抗体F(ab′)_2片段靶向的载多柔比星免疫毫微粒的构建及其抗肝癌作用 被引量：3

1

作者 王霞 刘晓波 +2 位作者 蔡美英 黎光 魏大鹏 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期176-180,共5页

目的　构建抗体F(ab′) 2 片段靶向的载药免疫毫微粒 ;评价F(ab′) 2 片段免疫毫微粒对肿瘤的特异结合性及杀伤作用。方法　采用异型双功能交联剂琥珀酰亚胺基 3 (2 吡啶二硫 )丙酸酯 (SPDP)将抗人肝癌单抗HAb18或对照抗体 4E3的F(ab... 目的　构建抗体F(ab′) 2 片段靶向的载药免疫毫微粒 ;评价F(ab′) 2 片段免疫毫微粒对肿瘤的特异结合性及杀伤作用。方法　采用异型双功能交联剂琥珀酰亚胺基 3 (2 吡啶二硫 )丙酸酯 (SPDP)将抗人肝癌单抗HAb18或对照抗体 4E3的F(ab′) 2 片段与多柔比星 (ADR)人血清白蛋白毫微粒 (ADR HAS NP)共价交联构建抗体F (ab′) 2 片段靶向的载药免疫毫微粒 (HAb18F(ab′) 2 ADR HSA NP ,4E3F (ab′) 2 ADR HSA NP) ;采用玻片凝集试验 ,免疫荧光染色实验确定F(ab′) 2 片段是否结合在毫微粒表面 ;采用花环形成实验 ,花环形成阻断实验 ,扫描电镜分别从光镜、电镜水平观察F(ab′) 2 片段免疫毫微粒是否同人肝癌细胞株SMMC 772 1特异性结合 ;采用MTT比色分析法研究F(ab′) 2 片段免疫毫微粒的体外细胞毒作用 ;采用皮下荷人肝癌裸鼠模型 ,经瘤体注射观察免疫毫微粒的抗人肝癌作用。结果　F (ab′) 2 片段免疫毫微粒圆球状 ,粒径1 2 μm左右 ,免疫荧光染色阳性而ADR HSA NP为阴性 ,提示F (ab′) 2 片段已偶联到ADR HSA NP表面 ;HAb18F(ab′) 2 ADR HSA NP能有效结合于人肝癌细胞株SMMC 772 1,该结合能被HAb18抗体的F(ab′) 2片段阻断 ,未见该免疫毫微粒与对照细胞 (SW 1116)有效结合 ,这些结果提示 ,HAb18F(ab′) 展开更多

关键词 抗体f(ab')2片段 多柔比星 ADR 白蛋白毫微粒 肝癌 载体

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抗竹叶青蛇毒抗体F(ab′)2的制备 被引量：6

2

作者 郑颖 张连江 +2 位作者 范泉水 邱薇 李作生 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期269-272,共4页

目的:制备特异性强、高纯度的抗竹叶青蛇毒抗体F(ab′)2。方法:以竹叶青蛇毒为免疫原免疫马,试血效价达到要求后,从免疫马血浆中先提取IgG,然后酶解、过疏水柱后得到F(ab′)2片段,以免疫扩散实验检测抗体F(ab′)2片段的特异性,以小鼠中... 目的:制备特异性强、高纯度的抗竹叶青蛇毒抗体F(ab′)2。方法:以竹叶青蛇毒为免疫原免疫马,试血效价达到要求后,从免疫马血浆中先提取IgG,然后酶解、过疏水柱后得到F(ab′)2片段,以免疫扩散实验检测抗体F(ab′)2片段的特异性,以小鼠中和试验测定其中和竹叶青蛇毒的能力。结果:纯化得到的F(ab′)2活性片段纯度可达90%;F(ab′)2冻干品与竹叶青蛇毒在8∶1时出现免疫沉淀线,在20∶1时可保护小鼠100%存活。结论:纯化得到的抗体F(ab′)2活性片段对竹叶青蛇毒具有较好的中和能力。 展开更多

关键词 竹叶青蛇毒 抗体 f(ab′)2 制备 冻干

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抗哇巴因多克隆抗体F(ab)_2片段的研制及鉴定 被引量：2

3

作者 张明娟 吕卓人 +2 位作者 袁育康 贺浪冲 王颢 《西安医科大学学报》 CAS CSCD 2000年第6期585-586,605,共3页

目的　用胃蛋白酶酶解抗哇巴因多克隆抗体 ,制备出F(ab) 2 片段 ,为改型抗体的研究提供依据。方法　免疫家兔制备出抗哇巴因多克隆抗体 ,并用胃蛋白酶分别在不同的酶解条件下消化抗体 ,继之用高效液相排阻色谱法 (HPSEC)对其进行分析、... 目的　用胃蛋白酶酶解抗哇巴因多克隆抗体 ,制备出F(ab) 2 片段 ,为改型抗体的研究提供依据。方法　免疫家兔制备出抗哇巴因多克隆抗体 ,并用胃蛋白酶分别在不同的酶解条件下消化抗体 ,继之用高效液相排阻色谱法 (HPSEC)对其进行分析、纯化 ,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测、鉴定其活性。结果　用胃蛋白酶 2mg/1 0 0mg抗哇巴因多克隆抗体 ,消化 1 8h ,反应体系的 pH3 0时 ,可获得F(ab) 2 片段。结论　用胃蛋白酶酶解抗哇巴因多克隆抗体是研制出有活性的F(ab) 2 展开更多

关键词 f(ab)2片段 研制 鉴定 抗哇巴因多克隆抗体

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抗人肝癌mAb HAb18F(ab′)_2半成品的制备与质量控制 被引量：1

4

作者 余晓玲 米力 +1 位作者 陈志南 冯强 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第2期161-163,共3页

目的制备符合人用标准的抗人肝癌mAbHAb18F(ab′)2 片段。方法用胃蛋白酶消化经硫酸铵盐析的腹水抗体 ,然后在快速蛋白液相色谱(FPLC)上用Phenyl SepharoseHP疏水柱纯化并进行质检。结果经Phenyl SepharoseHP疏水柱纯化后 ,F(ab′)2 片... 目的制备符合人用标准的抗人肝癌mAbHAb18F(ab′)2 片段。方法用胃蛋白酶消化经硫酸铵盐析的腹水抗体 ,然后在快速蛋白液相色谱(FPLC)上用Phenyl SepharoseHP疏水柱纯化并进行质检。结果经Phenyl SepharoseHP疏水柱纯化后 ,F(ab′)2 片段的纯度可达98.8% ;回收率大于50 % ;免疫活性为1∶8000;细菌、热原质检测均呈阴性。结论本制备工艺周期短、易于质控 ,适宜进行中试放大及半成品生产。 展开更多

关键词 抗人肝癌 单克隆抗体 片段抗体 制备 质量控制

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无花果酶制备抗卵巢上皮癌单抗F(ab')_2片段 被引量：2

5

作者 李小平 钱和年 +3 位作者 冯捷 王建六 李文锦 付天云 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期232-232,共1页

无花果酶制备抗卵巢上皮癌单抗Ｆ（ａｂ）２片段①李小平钱和年冯捷王建六②李文锦付天云（北京医科大学人民医院妇科肿瘤研究室，北京１０００３４）Ｆ（ａｂ）２制备多采用胃蛋白酶（Ｐｅｐｓｉｎ），但有些抗体对其有抗性，本室... 无花果酶制备抗卵巢上皮癌单抗Ｆ（ａｂ）２片段①李小平钱和年冯捷王建六②李文锦付天云（北京医科大学人民医院妇科肿瘤研究室，北京１０００３４）Ｆ（ａｂ）２制备多采用胃蛋白酶（Ｐｅｐｓｉｎ），但有些抗体对其有抗性，本室曾用其制备ＣＯＣ１６６－９和ＣＯＣ... 展开更多

关键词 抗卵巢上皮癌 单克隆抗体 f(ab′)2 制备 fICIN

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单抗TIGTC-Ⅲ片段F(ab′)_2的制备及其放射免疫显像研究 被引量：1

6

作者 施乐华 杨家和 +4 位作者 崔贞福 吴孟超 潘文舟 孔令山 王明库 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期35-36,39,共3页

目的：将抗人原发性肝癌（ＰＬＣ）单抗ＴＩＧＴＣⅢ，用胃蛋白酶法消化成Ｆ（ａｂ′）２片段，标记１３１Ｉ后进行裸鼠人肝癌移植瘤的体内定位研究。方法：采用胃蛋白酶消化法，进行裸鼠体内核素显像。结果：消化产率为３１７％
... 目的：将抗人原发性肝癌（ＰＬＣ）单抗ＴＩＧＴＣⅢ，用胃蛋白酶法消化成Ｆ（ａｂ′）２片段，标记１３１Ｉ后进行裸鼠人肝癌移植瘤的体内定位研究。方法：采用胃蛋白酶消化法，进行裸鼠体内核素显像。结果：消化产率为３１７％±２４％，经细胞结合实验证明Ｆ（ａｂ′）２具有良好的免疫活性，抗体片段进入裸鼠体内后，与完整抗体比，进入肿瘤的速度快，生物学分布特异性高，定位指数上升，血清本底下降迅速，生物半衰期明显缩短。结论：Ｆ（ａｂ′）２与全抗体比较可使成像时间提前。 展开更多

关键词 单克隆抗体 f(ab')2片段 放射免疫显像 肝肿瘤

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Bcr-abl阴性骨髓增殖性疾病患者的jak2v617f点突变与socs3基因表达的相关性 被引量：1

7

作者 王冬梅 潘崚 +3 位作者 张俊棉 李英华 王红芬 王修乾 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期479-483,共5页

本研究探讨bcr-abl阴性MPD患者中的jak2v617f点突变与socs3基因表达的相关性。选择62例bcr-abl阴性MPD患者(PV26例、ET26例、IMF9例、CNL1例)为研究组,CML20例、AL10例、健康志愿者15名为对照组;用AS-PCR检测各组患者jak2v617f的突变情... 本研究探讨bcr-abl阴性MPD患者中的jak2v617f点突变与socs3基因表达的相关性。选择62例bcr-abl阴性MPD患者(PV26例、ET26例、IMF9例、CNL1例)为研究组,CML20例、AL10例、健康志愿者15名为对照组;用AS-PCR检测各组患者jak2v617f的突变情况,PCR产物纯化后测序以发现突变患者;用RT-PCR方法检测各组socs3 mRNA的表达情况;分析bcr-abl阴性MPD患者中jak2v617f点突变阳性组及阴性组之间socs3 mRNA表达的相关性。结果发现,在62例bcr-abl阴性MPD患者中44例jak2v617f突变阳性(PV23例、ET15例、IMF5例、CNL1例),18例突变阴性。对照组均为阴性。44例突变阳性组中39例表达socs3 mRNA。18例突变阴性组中10例表达socs3 mRNA。jak2v617f突变阳性组与阴性组患者的socs3 mRNA表达率有显著性差异(χ2值=8.44,p<0.005);jak2v617f突变阳性组与阴性组两组患者的socs3 mRNA表达水平也有显著性差异(t值2.167,p=0.035)。结论bcr-abl阴性MPD患者中jak2v617f点突变阳性与阴性组socs3 mRNA的表达率及表达水平均有显著性差异。 展开更多

关键词 骨髓增殖性疾病 JAK2V617f socs3基因 bcr—ab1基因 基因突变

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抗汉坦病毒单克隆抗体F(ab')_2的制备及其纯度和活性鉴定

8

作者 赵茜 徐志凯 +3 位作者 王海涛 薛小平 张芳琳 白文涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1998年第2期132-134,共3页

利用木瓜蛋白酶分别制备了抗汉坦病毒鼠源性单克隆抗体（ｍＡｂ）３Ｇ１和３Ｄ８Ｆ（ａｂ′）２片段。通过ＷａｔｅｒＤＥＡＥ４０ＨＲ阴离子交换色谱柱纯化后，非还原型ＳＤＳＰＡＧＥ呈现单一条带，相对分子质量（Ｍｒ）约１００... 利用木瓜蛋白酶分别制备了抗汉坦病毒鼠源性单克隆抗体（ｍＡｂ）３Ｇ１和３Ｄ８Ｆ（ａｂ′）２片段。通过ＷａｔｅｒＤＥＡＥ４０ＨＲ阴离子交换色谱柱纯化后，非还原型ＳＤＳＰＡＧＥ呈现单一条带，相对分子质量（Ｍｒ）约１０００００。两种Ｆ（ａｂ′）２片段均具有良好的血凝抑制活性。 展开更多

关键词 汉坦病毒 单克隆抗体 制备 鉴定 f(ab')2片段

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鉴定单克隆抗体F(ab′)_2段及其结合物抗体活性方法的建立

9

作者 杨连君 隋延仿 +3 位作者 陈志南 贺占国 张文 成继民 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期722-723,共2页

关键词 免疫组织化学 抗体单克隆 f(ab’)2 鉴定

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人单核细胞趋化因子受体5(CCR5)N-端膜外第一襻特异抗体F(ab′)_2的制备及鉴定

10

作者 张莉 郭葆玉 +1 位作者 苗红 张冉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期236-239,共4页

目的 :研究人 β趋化因子受体 5 (huCCR5 )NH2 端膜外第一襻特异抗体F(ab′) 2 的制备及鉴定方法。方法 :计算机分析定位超基因家族中同源顺序最低的结构域NH2 端膜外第一襻 ,PCR扩增出该基因片段后克隆到原核表达载体pGEX 1N中 ,经测... 目的 :研究人 β趋化因子受体 5 (huCCR5 )NH2 端膜外第一襻特异抗体F(ab′) 2 的制备及鉴定方法。方法 :计算机分析定位超基因家族中同源顺序最低的结构域NH2 端膜外第一襻 ,PCR扩增出该基因片段后克隆到原核表达载体pGEX 1N中 ,经测序鉴定正确后 ,在E coli中表达 ,纯化后免疫新西兰白兔。经A蛋白 SepharoseCL 4B亲和层析纯化后 ,用胃蛋白酶消化IgG ,经S 2 0 0凝胶过滤柱分离制备F(ab′) 2 。结果 :经还原和非还原聚丙烯酰胺凝胶电泳和ELISA阻断实验分析证明得到抗huCCR5NH2 端的特异性抗体。结论 :这一简捷快速的特定功能结构域抗体F(ab′) 2 的制备方法 ,对研究该基因在体内的表达及生物学功能提供了重要的实验材料 ,同时也对超基因家族中亚家族特异抗体研制提供了一种研究思路和方法。 展开更多

关键词 人单核细胞趋化因子受体5 融合蛋白 抗体 制备

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CX_2(NO_2)_2(X=H,F,C1)分子旋转势和构型稳定性的ab initio研究

11

作者 吴念慈 董南 +2 位作者 蔡国强 俞庆森 宗汉兴 《杭州大学学报（自然科学版）》 CSCD 1992年第2期172-178,共7页

本文用ab initio计算方法,采用STO-3G基组,对二硝基卤代甲烷CH_2(NO_2)_3(1),CF_2(NO_2)_2(2);CCl_2(NO_2)_2(3)等分子作了单点计算,研究其旋转势能.全构型优化研究了五个具有对称性构型的结构和稳定性,并作了理论分析和探讨.

关键词 分子旋转势 硝基卤代甲烷 稳定性

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抗黄曲霉毒素单克隆抗体F(ab')2片段的制备与活性 被引量：2

12

作者 雷佳文 李培武 +3 位作者 张奇 张兆威 丁小霞 张文 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期317-320,共4页

为剧毒靶标(黄曲霉毒素)绿色分析提供高效抗体,在已有抗黄曲霉毒素杂交瘤细胞株1C11的基础上,通过小鼠腹水法制备单克隆抗体,经胃蛋白酶酶解,制备F(ab')2片段,发现在优化条件37℃、pH4.1柠檬酸缓冲液中酶解4.5h,可高效制备F(ab'... 为剧毒靶标(黄曲霉毒素)绿色分析提供高效抗体,在已有抗黄曲霉毒素杂交瘤细胞株1C11的基础上,通过小鼠腹水法制备单克隆抗体,经胃蛋白酶酶解,制备F(ab')2片段,发现在优化条件37℃、pH4.1柠檬酸缓冲液中酶解4.5h,可高效制备F(ab')2片段。通过酶联免疫吸附法(ELISA)比较了抗体片段与原始抗体的识别活性,发现F(ab')2片段效价达到1∶320 000,是原抗体效价的1.5倍;灵敏度(IC50)为8.7pg/mL,保持了原抗体的抗原结合能力。 展开更多

关键词 黄曲霉毒素 单克隆抗体 f(ab')2片段 活性

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微囊藻毒素多克隆抗体的纯化及F(ab′)_2片段的制备 被引量：2

13

作者 纪炜 刘媛 刘贤进 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期641-644,共4页

为制备微囊藻毒素(MCYST-LR)多克隆抗体F(ab′)2片段的方法。采用Protein G亲和柱纯化微囊藻毒素多克隆抗体,经木瓜蛋白酶在温和条件下酶切抗体,利用DEAE-52离子交换树脂柱分离抗体酶切片段,获得F(ab′)2片段。SDS-PAGE分析表明,MCYST-L... 为制备微囊藻毒素(MCYST-LR)多克隆抗体F(ab′)2片段的方法。采用Protein G亲和柱纯化微囊藻毒素多克隆抗体,经木瓜蛋白酶在温和条件下酶切抗体,利用DEAE-52离子交换树脂柱分离抗体酶切片段,获得F(ab′)2片段。SDS-PAGE分析表明,MCYST-LR多克隆抗体得到有效纯化,木瓜蛋白酶酶切后出现明显F(ab′)2片段的对应谱带;利用紫外分光光度计法测得F(ab′)2片段的产率为30.6%。采用木瓜蛋白酶法成功制备了MCYST-LR多克隆抗体的F(ab′)2片段。 展开更多

关键词 多克隆抗体 木瓜蛋白酶 离子交换色谱 f(ab′)2片段

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新型基因工程抗CD_(20)抗体片段F(ab’)_2的构建、表达和活性测定 被引量：2

14

作者 郑梦杰 范冬梅 +3 位作者 熊冬生 彭晖 朱祯平 杨纯正 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第9期13-17,共5页

从抗CD2 0 Fab’表达载体上利用PCR方法扩增并修饰其重链恒定区CH1C 末端的DNA序列 ,然后将修饰后的CH1DNA序列重组到原Fab’表达载体中 ,构建成抗CD2 0抗体片段F(ab’) 2 表达载体。将该载体转化宿主大肠杆菌 16C9,实现了抗CD2 0 抗体... 从抗CD2 0 Fab’表达载体上利用PCR方法扩增并修饰其重链恒定区CH1C 末端的DNA序列 ,然后将修饰后的CH1DNA序列重组到原Fab’表达载体中 ,构建成抗CD2 0抗体片段F(ab’) 2 表达载体。将该载体转化宿主大肠杆菌 16C9,实现了抗CD2 0 抗体片段F(ab’) 2 在工程菌中的可溶性分泌表达。经分离纯化获得具有与抗原CD2 0 特异结合的F(ab’) 2 活性片段。竞争性免疫荧光实验的结果表明 :抗CD2 0 F(ab’) 2 片段具有比Fab’更强的竞争性抑制亲本鼠源性单克隆抗体HI4 7与Daudi细胞表面CD2 0 相结合的能力 ;用MTT法检测所得到的数据说明 :F(ab’) 2 展开更多

关键词 基因工程抗体 嵌合抗体 f(ab′)2 CD20 B-淋巴细胞 PCR B淋巴细胞瘤 DNA 临床治疗 活性测定 表达 构建

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FPLC纯化单克隆抗体（Fab＇）_2片段 被引量：1

15

作者 刘智广 陈志南 +2 位作者 刘成刚 朱力 王茜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1994年第3期51-56,共6页

作者采用ＤＥＡＥ－４０ＨＲ阴离子交换色谱柱，在Ｗａｔｅｒｓ６５０Ｅ快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）建立了抗肝癌单克隆抗体（ＨＡｂ１８）Ｆ（ａｂ＇）２片段的快速纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ用胃蛋白酶消化１８ｈ后，上阴离子... 作者采用ＤＥＡＥ－４０ＨＲ阴离子交换色谱柱，在Ｗａｔｅｒｓ６５０Ｅ快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）建立了抗肝癌单克隆抗体（ＨＡｂ１８）Ｆ（ａｂ＇）２片段的快速纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ用胃蛋白酶消化１８ｈ后，上阴离子交换色谱柱纯化，用ｐＨ７．５１０ｍｍｏｌ／ＬＰＢ洗脱，即得到纯化的Ｆ（ａｂ＇）２．一次纯化周期仅需２５ｍｉｎ，一次上样量１２０～１６０ｎｇ蛋白，Ｆ（ａｂ＇）２得率为３４％，回收率为５１％。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定纯度大于９５％，免疫荧光法测定活性为１：４０００．该法操作简单、快速、实用性强，不需要高档次的色谱仪，只要有一台核酸／蛋白检测仪便可进行纯化，是实验室纯化Ｆ（ａｂ＇）２的理想方法． 展开更多

关键词 抗体.单克隆 f(ab')₂片段 纯化 离子交换色谱法

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纸纤维固定木瓜蛋白酶的研究及应用 被引量：2

16

作者 易喻 李慧娟 +3 位作者 陈建澍 梅建凤 朱克寅 应国清 《浙江工业大学学报》 CAS 2013年第2期147-151,共5页

利用纸纤维为载体,制备高活性的固定化木瓜蛋白酶并应用于抗HCG抗体的水解.利用戊二醛交联法,制备固定化木瓜蛋白酶,并通过一系列优化,得到最佳固定化条件,包括pH﹑给酶量﹑温度﹑戊二醛体积分数,将制备的固定化木瓜蛋白酶应用于抗HCG... 利用纸纤维为载体,制备高活性的固定化木瓜蛋白酶并应用于抗HCG抗体的水解.利用戊二醛交联法,制备固定化木瓜蛋白酶,并通过一系列优化,得到最佳固定化条件,包括pH﹑给酶量﹑温度﹑戊二醛体积分数,将制备的固定化木瓜蛋白酶应用于抗HCG抗体水解并制备F(ab′)2片段.研究表明:反应温度为40℃时,固定化酶在pH 5.0,0.01mol/L的醋酸缓冲液条件下,给酶量为46mg/g载体,戊二醛体积分数为0.01%时,固定化酶的酶活达到最高19 250U/g,相对于优化前1 940U/g提高了近10倍,成功应用于抗HCG抗体水解制备F(ab′)2片段:经SDS-PAGE电泳检测,F(ab′)2片段达到电泳纯.ELISA反应检测表明:片段仍保留较高的活性,效价为1∶12 000. 展开更多

关键词 抗HCG抗体 固定化酶 木瓜蛋白酶 f(ab’)2片段 ELISA 纸纤维

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抗血小板单克隆抗体片段的抗栓效应研究 被引量：1

17

作者 邵波静 赵益明 +1 位作者 沈飞 阮长耿 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期269-271,共3页

目的 :研究抗血小板膜糖蛋白IIIa(GPIIIa)单克隆抗体 (mAb)SZ 2 1F(ab′) 2 片段的抗血栓效应。方法 :用木瓜蛋白酶在偏酸条件下 ( pH5 .5 )消化 2 0h ,经DEAE 5 2NaCl梯度洗脱消化产物 ,以得到F(ab′) 2 片段。收集产物经SDS PAGE鉴定 ... 目的 :研究抗血小板膜糖蛋白IIIa(GPIIIa)单克隆抗体 (mAb)SZ 2 1F(ab′) 2 片段的抗血栓效应。方法 :用木瓜蛋白酶在偏酸条件下 ( pH5 .5 )消化 2 0h ,经DEAE 5 2NaCl梯度洗脱消化产物 ,以得到F(ab′) 2 片段。收集产物经SDS PAGE鉴定 ,并通过ELISA和血小板聚集抑制试验 ,观察所获F(ab′) 2 片段免疫原活性和抗栓活性。结果 :该法制备F(ab′) 2 片段的得率为 6 0 .32 % ;酶免法测定其效价为 0 .8× 10 -9mol/L ;体外血小板聚集抑制半数有效剂量 (ED5 0 )为 3.395mg/L。F(ab′) 2 片段与血小板的结合性及对血小板聚集功能的抑制效果均高于完整的IgG。 结论 :利用木瓜蛋白酶制备的抗血小板mAbSZ 2 1的F(ab′) 2 片段 ,产率高且其抗栓活性与免疫原活性均优于完整的mAbIgG ,为mAbSZ 2 展开更多

关键词 血小板 单克隆抗体 片段 抗栓效应

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致猪水肿病大肠埃希菌多重PCR检测方法的建立及应用 被引量：5

18

作者 李伟杰 赵耘 +3 位作者 魏财文 岂晓鑫 田野 蒋桃珍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第3期537-543,共7页

本研究旨在建立一种快速鉴定致猪水肿病大肠埃希菌的多重PCR检测方法。分别针对大肠埃希菌16SrDNA、志贺毒素Stx2eA亚基和菌毛F18ab A亚基保守序列设计合成3对特异性引物,优化多重PCR反应条件,并进行特异性和敏感性检测。结果显示,阳性... 本研究旨在建立一种快速鉴定致猪水肿病大肠埃希菌的多重PCR检测方法。分别针对大肠埃希菌16SrDNA、志贺毒素Stx2eA亚基和菌毛F18ab A亚基保守序列设计合成3对特异性引物,优化多重PCR反应条件,并进行特异性和敏感性检测。结果显示,阳性对照菌株扩增产物大小分别为1 062、733和313bp。特异性和灵敏性检测结果表明,与肠炎沙门菌、多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、支气管败血波氏杆菌和猪链球菌等猪常见致病菌均无交叉反应;菌体直接扩增法最低检出量为1 875CFU。利用建立的多重PCR检测方法对分离收集的128株大肠埃希菌进行鉴定,得到36株致猪水肿病大肠埃希菌,其中30株既有菌毛F18ab又产志贺毒素Stx2e,另外6株仅产志贺毒素Stx2e。结果表明,本试验所建立的多重PCR检测方法对致猪水肿病大肠埃希菌的快速诊断和流行病学调查具有一定的应用价值。 展开更多

关键词 猪水肿病 大肠埃希菌 志贺毒素Stx2e 菌毛f18ab

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偶联单克隆抗体的聚氨酯膜在基因定位递送中的应用 被引量：1

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作者 张琳华 宋存先 +2 位作者 王满燕 杨菁 唐丽娜 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期350-354,i0002,共6页

目的研究偶联单克隆抗体胶原涂覆的聚氨酯膜在基因定位递送中的应用。方法将抗腺病毒纤突的单克隆F(ab)’2抗体通过巯基反应共价键偶联到胶原涂覆的聚氨酯膜上,再通过抗体-抗原特异性反应携带病毒基因载体,得到局部定位的基因运载体系... 目的研究偶联单克隆抗体胶原涂覆的聚氨酯膜在基因定位递送中的应用。方法将抗腺病毒纤突的单克隆F(ab)’2抗体通过巯基反应共价键偶联到胶原涂覆的聚氨酯膜上,再通过抗体-抗原特异性反应携带病毒基因载体,得到局部定位的基因运载体系。用报告基因进行平滑肌细胞(A10细胞)的体外转染实验和模拟生理条件的稳定性实验。结果体外细胞转染实验显示,该方法携带的载基因病毒在A10细胞中实现了高效、高度定位的基因表达。模仿生理条件的体外稳定性实验表明,通过抗体结合在PU膜上的载基因病毒可缓慢持续地释放出来,有效地转染A10细胞达20d左右。结论这种经抗病毒抗体连接固定于胶原涂覆聚氨酯膜的病毒能很好地局部定位递送基因,可望用于临床基因治疗。 展开更多

关键词 聚氨酯膜 抗腺病毒纤突的单克隆f(ab)’2抗体 基因载体 定位递送

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绿色无毒黄曲霉毒素B_1免疫检测方法 被引量：6

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作者 张勋 匡华 +3 位作者 徐丽广 马伟 刘丽强 胥传来 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1293-1297,共5页

建立了一种基于抗独特型抗体的绿色无毒的ELISA方法，并用于检测面粉中黄曲霉毒素B1。通过酶解2种抗黄曲霉毒素小鼠单克隆抗体（11A9和1G3）制备F（db’）2片段，并将其免疫新西兰大白兔制备抗独特型抗体。最终得到两种抗独特型抗体，... 建立了一种基于抗独特型抗体的绿色无毒的ELISA方法，并用于检测面粉中黄曲霉毒素B1。通过酶解2种抗黄曲霉毒素小鼠单克隆抗体（11A9和1G3）制备F（db’）2片段，并将其免疫新西兰大白兔制备抗独特型抗体。最终得到两种抗独特型抗体，并对抗独特型抗体和AFB。进行相关性分析。通过实际样品添加回收，其批内回收率为115．60％～121．88％，变异系数在5％以内；而批间回收率为111．89％～126．98％，变异系数低于8％。分析结果准确可靠，表明此无毒绿色ELISA是一种安全可靠的AFB1分析方法。 展开更多

关键词 黄曲霉毒素B1 f(ab’)2片段 抗独特型抗体 无毒ELISA

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