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GST pull-down联合质谱分析技术筛选鸡NOS2的互作蛋白 被引量：2
1
作者 周鑫琦 王颖洁 +1 位作者 张文慧 张亚妮 《中国家禽》 北大核心 2020年第9期19-25,共7页
为了筛选NOS2在鸡雄性生殖细胞形成过程中的互作蛋白,通过克隆NOS2序列,构建pGEX-6p-NOS2原核表达载体且诱导表达NOS2蛋白,采用GST pull-down联合质谱分析技术筛选与鸡NOS2相互作用的蛋白质。结果显示:经GST pull-down质谱分析鉴定到31... 为了筛选NOS2在鸡雄性生殖细胞形成过程中的互作蛋白,通过克隆NOS2序列,构建pGEX-6p-NOS2原核表达载体且诱导表达NOS2蛋白,采用GST pull-down联合质谱分析技术筛选与鸡NOS2相互作用的蛋白质。结果显示:经GST pull-down质谱分析鉴定到316个与鸡NOS2相互作用的候选蛋白质,其中12个高评分蛋白具有相同的功能注释,参与精子运动调控,且主要分布在细胞质、细胞核等细胞组分中,可能通过与其它蛋白质、核酸等分子结合而参与MAPK、Notch等信号通路;质谱分析还发现GOT1蛋白与NOS2互作最为明显,该蛋白参与Notch信号通路,后续将作为重点候选互作蛋白以探究其与NOS2蛋白的互作方式。该结果为进一步探究NOS2在鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化中的调控机制奠定了实验基础。 展开更多
关键词 NOS2 gst pull-down 质谱分析技术 蛋白质相互作用
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利用GST pull-down联合质谱技术鉴定H7N9禽流感病毒PA-X的互作蛋白 被引量：1
2
作者 徐国双 姜童潇 +3 位作者 郭艺迪 段铭 张茂林 关振宏 《广东农业科学》 CAS 2022年第1期121-127,共7页
【目的】为探究H7N9亚型禽流感病毒(AIV)PA-X蛋白的功能,采用GST pull-down联合质谱技术筛选与鉴定与PA-X相互作用的宿主蛋白。【方法】构建PA-X的重组表达载体pGEX-4T-PA-X,转化大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白,并利用GST亲合树脂进... 【目的】为探究H7N9亚型禽流感病毒(AIV)PA-X蛋白的功能,采用GST pull-down联合质谱技术筛选与鉴定与PA-X相互作用的宿主蛋白。【方法】构建PA-X的重组表达载体pGEX-4T-PA-X,转化大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白,并利用GST亲合树脂进行纯化得到GST-PA-X融合蛋白。利用GST pull-down技术,将GST-PA-X和GST对照蛋白分别与A549细胞裂解液总蛋白进行体外孵育,得到的蛋白复合物经SDS-PAGE分离后进行质谱检测分析。【结果】经GST pull-down筛选与质谱分析鉴定后得到39个高可信度的可能与PA-X互作的候选蛋白质。通过GO注释和KEGG等通路富集分析发现,这些蛋白主要参与RNA的代谢及加工、mRNA翻译及运输、多肽生物合成及基因表达的转录后调节等生物学过程。对其中评分最高的蛋白Hsp70-2与PA-X的相互作用作进一步验证,免疫荧光试验结果表明Hsp70-2与PA-X可以在细胞浆中共定位。【结论】利用GST pulldown联合质谱技术筛选到39种与PA-X互作的候选蛋白,且经免疫荧光试验证明候选蛋白Hsp70-2与PA-X存在共定位,为深入探讨PA-X在AIV生命周期中的作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒H7N9 PA-X gst pull-down 质谱 Hsp70-2 蛋白互作
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GST pull-down技术验证CIPK7蛋白激酶与CBL1蛋白的相互作用 被引量：3
3
作者 黄聪琳 丁硕 +1 位作者 姜华 安黎哲 《兰州大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期828-832,共5页
采用DNA重组技术,构建pGEX-4T-3-CIPK7和pET28-CBL1蛋白表达载体,转化大肠杆菌并诱导表达目的蛋白,利用亲和层析纯化法纯化GST标签、His标签融合蛋白,通过GST pull-down试验验证CIPK7与CBL1之间的相互作用.成功构建了CBL1和CIPK7的重组... 采用DNA重组技术,构建pGEX-4T-3-CIPK7和pET28-CBL1蛋白表达载体,转化大肠杆菌并诱导表达目的蛋白,利用亲和层析纯化法纯化GST标签、His标签融合蛋白,通过GST pull-down试验验证CIPK7与CBL1之间的相互作用.成功构建了CBL1和CIPK7的重组质粒,经诱导表达及纯化获得了可溶性GSTCIPK7和CBL1-His融合蛋白,GST pull-down试验证实了CBL1能够与CIPK7结合.CIPK7蛋白与CBL1蛋白之间存在直接的相互作用,为进一步研究蛋白激酶CIPK7的功能奠定了基础. 展开更多
关键词 CBL1蛋白 gst pull-down CIPK7蛋白 蛋白质相互作用
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GST pull-down验证流感病毒PB1-F2蛋白与热休克蛋白40的相互作用 被引量：2
4
作者 侯佩莉 关振宏 +2 位作者 张茂林 李影 段铭 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期202-207,共6页
为体外验证流感病毒PB1-F2与热休克蛋白Hsp40相互作用,通过两个方向的GST pull-down试验验证PB1-F2与Hsp40的相互作用。构建GST-多肽融合蛋白原核表达载体pGEX-6P-1-PB1-F2和pGEX-6P-1-Hsp40,并在大肠杆菌(E.co-li)BL21中诱导表达;构建... 为体外验证流感病毒PB1-F2与热休克蛋白Hsp40相互作用,通过两个方向的GST pull-down试验验证PB1-F2与Hsp40的相互作用。构建GST-多肽融合蛋白原核表达载体pGEX-6P-1-PB1-F2和pGEX-6P-1-Hsp40,并在大肠杆菌(E.co-li)BL21中诱导表达;构建真核表达载体pLEGFP-Hsp40及pCAGGS-PB1-F2,并分别转染293T细胞使其表达Hsp40及PB1-F2融合蛋白,然后进行GST pull-down试验验证二者的相互作用。成功地构建了两种蛋白的各种表达载体,经表达、纯化获得了可溶性的GST-多肽融合蛋白,GST pull-down试验正反两方向都证实了PB1-F2与Hsp40的相互作用,初步证实了流感病毒PB1-F2在体外能与Hsp40发生相互作用。 展开更多
关键词 gst pull-down 流感病毒PB1-F2蛋白 热休克蛋白40 蛋白质相互作用
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GST pull-down验证新城疫病毒基质蛋白与鸡importinβ1蛋白的相互作用 被引量：1
5
作者 胡焱 段志强 +4 位作者 嵇辛勤 赵佳福 邓珊珊 李世静 熊建民 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期126-133,共8页
旨在利用GST pull-down技术验证新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基质(matrix,M)蛋白与鸡importinβ1蛋白在体外的相互作用。根据NDV ZJ1株M基因和鸡importinβ1基因序列设计引物,通过PCR扩增获得NDV M基因和鸡importinβ1基因... 旨在利用GST pull-down技术验证新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基质(matrix,M)蛋白与鸡importinβ1蛋白在体外的相互作用。根据NDV ZJ1株M基因和鸡importinβ1基因序列设计引物,通过PCR扩增获得NDV M基因和鸡importinβ1基因,将其分别定向插入到原核表达载体pGEX-6p-1和pET-32a(+)构建重组原核表达载体pGEX-6p-M、pET-32a-importinβ1,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)后进行IPTG诱导表达,SDSPAGE检测重组蛋白的表达情况,并对包涵体重组蛋白进行变性和复性处理。然后以GST-M重组蛋白为诱饵蛋白,His-importinβ1重组蛋白为猎物蛋白,利用GST pull-down技术验证M蛋白与importinβ1蛋白的相互作用。结果表明,成功构建了重组原核表达载体pGEX-6p-M和pET-32a-importinβ1,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)获得了正确表达。SDS-PAGE电泳检测显示GST-M重组蛋白主要以包涵体形式存在,而His-importinβ1重组蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在。利用蛋白重折叠试剂盒获得了有活性的GST-M重组蛋白,将其作为诱饵蛋白,可以捕获并检测到His-importinβ1重组蛋白,但是GST标签蛋白不能结合His-importinβ1重组蛋白。利用GST pull-down技术证实了NDV M蛋白与鸡importinβ1蛋白在体外具有直接的相互作用,这为深入研究importinβ1蛋白在NDV M蛋白细胞核定位的分子机制以及在NDV复制和致病中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 新城疫病毒 基质蛋白 importinβ1蛋白 gstpull-down 蛋白相互作用
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炎症性肠病患者GST基因多态性与硫唑嘌呤活性代谢物6-TGN浓度水平相关性研究
6
作者 董家珊 陈嘉睿 +3 位作者 曾大勇 刘亦伟 许建文 林荣芳 《中国临床药理学与治疗学》 北大核心 2025年第10期1383-1390,共8页
目的:探讨炎症性肠病(inflammation bowel disease,IBD)患者谷胱甘肽S转移酶(glutathione-S-transferase,GST)基因多态性对硫唑嘌呤(azathioprine,AZA)活性代谢物6-硫鸟嘌呤核苷酸(6-thioguanine nucleotides,6-TGN)浓度的影响,以期为... 目的:探讨炎症性肠病(inflammation bowel disease,IBD)患者谷胱甘肽S转移酶(glutathione-S-transferase,GST)基因多态性对硫唑嘌呤(azathioprine,AZA)活性代谢物6-硫鸟嘌呤核苷酸(6-thioguanine nucleotides,6-TGN)浓度的影响,以期为优化患者AZA治疗方案提供参考。方法:前瞻性收集接受AZA治疗的IBD患者相关临床资料,给药前采用多重PCR技术结合高通量测序技术的靶向测序法测得患者GST-A1、GST-M1、GST-P1、GST-T1基因型,并应用HPLC法测定患者红细胞中6-TGN稳态谷浓度,利用SPSS 26.0软件进行统计分析。结果:研究共纳入90例IBD患者。GSTA1、GST-M1、GST-P1、GST-T1等位基因频率均符合Hardy-Weinberg平衡定律。Logistic回归分析显示携带GST-A1突变基因是6-TGN谷浓度升高的独立危险因素(低浓度水平OR=17.50,P=0.030;高浓度水平OR=3.60,P=0.033),而GST-M1、GST-P1、GST-T1基因多态性与6-TGN浓度水平无显著相关(P>0.05)。结论:GST-A1基因多态性可影响AZA活性代谢物6-TGN浓度水平,AZA治疗前进行GST-A1基因型检测将有助于临床个体化用药。 展开更多
关键词 炎症性肠病 谷胱甘肽S转移酶基因多态性 硫唑嘌呤 6-硫鸟嘌呤核苷酸浓度
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芥菜BjGSTF12基因克隆及表达分析
7
作者 朱云娜 陈凤梅 +4 位作者 李芷娴 王斌 冯慧敏 胡芳 李海渤 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期267-280,共14页
为了探究谷胱甘肽转移酶编码基因(GST)在芥菜花青素积累中的作用,该文以紫薹-绿薹芥菜近等位基因系为材料,克隆到1个花青素积累相关的GST基因,命名为BjGSTF12。该文对BjGSTF12编码蛋白及其启动子进行生物信息学分析,并分析其在绿薹、紫... 为了探究谷胱甘肽转移酶编码基因(GST)在芥菜花青素积累中的作用,该文以紫薹-绿薹芥菜近等位基因系为材料,克隆到1个花青素积累相关的GST基因,命名为BjGSTF12。该文对BjGSTF12编码蛋白及其启动子进行生物信息学分析,并分析其在绿薹、紫薹芥菜中的表达水平及其与花青素含量的关系。结果表明:(1)BjGSTF12的基因组和cDNA全长分别为808、651 bp,编码216个氨基酸,具有GST_N端和GST_C端保守结构域。然而,绿薹、紫薹芥菜BjGSTF12序列无区别。(2)BjGSTF12与拟南芥AtGSTF12亲缘关系最近,同属于φ亚家族。(3)2个芥菜品系BjGSTF12启动子序列存在4处碱基突变/插入,但二者顺式作用元件种类与数目相同,均含9个MYB结合位点、1个赤霉素响应元件、3个非生物胁迫响应元件。(4)紫薹芥菜花青素含量显著高于绿薹芥菜,BjGSTF12表达水平与花青素含量表现出类似变化规律。(5)互作蛋白网络分析表明,BjGSTF12与花青素合成关键酶、糖基化修饰、转运蛋白等蛋白存在互作。综上认为,BjGSTF12在芥菜薹茎花青素积累中可能发挥重要作用,BjGSTF12可能通过互作蛋白调控芥菜花青素合成、修饰、转运从而影响花青素积累。该文对深入研究GST在芥菜薹茎花青素积累的功能及作用机制奠定了一定理论基础。 展开更多
关键词 芥菜 gst 生物信息学分析 表达分析 花青素积累
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藜麦GST基因家族鉴定及冷胁迫下表达模式分析 被引量：1
8
作者 周光怡 李魁印 +4 位作者 王睿 刘晓娟 覃显娇 简子林 任明见 《江苏农业科学》 北大核心 2024年第15期33-44,共12页
冷胁迫会直接影响植物的生长和发育,并在植物体内不断累积有害物质。谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase, GST)是一种对细胞保护至关重要的抗氧化酶,通过减少活性氧引起的生理性损伤,在生物和非生物应激反应中发挥重要作用。藜... 冷胁迫会直接影响植物的生长和发育,并在植物体内不断累积有害物质。谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase, GST)是一种对细胞保护至关重要的抗氧化酶,通过减少活性氧引起的生理性损伤,在生物和非生物应激反应中发挥重要作用。藜麦(Chenopodium quinoa Willd.)中富含蛋白质、氨基酸等对人体有益的物质,但藜麦苗期易受冷空气侵袭而导致减产。因此,鉴定藜麦耐寒相关基因是必要的,为此鉴定藜麦GST基因家族成员,并分析藜麦GST基因在冷胁迫下不同组织中的表达模式。结果表明,在藜麦基因组中共鉴定出59个藜麦GST基因成员,其氨基酸长度范围为199~416 aa,分子量在22.72~47.45 ku范围内,随机分布在14条染色体上,通过系统发育分析将其分为8个亚家族,在启动子区域中分析发现多个低温顺式作用元件(LTR)和多种生长发育及代谢相关的元件。在藜麦GST基因家族中共发现11对串联重复基因和11对片段重复基因,表明基因复制事件是该物种GST基因家族进化的主要驱动力。基因的组织特异性表达分析结果显示,大多数藜麦GST基因在不同持续时间的冷胁迫下可以作出响应,特别是在叶片上高表达。结果可为进一步研究藜麦GST基因功能提供基础,为藜麦耐寒品种选育提供候选基因。 展开更多
关键词 藜麦 gst基因家族 冷胁迫 表达分析 基因鉴定
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壬基酚对牙鲆肝脏EROD和GST酶活性的影响 被引量：17
9
作者 丁秀蓉 李正炎 +1 位作者 王波 傅明珠 《中国海洋大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第S1期101-104,100,共5页
乙氧基-异酚恶唑脱乙基酶(EROD)和谷胱甘肽转移酶(GST)是动物体内主要的解毒酶,在外源毒物的转化和代谢过程中具有重要作用。本文应用牙鲆肝脏组织中的EROD和GST酶活性作为生物标志物,研究了不同浓度的壬基酚(0,0.10,0.33和1.00 mg·... 乙氧基-异酚恶唑脱乙基酶(EROD)和谷胱甘肽转移酶(GST)是动物体内主要的解毒酶,在外源毒物的转化和代谢过程中具有重要作用。本文应用牙鲆肝脏组织中的EROD和GST酶活性作为生物标志物,研究了不同浓度的壬基酚(0,0.10,0.33和1.00 mg·L^(-1))活体暴露下2种酶的活性响应特征。结果表明,与对照组相比,暴露于低浓度(0.10和0.33 mg·L^(-1))的壬基酚中,EROD和GST酶活性均被诱导,暴露4 d后0.33 mg·L^(-1)的壬基酚处理组中EROD和GST活性的诱导率分别为99.2%和127.5%。暴露于高浓度(1.00 mg·L^(-1))的王基酚中。2种酶的活性均被抑制,4 d后EROD和GST酶活性的抑制率分别为62.0%和37.3%。该试验表明,EROD和GST酶活性的响应可用来评价环境中壬基酚的污染效应。 展开更多
关键词 壬基酚 牙鲆 EROD gst
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镉胁迫下两种水稻GSH和GST应答差异的研究 被引量：14
10
作者 胡延玲 张春华 +1 位作者 居婷 葛滢 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期305-310,共6页
还原型谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽转硫酶(GST)是水稻解毒系统中的重要组成部分。采用水培法研究了耐性不同的两种水稻(特优559和K优818)在不同程度镉(Cd)胁迫下GSH和GST的变化情况。结果表明,Cd处理导致两种水稻生物量减少、Cd吸收积累增... 还原型谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽转硫酶(GST)是水稻解毒系统中的重要组成部分。采用水培法研究了耐性不同的两种水稻(特优559和K优818)在不同程度镉(Cd)胁迫下GSH和GST的变化情况。结果表明,Cd处理导致两种水稻生物量减少、Cd吸收积累增加,水稻根部Cd含量和积累量均高于地上部,但Cd从水稻根部向地上部的转运存在明显的种间差异,耐性较弱的特优559的Cd转移率(S/R)随处理Cd浓度提高而上升,而耐性较强的K优818则恰好相反,将Cd更多地钝化在根部。两种水稻GSH和GST的变化趋势也有所不同,Cd胁迫使特优559的GSH含量和GST活性显著增加,而K优818的GSH在低浓度Cd处理时出现了小幅下降,但其GST活性变化与特优559相似,根部增幅更为显著。以上结果说明,水稻GSH和GST在Cd解毒和钝化过程中发挥了重要的作用,而且其应答机制存在着一定的基因型差异,这可能与两品种GST同功酶的组成、表达和功能不同有关。 展开更多
关键词 水稻 CD胁迫 GSH gst
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GST-NAP融合蛋白可溶性表达及柱上切割GST标签 被引量：8
11
作者 黄夏冰 康巧珍 +2 位作者 傅国 汲振余 刘鑫 《郑州大学学报（理学版）》 CAS 北大核心 2015年第4期94-98,共5页
利用基因工程的方法,以实验室保存的p MAL-C2X-NAP质粒为模板,PCR扩增NAP基因,构建重组质粒p GEX-NAP.重组质粒通过酶切和测序鉴定后转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),再经IPTG低温诱导获得可溶性GST-NAP融合蛋白,最后利用谷胱甘肽琼脂糖... 利用基因工程的方法,以实验室保存的p MAL-C2X-NAP质粒为模板,PCR扩增NAP基因,构建重组质粒p GEX-NAP.重组质粒通过酶切和测序鉴定后转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),再经IPTG低温诱导获得可溶性GST-NAP融合蛋白,最后利用谷胱甘肽琼脂糖凝胶树脂进行纯化,Prescission蛋白酶进行柱上切割去除GST标签.结果表明,p GEX-NAP重组质粒构建正确,在大肠杆菌中经IPTG低温诱导表达,可获得大量可溶性GST-NAP融合蛋白.Prescission蛋白酶柱上切割去除GST标签后,经Western Blot验证NAP蛋白能被兔抗NAP多克隆抗体特异识别. 展开更多
关键词 gst-NAP 重组质粒 蛋白表达 gst标签
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食蚊鱼(Gambusia afinis)cat、gapdh和gst基因的克隆及其在生态毒理学中的应用 被引量：7
12
作者 欧瑞康 武小燕 +4 位作者 库培佳 王兰 苏甜 梁惜梅 聂湘平 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期83-92,共10页
根据Ensembl、Genbank登录的鱼类cat、gapdh和gst基因的CDS序列设计普通PCR扩增引物,寻找食蚊鱼的cat、gapdh和gst基因的c DNA片段,并根据定量引物设计要求设计出相应的SYBR Green I荧光定量RT-q PCR引物,建立了食蚊鱼cat、gapdh和gst... 根据Ensembl、Genbank登录的鱼类cat、gapdh和gst基因的CDS序列设计普通PCR扩增引物,寻找食蚊鱼的cat、gapdh和gst基因的c DNA片段,并根据定量引物设计要求设计出相应的SYBR Green I荧光定量RT-q PCR引物,建立了食蚊鱼cat、gapdh和gst基因的SYBR Green I荧光定量RT-q PCR方法。该方法在104~108数量级范围内有良好线性关系(R=0.999~1.000);熔解曲线显示扩增产物特异性良好,均为单一峰值;质粒标准品最高浓度与最低浓度的批内试验变异系数与批间试验变异系数均低于2%。利用该方法监测和评价环境污染物对水生生物的影响,选择了水体中常见典型药物污染物——双氯芬酸,研究其对食蚊鱼抗氧化基因表达的影响。结果表明,雌性食蚊鱼暴露在不同浓度双氯芬酸钠(0.005、0.05、0.5和5 mg·L-1)24 h后,其肝脏cat、gapdh和gst的mRNA呈现显著变化,相对于对照组,在低浓度0.005 mg·L-1时,cat与gst mRNA的表达量均有极显著上升(p<0.01),而其它浓度均极显著下降(p<0.01)。试验表明该方法具有快速、精确、灵敏度高的优点,可为利用该类小型鱼类的原位污染物的生物监测和生态毒理评价提供有力的技术支持。 展开更多
关键词 食蚊鱼 CAT GAPDH gst 实时荧光定量PCR 双氯芬酸
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小麦抗白粉病相关基因GST克隆与表达 被引量：13
13
作者 吴金华 张西平 +1 位作者 胡言光 吉万全 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期34-38,共5页
以从小麦抗白粉病相关基因差异表达分析中获得的EST-3(Genbank序列号EX567360)为标签,采用电子克隆的方法对其进行延伸,并对电子克隆结果进行半定量RT-PCR验证,最后对白粉菌不同侵染时间进行了表达分析。经RT-PCR扩增,EST-3表达的带型... 以从小麦抗白粉病相关基因差异表达分析中获得的EST-3(Genbank序列号EX567360)为标签,采用电子克隆的方法对其进行延伸,并对电子克隆结果进行半定量RT-PCR验证,最后对白粉菌不同侵染时间进行了表达分析。经RT-PCR扩增,EST-3表达的带型变化趋势与其在抑制性消减杂交SSH-cDNA的差异显示情况一致,且RT-PCR获得的序列与电子克隆的序列一致性达98%。生物信息学分析表明,该序列是由875bp核苷酸组成的,具有完整的开放阅读框架,编码蛋白为229个氨基酸,GenBank序列号JK841279,含有一个N端和C端谷胱甘肽硫转移酶结构域,该序列与小麦谷胱甘肽硫转移酶基因(GST)一致性较高,达97%。表达分析结果显示,白粉菌侵染24h表达受到抑制,48h开始表达,侵染72h表达最强,96h又开始下降,表明GST基因属于白粉菌诱导型相关基因,参与小麦对白粉病的应答反应。 展开更多
关键词 小麦 白粉病 小麦谷胱甘肽硫转移酶基因(gst) 电子克隆
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脱落酸和赤霉素对核桃JrGSTU8基因响应炭疽病的表达调控 被引量：8
14
作者 马凯恒 谢牧洪 +4 位作者 郑欣悦 贾彩霞 洪心悦 孙宇栋 杨桂燕 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期121-129,共9页
【目的】谷胱甘肽转移酶(GST)是植物应对外界刺激的重要酶类,其表达可有效改善植株抗逆能力。核桃是重要的经济木本油料植物,其产量和品质受不同环境因子影响,其中主要由胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides引起的核桃炭疽病是导... 【目的】谷胱甘肽转移酶(GST)是植物应对外界刺激的重要酶类,其表达可有效改善植株抗逆能力。核桃是重要的经济木本油料植物,其产量和品质受不同环境因子影响,其中主要由胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides引起的核桃炭疽病是导致我国核桃严重落果、枯梢的主要病害,近年来呈逐渐严重趋势,已成为限制我国核桃产业可持续发展的一个重要因素。为更好的防治核桃炭疽病,必须掌握核桃响应炭疽病的调控机制。由于植株响应逆境通常涉及不同激素信号通路,特别是在病害响应中脱落酸(ABA)和赤霉素(GA)具有重要调节作用。因此,本研究鉴定GST家族成员基因JrGSTU8,对其在ABA和GA介导下的炭疽病响应进行分析,为揭示核桃逆境适应机制和科学的田间管理提供依据。【方法】以‘香玲’核桃cDNA为模板克隆获得一个Tau类GST基因,命名为JrGSTU8。通过分析JrGSTU8的基本信息、保守结构域、进化、启动子及其包含的顺式作用元件,预测JrGSTU8与逆境响应的潜力。对核桃进行炭疽病、ABA、GA、炭疽病+ABA、炭疽病+GA等不同处理,提取RNA反转录为cDNA,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对JrGSTU8的表达进行分析,明确JrGSTU8响应ABA、GA和炭疽病的能力。【结果】JrGSTU8基因开放阅读框长612 bp,推导的多肽分子量为23145.57 Da,包含氨基酸203 aa,理论等电点为6.61,与杨梅Morella rubra GSTU8等蛋白的亲缘关系较近。JrGSTU8上游1443 bp启动子包含307个顺式作用元件位点,属于80类不同元件,包括赤霉素(GA)(如WRKY71OS、TATCCAOSAMY、PYRIMIDINEBOXOSRAMY1A),脱落酸(ABA)(如MYB2CONSENSUSAT、BOXLCOREDCPAL、CAREOSREP1)等激素响应相关,热(CCAATBOX1)、低温(MYCCONSENSUSAT)等非生物胁迫以及病害(BIHD1OS、WBOXATNPR1、WRKY71OS、WRKY71OS)响应相关元件。qRT-PCR发现,JrGSTU8基因能被ABA、GA和核桃炭疽病不同程度地诱导表达,且ABA和GA均可有效提高JrGSTU8响应炭疽病胁迫的转录活性。【结论】核桃JrGSTU8基因受炭疽病诱导,具有组织表达特异性,涉及ABA和GA信号通路,推测其在核桃病害响应中起到一定作用。 展开更多
关键词 核桃 gst基因 启动子 生物胁迫 表达活性
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苯并芘B[a]P对泥蚶组织EROD、GST酶活力和MDA含量的影响 被引量：7
15
作者 肖国强 张炯明 +5 位作者 邵艳卿 柴雪良 吴洪喜 刘博 方军 滕爽爽 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期28-34,共7页
摘要：采用实验生态学的方法，通过染毒和清除，研究了不同浓度（0．05、0．5、5和10μg／L）苯并芘B[a]P胁迫15d和释放15d后，泥蚶（Tegillarcag阳n0J日）消化盲囊和鳃丝乙氧基异吩嗯唑脱乙基酶（EROD）、谷胱甘肽转移酶（GST）活力和... 摘要：采用实验生态学的方法，通过染毒和清除，研究了不同浓度（0．05、0．5、5和10μg／L）苯并芘B[a]P胁迫15d和释放15d后，泥蚶（Tegillarcag阳n0J日）消化盲囊和鳃丝乙氧基异吩嗯唑脱乙基酶（EROD）、谷胱甘肽转移酶（GST）活力和脂质过氧化物（MDA）含量的变化。结果表明：在胁迫阶段0．5、5和10I．tg／L，B[a]P处理组对泥蚶消化盲囊和鳃丝EROD、GST酶活力和MDA含量显著影响（P〈O．05），EROD、GST酶活力分别被诱导和抑制，第5d趋于稳定，MDA含量随时间呈上升趋势，在第10d基本达到峰值并趋于稳定。在清除阶段，EROD活力和MDA含量逐渐下降，GST活力逐渐升高，并在5—10d恢复到对照组水平。本研究中，EROD和GST活力的变化能够反映机体解毒代谢的能力，MDA含量的变化反映了机体氧化损伤的程度，表现出了一定的剂量和时间效应。 展开更多
关键词 苯并（a）芘 泥蚶（Tegillarca granosa） 消化盲囊 鳃丝 EROD gst MDA
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多溴联苯醚胁迫下鲫鱼肝脏微粒体CYP3A1和GST的响应 被引量：10
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作者 吴伟 瞿建宏 +1 位作者 聂凤琴 孟顺龙 《生态环境学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期805-810,共6页
以鲫鱼Carassius auratus Linn．为试验鱼类，研究了其暴露于不同质量浓度的2，2’，4，4’-四溴联苯醚（PBDE-47）和十溴联苯醚（PBDE-209）后鱼肝微粒体中CYP3A1和GST酶活性的动态变化。结果表明，鲫鱼在0．10～5．00mg·L-1的PBD... 以鲫鱼Carassius auratus Linn．为试验鱼类，研究了其暴露于不同质量浓度的2，2’，4，4’-四溴联苯醚（PBDE-47）和十溴联苯醚（PBDE-209）后鱼肝微粒体中CYP3A1和GST酶活性的动态变化。结果表明，鲫鱼在0．10～5．00mg·L-1的PBDE．47和5．00～50．0mg·L0的PBDE-209中暴露15d后，除0．10mg·L-1 PBDE．47、5．00mg·L-1和10．0mg·L-1PBDE-209试验组外，其余各试验组的鱼肝微粒体中CYP3A1被诱导，呈显著的剂量-效应关系。CYP3A1的活性随着作用时间的延续而上升，到试验第15天时达到最高，但上升速率最快的阶段为试验的第0-5天。而GST酶则表现出不同的特点，呈先升高后降低的趋势。经过15d试验，除0．10mg·L-1PBDE-47和5．00mg·L-1PBDE-209以外的各试验组鲫鱼肝脏微粒体中的GST活性仅为对照组的12．74％～85．35％，表明PBDEs已对鱼体肝脏GST产生了较为严重的影响。研究表明，鱼类肝脏微粒体中CYP3AI和GST酶可作为污染生物标志物来评价PBDEs的早期污染毒理效应。 展开更多
关键词 多溴联苯醚 鲫鱼 肝脏 微粒体 CYP3A1 gst
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GST酶的提取纯化及特性分析 被引量：6
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作者 刘小丽 廖祥儒 +3 位作者 赵立梅 陈彤 刘强 孟虎 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 2003年第2期170-174,共5页
通过硫酸铵分级盐析、SephadexG - 2 5脱盐、A - 2 5柱层析、丙酮沉淀、SephadexG - 75及SephadexG - 2 0 0等一系列分离纯化手段 ,从小麦幼穗抽提液中分离得到了电泳纯的谷胱甘肽转移酶 .结果表明 ,1-氯 - 2 ,4 -二硝基苯 (CDNB)浓度... 通过硫酸铵分级盐析、SephadexG - 2 5脱盐、A - 2 5柱层析、丙酮沉淀、SephadexG - 75及SephadexG - 2 0 0等一系列分离纯化手段 ,从小麦幼穗抽提液中分离得到了电泳纯的谷胱甘肽转移酶 .结果表明 ,1-氯 - 2 ,4 -二硝基苯 (CDNB)浓度变化的体系中 ,该酶表观Km=10 .4 2nmol/L ;谷胱甘肽 (GSH)浓度变化的体系中 ,表观Km=2 99μmol/L . 展开更多
关键词 小麦 谷胱甘肽转移酶(gst) 纯化
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AgNO_3和低温处理对小麦细胞GST及GR酶活性的影响 被引量：5
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作者 杜建芳 廖祥儒 +5 位作者 侯小康 王俊丽 陈丕铃 周艳芬 芦春斌 王建平 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 2001年第4期402-405,共4页
研究了AgNO3 和低温处理对小麦悬浮细胞谷胱甘肽转移酶 (GST)及谷胱甘肽还原酶 (GR)酶活性的影响 .结果表明 ,AgNO3 和低温处理对小麦细胞再生的影响因处理时间的不同而有差异 ,在处理的4d内低温处理使再生率明显增加 ,AgNO3 处理 2d使... 研究了AgNO3 和低温处理对小麦悬浮细胞谷胱甘肽转移酶 (GST)及谷胱甘肽还原酶 (GR)酶活性的影响 .结果表明 ,AgNO3 和低温处理对小麦细胞再生的影响因处理时间的不同而有差异 ,在处理的4d内低温处理使再生率明显增加 ,AgNO3 处理 2d使细胞再生率显著增高 ,但处理 4d则对细胞再生无明显影响 .低温处理使细胞蛋白质含量明显升高 ,AgNO3 处理对小麦细胞蛋白质含量无明显影响 .小麦细胞GST活性随处理时间的延长而迅速降低 ,AgNO3 处理对GST活性无明显影响 ,但低温处理明显延缓GST活性降低 .AgNO3 和低温处理都使小麦细胞GR酶活性明显降低 .AgNO3 处理 2d和低温处理对细胞谷胱甘肽 (GSH )含量无明显影响 ,但在处理的第 4dAgNO3 使细胞GSH含量明显降低 . 展开更多
关键词 gst GSH 小麦 悬浮细胞 低温 AGNO3 亚硝酸银 植物细胞 生长发育
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Na_2CO_3胁迫下星星草幼苗叶绿体GST活性变化及其与相关指标的关系 被引量：8
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作者 孙国荣 王建波 +2 位作者 曹文钟 杜坤 张彪 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期2495-2501,共7页
通过对不同浓度Na2CO3胁迫下星星草幼苗培养基质和叶片渗透势、叶片相对电导率、叶绿体谷胱甘肽转移酶GST活性和O-·2产生速率的研究,以探讨星星草幼苗叶绿体GST活性在Na2CO3胁迫下的变化规律及其在抗Na2CO3胁迫中的作用.结果表明,... 通过对不同浓度Na2CO3胁迫下星星草幼苗培养基质和叶片渗透势、叶片相对电导率、叶绿体谷胱甘肽转移酶GST活性和O-·2产生速率的研究,以探讨星星草幼苗叶绿体GST活性在Na2CO3胁迫下的变化规律及其在抗Na2CO3胁迫中的作用.结果表明,在0～0.4%Na2CO3胁迫范围内,随着其浓度的增加星星草幼苗叶绿体GST活性增强,Na2CO3胁迫浓度继续增加则GST活性急剧减弱.星星草幼苗叶绿体GST活性随培养基质渗透势、叶片渗透势和叶片相对电导率以及叶绿体O-·2产生速率的变化趋势相似.叶绿体GST活性和Na2CO3胁迫浓度以及叶片渗透势之间、叶绿体GST活性和O-·2产生速率以及叶片渗透势之间、叶绿体GST活性和培养基质渗透势以及叶片渗透势之间、叶绿体GST活性和O-·2产生速率以及叶片相对电导率之间相关关系显著.说明叶绿体GST在星星草幼苗抵抗低强度浓度Na2CO3胁迫中起着非常重要的作用. 展开更多
关键词 星星草幼苗 叶绿体 谷胱甘肽转移酶(gst)活性 渗透势 O2^-产生速率 NA2CO3 胁迫
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割手密谷胱甘肽硫转移酶基因SsGST的克隆与生物信息学分析 被引量：4
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作者 徐磊 胡小文 +2 位作者 姚艳丽 邢淑莲 刘洋 《广东农业科学》 CAS 2015年第18期14-19,共6页
为克隆割手密谷胱甘肽硫转移酶基因,采用电子克隆和RT-PCR技术获得了1个割手密GST基因,命名为Ss GST,并对其进行生物信息学分析。序列分析表明,割手密Ss GST基因c DNA全长702 bp,编码224个氨基酸,蛋白分子式为C1119H1756N300O327S5,预... 为克隆割手密谷胱甘肽硫转移酶基因,采用电子克隆和RT-PCR技术获得了1个割手密GST基因,命名为Ss GST,并对其进行生物信息学分析。序列分析表明,割手密Ss GST基因c DNA全长702 bp,编码224个氨基酸,蛋白分子式为C1119H1756N300O327S5,预测蛋白质分子量为24.8 ku,等电点为6.21。蛋白疏水性分析表明Ss GST蛋白为亲水性蛋白。保守结构域预测表明Ss GST蛋白具有GST-N和GST-C结构域。Ss GST蛋白序列与玉米、高粱、谷子和甘蔗等植物的GST蛋白序列相似性较高,系统进化树分析表明,Ss GST蛋白与玉米GST蛋白亲缘关系最近。 展开更多
关键词 割手密 gst基因 电子克隆 RT-PCR 生物信息学
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