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结核分枝杆菌分泌蛋白早期分泌性抗原6(ESAT-6)的免疫学性质及其在新型疫苗中作用的研究进展 被引量:2
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作者 李玉洁 余海燕 +1 位作者 杨雨婷 杨国平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期89-94,共6页
早期分泌性抗原6(ESAT-6)是结核分枝杆菌(MTB)关键的毒力因子,可通过抑制巨噬细胞的吞噬杀菌功能与自噬反应抵抗机体对MTB的清除,从而减弱机体对MTB感染的免疫防御功能。此外,ESAT-6诱导的巨噬细胞的凋亡与固有免疫细胞的大量坏死可促进... 早期分泌性抗原6(ESAT-6)是结核分枝杆菌(MTB)关键的毒力因子,可通过抑制巨噬细胞的吞噬杀菌功能与自噬反应抵抗机体对MTB的清除,从而减弱机体对MTB感染的免疫防御功能。此外,ESAT-6诱导的巨噬细胞的凋亡与固有免疫细胞的大量坏死可促进MTB的扩散、定植,引发MTB的全身感染。ESAT-6还可抑制Th1细胞的保护性免疫反应从而抑制相关促炎细胞因子的分泌,引发机体免疫功能的紊乱,加速MTB感染进程。在这一感染过程中,ESAT-6所具备的高度免疫原性使其可作为优势抗原用于新型结核病(TB)疫苗的研制,具有广阔的发展前景。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌(MTB) 早期分泌性抗原6(esat-6) 自噬 凋亡 优势抗原 综述
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PstS1-ESAT-6抗原血清学和γ-干扰素释放试验辅助诊断结核病的价值 被引量:5
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作者 何秀云 黄香玉 +5 位作者 朱传智 陈红兵 张翠英 肖漓 高钰 孔祥瑞 《中国防痨杂志》 CAS 2016年第10期805-812,共8页
目的分析重组融合蛋白PstS1-ESAT-6抗原血清学和r干扰素释放试验辅助诊断结核病的潜在价值。方法选取40只无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级BALB/c小鼠和18只SPF级豚鼠,均分别注射卡介苗(BCG)或热灭活结核分枝杆菌。... 目的分析重组融合蛋白PstS1-ESAT-6抗原血清学和r干扰素释放试验辅助诊断结核病的潜在价值。方法选取40只无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级BALB/c小鼠和18只SPF级豚鼠,均分别注射卡介苗(BCG)或热灭活结核分枝杆菌。选取解放军第三0九医院全军结核病研究所于2012年3—8月收治入院的129例结核病患者(结核病组)、54例非结核性肺部相关疾病患者(非结核病组)和194名健康者(健康对照组)作为研究对象。研究对象均采集外周静脉血。外周血单个核细胞(PBMC)和免疫的小鼠脾淋巴细胞经重组融合蛋白PstS1-ESAT-6体外刺激,应用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测经抗原刺激后释放r干扰素(IFN-γ)的效应T淋巴细胞即斑点形成细胞(SFC);应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血血浆和免疫小鼠血清抗重组融合蛋白PstS1-ESAT-6的IgG;应用孟都法(Mantoux)检测健康者BCG-PPD皮试、免疫豚鼠BCG-PPD皮试及重组融合蛋白PstS1-ESAT-6皮试。结果结核病组PBMC体外经重组融合蛋白PstS1-ESAT-6刺激,分泌IFN-γ的SFC数为(45.02±68.03)/z.5x10。个PBMC,高于非结核病组的(11.87±38.63)/2.5×10。个PBMC和健康对照组的(5.24±15.46)/2.5×10。个PBMC(F=32.96,P=0.000)。ELISPOT诊断结核病患者的敏感度为82.2%(106/lZ9),诊断非结核病组患者和健康者的特异度分别为87.0%(47/54)和90.2%(175/194),两者特异度比较差异无统计学意义(χ^2=0.45,P=0.500)。结核病组血浆中抗重组融合蛋白PstS1-ESAT-6的IgG水平(平均A492值为0.82±0.66)高于非结核病组[平均A492值为(0.60±0.30)]和健康对照组[平均A492为(0.36±0.20)1(F=43.60,P=0.000);ROC分析确定检测临界值为0.49,其用于诊断结核病的敏感度为62.2%(69/111)、诊断非结核病组的特异度为40.4%(19/47)、诊断健康者的特异度为84.5%(164/192),诊断非结核病组与健康组的特异度比较,差异有统计学意义(χ^2=42.60,P〈0.01)。热灭活结核分枝杆菌免疫豚鼠均产生BCG-PPD和重组融合蛋白PstS1-ESAT-6皮试反应,所有豚鼠皮肤出现红肿或硬结平均直径〉5mm;热灭活结核分枝杆菌免疫小鼠,重组融合蛋白PstS1-ESAT-6的ELISPOT和ELISA检测均为阴性。BCG免疫豚鼠只产生BCG-PPD皮试反应,硬结平均直径为(10.08±0.36)mm,不产生重组融合蛋白PstS1-ESAT-6皮试反应;BCG免疫小鼠,重组融合蛋白PstS1-ESAT-6的ELISPOT检测阴性,而ELISA检测为阳性。结论ELISPOT用于结核病诊断优于血清学诊断,但其诊断活动I生结核病价值还需进一步论证。 展开更多
关键词 结核 早期分泌抗原靶6 结核菌素试验 酶联免疫斑点检测 酶联免疫吸附测定 对比研究
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小鼠巨噬细胞内表达结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白对细胞增殖和凋亡的影响 被引量:6
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作者 任琳 李轶 +2 位作者 王山梅 师娟 郭思 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1809-1814,共6页
目的:建立培养滤液蛋白10-早期分泌性抗原靶6(CFP10-ESAT6)真核表达质粒并转染RAW264.7巨噬细胞,观察胞内表达CFP10-ESAT6对细胞活性及凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法:将CFP10-ESAT6融合基因插入真核表达质粒pEGFP-N1,构建重组质粒... 目的:建立培养滤液蛋白10-早期分泌性抗原靶6(CFP10-ESAT6)真核表达质粒并转染RAW264.7巨噬细胞,观察胞内表达CFP10-ESAT6对细胞活性及凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法:将CFP10-ESAT6融合基因插入真核表达质粒pEGFP-N1,构建重组质粒,转染RAW264.7巨噬细胞。采用MTT的方法测定CFP10-ESAT6融合蛋白对RAW264.7巨噬细胞活性的影响,采用结核分枝杆菌19 kD脂蛋白和十字孢碱(staurosporine)处理RAW264.7巨噬细胞,并以流式细胞术检测细胞凋亡率以及Toll样受体2(TLR2)的表达。结果:成功构建了重组质粒pEGFP-N1/CFP10-ESAT6并转染至RAW264.7巨噬细胞;与对照组相比,胞内表达CFP10-ESAT6不能影响巨噬细胞的活性,但可以明显抑制结核分枝杆菌19 kD脂蛋白所造成的凋亡(P<0.05),并显著抑制了TLR2的表达(P<0.05)。结论:巨噬细胞内表达的CFP10-ESAT6融合蛋白不具有细胞毒性作用,但可以通过下调TLR2的表达来抑制结核分枝杆菌19 kD脂蛋白所造成的凋亡。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 培养滤液蛋白10 早期分泌性抗原靶6 巨噬细胞 细胞增殖 细胞凋亡
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6 kD早期分泌型抗原靶点(ESAT6)抑制巨噬细胞的自噬并促进BCG的增殖 被引量:1
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作者 徐雪维 赵润鹏 +5 位作者 张荣波 吴静 胡东 邢应如 倪升发 铁保贤 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期310-314,共5页
目的 6 kD早期分泌型抗原靶点(ESAT6)能够促进卡介苗(BCG)的增殖,巨噬细胞的自噬功能能有效杀伤BCG,研究ESAT6与自噬的相互作用,为揭示ESAT6介导的免疫逃逸提供实验依据。方法分别观察对照质粒pCMV-HA和重组质粒pCMV-HA-ESAT6转染以及Ea... 目的 6 kD早期分泌型抗原靶点(ESAT6)能够促进卡介苗(BCG)的增殖,巨噬细胞的自噬功能能有效杀伤BCG,研究ESAT6与自噬的相互作用,为揭示ESAT6介导的免疫逃逸提供实验依据。方法分别观察对照质粒pCMV-HA和重组质粒pCMV-HA-ESAT6转染以及Earle平衡盐溶液(EBSS)处理的小鼠RAW264.7巨噬细胞中BCG的生长情况,Western blot法检测转染pCMV-HA-ESAT6的RAW264.7细胞0、8、12、24、32 h后,微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白水平。转染pCMV-HA、pCMV-HA-ESAT6、氯喹(CQ)单独处理和CQ与pCMV-HA-ESAT6转染联合处理条件下,Western blot法检测LC3的水平,Lyso Tracker Red染料法计数溶酶体数量,观察罗琴培养基上BCG的情况。结果 pCMV-HA-ESAT6转染的RAW264.7细胞中BCG的生长旺盛,而EBSS处理组生长受抑制;在0、8、12、24、32 h,pCMV-HA-ESAT6转染的RAW264.7细胞中LC3Ⅰ向LC3Ⅱ转换逐渐增强;与对照组相比,溶酶体荧光探针Lyso Tracker Red染色法显示pCMV-HA-ESAT6、CQ以及CQ与pCMV-HA-ESAT6转染处理组的溶酶体较多且体积大,但后三组间均无显著性差异;pCMV-HA-ESAT6、CQ以及CQ与pCMV-HA-ESAT6转染处理组的BCG生长旺盛。结论 ESAT6抑制RAW264.7细胞内的自噬水平,并且能够促进RAW264.7细胞中感染BCG的生长。 展开更多
关键词 早期分泌型抗原靶点6(ESAT6) 巨噬细胞 自噬 卡介苗(BCG)
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结核分枝杆菌EsxV亚单位疫苗黏膜免疫诱导的免疫应答 被引量:3
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作者 白鹭 宁唤唤 +6 位作者 康健 梁璇 谢燕玲 彭钰君 张婧瑶 路延之 柏银兰 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期379-386,共8页
目的研究结核分枝杆菌抗原Rv3619c(EsxV)黏膜免疫小鼠诱导的免疫应答水平。方法PCR法扩增esxV基因克隆入原核表达载体pET28a(+),获得的重组E.coli诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE电泳和Western Blot鉴定蛋白的表达,亲和层析法纯化EsxV蛋白。... 目的研究结核分枝杆菌抗原Rv3619c(EsxV)黏膜免疫小鼠诱导的免疫应答水平。方法PCR法扩增esxV基因克隆入原核表达载体pET28a(+),获得的重组E.coli诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE电泳和Western Blot鉴定蛋白的表达,亲和层析法纯化EsxV蛋白。以EsxV和/或联合环二腺苷酸(c-di-AMP)经鼻黏膜免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠特异性抗体水平及亚类,MTS法检测脾细胞增殖,qRT-PCR检测脾和肺脏细胞因子表达水平,ELISA法检测脾细胞因子分泌水平。结果成功构建EsxV的原核表达载体pET28a(+)-esxV并诱导表达目的蛋白,亲和层析法获得了纯化的重组EsxV蛋白。EsxV经黏膜免疫可诱导显著的体液免疫应答,但诱导的细胞免疫应答水平不高。EsxV与c-di-AMP经黏膜接种可诱导特异性IgG水平增加,EsxV蛋白特异的脾细胞增殖,脾和肺细胞的IFN-γ转录增加。c-di-AMP显著提高EsxV特异的IFN-γ、IL-2、IL-10和IL-17细胞因子分泌,而不诱导炎症因子TNF-α和IL-6表达。结论EsxV与c-di-AMP佐剂构建的亚单位疫苗可诱导特异性体液和细胞免疫应答,可进一步用于新型结核病亚单位疫苗的研制。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 6kDa早期分泌靶抗原分泌系统蛋白V(EsxV) 亚单位疫苗 黏膜免疫 环二腺苷酸
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