氟康唑对豚鼠心室肌细胞I_K和在HEK-293细胞中表达的HERG钾通道的抑制作用 被引量：4

1

作者 韩圣娜 陈秋 +4 位作者 张雨 角灿武 毛讯 付润芳 张莉蓉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期861-866,共6页

目的研究氟康唑对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流(IK)和在HEK-293细胞中表达的HERG钾通道的抑制作用。方法应用酶解法消化豚鼠单个心室肌细胞,观察氟康唑对IK的影响;采用磷酸钙沉淀瞬时转染的方法将HERG基因表达于HEK-293细胞上,观察氟... 目的研究氟康唑对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流(IK)和在HEK-293细胞中表达的HERG钾通道的抑制作用。方法应用酶解法消化豚鼠单个心室肌细胞,观察氟康唑对IK的影响;采用磷酸钙沉淀瞬时转染的方法将HERG基因表达于HEK-293细胞上,观察氟康唑对野生型HERG钾通道电流、激活和失活曲线的影响,以及氟康唑对Y652A和F656C突变型HERG钾通道的作用;IK和HERG电流的记录均采用全细胞膜片钳技术。结果氟康唑(0.01、0.1、1、3、10、30、100、300和1 000μmol.L-1)浓度依赖性地抑制IK和HERG钾电流,其IC50值分别为(68.1±21.6)μmol.L-1和(48.2±9.4)μmol.L-1,对HERG钾通道的电压依赖性激活和失活曲线无影响;与野生型(WT)比较,Y652A和F656C突变型可减弱氟康唑对HERG通道的阻断作用。结论氟康唑能阻断IK和HERG通道,Y652和F656是氟康唑与HERG通道结合的关键位点。 展开更多

关键词 氟康唑 延迟整流钾电流 HERG钾通道 膜片钳技术 hek-293细胞 心室肌细胞

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稳定表达GlyRα1的HEK293细胞系的建立 被引量：5

2

作者 蒋玲琳 刘丽 +3 位作者 朱含章 杨青 范乐明 陈琪 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期647-650,共4页

目的:建立稳定表达甘氨酸受体α1亚基(GlyRα1)真核表达载体的人胚肾细胞(HEK293)细胞系。方法:构建pcDNA3.1-GlyRα1真核表达载体,应用脂质体介导的转染技术将该质粒导入HEK293细胞,再用G418筛选表达稳定的细胞系。真核细胞中GlyRα1... 目的:建立稳定表达甘氨酸受体α1亚基(GlyRα1)真核表达载体的人胚肾细胞(HEK293)细胞系。方法:构建pcDNA3.1-GlyRα1真核表达载体,应用脂质体介导的转染技术将该质粒导入HEK293细胞,再用G418筛选表达稳定的细胞系。真核细胞中GlyRα1的表达分别用RT-PCR与Western blot方法检测。结果:在7株转染并经G418反复筛选的HEK293细胞系中,有4株细胞系明显表达GlyRα1的mRNA及其蛋白质,其余3株细胞表达较弱或者没有表达。结论:用pcDNA3.1-GlyRα1转染的HEK293细胞经G418筛选,可成功建立GlyRα1稳定表达系。 展开更多

关键词 甘氨酸受体 基因转染 hek293细胞 稳定表达

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人趋化因子受体CCR6在HEK293细胞内的稳定表达及其功能分析 被引量：1

3

作者 魏巍 高岚 +2 位作者 张菲菲 崔礼鑫 谢欣 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期33-35,39,共4页

目的:构建稳定表达人趋化因子受体6(CCR6)的HEK293细胞株。方法:将CCR6基因和Gα16质粒共转到HEK293细胞中,并挑取稳定表达CCR6基因的HEK293细胞克隆。采用体外趋化实验、钙流实验、RT-PCR、Western blot及免疫荧光染色法,检测CCR6在HEK... 目的:构建稳定表达人趋化因子受体6(CCR6)的HEK293细胞株。方法:将CCR6基因和Gα16质粒共转到HEK293细胞中,并挑取稳定表达CCR6基因的HEK293细胞克隆。采用体外趋化实验、钙流实验、RT-PCR、Western blot及免疫荧光染色法,检测CCR6在HEK293细胞表面的表达。结果:经上述实验证实,CCR6基因和Gα16质粒共转染的HEK293细胞上,可稳定表达CCR6,且具有生物学活性。结论:成功地在HEK293细胞表面稳定表达具有生物学活性的CCR6,为研究CCR6的生物学功能及筛选CCR6的拮抗剂奠定了基础。 展开更多

关键词 人趋化因子受体6 hek293细胞 表达

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HEK-293细胞α_(1B)-肾上腺素受体引起的Ca^(2+)依赖性K^+电流和Ca^(2+)内流(英文) 被引量：1

4

作者 关永源 陶亮 +3 位作者 贺华 韩启德 张幼怡 孙家钧 《中山医科大学学报》 CSCD 1999年第4期248-251,共4页

目的:研究HEK293细胞上α1B肾上腺素受体亚型引起向外K+电流和Ca2+内流的特性。方法:细胞贴附式单通道记录K+通道和Fura2荧光测定胞浆游离Ca2+浓度。结果:肾上腺素或苯肾上腺素可引发一电导为160pS的外向K+电流。该电流可被50μmol·... 目的:研究HEK293细胞上α1B肾上腺素受体亚型引起向外K+电流和Ca2+内流的特性。方法:细胞贴附式单通道记录K+通道和Fura2荧光测定胞浆游离Ca2+浓度。结果:肾上腺素或苯肾上腺素可引发一电导为160pS的外向K+电流。该电流可被50μmol·L-1氯乙醛可乐定(CEC),5mmol·L-1依他酸(EGTA)或2mmol·L-1四乙铵(TEA)抑制。硝苯吡啶(nifedipine)不改变该电流及α1B亚型引起的Ca2+内流;后者可被1mmol·L-1LaCl3抑制。结论:激活转染在HEK293细胞上的α1B受体亚型可引起通过硝苯吡啶不敏感Ca2+通道的Ca2+内流。 展开更多

关键词 钙通道 钾通道 受体 肾上腺素能Α1 hek-293细胞

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依托咪酯对HEK-293细胞中异源表达的hERG钾通道电流的抑制作用

5

作者 韩圣娜 刘备 +4 位作者 孔岚 李靓 冯馨 张卫 张莉蓉 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2016年第2期204-208,共5页

目的:观察依托咪酯对HEK-293细胞中异源表达的hERG钾通道电流的抑制作用及其机制。方法:采用脂质体瞬时转染的方法将野生型hERG(WT-hERG)、突变型Y652A-hERG和F656C-hERG分别转染人胚胎肾细胞HEK-293,应用全细胞膜片钳技术记录依托咪酯... 目的:观察依托咪酯对HEK-293细胞中异源表达的hERG钾通道电流的抑制作用及其机制。方法:采用脂质体瞬时转染的方法将野生型hERG(WT-hERG)、突变型Y652A-hERG和F656C-hERG分别转染人胚胎肾细胞HEK-293,应用全细胞膜片钳技术记录依托咪酯对转染后HEK-293细胞表达的hERG钾通道电流的抑制作用以及对激活曲线和失活曲线的影响。结果:依托咪酯可浓度依赖性地抑制WT-hERG转染的HEK-293细胞钾通道电流,其半数最大抑制浓度为(6.41±2.43)μmol/L,对激活曲线和失活曲线无明显影响。与WT-hERG转染的HEK-293细胞相比,依托咪酯对突变体Y652A-hERG及F656C-hERG转染的HEK-293细胞内钾通道电流的抑制作用减弱。结论:F656C可能是依托咪酯抑制hERG钾通道的重要靶点。 展开更多

关键词 依托咪酯 HERG钾通道 全细胞膜片钳 hek-293细胞

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玉屏风水煎剂及其组分对大鼠肾脏组织及HEK-293细胞OAT1/3表达的影响 被引量：2

6

作者 闻泽强 李大朗 宋珏 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1457-1462,共6页

目的探讨玉屏风水煎剂及其组分对大鼠肾脏组织及HEK-293细胞OAT1/3表达的影响。方法采用MTT法检测玉屏风及其组分水煎剂对HEK-293细胞存活率的影响;采用Western blot法和RT-PCR法检测各组水煎剂对大鼠肾脏及HEK-293细胞中OAT1/3蛋白及m... 目的探讨玉屏风水煎剂及其组分对大鼠肾脏组织及HEK-293细胞OAT1/3表达的影响。方法采用MTT法检测玉屏风及其组分水煎剂对HEK-293细胞存活率的影响;采用Western blot法和RT-PCR法检测各组水煎剂对大鼠肾脏及HEK-293细胞中OAT1/3蛋白及mRNA表达的影响。结果玉屏风、白术、防风水煎剂下调大鼠肾脏和HEK-293细胞中OAT1蛋白及mRNA表达(P<0.05,P<0.01),玉屏风及防风水煎剂下调大鼠肾脏及HEK-293细胞中OAT3蛋白及mRNA表达(P<0.05,P<0.01),白术水煎剂上调大鼠肾脏及HEK-293细胞OAT3蛋白及mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。黄芪水煎剂对大鼠肾脏及HEK-293细胞中OAT1/3蛋白表达无抑制作用。结论玉屏风水煎剂对OAT1/3有明显的抑制作用,玉屏风的这种抑制作用可能跟其主要成分白术、防风有关。 展开更多

关键词 玉屏风水煎剂 大鼠肾脏 hek-293 OAT1/3

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Lanthanides-Induced Cellular Signal Transduction: Implications in Pathogenesis of Fibrosis

7

作者 HE Xia GUO Yuting +2 位作者 DONG Faqing WANG Kui YU Siwang 《矿物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第S1期34-34,共1页

With the extensive mining and application of lanthanides in China and worldwide, the potential impact of lanthanides on human health is gaining increasing attentions. The recent etiological association of gadolinium-b... With the extensive mining and application of lanthanides in China and worldwide, the potential impact of lanthanides on human health is gaining increasing attentions. The recent etiological association of gadolinium-based contrast agents with nephrogenic systemic fibrosis (NSF) evoked widespread concerns regarding the safety issue of lanthanides. The elucidation of the cellular biological effects of and the signalling cascade induced lanthanides is essential for proper evaluation of their health impacts. 展开更多

关键词 GADOLINIUM LANTHANUM nephrogenic SYSTEMIC FIBROSIS hek 293 cell cycle EGFR PI3K/Akt MAPK TGFΒ-1 IntegrinαVβ1

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重组腺病毒Ad-p16的扩增及病毒滴度检测 被引量：12

8

作者 周文泉 闵志廉 +1 位作者 李莉 张玲珍 《医学研究生学报》 CAS 2001年第1期44-46,共3页

目的 :探讨高效扩增腺病毒载体的方法。　方法 :用人胚胎肾 2 93细胞株扩增重组腺病毒 ,并测定病毒滴度。　结果 :扩增得到腺病毒的滴度约为 5× 10 8PFU/ ml。　结论 :用人胚胎肾 2 93细胞株扩增重组腺病毒 ,在不进行任何浓缩时可... 目的 :探讨高效扩增腺病毒载体的方法。　方法 :用人胚胎肾 2 93细胞株扩增重组腺病毒 ,并测定病毒滴度。　结果 :扩增得到腺病毒的滴度约为 5× 10 8PFU/ ml。　结论 :用人胚胎肾 2 93细胞株扩增重组腺病毒 ,在不进行任何浓缩时可达较高病毒滴度 ,为腺病毒介导的基因转移方法提供了理论基础。 展开更多

关键词 人胚胎肾293细胞 腺病毒 检测 扩增

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埃他卡林对K_(ATP)通道亚型选择性作用的研究 被引量：11

9

作者 陈玉萍 崔文玉 汪海 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期278-284,共7页

目的建立特异性表达以K ir6.x和SUR亚单位组成的不同KATP通道亚型的细胞模型,研究KATP通道开放剂埃他卡林对KATP通道亚型的选择性作用特点。方法利用脂质体转染的方法将编码KATP通道亚单位K ir6.x-pcDNA3、SUR-pcDNA3基因和编码绿色荧... 目的建立特异性表达以K ir6.x和SUR亚单位组成的不同KATP通道亚型的细胞模型,研究KATP通道开放剂埃他卡林对KATP通道亚型的选择性作用特点。方法利用脂质体转染的方法将编码KATP通道亚单位K ir6.x-pcDNA3、SUR-pcDNA3基因和编码绿色荧光蛋白pEGFP-N1基因共同转染到HEK-293细胞中,免疫组化法鉴定细胞上K ir6.x和SUR蛋白的表达,并采用膜片钳全细胞记录技术,以KATP通道特异性激动剂吡那地尔和二氮嗪为对照,分析埃他卡林对特定刺激条件下对K ir6.x和SUR共同转染的细胞上诱发的钾电流的影响,并观察KATP通道特异性拮抗剂格列苯脲的阻断作用。结果在共同转入KATP通道两亚单位基因的HEK-293细胞上,有K ir6.x和SUR蛋白的表达。在共同表达K ir6.1/SUR2B的细胞上,埃他卡林(100μmol.L-1)、吡那地尔(100μmol.L-1)及二氮嗪(200μmol.L-1)均具有增强诱发电流的效应,给药前后-100 mV时电流值由(-88.0±30.8)pA分别增至(-2042.6±127.3)pA,(-1431.9±142.4)pA及(-1104.7±228.9)pA,三者的作用均能被格列苯脲所阻断。相同条件下,在共同表达K ir6.2/SUR2A的细胞上,埃他卡林和吡那地尔能增强诱发电流,此作用对格列苯脲敏感;而二氮嗪对该电流无影响。相反,在共同表达K ir6.2/SUR1的细胞上,二氮嗪能增强诱发电流,此作用对格列苯脲敏感;而埃他卡林和吡那地尔对该电流无影响。结论不同结构钾通道开放剂对不同亚型KATP通道作用不同,埃他卡林与吡那地尔作用相似,能选择性作用于K ir6.1/SUR2B和K ir6.2/SUR2A型KATP通道,对K ir6.2/SUR1型无影响。 展开更多

关键词 KATP通道 hek-293细胞 转染 膜片钳技术

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埃他卡林新衍生物激活ATP敏感性钾通道的亚型选择性 被引量：4

10

作者 陈玉萍 潘志远 +1 位作者 崔文玉 汪海 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1427-1430,共4页

目的研究埃他卡林新衍生物对不同亚型KATP通道的选择性作用。方法在特异性表达Kir6.2/SUR1、Kir6.2/SUR2A、Kir6.1/SUR2B3种不同亚型KATP通道的HEK-293细胞模型上,分别给予0.1、1.0、10、100×10-6mol.L-1的埃他卡林新衍生物,研究... 目的研究埃他卡林新衍生物对不同亚型KATP通道的选择性作用。方法在特异性表达Kir6.2/SUR1、Kir6.2/SUR2A、Kir6.1/SUR2B3种不同亚型KATP通道的HEK-293细胞模型上,分别给予0.1、1.0、10、100×10-6mol.L-1的埃他卡林新衍生物,研究其作用前后DiBAC4(3)细胞荧光强度的变化,评价其对克隆表达的不同亚型KATP通道的选择性作用。结果7个埃他卡林新衍生物可激活KATP通道,其中衍生物(3)、(7)、(8)、(9)、(12)和(14)对3个亚型的KATP通道均具有激活作用,衍生物(7)对Kir6.2/SUR2A亚型的激活作用最强;衍生物(6)纳他卡林(natakalim)仅激活Kir6.1/SUR2B亚型,对Kir6.2/SUR2A和Kir6.2/SUR1亚型均无激活作用。结论纳他卡林为Kir6.1/SUR2B亚型高选择性开放剂。 展开更多

关键词 KATP通道 hek-293细胞 纳他卡林 埃他卡林衍生物

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缬草提取物8-羟基松脂醇苷对Kv1.5钾通道电流的影响 被引量：4

11

作者 方颖 段雪云 +2 位作者 王宏飞 范恒 刘焱文 《医药导报》 CAS 2011年第10期1259-1262,共4页

目的探讨缬草提取物8-羟基松脂醇苷对Kv1.5钾通道电流的影响。方法以转基因Kv1.5HEK293细胞为受试对象,采用膜片钳技术观察10,30μmol.L-18-羟基松脂醇苷对转基因Kv1.5HEK293细胞电流的影响。结果 8-羟基松脂醇苷浓度依赖性减少Kv1.5HEK... 目的探讨缬草提取物8-羟基松脂醇苷对Kv1.5钾通道电流的影响。方法以转基因Kv1.5HEK293细胞为受试对象,采用膜片钳技术观察10,30μmol.L-18-羟基松脂醇苷对转基因Kv1.5HEK293细胞电流的影响。结果 8-羟基松脂醇苷浓度依赖性减少Kv1.5HEK293细胞电流,电流值从(148.3±13.0)PA/PF分别降至(109.4±4.4)PA/PF和(78.6±11.3)PA/PF,抑制率分别为28.5%和37.1%。结论 8-羟基松脂醇苷对转基因Kv1.5 HEK293细胞电流有抑制作用,且呈浓度依赖性,可以部分解释缬草抗心律失常作用机制。 展开更多

关键词 8-羟基松脂醇苷 缬草 Kv1.5hek293细胞 Kv1.5钾通道

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葡萄籽原花青素对顺铂诱导人胚肾细胞凋亡的拮抗作用 被引量：4

12

作者 郭卓雨 高丽萍 李贞 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第1期234-238,共5页

目的:探讨葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidin,GSPE)对顺铂(cisdiamminedichloroplatinum,CDDP)诱导人胚肾细胞HEK293凋亡及相关凋亡基因的影响,并探讨可能的机制。方法:体外培养正常HEK293细胞,噻唑蓝法测定GSPE、CDD P分别对... 目的:探讨葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidin,GSPE)对顺铂(cisdiamminedichloroplatinum,CDDP)诱导人胚肾细胞HEK293凋亡及相关凋亡基因的影响,并探讨可能的机制。方法:体外培养正常HEK293细胞,噻唑蓝法测定GSPE、CDD P分别对HEK293细胞生长的影响以及GSPE对CDDP诱导HEK293细胞毒性的保护作用,流式细胞仪测定GSPE对CDDP所致HEK293细胞凋亡率的变化,Western blotting测定GSPE对CDDP所致HEK293细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。结果:GSPE对CDDP所致HEK293细胞毒性具有拮抗作用,可减轻CDDP所致HEK293细胞凋亡,减弱Bax表达、增强Bcl-2表达。结论:GSPE对CDDP所致HEK293细胞凋亡具有拮抗作用,其机制可能与GSPE降低促凋亡基因Bax,升高抗凋亡基因Bcl-2的表达有关。 展开更多

关键词 葡萄籽原花青素 顺铂 人胚肾细胞hek293 细胞凋亡

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醋酸铅对两种不同细胞遗传毒性的初步研究 被引量：2

13

作者 陈雪利 吴珏 杨超 《生物学杂志》 CAS CSCD 2015年第4期35-37,42,共4页

为探究醋酸铅对肝、肾细胞遗传毒性的影响,采用不同浓度的醋酸铅处理体外培养的人肝细胞WRL-68和人胚肾细胞HEK-293,分析其微核和核芽指标并测定了HEK-293细胞的活力。发现随醋酸铅浓度的增加,WRL-68细胞的微核率呈逐渐上升的趋势,其核... 为探究醋酸铅对肝、肾细胞遗传毒性的影响,采用不同浓度的醋酸铅处理体外培养的人肝细胞WRL-68和人胚肾细胞HEK-293,分析其微核和核芽指标并测定了HEK-293细胞的活力。发现随醋酸铅浓度的增加,WRL-68细胞的微核率呈逐渐上升的趋势,其核芽率则先升后降并在0.5μmol/L时达到最大值;而HEK-293细胞的微核率、核芽率2项指标都呈先上升后下降的趋势,并在浓度为125μmol/L时,达到峰值。采用MTT法研究HEK-293细胞活力的实验中发现,随醋酸铅浓度的增加及处理时间的延长,细胞活力呈现明显的剂量效应和时间效应。结果表明,醋酸铅对肝细胞及肾细胞具有遗传毒性可能是通过微核及核芽导致细胞的遗传物质丢失这一途径引起的。 展开更多

关键词 醋酸铅 WRL-68细胞 hek-293细胞 遗传毒性

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含hITF启动子的荧光素酶报告质粒的构建及活性检测 被引量：1

14

作者 王臻 王林 +3 位作者 万千雪 金星 梁光萍 彭曦 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1024-1027,共4页

目的构建含有人肠三叶因子(intestinal trefoil factor,hITF)启动子的荧光素酶表达载体,并检测启动子活性。方法采用PCR技术从LS-174T细胞基因组DNA中扩增出长约2.5kb的含hITF基因启动子片段(-2331/+53),而后在此基础上构建了10个不同... 目的构建含有人肠三叶因子(intestinal trefoil factor,hITF)启动子的荧光素酶表达载体,并检测启动子活性。方法采用PCR技术从LS-174T细胞基因组DNA中扩增出长约2.5kb的含hITF基因启动子片段(-2331/+53),而后在此基础上构建了10个不同长度的启动子序列至pGL-3basic荧光素酶表达载体,然后将这些重组质粒转染HEK-293细胞并在48h后检测其荧光素酶活性。结果插入的hITF启动子片段测序结果显示正确,-500/+53,-400/+53和-300/+53片段活性介于0.023～0.026之间,-200/+53,-100/+53和-50/+53活性介于0.0032～0.0042之间,明确了最小活性功能域位于-300/+53区域,-300/-200区域对hITF转录起始起关键性作用。结论成功构建了含hITF启动子的萤火虫荧光素酶报告基因质粒,鉴定出人肠三叶因子(hITF)启动子活性位于-300/-200区域。 展开更多

关键词 肠三叶因子 启动子 pGL-3basic hek-293细胞

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基于细胞融合开发双基因共敲除技术

15

作者 于鲁孟 刘思思 +1 位作者 高晓冬 藤田盛久 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期65-74,共10页

基因编码工具(例如CRISPR/Cas9)的出现使敲除哺乳动物细胞基因成为现实。然而,实现细胞的多基因敲除成功率低且所需时间长。细胞融合技术是构建杂合细胞的常用方法,通过融合两种不同表型的细胞,构建出一种具有杂合表型的新型细胞。但是... 基因编码工具(例如CRISPR/Cas9)的出现使敲除哺乳动物细胞基因成为现实。然而,实现细胞的多基因敲除成功率低且所需时间长。细胞融合技术是构建杂合细胞的常用方法,通过融合两种不同表型的细胞,构建出一种具有杂合表型的新型细胞。但是,由于基因的互补作用,通过基因敲除而获得的性状在细胞融合后成为隐性性状,融合细胞不能表现该性状。本研究的目的是设计一种通过细胞融合技术和CRISPR/Cas9技术获得基因双敲除细胞的方法。由于现阶段没有关于HEK 293细胞株细胞融合的参考数据,所以首先在HEK 293野生型细胞株中分别敲除GPI生物合成必需的PIGA或PIGK,获得PIGA-KO细胞株和PIGK-KO细胞株,并以这两个细胞株作为模型进行条件优化。经过反应条件优化,HEK 293细胞的融合效率显著提高,且实现了FUT8敲除细胞株和ST6GAL1敲除细胞株的快速融合;其次是将细胞融合技术与CRISPR/Cas9技术结合从而实现多种糖基因的快速敲除。将分别含有FUT8和ST6GAL1目标导向RNAs且都能稳定表达Cas9蛋白的两个细胞株进行融合,即可获得FUT8和ST6GAL1基因都被敲除的双敲细胞株。实验结果表明,将细胞融合技术和CRISPR/Cas9技术结合可简便而快速地获得基因双敲除细胞株。 展开更多

关键词 hek 293 细胞融合 基因敲除 CRISPR/Cas9

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