鲤鱼(Cyprinus carpio)生长激素基因克隆及原核表达 被引量：32

1

作者 白俊杰 马进 +2 位作者 简清 李新辉 罗建仁 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第3期409-412,共4页

采用逆转录—聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，从鲤鱼脑垂体总ＲＮＡ中扩增出编码鲤鱼生长激素（ＧＨ）成熟肽基因序列．定向克隆至质粒ｐＵＣ１８，克隆的鲤鱼ＧＨｃＤＮＡ不含信号肽序列并以新的起始密码子ＡＴＧ取代鲤鱼ＧＨｃ... 采用逆转录—聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，从鲤鱼脑垂体总ＲＮＡ中扩增出编码鲤鱼生长激素（ＧＨ）成熟肽基因序列．定向克隆至质粒ｐＵＣ１８，克隆的鲤鱼ＧＨｃＤＮＡ不含信号肽序列并以新的起始密码子ＡＴＧ取代鲤鱼ＧＨｃＤＮＡ第１个密码子ＴＣＡ．序列分析表明，与Ｋｏｒｅｎ报道的鲤鱼ＧＨｃＤＮＡ相比有两个碱基差异，但推断的氨基酸序列完全一致．将鲤鱼ＧＨｃＤＮＡ定向克隆至原核表达载体ｐＢＶ２２０，构建成重组鲤鱼ＧＨ基因表达载体ｐＢＶｃＧＨ８．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和薄层扫描分析表明：经４２℃诱导，ｐＢＶｃＧＨ８在大肠杆菌中可表达一分子量约２２０００的特异蛋白，表达量占细胞总蛋白的２９．２％．该基因重组的鲤鱼ＧＨ添加到饲料中投喂罗非鱼。 展开更多

关键词 鲤鱼 原核表达 促生长 生长激素基因

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转大麻哈鱼生长激素基因鲤生态安全性检测与分析 被引量：7

2

作者 耿波 梁利群 +3 位作者 关云涛 孙效文 雷清泉 欧阳红生 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期1139-1144,共6页

评价了转大麻哈鱼(Oncorhynchus Suckley)生长激素基因鲤生态安全性问题及研究转基因鱼对天然野生鲤群体遗传污染程度。通过RAPD和SSLP方法,用265个RAPD标记和35对鲤的微卫星标记对受杂交鲤污染的哈尔滨江段黑龙江鲤群体、未受污染的抚... 评价了转大麻哈鱼(Oncorhynchus Suckley)生长激素基因鲤生态安全性问题及研究转基因鱼对天然野生鲤群体遗传污染程度。通过RAPD和SSLP方法,用265个RAPD标记和35对鲤的微卫星标记对受杂交鲤污染的哈尔滨江段黑龙江鲤群体、未受污染的抚远江段黑龙江鲤群体及模拟转基因鲤占普通鲤群体的1%和10%比例获得繁殖子代等实验群体的DNA样本进行全基因组扫描统计分析得出结论,即转基因鲤占普通鲤群体1%时对普通群体的基因污染程度是微乎其微的,远远低于杂交鲤对野生群体基因污染,转基因鲤占普通鲤群体10%时对普通鲤遗传背景的影响稍有升高,但仍然远远低于杂交鲤对野生群体基因污染程度。总之,在现有的检测技术条件及有效的监控条件下,与杂交鲤相比转基因鲤对鲤野生群体的遗传背景的影响是微弱的,而外来种和杂交种则对生态环境有严重威胁。 展开更多

关键词 大麻哈鱼生长激素基因 鲤 生态安全 基因污染

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饥饿状态下转基因鲤鱼和对照鲤鱼血清生长激素的表达研究 被引量：3

3

作者 钟山 罗大极 +4 位作者 汪亚平 陈竹 管波 廖兰杰 朱作言 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1046-1050,共5页

研究采用酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA)技术,比较分析了转GH基因鲤鱼和对照鲤鱼在饥饿和饱食状态下血清生长激素水平的变化规律,并探讨其可能机制。实验结果表明,在投喂实验中,转基因鲤鱼和对照鲤鱼血清... 研究采用酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA)技术,比较分析了转GH基因鲤鱼和对照鲤鱼在饥饿和饱食状态下血清生长激素水平的变化规律,并探讨其可能机制。实验结果表明,在投喂实验中,转基因鲤鱼和对照鲤鱼血清生长激素水平均无明显变化,但转基因鲤鱼血清生长激素远高于对照鲤鱼,分别为(142.0±4.9)ng/mL和(1.6±0.2)ng/mL,转基因鲤鱼体重增长速率显著高于对照鱼。在饥饿实验中,转基因鲤鱼的血清生长激素迅速下降,从(142.0±4.9)ng/mL降至(46.0±3.2)ng/mL,而后稳定在这一较低水平;对照鲤鱼血清生长激素持续上升,从(1.6±0.2)ng/mL升至(10.9±1.4)ng/mL,体重负增长速率没有显著差异。研究结果提示,转GH基因鲤鱼血清生长激素的调控机制与对照鲤鱼的不同,其表达水平不受脑垂体反馈抑制调控机制的影响,而与重组GH基因中β-actin基因启动子的调控模式相关。 展开更多

关键词 转基因鲤鱼 生长激素 饥饿 ELISA

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转基因鱼对食用动物影响的研究 被引量：9

4

作者 闫学春 孙孝文 张利民 《水产学杂志》 CAS 1996年第1期12-15,共4页

本文报导了以转基因鱼作为食物对食用动物的影响研究。以猫为实验动物，用所构建的转牛和羊生长激素基因鲤鱼鱼种喂养，三个月后将实验猎杀死，测定其生理学指标和血液学指标并进行几种组织的重金属含量和外源基因残存量的测定。实验结... 本文报导了以转基因鱼作为食物对食用动物的影响研究。以猫为实验动物，用所构建的转牛和羊生长激素基因鲤鱼鱼种喂养，三个月后将实验猎杀死，测定其生理学指标和血液学指标并进行几种组织的重金属含量和外源基因残存量的测定。实验结果，并未发现转基因鱼对猫有任何不利的影响，无任何毒副作用。 展开更多

关键词 生长激素基因 转基因鱼 食用动物 生理学指标 血液学指标 安全性

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儿茶酚胺类药物对草鱼生长激素分泌的影响 被引量：3

5

作者 张为民 张利红 林浩然 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期340-344,共5页

本文研究了儿茶酚胺类药物对草鱼生长激素水平的影响。腹腔注射儿茶酚胶合成抑制剂α－甲基－对－酪氨酸（α－ＭＰＴ，５μｇ／ｇｂ·Ｗ和５０μｇ／ｇ·ｂＷ）显著降低草鱼鱼种血清生长激素水平，腹腔注射儿茶酚胺能神经毒素... 本文研究了儿茶酚胺类药物对草鱼生长激素水平的影响。腹腔注射儿茶酚胶合成抑制剂α－甲基－对－酪氨酸（α－ＭＰＴ，５μｇ／ｇｂ·Ｗ和５０μｇ／ｇ·ｂＷ）显著降低草鱼鱼种血清生长激素水平，腹腔注射儿茶酚胺能神经毒素６－羟多巴胺（６－ＨＯＤＡ，５μｇ／ｇｂ·Ｗ和５０μｇ／ｇ·ｂｗ也显著降低草鱼鱼种血清生长激素水平。阿卟吗啡（ＡＰＯ，７．１ｍｇ／Ｋｇｂ·ｗ和１２．５ｍｇ／Ｋｇ·ｂｗ）通过背大动脉插管注入草鱼体内后能显著提高草鱼血浆生长激素水平．腹腔注射去甲肾上腺素（ＮＥ，５０ｕｇ／ｇｂ·ｗ）２ｈ，６ｈ和２４ｈ后，草鱼鱼种血清生长激素水平明显低于对照组（ＶＥＨ）；腹腔注射β－肾上腺素能受体拮抗剂Ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ（５ｕｇ／ｇｂ·ｗ）或α－肾上腺素能受体增强剂Ｃｌｏｎｉｄｉｎｅ（５ｕｇ／ｇｂ·ｗ）对草鱼鱼种血清生长激素水平无显著影响，而同时注射ＮＥ＋Ｃｌｏｎｉｄｉｎｅ（５０μｇ／ｇｂ·ｗ，５μｇ／ｇｂ·ｗ）或ＮＥ＋Ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ（５０μｇ／ｇｂ·ｗ，５μｇ／ｇｂ·ｗ）２ｈ和６ｈ后，草鱼鱼种血清生长激素水平显著高于单独注射ＮＥ（５０μｇ／ｇｂ·Ｗ）的草鱼鱼种．结果表明：儿茶酚胺类药物也参与草鱼生长激素分泌的调节? 展开更多

关键词 草鱼 草鱼鱼种 生长激素 儿茶酚胺

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银鲫和建鲤血液外源生长激素代谢动力学 被引量：2

6

作者 肖东 陈松林 +2 位作者 严安生 陈细华 邓文涛 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1998年第S1期85-89,共5页

采用草鱼生长激素夹心式酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ），研究了重组鲤鱼生长激素（ｒｃＧＨ）在银鲫和建鲤血液中的代谢规律．银鲫每ｇ体质量腹腔注射ｒｃＧＨ１μｇ后，血清ＧＨ水平迅速升高，２ｈ时达峰值，８ｄ后血清ＧＨ水平仍... 采用草鱼生长激素夹心式酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ），研究了重组鲤鱼生长激素（ｒｃＧＨ）在银鲫和建鲤血液中的代谢规律．银鲫每ｇ体质量腹腔注射ｒｃＧＨ１μｇ后，血清ＧＨ水平迅速升高，２ｈ时达峰值，８ｄ后血清ＧＨ水平仍未恢复正常值．而每ｇ体质量腹腔注射ｒｃＧＨ０．２μｇ后，银鲫血清ＧＨ却较为缓慢升高，６ｈ后才达峰值，８ｄ后血清ＧＨ水平已恢复正常值．银鲫每ｇ体质量腹腔注射ｒｃＧＨ０．２，１，５μｇ后，仅０．２μｇ组在２ｄ后血清ＧＨ水平恢复正常值，其余两剂量组在８ｄ后仍未恢复正常值．建鲤每ｇ体质量腹腔注射ｒｃＧＨ０．５，１，５μｇ后，血清ＧＨ水平分别在第３，５。 展开更多

关键词 银鲫 建鲤 重组鲤鱼生长激素(rcgh) 代谢动力学

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17β-雌二醇对不同性腺发育时期鲤鱼生长激素分泌的影响 被引量：5

7

作者 李文笙 林浩然 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2003年第2期96-102,共7页

目的　以不同性腺发育阶段的雌性鲤鱼为材料 ,采用脑垂体碎片离体灌流孵育的方法 ,研究 17β 雌二醇对由神经内分泌因子—促性腺激素释放激素和促甲状腺素释放激素诱导的生长激素分泌的调节作用的季节性变化特点。方法与结果　用 10 - 8... 目的　以不同性腺发育阶段的雌性鲤鱼为材料 ,采用脑垂体碎片离体灌流孵育的方法 ,研究 17β 雌二醇对由神经内分泌因子—促性腺激素释放激素和促甲状腺素释放激素诱导的生长激素分泌的调节作用的季节性变化特点。方法与结果　用 10 - 8mol L和 10 - 1 0 mol L 17β 雌二醇对鲤鱼脑垂体碎片进行 10～ 12h的过夜孵育后 ,性腺处于退化期和发育期的的鲤鱼脑垂体对浓度依次为 10 - 9,10 - 8和 10 - 7mol L的促性腺激素释放激素类似物的脉冲刺激的反应性显著大于对照组 ,但在成熟期 17β 雌二醇作用组的反应性与对照组无显著性差异 ;经过同样浓度的 17β 雌二醇预孵育后 ,鲤鱼脑垂体碎片对浓度依次为 10 - 1 0 ,3× 10 - 8和 10 - 7mol L的促甲状腺素释放激素脉冲刺激的反应性也表现出季节性差异 ,反应性的增强作用表现为 :成熟期 >发育期 >退化期。结论　性类固醇激素具有调节脑垂体对刺激生长激素分泌的神经内分泌因子的反应性的作用 ,这种调节作用与鱼体的性腺发育状态有关 。 展开更多

关键词 17Β-雌二醇 性腺 发育时期 鲤鱼 生长激素 促性腺激素释放激素 调节作用

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重组鲤鱼生长激素的试验制备与纯化 被引量：1

8

作者 简清 白俊杰 +3 位作者 李英华 叶星 罗建仁 劳海华 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期55-58,共4页

采用高效表达鲤鱼生长激素的大肠杆菌基因工程菌株E .coli(pBVcGH8)进行发酵培养 ,经温度诱导可产生一分子量约为 3.6 3× 10 -2 0 g的特异表达产物 ,该表达产物主要以包涵体的形式存在 ,表达量占菌体总蛋白的 2 9.2 %。表达产物经... 采用高效表达鲤鱼生长激素的大肠杆菌基因工程菌株E .coli(pBVcGH8)进行发酵培养 ,经温度诱导可产生一分子量约为 3.6 3× 10 -2 0 g的特异表达产物 ,该表达产物主要以包涵体的形式存在 ,表达量占菌体总蛋白的 2 9.2 %。表达产物经包涵体收集、洗涤等初步纯化后 ,纯度可达 85 .0 %。再经变性与复性后 ,用阴离子交换层析进一步分离纯化 ,最终可获得纯度为 96 .0 %的重组鲤鱼生长激素。用该纯化过的重组鲤鱼生长激素注射罗非鱼 。 展开更多

关键词 鲤鱼生长激素 促生长作用 基因变组 制备 纯化

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E_2对鲤鱼生长激素分泌的影响:离体研究 被引量：4

9

作者 李文笙 林浩然 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期23-27,共5页

采用离体灌流孵育的方法研究了１７β－雌二醇（Ｅ２）对鲤鱼脑垂体生长激素（ＧＨ）分泌的影响．结果表明：１μｍｏｌ／ＬＥ２作用于性腺成熟期鲤鱼脑垂体碎片３０ｍｉｎ后，ＧＨ基础分泌显著提高，２ｈ后达到最大值，随后逐步下降，... 采用离体灌流孵育的方法研究了１７β－雌二醇（Ｅ２）对鲤鱼脑垂体生长激素（ＧＨ）分泌的影响．结果表明：１μｍｏｌ／ＬＥ２作用于性腺成熟期鲤鱼脑垂体碎片３０ｍｉｎ后，ＧＨ基础分泌显著提高，２ｈ后达到最大值，随后逐步下降，４ｈ后ＧＨ基础分泌水平与作用前无显著性差异．用Ｅ２（１μｍｏｌ／Ｌ）进行１０～１２ｈ的过夜孵育，ＧＨ的基础分泌无显著性变化，但影响了脑垂体对ＬＨＲＨ－Ａ和ＴＲＨ刺激的反应性，对前者有抑制作用。 展开更多

关键词 17Β-雌二醇 生长激素 离体实验 鲤鱼

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鲤鱼SOCS-4基因克隆、鉴定及表达模式分析 被引量：1

10

作者 倪砚 高谦 +5 位作者 刘德立 韦友传 付建平 胡炜 汪亚平 聂品 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期541-545,共5页

细胞因子是调节机体免疫和神经内分泌功能的生物活性物质，其信号的激发、放大和持续在时间和空间上都受到严格调控 。细胞因子信号传导抑制因子（Suppressor of cytokine signaling．socs）是细胞因子信号通路的负调节因子，通过负反... 细胞因子是调节机体免疫和神经内分泌功能的生物活性物质，其信号的激发、放大和持续在时间和空间上都受到严格调控 。细胞因子信号传导抑制因子（Suppressor of cytokine signaling．socs）是细胞因子信号通路的负调节因子，通过负反馈抑制细胞因子的信号传递，防止过度的信号反应干扰机体代谢平衡和细胞功能 . 展开更多

关键词 基因克隆 表达模式 细胞因子 鲤鱼 鉴定 生物活性物质 信号传导 机体免疫

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年龄对促黄体素释放激素类似物(LHRH-A)刺激的和多巴胺能药物抑制的鲤鱼促性腺激素(GtH)分泌的影响 被引量：3

11

作者 王黎 林浩然 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期286-289,共4页

关键词 鲤鱼 促性腺激素 多巴胺能药物 LHRH-A 年龄

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转生长激素基因鲤鱼的生长研究 被引量：2

12

作者 闫学春 孙孝文 +1 位作者 梁利群 沈俊宝 《水产学杂志》 CAS 1997年第1期34-37,共4页

本文报导了生长激素基因对鲤鱼生长影响的研究。经池塘对照实验表明，转生长激素基因鲤鱼的快速生长效应比正常鲤鱼明显，而且由转生长激素基因阳性性成熟鲤鱼经人工催产繁殖的子一代群体中，仍表现出快速生长的特性、这一结果，为能获... 本文报导了生长激素基因对鲤鱼生长影响的研究。经池塘对照实验表明，转生长激素基因鲤鱼的快速生长效应比正常鲤鱼明显，而且由转生长激素基因阳性性成熟鲤鱼经人工催产繁殖的子一代群体中，仍表现出快速生长的特性、这一结果，为能获得一个转外源生长激素基因并具快速生长特性的遗传稳定的转基固鲤鱼核心群体提供了可靠的数据。 展开更多

关键词 鲤鱼 生长激素基因 转基因 生长性能

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转生长激素基因工程鲤鱼研究 被引量：2

13

作者 孙孝文 沈俊宝 +1 位作者 梁利群 闫学春 《水产学杂志》 CAS 1995年第1期1-6,共6页

约１００００余尾注射牛和羊生长激素基因的鲤鱼已被生产出来，并从中筛选出生长速度快且整合了外源基因的个体１４３尾，也证明外源基因可传递给子代同时子代也具有快速生长的特征。建立了把外源基因直接注入受精卵的方法，确定了注入... 约１００００余尾注射牛和羊生长激素基因的鲤鱼已被生产出来，并从中筛选出生长速度快且整合了外源基因的个体１４３尾，也证明外源基因可传递给子代同时子代也具有快速生长的特征。建立了把外源基因直接注入受精卵的方法，确定了注入外源基因的最佳时期。 展开更多

关键词 生长激素基因 鲤鱼 转基因动物

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鲤鱼生长激素和对虾白斑病毒囊膜蛋白VP28的融合表达及功能研究 被引量：5

14

作者 韩建山 龙燕 +3 位作者 孟小林 徐进平 鲁伟 王健 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期308-313,共6页

鲤鱼生长激素GH是鲤鱼生长腺体分泌并促进鲤鱼生长的一种分泌蛋白。对虾白斑综合病毒(WSSV)VP28蛋白为囊膜蛋白,是病毒感染宿主的必需因子。根据gh和vp28的上下游序列,分别设计合成两对引物,PCR扩增gh和vp28基因,将基因gh和vp28按先后... 鲤鱼生长激素GH是鲤鱼生长腺体分泌并促进鲤鱼生长的一种分泌蛋白。对虾白斑综合病毒(WSSV)VP28蛋白为囊膜蛋白,是病毒感染宿主的必需因子。根据gh和vp28的上下游序列,分别设计合成两对引物,PCR扩增gh和vp28基因,将基因gh和vp28按先后次序融合后插入穿梭质粒pPIC6αC多克隆位点,构建成重组分泌表达穿梭质粒pPIC6αC-(gh+vp28),用Bstx1单酶切穿梭质粒pPIC6αC-(gh+vp28)线形化,转化毕赤酵母X-33。重组菌株30℃甲醇诱导,实现在酵母中的融合分泌表达,获得融合蛋白。表达产物经SDS-PAGE检测和Western Blot印迹鉴定,显示与预期大小66kD相吻合的融合蛋白带。用Ni2+-柱纯化后的基因工程蛋白注射鳌虾进行蛋白生物功能测试,结果表明该蛋白获得了促鳌虾生长和抗WSSV感染的双重功效。 展开更多

关键词 鲤鱼生长激素(gh) 对虾白斑综合病毒(WSSV)VP28 gh+vp28 毕赤酵母 促生长 抗病毒

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