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E.coli DH10B碱性磷酸酶基因的克隆、表达及活性研究
1
作者
李军
黄霞
+2 位作者
姚雪梅
陈雪芬
齐兴柱
《中国医药导报》
CAS
2012年第1期28-29,66,共3页
目的:克隆并表达E.coli DH10B碱性磷酸酶(AKP)成熟肽基因(phoAm),为AKP的定向改构及应用奠定基础。方法:采用PCR法从E.coli DH10B基因组扩增phoAm;将phoAm克隆入表达载体pET28a,再转入E.coli BL21(DE3)进行表达;用免疫金层析法和SDS-PAG...
目的:克隆并表达E.coli DH10B碱性磷酸酶(AKP)成熟肽基因(phoAm),为AKP的定向改构及应用奠定基础。方法:采用PCR法从E.coli DH10B基因组扩增phoAm;将phoAm克隆入表达载体pET28a,再转入E.coli BL21(DE3)进行表达;用免疫金层析法和SDS-PAGE法检测表达的重组rAKP;采用对硝基酚磷酸(pNPP)法测定rAKP的活性。结果:rAKP单体分子量约47 K,活性分析比对照菌提高21.5倍。结论:获得AKP成熟肽基因并得了到具有较高活性的重组rAKP。
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关键词
碱性磷酸酶
大肠杆菌
dh10b
表达纯化
活性分析
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职称材料
题名
E.coli DH10B碱性磷酸酶基因的克隆、表达及活性研究
1
作者
李军
黄霞
姚雪梅
陈雪芬
齐兴柱
机构
热带生物资源教育部重点实验室
海南大学海洋学院
出处
《中国医药导报》
CAS
2012年第1期28-29,66,共3页
基金
海南大学211工程研究生教育教学改革研究项目(项目编号:YJG0102)
文摘
目的:克隆并表达E.coli DH10B碱性磷酸酶(AKP)成熟肽基因(phoAm),为AKP的定向改构及应用奠定基础。方法:采用PCR法从E.coli DH10B基因组扩增phoAm;将phoAm克隆入表达载体pET28a,再转入E.coli BL21(DE3)进行表达;用免疫金层析法和SDS-PAGE法检测表达的重组rAKP;采用对硝基酚磷酸(pNPP)法测定rAKP的活性。结果:rAKP单体分子量约47 K,活性分析比对照菌提高21.5倍。结论:获得AKP成熟肽基因并得了到具有较高活性的重组rAKP。
关键词
碱性磷酸酶
大肠杆菌
dh10b
表达纯化
活性分析
Keywords
Alkaline phosphatase
e.coli dh10b
Express and purify
Activity analysis
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
E.coli DH10B碱性磷酸酶基因的克隆、表达及活性研究
李军
黄霞
姚雪梅
陈雪芬
齐兴柱
《中国医药导报》
CAS
2012
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