/ml范围内测定呈直线关系,相关系数为0.9985。可用于测定基因工程产品中汉逊酵母菌体蛋白的残余量。 展开更多

关键词 酶联免疫吸附测定 菌体蛋白 汉逊酵母

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一步重组法构建产龙胆苦苷酵母重组菌的研究 被引量：2

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作者 钱卫东 赵德志 +5 位作者 付云芳 陈雪峰 毛培宏 周颖欣 常凯 谢海艳 《陕西科技大学学报（自然科学版）》 2014年第5期123-128,共6页

利用低能N+注入介导秦艽基因组DNA转化多形汉逊酵母技术,结合颜色反应、薄层层析和高效液相色谱等方法筛选重组菌株,获得1株遗传稳定的能生物合成龙胆苦苷的重组酵母菌,被命名为DL-49.经液体培养90h后,利用HPLC分析其发酵液中的龙胆苦苷... 利用低能N+注入介导秦艽基因组DNA转化多形汉逊酵母技术,结合颜色反应、薄层层析和高效液相色谱等方法筛选重组菌株,获得1株遗传稳定的能生物合成龙胆苦苷的重组酵母菌,被命名为DL-49.经液体培养90h后,利用HPLC分析其发酵液中的龙胆苦苷,其产量为2.22mg/L.将重组菌株传代培养8代后,分析显示重组酵母菌生物合成龙胆苦苷的产量基本稳定.试验表明,采用低能离子注入介导秦艽基因组转化酵母技术,可以在龙胆苦苷生物合成相关基因信息未知的情况下,直接获得能生物合成龙胆苦苷的酵母重组菌. 展开更多

关键词 低能离子注入 多形汉逊酵母 秦艽 龙胆苦苷

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绵羊PrP前体蛋白基因真核表达载体的构建及汉逊酵母中的初步表达

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作者 兰邹然 王志亮 +2 位作者 赵永刚 李金明 吴晓东 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第S1期271-275,281,共6页

根据已知的绵羊PRNP基因序列设计引物,扩增出完整的PrP前体蛋白基因,将获得的基因克隆到pGEM-T载体中,得到插入PrP前体蛋白基因的pGEM-T-OPrP质粒,经PCR、酶切、测序鉴定后,用EcoRI和NotI从pGEM-T-OPrP上切下目的片段后,连接到汉逊酵母... 根据已知的绵羊PRNP基因序列设计引物,扩增出完整的PrP前体蛋白基因,将获得的基因克隆到pGEM-T载体中,得到插入PrP前体蛋白基因的pGEM-T-OPrP质粒,经PCR、酶切、测序鉴定后,用EcoRI和NotI从pGEM-T-OPrP上切下目的片段后,连接到汉逊酵母表达载体pFMDHZ-α-A中,通过PCR、酶切、插入鉴定保证正确插入后,经电转化将重组质粒pFMDHZ-α-A-OPrP转入多形汉逊酵母中,随后通过甲醇诱导进行表达。本研究表达的绵羊PrP前体蛋白,为绵羊痒的检测及诊断、PrP的结构与功能研究奠定基础。 展开更多

关键词 PRP 前体蛋白 多形汉逊酵母 表达

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马动脉炎病毒主要结构蛋白基因酵母工程菌的构建及鉴定

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作者 杜建 王志亮 +2 位作者 宋厚辉 金宁一 张念祖 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2005年第11期3-5,共3页

目的:构建马动脉炎病毒读码框ORF5、ORF6、ORF7主要结构蛋白基因全长片段的克隆载体及汉逊酵母穿梭载体,并获得重组工程菌,为下一步酵母表达重组目的蛋白奠定基础。方法:应用RT-PCR方法从病毒核酸中扩增ORF5、ORF6和ORF7读码框的全长基... 目的:构建马动脉炎病毒读码框ORF5、ORF6、ORF7主要结构蛋白基因全长片段的克隆载体及汉逊酵母穿梭载体,并获得重组工程菌,为下一步酵母表达重组目的蛋白奠定基础。方法:应用RT-PCR方法从病毒核酸中扩增ORF5、ORF6和ORF7读码框的全长基因,产物回收后分别与PUC18和PMD18-T载体连接并转化DH5αE.coli,经氨苄筛选及测序,建立克隆载体PUC18-GL、PUC18-M和PMD18T-ORF7;以构建的克隆载体为模板,用重新设计的引物构建了汉逊酵母分泌性穿梭载体,然后电转化至汉逊酵母基因组中。结果:所有重组质粒经PCR和酶切鉴定均出现目的片段,测序结果证实正确,目的基因ORF5、ORF6与酵母重组成功。结论:构建了含有目的基因ORF5、ORF6的重组酵母工程菌,为实现分泌表达目的蛋白,进而研制病毒亚单位疫苗及诊断试剂提供了物质基础。 展开更多

关键词 马动脉炎病毒 结构蛋白基因 克隆 汉逊酵母菌

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亚硒酸钠促进多形汉逊酵母DL-1合成谷胱甘肽的转录组学分析 被引量：3

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作者 王婷 刘婵婵 +2 位作者 任娟 荆蓉蓉 钱卫东 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第6期193-199,共7页

为解析Na_(2)SeO_(3)诱导多形汉逊酵母DL-1(Hansenula polymorpha DL-1,HP-DL-1)生物合成谷胱甘肽(glutathione,GSH)的分子机制。通过DTNB法以及Illumina测序平台对比分析不同浓度Na_(2)SeO_(3)对HP-DL-1合成GSH产量的影响及Na_(2)SeO_... 为解析Na_(2)SeO_(3)诱导多形汉逊酵母DL-1(Hansenula polymorpha DL-1,HP-DL-1)生物合成谷胱甘肽(glutathione,GSH)的分子机制。通过DTNB法以及Illumina测序平台对比分析不同浓度Na_(2)SeO_(3)对HP-DL-1合成GSH产量的影响及Na_(2)SeO_(3)诱导下GSH高产菌株与出发菌株转录组差异。结果表明:以60μmol/L Na_(2)SeO_(3)诱导HPDL-1发酵48 h,酵母总GSH产量达(530.22±9.6)mg/L;与对照组相比,Na_(2)SeO_(3)诱导组共有1254个显著性差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),其中630个DEGs表达上调,624个DEGs表达下调;依据基因本体(Gene Ontology,GO)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集,这些差异基因主要集中在细胞周期、有丝分裂、氨基酸生物合成、糖酵解、核糖体组分、甲烷、脂肪、核酸、GSH等多条代谢通路。本研究为分子改造构建高产GSH的酵母工程菌株提供一定参考。 展开更多

关键词 多形汉逊酵母 谷胱甘肽 亚硒酸钠 转录组 差异表达基因

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果糖对多形汉逊酵母硒代谢及转录组的影响

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作者 王婷 刘婵婵 +1 位作者 毛跟年 钱卫东 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期29-34,共6页

富硒酵母具有机硒含量高、生理活性好、安全无毒等优点,是硒补充剂的重要来源之一。该研究分别以果糖和葡萄糖为碳源,探讨果糖对多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)硒代谢及其基因表达的影响。通过HPLC-ICP-MS方法和二代测序分析酵母... 富硒酵母具有机硒含量高、生理活性好、安全无毒等优点,是硒补充剂的重要来源之一。该研究分别以果糖和葡萄糖为碳源,探讨果糖对多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)硒代谢及其基因表达的影响。通过HPLC-ICP-MS方法和二代测序分析酵母中硒代蛋氨酸(selenomethionine, Se-Met)和转录组变化。与葡萄糖发酵组相比,果糖发酵组酵母生长减缓,但其胞内Se-Met含量呈增加趋势;2个发酵组之间的显著性差异表达基因(differential expressed genes, DEGs)数量为221个;GO(Gene Ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集结果表明,这些DEGs主要富集在果糖和甘露糖代谢、糖酵解、磷酸戊糖通路、三羧酸循环等碳代谢,以及谷胱甘肽、半胱氨酸、蛋氨酸、硒复合物等多条代谢通路中。该研究为进一步分析果糖对多形汉逊酵母菌中硒代谢调控机制及富硒酵母发酵工艺优化提供参考。 展开更多

关键词 多形汉逊酵母 果糖 硒代蛋氨酸 转录组 差异表达基因

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