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植物乳杆菌的DPO引物实时荧光PCR检测方法被引量：1: 1; 作者孙凯魏霜 +5 位作者刘玉莉许如苏刘中勇鄞杰平袁俊杰吴希阳《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期178-183,共6页; 根据已报道的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）的23S rRNA基因保守序列,设计用于检测植物乳杆菌的特异性DPO（dual priming oligonucleotide）引物,结合SYBR GreenⅠ实时荧光PCR技术,建立植物乳杆菌的DPO引物实时荧光PCR检测方法... 展开更多; 关键词植物乳杆菌实时荧光PCR dpo引物检测; 在线阅读下载PDF 职称材料

基于DPO引物检测猪流行性腹泻病毒荧光定量RT-PCR方法的建立及初步应用被引量：6: 2; 作者王以欣王紫薇 +8 位作者汉武娇王丽姜艳平崔文周晗乔薪瑗唐丽杰李一经徐义刚《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期710-715,共6页; 为建立快速、准确检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的方法,本研究以PEDV的N基因为靶基因,基于双启动寡核苷酸引物(DPO),经过条件优化,建立了检测PEDV的荧光定量RT-PCR方法。结果显示,DPO引物的有效退火温度范围较宽(45℃~65℃);在测试的10种... 展开更多; 关键词猪流行性腹泻病毒 dpo引物荧光定量RT-PCR; 在线阅读下载PDF 职称材料

应用DPO-PCR技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7 被引量：11: 3; 作者徐义刚李丹丹 +2 位作者崔丽春刘忠梅李苏龙《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第8期160-164,共5页; 利用双启动寡核苷酸引物(dual-priming oligonucleotide,DPO)聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7。根据DPO引物设计原则,以肠出血性大肠杆菌O157∶H7 rfbE基因为靶基因设计一对DPO引物,经... 展开更多; 关键词肠出血性大肠杆菌O157∶H7 rfbE基因双启动寡核苷酸引物聚合酶链式反应; 在线阅读下载PDF 职称材料

应用DPO技术检测番茄斑萎病毒方法的建立被引量：5: 4; 作者刘忠梅罗佳 +5 位作者潘仲乐刘洪义李丹丹韩政坤魏冬旭马微《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第11期93-97,共5页; 为了准确、高效地检出番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV),利用双启动寡核苷酸引物(DPO)技术,以TSWV外壳蛋白(CP)基因为靶基因,设计了一对DPO引物,对PCR反应体系中的引物、d NTPs、Taq DNA聚合酶用量进行优化,建立了TSWV的DP... 展开更多; 关键词番茄斑萎病毒双启动寡核苷酸引物 dpo—PCR 检测; 在线阅读下载PDF 职称材料

基于DPO引物的多重PCR在检测单增李斯特菌中的应用被引量：1: 5; 作者刘纯真王云龙景建洲《湖北农业科学》北大核心 2011年第15期3197-3200,共4页; 根据单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)的hly、prfA和iap基因设计了3对常规引物和DPO(Dual priming oligonucleotide)引物,采用多重PCR的方法,建立了单增李斯特菌的快速检测体系,并比较了常规引物和DPO引物的优劣,结果表明DPO引物... 展开更多; 关键词单增李斯特菌 dpo(dual priming oligonucleotide)引物多重PCR; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名植物乳杆菌的DPO引物实时荧光PCR检测方法被引量：1: 1; 作者孙凯魏霜刘玉莉许如苏刘中勇鄞杰平袁俊杰吴希阳; 机构暨南大学理工学院食品科学与工程系汕头出入境检验检疫局湛江出入境检验检疫局; 出处《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期178-183,共6页; 基金国家质量监督检验检疫总局科技计划项目(2015IK078); 文摘根据已报道的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）的23S rRNA基因保守序列,设计用于检测植物乳杆菌的特异性DPO（dual priming oligonucleotide）引物,结合SYBR GreenⅠ实时荧光PCR技术,建立植物乳杆菌的DPO引物实时荧光PCR检测方法,对其特异性和灵敏度进行了评价,并将建立的检测方法用于实际样品的检测中。结果显示,该方法对2株植物乳杆菌能得到阳性扩增,其余11株乳酸菌及阴性对照没有扩增曲线,灵敏度高达0.001 ng/μL,而且在退火温度为50~60℃范围内不影响其特异性,表明该方法对退火温度不敏感;用微生物菌制剂和酸奶共13种益生菌产品进行了验证,检出情况与产品标识一致。因此,该研究建立的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR能够快速、准确、高效地检测微生物菌制剂及其他益生菌产品中的植物乳杆菌。; 关键词植物乳杆菌实时荧光PCR dpo引物检测; Keywords Lactobacillus plantarum real-time PCR dpo（dual priming oligonucleotide） detection; 分类号 TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于DPO引物检测猪流行性腹泻病毒荧光定量RT-PCR方法的建立及初步应用被引量：6: 2; 作者王以欣王紫薇汉武娇王丽姜艳平崔文周晗乔薪瑗唐丽杰李一经徐义刚; 机构东北农业大学动物医学学院农业部动物疫病病原生物学重点实验室/东北科学观测实验站; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期710-715,共6页; 基金国家重点研发计划项目(2016YFD0500704) 农业部动物病原生物学重点实验室开放课题(BYSWX2018KFKT10); 文摘为建立快速、准确检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的方法,本研究以PEDV的N基因为靶基因,基于双启动寡核苷酸引物(DPO),经过条件优化,建立了检测PEDV的荧光定量RT-PCR方法。结果显示,DPO引物的有效退火温度范围较宽(45℃~65℃);在测试的10种病毒中仅PEDV为阳性扩增结果,其余病毒为阴性结果,特异性较强;对PEDV质粒标准品的检测限可达1.64×10^1拷贝/μL,敏感性较高;组内、组间重复性结果的变异系数均小于1%,重复性较好。利用该方法对采集的272份临床仔猪腹泻样品(粪便、小肠组织)进行检测,结果显示,共检出PEDV阳性样品39份,阳性率为14.34%,与常规RT-PCR方法检测结果的阳性符合率为92.31%;本研究建立方法检测的阳性样品经PEDV N基因测序鉴定,确实均为PEDV阳性样品。本研究建立的基于DPO引物检测PEDV的荧光定量RT-PCR方法为PEDV的准确检测和流行病学调查提供技术支持。; 关键词猪流行性腹泻病毒 dpo引物荧光定量RT-PCR; Keywords porcine epidemic diarrhea virus(PEDV) dual priming oligonucleotide(dpo) fluorescent quantitation RT-PCR; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名应用DPO-PCR技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7 被引量：11: 3; 作者徐义刚李丹丹崔丽春刘忠梅李苏龙; 机构黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心海南出入境检验检疫局检验检疫技术中心东北林业大学研究生院; 出处《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第8期160-164,共5页; 基金国家质检总局科技计划项目(2012IK157) 质检公益性行业科研专项(201310126); 文摘利用双启动寡核苷酸引物(dual-priming oligonucleotide,DPO)聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7。根据DPO引物设计原则,以肠出血性大肠杆菌O157∶H7 rfbE基因为靶基因设计一对DPO引物,经过反应体系的优化,建立了肠出血性大肠杆菌O157∶H7 DPO-PCR检测方法,其检测灵敏度约为94 CFU/mL。与常规PCR方法相比,所建立的DPO-PCR方法对退火温度不敏感,在引物设计和实验过程中不需要对引物及其退火温度反复优化,同时基于DPO引物的特殊结构又增强了其特异性。DPO-PCR方法设计简易、特异性强,为致病性微生物的快速准确检测提供了新途径。; 关键词肠出血性大肠杆菌O157∶H7 rfbE基因双启动寡核苷酸引物聚合酶链式反应; Keywords Escherichia coli O157∶H7 （EHEC O157∶H7） rfbE gene dual-priming oligonucleotide polymerase chain reaction （dpo-PCR） method; 分类号 TS207.3 [轻工技术与工程—食品科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名应用DPO技术检测番茄斑萎病毒方法的建立被引量：5: 4; 作者刘忠梅罗佳潘仲乐刘洪义李丹丹韩政坤魏冬旭马微; 机构黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心辽宁出入境检验检疫局海南出入境检验检疫局检验检疫技术中心东宁出入境检验检疫局; 出处《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第11期93-97,共5页; 基金哈尔滨市科技创新人才研究专项(2012RFQQN029) 国家质检总局科技计划项目(2013IK051); 文摘为了准确、高效地检出番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV),利用双启动寡核苷酸引物(DPO)技术,以TSWV外壳蛋白(CP)基因为靶基因,设计了一对DPO引物,对PCR反应体系中的引物、d NTPs、Taq DNA聚合酶用量进行优化,建立了TSWV的DPO-PCR检测方法,并对其灵敏度、特异性以及退火温度敏感性进行了评价。结果表明,应用DPO引物建立的PCR技术能够成功地扩增出TSWV的208 bp特异性条带,与预期目标相符。经过优化后,DPO-PCR反应体系(25μL)为:DNA模板1μL,10×Buffer(含Mg2+)2.5μL,d NTPs(每种2.5 mmol/L)2.0μL,Taq DNA聚合酶(5 U/μL)0.2μL,上、下游DPO引物(20μmol/L)各1.0μL,以去离子水补充至25μL。利用该检测方法,在49.8~70.0℃的退火温度范围内,均可实现目标基因片段的高效扩增,说明其对退火温度不敏感;利用病毒RNA进行检测,该方法的灵敏度为7.5 ng;通过对TSWV、番茄环斑病毒、烟草环斑病毒和番茄黑环病毒的检测表明,仅TSWV呈现阳性反应,说明该方法特异性强。所建立的DPO-PCR检测方法能够准确、高效地检测TSWV,可用于进出境种苗检疫筛查及田间病害诊断。; 关键词番茄斑萎病毒双启动寡核苷酸引物 dpo—PCR 检测; Keywords tomato spotted wilt virus dual-priming oligonueleotide dpo-PCR detection; 分类号 S432.41 [农业科学—植物病理学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于DPO引物的多重PCR在检测单增李斯特菌中的应用被引量：1: 5; 作者刘纯真王云龙景建洲; 机构郑州轻工业学院食品与生物工程学院河南省生物工程技术研究中心; 出处《湖北农业科学》北大核心 2011年第15期3197-3200,共4页; 基金河南省杰出青年基金项目(74100510007); 文摘根据单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)的hly、prfA和iap基因设计了3对常规引物和DPO(Dual priming oligonucleotide)引物,采用多重PCR的方法,建立了单增李斯特菌的快速检测体系,并比较了常规引物和DPO引物的优劣,结果表明DPO引物的特异性强,能够快速准确地检测单增李斯特菌。; 关键词单增李斯特菌 dpo(dual priming oligonucleotide)引物多重PCR; Keywords Listeria monocytogenes dpo（dual priming oligonucleotide） primers multiplex PCR; 分类号 R378 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	植物乳杆菌的DPO引物实时荧光PCR检测方法	孙凯魏霜刘玉莉许如苏刘中勇鄞杰平袁俊杰吴希阳	《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心	2016	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	基于DPO引物检测猪流行性腹泻病毒荧光定量RT-PCR方法的建立及初步应用	王以欣王紫薇汉武娇王丽姜艳平崔文周晗乔薪瑗唐丽杰李一经徐义刚	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2019	6	在线阅读下载PDF 职称材料
3	应用DPO-PCR技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7	徐义刚李丹丹崔丽春刘忠梅李苏龙	《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心	2014	11	在线阅读下载PDF 职称材料
4	应用DPO技术检测番茄斑萎病毒方法的建立	刘忠梅罗佳潘仲乐刘洪义李丹丹韩政坤魏冬旭马微	《河南农业科学》 CSCD 北大核心	2017	5	在线阅读下载PDF 职称材料
5	基于DPO引物的多重PCR在检测单增李斯特菌中的应用	刘纯真王云龙景建洲	《湖北农业科学》北大核心	2011	1	在线阅读下载PDF 职称材料