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GOX-CP4EPSP转化甘蓝型油菜的抗草甘膦研究 被引量:4
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作者 万丽丽 王转茸 +3 位作者 辛强 董发明 洪登峰 杨光圣 《湖北农业科学》 2016年第10期2661-2666,共6页
利用Genome walking方法在孟山都抗农达油菜(Brassica napus L.)中克隆了GOX-CP4EPSP双顺反子结构。利用农杆菌介导的遗传转化方法将PCAMBIA-GOX-CP4EPSP植物双元表达载体转化甘蓝型油菜Pol CMS恢复系"7-5"获得转基因植株。... 利用Genome walking方法在孟山都抗农达油菜(Brassica napus L.)中克隆了GOX-CP4EPSP双顺反子结构。利用农杆菌介导的遗传转化方法将PCAMBIA-GOX-CP4EPSP植物双元表达载体转化甘蓝型油菜Pol CMS恢复系"7-5"获得转基因植株。在田间对转基因植株喷施400倍的农达(41%草甘膦异丙胺盐),所有的转基因家系都能存活,而非转基因Pol CMS恢复系"7-5"全部死亡。在转基因植株叶片中能够检测到GOX和CP4EPSP基因的表达。对转基因T1代3个家系在60 mg/L草甘膦培养基上的发芽试验以及GUS染色分析表明抗草甘膦的单株能表达与GOX-CP4EPSP共转化的GUS蛋白质,而对草甘膦敏感的单株和野生型对照植株都不能表达GUS蛋白质。鉴于GOX-CP4EPSP双顺反子在转基因油菜中的有效性和稳定性,可以作为双子叶植物遗传转化的筛选标记。 展开更多
关键词 油菜(Brassica NAPUS L.) gox-cp4epsp 双顺反子 草甘膦抗性 农达 筛选标记
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含抗草甘膦 CP4-EPSPS 基因和耐逆 Trihelix 类转录因子GmGT-2 A基因的植物表达载体构建及转化验证 被引量:2
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作者 李雁杰 朱丹华 +3 位作者 冯小锋 高莎 杨清华 董德坤 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第2期133-140,共8页
高效易用的植物表达载体在基因功能相关研究中起着重要的作用。以植物表达载体p BA002为基础载体,使用抗草甘膦CP4-EPSPS基因替换原载体的Bar筛选标记基因,获得新的植物表达载体p ES002。将大豆耐逆相关Trihelix类转录因子Gm GT-2A连接... 高效易用的植物表达载体在基因功能相关研究中起着重要的作用。以植物表达载体p BA002为基础载体,使用抗草甘膦CP4-EPSPS基因替换原载体的Bar筛选标记基因,获得新的植物表达载体p ES002。将大豆耐逆相关Trihelix类转录因子Gm GT-2A连接到p ES002,构建了同时含耐逆相关基因和抗除草剂标记基因的植物表达载体p ES002-Gm GT-2A。利用农杆菌介导的花序浸润法转化拟南芥,并对转基因植株进行抗草甘膦和耐盐性鉴定。结果表明,转基因植株在抗草甘膦和耐盐性上均显著强于对照,表明该载体可以用于转基因相关的基因功能研究。 展开更多
关键词 草甘膦 转录因子 表达载体
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转EPSPS基因大豆植株中蛋白的表达 被引量:4
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作者 邢珍娟 李飞武 +5 位作者 刘娜 李葱葱 康岭生 宋新元 邵改革 张明 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期981-984,989,共5页
采用ELISA定量测定法研究了转EPSPS基因大豆不同生长时期不同器官中CP4EPSPS蛋白含量的变化。结果表明:转EPSPS基因大豆不同器官在不同生育期CP4EPSPS蛋白含量表现出较大的差异,R8期籽粒中的CP4EPSPS蛋白含量在所有时期和所有组织中... 采用ELISA定量测定法研究了转EPSPS基因大豆不同生长时期不同器官中CP4EPSPS蛋白含量的变化。结果表明:转EPSPS基因大豆不同器官在不同生育期CP4EPSPS蛋白含量表现出较大的差异,R8期籽粒中的CP4EPSPS蛋白含量在所有时期和所有组织中蛋白含量最高;上位叶和下位叶中CP4EPSPS蛋白除V3~V5期和R8期外的表达趋势一致,茎上部和茎下部中CP4EPSPS蛋白存不同时期表达动态趋势基本一致,根中CP4EPSPS蛋白含量在V3~V5期下降,然后逐渐升高,R1~R8期有一个大幅度的下降过程。从V1期至R8期,随着植株的不断生长,各组织中CP4EPSPS蛋白的含量有明显的变化。 展开更多
关键词 转基因大豆 CP4 epspE蛋白含量 酶联免疫吸附测定
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转基因大豆种植对根际土壤酶活性和养分的影响 被引量:13
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作者 章秋艳 李刚 +5 位作者 杨志国 王丽娟 王慧 常泓 杨殿林 赵建宁 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期409-413,共5页
采用盆栽试验,以耐草甘膦大豆M88、抗虫耐草甘膦大豆ZB及常规大豆中黄13为研究对象,比较分析转基因大豆对根际土壤酶活性和养分含量的影响。结果表明,在大豆成熟期时,与常规大豆中黄13相比,M88、ZB根际土壤碱性磷酸酶活性、过氧化氢酶... 采用盆栽试验,以耐草甘膦大豆M88、抗虫耐草甘膦大豆ZB及常规大豆中黄13为研究对象,比较分析转基因大豆对根际土壤酶活性和养分含量的影响。结果表明,在大豆成熟期时,与常规大豆中黄13相比,M88、ZB根际土壤碱性磷酸酶活性、过氧化氢酶活性、速效磷含量无显著差异,硝态氮含量显著下降。根际土壤脲酶活性、铵态氮含量则表现不同,其变化随大豆品种的不同而不同。相较于常规大豆中黄13,M88根际土壤脲酶活性和铵态氮含量无显著差异;ZB根际土壤脲酶活性显著下降,而铵态氮含量则显著上升。 展开更多
关键词 转基因大豆 CP4 epsps耐草甘膦基因 Bt cry1Ab抗虫基因 酶活性 氮含量
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转基因大豆中外源基因的二重PCR检测 被引量:1
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作者 邵碧英 陈文炳 +1 位作者 江树勋 李寿崧 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2005年第4期483-487,共5页
用CTAB法提取转基因大豆(Roundup Ready品系)的总DNA.根据行业标准SN/T 1195-2003,合成用于扩增花椰菜花叶病毒(Cauliflowerm osaic viru,s CaMV)35S启动子的引物S1和S2、根癌农杆菌(Agrobacterium tum efaciens)CP4菌株EPSPS基因的引... 用CTAB法提取转基因大豆(Roundup Ready品系)的总DNA.根据行业标准SN/T 1195-2003,合成用于扩增花椰菜花叶病毒(Cauliflowerm osaic viru,s CaMV)35S启动子的引物S1和S2、根癌农杆菌(Agrobacterium tum efaciens)CP4菌株EPSPS基因的引物Ea、ER和Eb.应用这5条(2组)引物对转基因大豆进行二重PCR检测时,扩增得到2个新片段,分别与片段S1ER、S1Eb大小一致.将片段S1ER、S1Eb进行克隆并测序,序列已在GenBank上登录,接受号分别为AY592954和AY596948.序列分析结果表明,片段S1ER含有CaMV 35S启动子和矮牵牛叶绿体转运肽序列(CTP)的部分序列,片段S1Eb含有CaMV 35S启动子部分序列、CTP和CP4 EPSPS基因的部分序列,原用于扩增CP4 EPSPS基因的引物中,仅引物Eb位于CP4 EPSPS基因中.重新合成扩增CP4 EPSPS基因的引物E1和E2,建立的二重PCR方法不仅适合于转基因RoundupReady大豆,还适合于其它植物中的CaMV 35S启动子和CP4 EPSPS基因的同时检测. 展开更多
关键词 大豆 CaMV 35S启动子 CP4 epspS基因 二重PCR
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食用精炼大豆油DNA提取及单管巢式PCR检测 被引量:10
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作者 姚芹 宋浩 陈枫 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第21期183-186,共4页
设计了针对转基因Roundup Ready大豆外源基因扩增的内外2对引物,分别位于CaMV35s启动子,CTP基因,CP4EPSPS基因区域,并成功对精炼大豆油中的外源基因进行单管巢式PCR检测。结果表明,用改良试剂盒法和冷冻干燥法提取大豆油中的DNA均可以... 设计了针对转基因Roundup Ready大豆外源基因扩增的内外2对引物,分别位于CaMV35s启动子,CTP基因,CP4EPSPS基因区域,并成功对精炼大豆油中的外源基因进行单管巢式PCR检测。结果表明,用改良试剂盒法和冷冻干燥法提取大豆油中的DNA均可以满足单管巢式PCR检测要求;单管巢式PCR扩增对内外引物的Tm值有特殊要求,外引物的退火温度高于内引物。本实验建立的精炼大豆油转基因成分的单管巢式PCR检测方法特异性强,灵敏度高且快速方便。 展开更多
关键词 精炼大豆油 DNA提取 CP4epspS基因 单管巢式PCR
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转基因大豆非同源对照模板QC-PCR检测方法的建立
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作者 徐景升 阙友雄 +2 位作者 李峰 陈华墙 陈如凯 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第5期156-159,共4页
建立了转基因大豆CP4EPSPS基因的非同源对照模板QC-PCR检测方法。非同源竞争对照构建方法如下:利用CP4EPSPS基因特异引物,以大肠杆菌基因组DNA为异源模板,在低严谨度PCR扩增,回收适宜DNA片段并克隆到pMD-8载体上。该片段与CP4EPSPS基因... 建立了转基因大豆CP4EPSPS基因的非同源对照模板QC-PCR检测方法。非同源竞争对照构建方法如下:利用CP4EPSPS基因特异引物,以大肠杆菌基因组DNA为异源模板,在低严谨度PCR扩增,回收适宜DNA片段并克隆到pMD-8载体上。该片段与CP4EPSPS基因相应序列除两端引物序列完全相同外,其他部分没有同源性。 展开更多
关键词 竞争定量PCR 非同源对照 CP4epspS 转基因检测
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