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siRNA沉默旋毛虫GAD基因对小鼠免疫反应影响的研究
1
作者 张博涵 阮入琳 +3 位作者 张鉴慧 刘跃辉 王浩迪 宋铭忻 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第6期623-631,共9页
为探究旋毛虫肌幼虫谷氨酸脱羧酶(GAD)在肌幼虫侵入肠道中发挥的作用,本研究分别将设计与合成的siRNA-GAD、siRNA-Control转染旋毛虫肌幼虫(siRNA-GAD组、siRNA-Control组、后者为阳性对照组NC)并设未转染siRNA的阳性对照组(PC组),于转... 为探究旋毛虫肌幼虫谷氨酸脱羧酶(GAD)在肌幼虫侵入肠道中发挥的作用,本研究分别将设计与合成的siRNA-GAD、siRNA-Control转染旋毛虫肌幼虫(siRNA-GAD组、siRNA-Control组、后者为阳性对照组NC)并设未转染siRNA的阳性对照组(PC组),于转染后12 h分别采用荧光定量PCR(qPCR)和western blot检测各组旋毛虫肌幼虫GAD基因的转录及其蛋白表达水平。结果显示,siRNA-GAD组相对PC组肌幼虫GAD基因的转录水平和蛋白表达水平分别降低63.7%(P<0.001)和62%(P<0.0001),表明siRNA-GAD能够干扰旋毛虫肌幼虫GAD基因的转录及表达。将上述各组旋毛虫肌幼虫分别感染BALB/c小鼠,并设未感染的小鼠为阴性对照,感染10 d时对小鼠采样,采用ELISA检测小鼠血清中促炎细胞因子TNF-α、IFN-γ和抗炎细胞因子IL-4、IL-10的分泌水平;通过流式细胞术检测小鼠脾脏CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比值;制备各组小鼠小肠组织病理切片观察其病理变化;采用qPCR检测小鼠小肠调节性T细胞(Treg细胞)活化标志物GARP、CD62L、OX40和趋化因子受体CXCR3、CCR4、CCR5、CCR10 mRNA的相对转录水平;采用免疫组化法检测各组小鼠小肠Foxp3的表达情况。结果显示,与阴性对照组相比,旋毛虫感染引起宿主血清细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-4和IL-10的分泌水平均显著上升(P<0.05),相比PC组siRNA-GAD组小鼠血清中IL-4和IL-10的分泌水平分别下降7.249%和8.460%(P<0.05);siRNA-GAD组小鼠脾脏中CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比值升高34.72%,差异显著(P<0.05);组织病理切片观察可见,PC组小鼠小肠上皮受损,局部炎性浸润,siRNA-GAD组小鼠肠绒毛水肿严重;相较PC组,siRNA-GAD组小鼠小肠Treg细胞活化标志物GARP和OX45的转录水平分别降低37.30%和13.06%(P<0.05);Treg细胞趋化因子受体CXCR3和CCR4的转录水平分别降低77.26%和61.06%(P<0.05);免疫组化结果显示,与阴性对照组相比,旋毛虫感染后小鼠小肠Treg细胞中的黄色颗粒增多,而siRNA-GAD组小鼠小肠Treg细胞中的黄色颗粒沉着相对较少,表明干扰GAD基因能够降低旋毛虫成虫期诱导Treg细胞标志蛋白Foxp3的表达。上述结果表明,干扰旋毛虫GAD基因能够降低小鼠小肠Treg细胞的活化水平,抑制宿主Th2型免疫反应,提高宿主非特异性免疫反应水平,也表明GAD参与旋毛虫诱导的宿主免疫反应,本研究为探究旋毛虫的致病机制及旋毛虫病的防治提供新思路。 展开更多
关键词 旋毛虫 谷氨酸脱羧酶 RNA干扰 免疫反应
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烟草Nt-GAD的氨基酸序列分析
2
作者 龙岗 陈树鸿 +2 位作者 龙建林 高萍 赵娟 《陕西农业科学》 2024年第1期7-10,105,共5页
为从分子层面研究烟草Nt-GAD的氨基酸序列,采用Protparam、Interpro、Blast、Muscle、Phyml和Treedyn工具,分析烟草Nt-GAD氨基酸序列的理化特性、结构域和进化树。结果表明:烟草Nt-GAD成员的等电点均处于5.5~6之间,且Nt-GAD1和Nt-GAD2... 为从分子层面研究烟草Nt-GAD的氨基酸序列,采用Protparam、Interpro、Blast、Muscle、Phyml和Treedyn工具,分析烟草Nt-GAD氨基酸序列的理化特性、结构域和进化树。结果表明:烟草Nt-GAD成员的等电点均处于5.5~6之间,且Nt-GAD1和Nt-GAD2同源性最高,此外Nt-GAD2的耐热性最好,Nt-GAD3的稳定性最强;烟草Nt-GAD属于磷酸吡哆醛依赖性脱羧酶家族和谷氨酸脱羧酶家族,且具有磷酸吡哆醛依赖性转移酶同源超家族结构域,C末端存在独特区域钙调蛋白结构域,通过进化树分析烟草Nt-GAD成员被划分为三组,其中烟草Nt-GAD3(第一组)分化较为突出,而Nt-GAD2(第三组)则较为保守,而Nt-GAD1和Nt-GAD4被划分为第二组。 展开更多
关键词 烟草 谷氨酸脱羧酶 生物学
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基于γ-氨基丁酸富化需求的稻谷品种筛选
3
作者 吴其飞 张子阳 +2 位作者 米行琼 刘淑一 徐斌 《粮油食品科技》 北大核心 2025年第2期43-52,共10页
为筛选高γ-氨基丁酸(GABA)稻谷品种,对产自我国的16个稻谷品种进行加温加湿处理,以富化稻谷的GABA含量。通过测定谷氨酸(Glu)含量、谷氨酸脱羧酶(GAD)活性、发芽率、吸水速率等参数,筛选出适宜GABA富化的稻谷品种。结果表明,加温加湿... 为筛选高γ-氨基丁酸(GABA)稻谷品种,对产自我国的16个稻谷品种进行加温加湿处理,以富化稻谷的GABA含量。通过测定谷氨酸(Glu)含量、谷氨酸脱羧酶(GAD)活性、发芽率、吸水速率等参数,筛选出适宜GABA富化的稻谷品种。结果表明,加温加湿法对稻谷GABA富化效果有明显的地域品种差异,多数粳稻的GABA含量在富化后高于籼稻,其中江苏粳稻GABA增量最高;南粳3908与南粳46富化后的GABA含量及增量均处于较高水平;富化后GAD活性可作为筛选高GABA含量稻谷品种的指标;发芽率和吸水速率(<8 h)可用于辅助预测稻谷GABA的富化效果。综上,将GAD活性作为参考指标,结合稻谷浸泡发芽的发芽率和吸水速率等参数能够较好地筛选出适宜GABA富化的稻谷品种。 展开更多
关键词 加温加湿法 Γ-氨基丁酸 谷氨酸脱羧酶 稻谷
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谷氨酸脱羧酶(GAD)的研究进展 被引量：24
4
作者 许建军 江波 许时婴 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期132-133,131,共3页
谷氨酸脱羧酶(GAD,EC4.1.1.15)是生物体内广泛存在的一种酶,有重要的生理学作用,能催化谷氨酸脱羧生成重要的抑制性神经递质γ-氨基丁酸(GABA)。GAD用于医疗和食品中具有很大潜力,本文综述了GAD的研究进展和应用。
关键词 谷氨酸脱羧酶(gad) γ-氨基丁酸(GABA)
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人工牛黄对实验性惊厥大鼠脑内海马及门区神经元丢失的抑制和GAD免疫反应阳性细胞的保护作用研究 被引量：14
5
作者 梁洁芳 胡景鑫 +8 位作者 杨彬源 陈盛强 钟愉 梁玉鹃 邓广斐 钟蓓华 黄哲 黄兰英 郭蓝蓝 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期2414-2417,共4页
目的:研究人工牛黄对致痫大鼠行为的影响,海马及门区神经元丢失情况和谷氨酸脱羧酶(GAD)免疫反应阳性细胞数目的改变,探讨该药的抗惊厥作用。方法:采用戊四唑急性惊厥模型,参照Rac ine标准观察行为学表现,用N issl染色作海马及门区神经... 目的:研究人工牛黄对致痫大鼠行为的影响,海马及门区神经元丢失情况和谷氨酸脱羧酶(GAD)免疫反应阳性细胞数目的改变,探讨该药的抗惊厥作用。方法:采用戊四唑急性惊厥模型,参照Rac ine标准观察行为学表现,用N issl染色作海马及门区神经元计数,用免疫组织化学方法作GAD免疫反应阳性细胞计数。结果:牛黄防治组惊厥发作的潜伏时间较对照组长,发作次数较惊厥组少,而在海马及门区的神经元和在海马的GAD阳性细胞的丢失数量较惊厥组的少。结论:人工牛黄能延长惊厥发作的潜伏期,减少发作次数,减轻神经元丢失和保护GAD免疫反应阳性细胞。 展开更多
关键词 人工牛黄 惊厥 谷氨酸脱羧酶 免疫组织化学
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GAD_(65)基因修饰的神经干细胞移植治疗癫痫的实验研究 被引量：8
6
作者 刘霞 齐志国 谢鹏 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期54-56,共3页
目的:将谷氨酸脱羧酶65(GAD65)基因修饰的神经干细胞移植到海仁酸颞叶癫痫模型大鼠海马中,检测目的基因在脑内的表达以及基因工程化细胞移植对癫痫的影响。方法:建立海仁酸致癫痫大鼠模型,完全随机分为GAD-NSCs移植组、单纯NSCs移植组... 目的:将谷氨酸脱羧酶65(GAD65)基因修饰的神经干细胞移植到海仁酸颞叶癫痫模型大鼠海马中,检测目的基因在脑内的表达以及基因工程化细胞移植对癫痫的影响。方法:建立海仁酸致癫痫大鼠模型,完全随机分为GAD-NSCs移植组、单纯NSCs移植组、生理盐水对照组,每组20只。在移植后1、2、3天,1、2、4、8周各时间点,通过小剂量戊四氮诱发试验检测大鼠的癫痫敏感性;移植l周后,取海马进行WesternBlotting检测GAD65表达;移植8周后,取脑组织,进行海马区HE病理染色及BrdU和GAD65的免疫组化染色。结果:移植后,GAD-NSCs移植组2天就表现出癫痫敏感性下降,而单纯NSCs移植组术后2周才出现该变化,并且生理盐水对照组和单纯NSCs移植组Racine评分标准评分高于GAD-NSCs称植组;Western Blotting检测表明仅有GAD-NSCs移植组海马区GAD65高表达;GAD-NSCs移植组的BrdU阳性标记细胞、GAD65阳性标记细胞均显著高于其他两组。结论:GAD65基因修饰神经干细胞移植到癫痫大鼠海马中,海马区GAD65呈高表达,可持续抑制实验动物癫痫敏感性,并对移植后的宿主神经干细胞具有保护作用,改善实验动物神经病理变化。 展开更多
关键词 神经干细胞 谷氨酸脱羧酶 癫痫 移植 海马
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籼稻GAD基因的克隆、序列分析及其植物表达载体构建 被引量：1
7
作者 黄志伟 许明 +2 位作者 林忠辉 蔡小玲 郑金贵 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1079-1085,共7页
【目的】克隆籼稻谷氨酸脱羧酶(GAD)基因的全长cDNA,并进行序列分析和植物表达载体构建,为改良水稻的营养保健品质奠定基础。【方法】根据已知植物GAD基因的保守区域设计引物,以高GABA籼稻品系"新-9-4"的胚芽为材料,利用RT-PC... 【目的】克隆籼稻谷氨酸脱羧酶(GAD)基因的全长cDNA,并进行序列分析和植物表达载体构建,为改良水稻的营养保健品质奠定基础。【方法】根据已知植物GAD基因的保守区域设计引物,以高GABA籼稻品系"新-9-4"的胚芽为材料,利用RT-PCR和RACE技术克隆GAD基因的全长cDNA;扩增其编码序列,构建双T-DNA植物表达载体。【结果】扩增获得长1962bp的籼稻GAD基因全长cDNA(OsiGAD),包含1479bp的开放阅读框,编码492个氨基酸。OsiGAD与已报道的水稻GAD基因OsGAD1、OsGAD2、OsGAD3的核苷酸序列同源性分别为67.1%、69.4%、98.3%,推导氨基酸序列的同源性分别为77.6%、70.1%、100.0%。OsiGAD蛋白序列具有磷酸吡哆醛结合位点和与钙调蛋白结合的C端延伸区域;构建了其具有水稻胚乳特异表达特性的双T-DNA植物高效表达载体pCDMAR-OsiGAD-hpt,选择标记基因和OsiGAD基因分别位于此载体的两个不同T-DNA区。【结论】克隆获得的籼稻GAD基因OsiGAD长1962bp,并成功构建了其双T-DNA植物高效表达载体。 展开更多
关键词 籼稻 谷氨酸脱羧酶(gad) γ-氨基丁酸(GABA) 基因克隆 序列分析 载体构建
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干扰旋毛虫GAD基因对其抗酸能力影响的研究 被引量：1
8
作者 张妍 孟诗 +6 位作者 孟小晴 高远 王爽 赵亚 王姗姗 郭琨 宋铭忻 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期187-194,共8页
为研究旋毛虫谷氨酸脱羧酶(GAD)基因在其谷氨酸依赖型抗酸系统2(AR2)中的作用,本研究根据GenBank中登录的旋毛虫GAD基因序列,设计3条靶向该基因的siRNA(GAD-siRNA1~GAD-siRNA3)及一条阴性对照NC siRNA。将这4条siRNA以2μmol/L的剂量通... 为研究旋毛虫谷氨酸脱羧酶(GAD)基因在其谷氨酸依赖型抗酸系统2(AR2)中的作用,本研究根据GenBank中登录的旋毛虫GAD基因序列,设计3条靶向该基因的siRNA(GAD-siRNA1~GAD-siRNA3)及一条阴性对照NC siRNA。将这4条siRNA以2μmol/L的剂量通过浸染法分别转染旋毛虫肌幼虫(后均简写为肌幼虫),12 h后分别采用荧光定量PCR和western blot检测各siRNA的干扰效果;采用不同剂量的最佳siRNA按照上述方法转染确定最佳干扰剂量。结果显示,2μmol/L的GAD-siRNA1(后简写为siRNA1)对GAD基因的干扰效果最好。将2μmol/L siRNA1、NC siRNA分别在不同pH值的培养液中利用浸染法分别转染肌幼虫,培养不同时间后分别计算各组存活率;同时利用荧光定量PCR方法检测GAD基因的转录水平;采用比色法建立γ-氨基丁酸(GABA)的标准曲线,通过酶活性公式和标准曲线计算酸环境培养0.5 h后各组培养液中GAD的酶活性并测定其pH值。存活率结果显示,随培养时间的增加,同一pH值培养液中各组肌幼虫的存活率均降低,其中siRNA1组肌幼虫的存活率明显低于PBS和NC siRNA组(NC组)(P<0.05),其在pH2.5培养0.5 h时的存活率最低,各组肌幼虫在pH6.6培养0.5 h时的存活率均最高。荧光定量PCR结果显示,相同p H条件下,随培养时间的延长,siRNA1组肌幼虫GAD基因的转录水平均显著低于PBS和NC组。相同培养时间内,与两个对照组相比,随着培养液p H值的减小,siRNA1组肌幼虫GAD基因的转录水平均增加,且该组肌幼虫在pH2.5时GAD基因的转录水平显著高于pH6.6时的转录水平(P<0.05)。上述结果表明,酸性环境可以诱导旋毛虫肌幼虫GAD基因转录水平的升高。酶活性测定结果显示,相同pH条件下,siRNA1组肌幼虫培养液中GAD的酶活性均比PBS组和NC组低,且该组肌幼虫在pH2.5和pH4.0时GAD的酶活性显著高于pH6.6和pH8.0(P<0.05);p H值测定结果显示,siRNA1组肌幼虫培养液pH值相比其在不同pH条件下培养前均略升高,但差异不显著。上述结果表明,干扰GAD基因后会降低旋毛虫肌幼虫GAD的酶活性,且在酸性条件下该酶活性较高。将GAD基因干扰后的肌幼虫感染小鼠,感染后第7 d迫杀小鼠收集成虫,计算旋毛虫成虫减虫率,感染后42 d采用相同方法计算肌幼虫的减虫率、繁殖力指数(RCI)及每克肌幼虫数(LPG);采集各组小鼠的膈肌,制作病理切片并经显微镜观察肌幼虫的保姆细胞。结果显示,siRNA1组成虫减虫率为31.50%,肌幼虫的减虫率为49.15%,RCI为62.51±7.32,LPG为1250.22±146.48。PBS组和NC组肌幼虫的RCI、LPG则显著高于siRNA1组(P<0.05);小鼠膈肌病理切片观察可见,siRNA1组肌幼虫子代保姆细胞壁周围有大量炎性细胞,且保姆细胞裂解,而两个对照组肌幼虫子代保姆细胞壁周围无炎性细胞。表明干扰GAD基因后肌幼虫体内的抗酸能力降低,对宿主免疫系统的抵抗力减弱。本研究首次证实了旋毛虫谷氨酸依赖型抗酸机制在其抵抗酸环境过程中发挥的作用,为旋毛虫抗酸系统的全面研究奠定了基础,并为旋毛虫病的预防提供了新思路。 展开更多
关键词 旋毛虫 RNA干扰 谷氨酸脱羧酶
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脑摄取平衡时丙泊酚对犬脑不同区域GAT-1 mRNA和GAD65 mRNA的影响 被引量：1
9
作者 杨晶晶 林春水 +4 位作者 古妙宁 李洋 刘亚伟 范钦 陈莺 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1469-1473,共5页
目的 探讨不同剂量丙泊酚恒速静注50 min时对犬脑不同区域γ-氨基丁酸浆膜转运体1（GAT-1）及谷氨酸脱羧酶65（GAD65）mRNA的影响。方法 18只12-18月健康杂种犬，雌雄不限，体质量10-12 kg，随机分为对照组（C组）、低剂量组（L组）和... 目的 探讨不同剂量丙泊酚恒速静注50 min时对犬脑不同区域γ-氨基丁酸浆膜转运体1（GAT-1）及谷氨酸脱羧酶65（GAD65）mRNA的影响。方法 18只12-18月健康杂种犬，雌雄不限，体质量10-12 kg，随机分为对照组（C组）、低剂量组（L组）和高剂量组（H组），每组6只。L组和H组分别以丙泊酚5.5 mg/kg和7.0 mg/kg静脉注射，续以55 mg/（kg.h）和70 mg/（ kg.h）恒速静脉输注50 min，分别取颈内动、静脉血各2 ml后，快速静脉注射10% KCl注射液2 mg/kg处死；采用高效液相色谱-紫外法（HPLC-UV）测动、静脉血浆丙泊酚浓度。C组不给予任何干预措施，快速静脉注射10% KCl注射液2 mg/kg处死。3组均解剖获取下丘脑、底丘脑、背侧丘脑、海马、脑桥、顶叶、额叶组织，采用实时荧光定量PCR技术测脑组织中GAT-1 mRNA和GAD65 mRNA的表达水平。结果 丙泊酚静脉输注50 min时，L组和H组丙泊酚血浆浓度（动脉-动脉，静脉-静脉比较）差异显著（P〈0.01），而两组颈内动脉和静脉丙泊酚血浆浓度比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。L组和H组下丘脑和海马GAT-1 mRNA的相对表达量均明显高于C组（P〈0.05, P〈0.01），两组之间差异无统计学意义（P〉0.05）；其他脑区GAT-1 mRNA的相对表达量3组均无显著差异。下丘脑和海马GAT-1 mRNA相对表达量的变化率，L组分别为（61.26±7.17）%和（79.34±39.95）%，差异无统计学意义（P〉0.05）；H组分别为（74.64±19.63）%和（97.12±32.31）%，差异无统计学意义（P〉0.05）。背侧丘脑GAD65 mRNA 的相对表达量，L组和H组均明显高于C组（P〈0.01）；其他脑区GAD65 mRNA的相对表达量3组均无显著差异。结论 丙泊酚恒速静注50 min，犬脑对丙泊酚的摄取处于平衡状态，此时，丙泊酚可明显上调下丘脑和海马GAT-1 mRNA以及背侧丘脑GAD65 mRNA的表达，呈非剂量依赖性。 展开更多
关键词 丙泊酚 γ氨基丁酸浆膜转运体1 谷氨酸脱羧酶2 脑 犬
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高产γ-氨基丁酸的富锌乳酸菌培养基优化及gad基因的克隆和序列分析 被引量：1
10
作者 谢晓阳 陈瑶 +4 位作者 刘志文 郭晓燕 程新 高小玉 徐波 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第19期304-308,共5页
为了检测和提高乳酸菌γ-氨基丁酸(GABA)产量,本研究采用纸层析预染法分析Lactobacillus brevis BS2最佳发酵产GABA条件为:pH5.0,以葡萄糖为碳源,以大豆蛋白胨和牛肉膏为复合氮源,碳氮比为1:1,底物质量分数1%,GABA产量可达到6.32g/L。采... 为了检测和提高乳酸菌γ-氨基丁酸(GABA)产量,本研究采用纸层析预染法分析Lactobacillus brevis BS2最佳发酵产GABA条件为:pH5.0,以葡萄糖为碳源,以大豆蛋白胨和牛肉膏为复合氮源,碳氮比为1:1,底物质量分数1%,GABA产量可达到6.32g/L。采用CTAB法提取该菌株基因组,并以此基因组为模板应用降落PCR扩增出1407bp的谷氨酸脱羧酶基因gad,将gad克隆到T载体后经测序分析发现与L.brevis strain BH2的gad具有高度的同源性,同源性达98%,证明该菌株为高产GABA的富锌短小乳酸杆菌,在工业应用方面具有很大潜力。 展开更多
关键词 Γ-氨基丁酸 LACTOBACILLUS brevis BS2 谷氨酸脱羧酶基因 培养基优化 序列分析
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ICA、ZnT8A、GADA联合检测对重庆儿童1型糖尿病早期诊断的意义 被引量：3
11
作者 李小强 谢婧雯 +2 位作者 吉颖 陈琼 李伶 《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期546-549,共4页
目的:通过观察研究重庆地区1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus,T1DM)儿童患者血清中胰岛细胞抗体(islet cell antibodies,ICA)、锌转运体8自身抗体(zinc transporter isoform 8 autoantibodies,Zn T8A)和胰岛相关自身抗体谷氨酸脱羧... 目的:通过观察研究重庆地区1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus,T1DM)儿童患者血清中胰岛细胞抗体(islet cell antibodies,ICA)、锌转运体8自身抗体(zinc transporter isoform 8 autoantibodies,Zn T8A)和胰岛相关自身抗体谷氨酸脱羧酶抗体(glutamic acid decarboxylase antibodies,GADA)的阳性率及其空腹C肽结果,探讨ICA、Zn T8A和GADA联合检测对1型糖尿病早期诊断的价值。方法:在我院初诊的T1DM组139例和正常组78例儿童,采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测ICA、Zn T8A和GADA;放射免疫法测定空腹C肽。T1DM组按自身抗体结果分为阳性组和阴性组。结果:1型糖尿病组的血清ICA、Zn T8A和GADA阳性率分别为61.9%(P=0.000)、51.1%(P=0.000)和54.0%(P=0.000),均明显高于正常对照组;抗体联合检测组的诊断符合率(ICA/Zn T8A=80.6%;ICA/GADA=81.6%;Zn T8A/GADA=78.3%;ICA/Zn T8A/GADA=88.9%)均高于单项抗体检测组,抗体联合检测与任一抗体单项检测的ROC曲线下面积相比均明显增大(P<0.05),3种抗体联合检测AUC=0.883(95%CI=0.830~0.936,P=0.000);抗体阳性患者的空腹C肽水平明显低于抗体阴性患者。结论:ICA、Zn T8A和GADA三者联合检测可以明显提高1型糖尿病的诊断效能。 展开更多
关键词 1型糖尿病 胰岛细胞抗体 锌转运体8自身抗体 谷氨酸脱羧酶抗体 自身抗体联合检测
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中国汉族人群GAD1和GABRB3基因启动子区单核苷酸多态性与精神分裂症的关联研究 被引量：1
12
作者 李娜 安宇 +3 位作者 张永录 丁志杰 吴柏林 兰小平 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期310-316,共7页
目的·探讨中国汉族人群谷氨酸脱羧酶1(glutamate decarboxylase 1,GAD1)基因和γ-氨基丁酸A受体β亚基[γ-aminobutyric acid (GABA)A receptorβ-3,GABRB3]基因启动子区单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与精... 目的·探讨中国汉族人群谷氨酸脱羧酶1(glutamate decarboxylase 1,GAD1)基因和γ-氨基丁酸A受体β亚基[γ-aminobutyric acid (GABA)A receptorβ-3,GABRB3]基因启动子区单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与精神分裂症(schizophrenia,SZ)的相关性。方法·采用SNaPshot基因分型技术对545例SZ患者(病例组)及624例正常个体(对照组)的GAD1基因rs3791878和rs3749034位点、GABRB3基因rs4906902位点进行分型,结合SNPstats在线软件比较总体样本和性别分层后样本的病例组与对照组之间等位基因、不同遗传模式下基因型分布的差异。应用生存分析研究rs3791878位点风险基因型G/T与男性SZ患者发病年龄的相关性。结果·在超显性遗传模式下,在男性病例组与对照组之间rs3791878位点G/T基因型分布差异有统计学意义(P=0.000),且P值经Bonferroni校正后,差异仍有统计学意义(P=0.000);而在总体样本的病例组与对照组之间rs3749034和rs4906902位点的等位基因及不同遗传模式下基因型分布差异均无统计学意义(P>0.05),在性别分层后的病例组与对照组之间等位基因分布差异也无统计学意义(P>0.05)。Kaplan-Meier分析显示,男性SZ患者在rs3791878位点携带风险基因型G/T与不携带风险基因型G/T在发病年龄上差异无统计学意义(P=0.603)。结论·GAD1基因启动子区rs3791878位点与中国汉族男性SZ患者的发病显著相关。 展开更多
关键词 精神分裂症 gad1基因 GABRB3基因 关联分析
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利用米糠外添GAD制备γ-氨基丁酸的工艺条件优化
13
作者 孟庆虹 严松 +3 位作者 王少元 张志宏 周野 卢淑雯 《北方水稻》 CAS 2013年第1期5-9,共5页
以稻米加工副产品米糠为原料,采用单因素和正交实验确定了外添谷氨酸脱羧酶(GAD)制备γ-氨基丁酸(GABA)的最佳工艺条件:GAD酶用量175u/g,酶解时间2h,pH5.5,酶解温度45℃。经验证实验,在最佳工艺条件下GABA生成量为1530.7mg/100g米糠。
关键词 谷氨酸脱羧酶 Γ-氨基丁酸 米糠
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羟基马桑毒素及其衍生物对粘虫体内GAD和GABA-T活性的影响
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作者 杜薇薇 李孟楼 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2011年第5期149-152,共4页
为了探明羟基马桑毒素及其衍生物(T1、T2、T3、T4)对粘虫神经系统的影响以及快速检测对比分析新合成的药物对试虫神经递质γ-氨基丁酸(GABA)相关酶谷氨酸脱羧酶(GAD)和γ-氨基丁酸转氨酶(GABA-T)活性的影响,通过胃毒和离体2种处理方式... 为了探明羟基马桑毒素及其衍生物(T1、T2、T3、T4)对粘虫神经系统的影响以及快速检测对比分析新合成的药物对试虫神经递质γ-氨基丁酸(GABA)相关酶谷氨酸脱羧酶(GAD)和γ-氨基丁酸转氨酶(GABA-T)活性的影响,通过胃毒和离体2种处理方式提取粗酶液并采用分光光度法对试虫酶活性进行测定。结果表明,经羟基马桑毒素及其衍生物处理后试虫的GAD酶活受到了抑制,而GABA-T活性被提高,这2种酶影响着试虫体内GABA的含量。离体测定的结果与胃毒处理后试虫体内酶活的变化相似,因此可以采用离体处理方法快速检测新药物对试虫的活性。 展开更多
关键词 羟基马桑毒素 粘虫 谷氨酸脱羧酶(gad) γ-氨基丁酸转氨酶(GABA-T) 活性测定
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前扣带回皮质参与小鼠脊髓损伤后疼痛和认知障碍共病
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作者 田珂 赵瑞 +2 位作者 张昆龙 孙晓龙 袁华 《神经解剖学杂志》 北大核心 2025年第1期9-17,共9页
目的:探究脊髓损伤(SCI)后小鼠神经病理性疼痛(NP)与认知功能的关系,以及前扣带回皮质(ACC)神经元激活情况,为研究SCI后NP与认知障碍之间的联系提供实验依据。方法:取10只8周龄雄性C57BL/6J小鼠制备脊髓半横断SCI模型。采用von Frey、... 目的:探究脊髓损伤(SCI)后小鼠神经病理性疼痛(NP)与认知功能的关系,以及前扣带回皮质(ACC)神经元激活情况,为研究SCI后NP与认知障碍之间的联系提供实验依据。方法:取10只8周龄雄性C57BL/6J小鼠制备脊髓半横断SCI模型。采用von Frey、热刺激和Morris水迷宫行为学实验,评估SCI后小鼠的痛行为和认知功能。运用免疫荧光染色技术分析SCI模型小鼠ACC内c-Fos以及GAD67/VGLUT2阳性细胞的表达情况。结果:与假手术组相比,实验组小鼠机械痛阈值和热痛阈值显著降低(P<0.05);Morris水迷宫结果显示,潜伏期显著延长(P<0.05),定位隐藏平台的搜索策略使用明显减少;免疫荧光结果显示,ACC内c-Fos阳性细胞数量显著增加(P<0.05),并且主要与兴奋性神经元VGLUT2阳性细胞共标。结论:SCI可以导致小鼠痛行为异常和认知功能障碍,并引起ACC内神经元激活,且主要激活兴奋性神经元。本研究为ACC内的兴奋性神经元参与SCI后的NP和认知障碍共病提供形态学依据。 展开更多
关键词 脊髓损伤 神经病理性疼痛 认知障碍 C-FOS VGLUT2 gad67 小鼠
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水稻多逆境响应基因OsGAD3的表达与克隆 被引量：2
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作者 董家利 姜云芸 +1 位作者 陈荣军 夏新界 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第5期1541-1548,共8页
逆境胁迫严重影响植物的生长发育,对农业生产造成相当大的影响。为了了解植物逆境反应机理和发现新的水稻耐逆基因,采用Affymetrix水稻表达芯片分析了籼稻培矮64S在多种逆境胁迫下的表达水平,筛选出一个受多种逆境诱导、在各生长发育时... 逆境胁迫严重影响植物的生长发育,对农业生产造成相当大的影响。为了了解植物逆境反应机理和发现新的水稻耐逆基因,采用Affymetrix水稻表达芯片分析了籼稻培矮64S在多种逆境胁迫下的表达水平,筛选出一个受多种逆境诱导、在各生长发育时期与组织器官均有响应的基因OsGAD3(Oryza sativa L.,Glutamate decarboxylase 3,GenBank登录号为:AY187941.1)。PCR扩增得到了该基因的cDNA,其包含的ORF长1476 bp,编码一个含有492个氨基酸残基的蛋白,分子量约为56 kD,等电点约为5.64。OsGAD3基因编码的蛋白质有多个保守结构域,经序列比对发现,其与水稻谷氨酸脱羧酶3相似性约为99.7%。启动子区域分析,发现多种与逆境反应相关的顺式作用元件,因此推测此基因可能参与水稻的耐逆反应过程。 展开更多
关键词 水稻 逆境 基因芯片 基因克隆 谷氨酸脱羧酶3
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水稻谷氨酸脱羧酶基因(OsGAD3)分子进化与表达分析 被引量：2
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作者 许辉 廖攀 +4 位作者 许明 黄志伟 程祖锌 董彦君 开国银 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第2期156-160,共5页
利用分子克隆技术从8个水稻品种中克隆到谷氨酸脱羧酶基因OsGAD3,并进行了相关的生物信息学及表达谱分析.结果表明,不同水稻品种OsGAD3的核苷酸序列差异性很小,都在1%以内,在氨基酸序列上都具有保守的结构域,在C末端均具有类似于OsGAD1... 利用分子克隆技术从8个水稻品种中克隆到谷氨酸脱羧酶基因OsGAD3,并进行了相关的生物信息学及表达谱分析.结果表明,不同水稻品种OsGAD3的核苷酸序列差异性很小,都在1%以内,在氨基酸序列上都具有保守的结构域,在C末端均具有类似于OsGAD1结合CaM的关键氨基酸位点,但不同于OsGAD2.系统进化树分析表明,不同水稻品种的OsGAD3在进化上可以分为粳稻和籼稻两大类,与水稻常规分类相一致.此外,对不同水稻品种的谷氨酸脱羧酶基因的表达谱分析发现,OsGAD1、OsGAD2、OsGAD3、OsGAD4和OsGAD5在测试的11种水稻叶片中都有表达,但表达特征存在一定的差异性,可能与品种特性相关. 展开更多
关键词 Γ-氨基丁酸 水稻 谷氨酸脱羧酶 基因克隆 分子进化 表达分析
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鞘内注射GDNF对神经病理性疼痛大鼠脊髓水平GAD65表达的影响 被引量：1
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作者 宋歌 梁健 +2 位作者 高园园 王存金 王红军 《中国疼痛医学杂志》 CAS CSCD 2015年第3期177-181,共5页
目的：研究神经病理性疼痛大鼠脊髓背角谷氨酸脱羧酶65（Glutamate decarboxylase65,GAD65）的表达变化及蛛网膜下腔注射胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF）对其表达的影响。方法：实验1：... 目的：研究神经病理性疼痛大鼠脊髓背角谷氨酸脱羧酶65（Glutamate decarboxylase65,GAD65）的表达变化及蛛网膜下腔注射胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF）对其表达的影响。方法：实验1：雄性SD大鼠随机分为假手术组（sham组）和坐骨神经结扎组（CCI组）。CCI组又分为术后1 d（D1）、3 d（D3）、7 d（D7）和14 d（D14）组。实验2：雄性SD大鼠随机分为：sham组、D14组、D14＋GDNF组和D14＋PBS组。两实验分别于实验前及CCI术后第1、3、7、14 d测定热缩足潜伏期（thermal withdrawal latency,TWL）及机械缩足阈值（mechanical withdrawal threshold,MWT）,处死后取其L4-L5脊髓背角,采用Western blot方法测定GAD65蛋白表达情况。结果：与sham组相比,CCI组大鼠TWL及MWT均降低,GAD65表达水平于术后3 d开始降低,一直持续到术后14 d;与D14组和D14＋PBS组相比,D14＋GDNF组大鼠TWL及MWT均升高,GAD65表达水平升高。结论：神经病理性疼痛的发生机制可能和大鼠脊髓背角内GAD 65表达降低相关,而GDNF对其镇痛作用可能部分是通过增加脊髓GAD65的表达实现的。 展开更多
关键词 胶质细胞源性神经营养因子 神经病理性疼痛 谷氨酸脱羧酶65
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GAD67-GFP基因敲入小鼠GFP与nNOS在嗅球中的表达和共存研究 被引量：1
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作者 韩飞 杨静 +3 位作者 余文富 尹一飞 武胜昔 凌树才 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期159-165,170,共8页
目的:探究GAD67-GFP基因敲入小鼠嗅球各细胞层中GAD67阳性神经元的分布及与一氧化氮合酶(bNOS)的共存。方法:对该实验室繁育的成年GAD67-GFP基因敲入小鼠利用聚合酶链式反应(PCR)进行基因型等鉴定,取阳性GAD67-GFP基因敲入小鼠嗅球做冰... 目的:探究GAD67-GFP基因敲入小鼠嗅球各细胞层中GAD67阳性神经元的分布及与一氧化氮合酶(bNOS)的共存。方法:对该实验室繁育的成年GAD67-GFP基因敲入小鼠利用聚合酶链式反应(PCR)进行基因型等鉴定,取阳性GAD67-GFP基因敲入小鼠嗅球做冰冻切片进行尼氏染色、免疫荧光染色,观察GAD67阳性神经元在嗅球各细胞层中的分布比例及与bNOS共存。结果:GAD67阳性神经元在嗅小球层、僧帽细胞层、颗粒细胞层所占比例分别为:(42.98±0.92)%、(23.64±0.84)%、(77.75±0.84)%,bNOS阳性神经元在球旁细胞层、僧帽细胞层有强阳性分布,而在颗粒细胞层几乎没有分布。GAD67与bNOS仅在嗅小球层偶有共存。结论:GAD67阳性神经元主要分布于嗅小球层与颗粒细胞层,GAD67与bNOS仅少数共存于嗅小球层。 展开更多
关键词 谷氨酸脱羧酶/遗传学 发光蛋白质类/遗传学 嗅球/解剖学和组织学 小鼠 基因敲除 神经元 一氧化氮合酶 gad67-GFP gad67 bNOS 共存
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阻断BDNF-Trk B信号通路后运动训练对脊髓损伤后大鼠痉挛状态及腰髓内GAD65表达的影响 被引量：9
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作者 丁洁 李向哲 +4 位作者 方露 吴勤峰 谢财忠 王红星 王彤 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期501-507,共7页
目的:探讨阻断脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)-酪氨酸激酶受体 B(tropomyosin-related kinase B,TrkB)信号通路后运动训练对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)大鼠后肢痉挛以及腰髓内谷氨酸脱羧酶65(gluta... 目的:探讨阻断脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)-酪氨酸激酶受体 B(tropomyosin-related kinase B,TrkB)信号通路后运动训练对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)大鼠后肢痉挛以及腰髓内谷氨酸脱羧酶65(glutamic acid decarboxylase 65,GAD65)表达的影响。方法:将60只雌性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、损伤+磷酸盐缓冲液组(Sed-PBS组)、运动+磷酸盐缓冲液组(TT-PBS组)、损伤+TrkB 阻滞剂组(Sed-TrkB/Fc组)以及运动+TrkB 阻滞剂组(TT-TrkB/Fc组)。采用改良Allen撞击法建立T10不完全脊髓损伤后痉挛模型,在SCI后第7天,于Sed-TrkB/Fc组和 TT-TrkB/Fc组植入灌有TrkB 阻滞剂(TrkB/Fc)的Alzet渗透压泵,其余三组渗透压泵中则注入0.01M 磷酸盐缓冲液(phosphate-buffered saline,PBS)进行对照。SCI后第8天,TT-PBS组和TT-TrkB/Fc组进行减重平板训练(treadmill training),每周使用H反射的Hmax/Mmax比值对术后大鼠后肢的痉挛状态进行评估,于术后5周采用Western Blot和免疫组化技术检测各组大鼠损伤远段脊髓GAD65的表达情况,并对大鼠小腿三头肌Hmax/Mmax比值与脊髓前角GAD65相对表达量之间的相关性进行分析。结果:术后,除假手术组外,其余4组大鼠后肢痉挛程度均逐渐加重。从第3周开始,与Sed-PBS组、Sed-TrkB/Fc 组和TT-TrkB/Fc组相比,TT-PBS组Hmax/Mmax比值明显降低(P<0.05);在术后第4—5周,TT-TrkB/Fc组比值也有下降(P<0.05)。5组大鼠GAD65免疫组化和Western Blot结果显示,各组GAD65的相对蛋白含量均低于假手术组(P<0.05),但TT-PBS 组明显多于除Sham组外的其他3组(P<0.05);TT-TrkB/Fc 组GAD65的相对蛋白表达量与Sed-PBS 组和 Sed-TrkB/Fc 组相比也有所增加(P<0.05)。相关性分析显示,SCI后第35天,大鼠小腿三头肌Hmax/Mmax比值与脊髓前角GAD65相对表达量之间呈负相关(P<0.001)。结论:运动训练可以改善SCI后的痉挛状态,而阻断BDNF-TrkB信号通路可抑制运动训练对不完全性SCI大鼠后肢痉挛的缓解和损伤远段脊髓GAD65表达的促进作用,且SCI后的痉挛状态的改善可能与脊髓前角GAD65相对表达量相关。 展开更多
关键词 脊髓损伤 运动训练 痉挛状态 谷氨酸脱羧酶65 脑源性神经营养因子
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